妊娠期母体胰岛的适应性变化

妊娠时随着胎儿对母体物质需求的增加,孕妇出现了糖代谢的改变以及生理性胰岛素抵抗。为了适应胰岛素需求的增加,妊娠期母体胰岛在结构和功能上都会发生相应的改变,包括葡萄糖刺激下胰岛素分泌能力的增强,以及伴随的葡萄糖刺激阈值的下降。此外,还出现母体胰岛素合成增多,胰岛细胞增殖以及胰岛容积的增加。这些变化与妊娠期激素特别是胎盘生乳素(HPL)、催乳素(PRL)及生长激素(GH)等密切相关。不仅如此,脂肪细胞因子、炎症因子、细胞因子信号传递抑制体(SOCS)、胰岛血管内皮细胞等因素对妊娠期母体胰岛的适应性变化也会产生影响。     

妊娠期大鼠胰岛β细胞适应性变化的研究

目的 探讨大鼠妊娠期胰岛β细胞的变化节律.方法 采用口服糖耐量试验、胰岛素释放试验以及大鼠胰岛对葡萄糖刺激下的胰岛素分泌试验研究大鼠妊娠期胰岛β细胞的功能改变特点.并用5-溴尿脱氧嘧啶核苷(BrdU)标记和抗胰岛素抗体免疫组化双染法研究大鼠妊娠期胰岛β细胞增殖的变化.结果 与正常对照组相比,大鼠妊娠期表现出空腹血糖减低的趋势,但未出现糖耐量的异常.与此同时,糖负荷后胰岛素的分泌从孕14.5 d开始增强并持续至孕20.5 d.体外胰岛β细胞的分泌能力则从孕12.5 d开始显著增强直至孕20.5 d.此外,大鼠妊娠期胰岛β细胞的增殖指数(PI)从孕12.5 d开始显著升高,孕14.5 d达到高峰.大鼠妊娠期胰岛β细胞的面积亦明显高于正常水平.结论 大鼠妊娠期胰岛β细胞的功能和增殖均发生了改变,从孕12.5 d开始增强,孕中晚期变化最为显著,并持续至孕20.5 d.     

新生期小鼠胰岛细胞凋亡及其机制的研究

目的 观察新生期小鼠胰岛细胞凋亡的变化特点并分析细胞凋亡相关基因的表达差异,初步探讨相关机制.方法 采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞,以磷脂结合蛋白V-绿色荧光素/碘化丙啶双染法流式细胞术检测细胞凋亡率.透射电镜观察胰岛细胞凋亡形态,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（Tunel）/胰岛素免疫荧光双染法检测凋亡.采用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因mRNA的表达.采用Western blotting技术检测促凋亡基因和抗凋亡基因的表达.多组间统计数据比较采用单因素方差分析.结果 （1）新生期小鼠胰岛细胞凋亡率在3周时显著增加,明显高于1周和8周[分别为（10.53±2.61）％、（1.80±0.69）％、（3.26±0.94）％,F=32.09,P＜0.01].透射电镜结果显示新生第3周小鼠胰岛细胞核出现凋亡早期改变.3周时Tunel/胰岛素双阳性细胞数明显高于1周和8周.（2）新生期小鼠胰岛细胞凋亡相关基因的表达呈动态变化,3周时,促凋亡基因Fas和FasL的mRNA表达均明显高于1周和8周（分别为1.53±0.21、1.00±0.00、0.46±0.24,F=24.85,P＜0.01;2.63±0.56比1.00±0.00、0.52±0.14,F=32.77,P＜0.01）,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达明显低于1周和8周（分别为0.30±0.23、1.00±0.00、1.71±0.00,F=78.06,P＜0.01）.（3）3周时,Fas、FasL和裂解的Caspase-3蛋白表达均明显高于1周和8周（分别为2.05±0.16、1.00±0.00、0.59±0.24,F=61.47,P＜0.01;3.54±0.86、1.00±0.00、0.72±0.26,F=27.04,P＜0.01;5.74±0.59比1.00±0.00、3.11±0.20,F=128.79,P＜0.01）;Bcl-2蛋白表达明显低于1周和8周（0.62±0.13比1.00±0.00、1.90±0.10,F=151.08,P＜0.01）.结论 Fas/FasL以及Bc1-2介导的细胞凋亡信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞凋亡的调控.     

谷氨酸脱羧酶预防NOD小鼠胰岛炎的机制

谷氨酸脱羧酶 (ＧＡＤ)预防ＮＯＤ小鼠胰岛炎和糖尿病(ＤＭ) 〔1,2〕的机制尚未阐明。本研究探讨ＧＡＤ在预防ＮＯＤ鼠胰岛炎过程中 ,对胰岛 β细胞凋亡和Ｆａｓ及其配体ＦａｓＬ及ｂｃｌ ｘ表达的影响。一、材料和方法ＮＯＤ小鼠 ,ＧＡＤ ,动物实验及胰岛炎的检测方法均同先前报道〔1〕。细胞凋亡染色试剂盒、抗Ｆａｓ、抗ＦａｓＬ、抗ｂｃｌ ｘ抗体、生物素标记羊抗鼠ＩｇＧ(1/30 0 )和ＡＢＣ试剂 (1/5 0 0 )均由武汉博士德公司提供 ,二氨基联苯胺由瑞士进口分装。1.β细胞凋亡计数 :用ＴＵＮＥＬ原位末端标记法染色凋亡细胞 ;用ＡＢＣ免…     

应用基因芯片技术研究大鼠妊娠期胰岛基因表达谱的变化

利用基因芯片技术研究大鼠妊娠不同阶段胰岛基因表达谱的变化.与正常对照组相比,大鼠妊娠期数百条基因发生差异表达,其中基因Reg3α在孕期表达显著高于正常对照组,可能与胰岛再生相关.     

细胞色素C对白血病细胞增殖、凋亡及Survivin表达的影响

凋亡是细胞的程序性死亡,该过程的启动和实施涉及一系列复杂的生化反应并受多种分子调节。死亡蛋白酶(Caspase)是其中的一组关键分子,在凋亡过程中起着中心调控作用,而线粒体是导致Caspase级联反应活化和细胞凋亡的第二途径。     

降糖干预对妊娠期糖尿病患者胰岛α、β细胞功能及炎症因子水平的影响

目的 探讨降糖干预对妊娠期糖尿病(GDM)患者胰岛α、β细胞功能、炎症因子水平的影响.方法 选择孕24～28周孕妇65例,根据口服葡萄糖耐量试验(OGTT)分为GDM组32例、正常糖耐量(NGT)组33例.GDM组给予降糖治疗.抽取NGT组及GDM组治疗前后清晨空腹静脉血,并进行OGTT.对比两组血糖指标[FPG及OG...     

盐酸小檗碱对糖尿病小鼠胰岛β细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对2型糖尿病db/db小鼠胰岛β细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:选取32只6周龄db/db雄性小鼠和32只db/m雄性小鼠,各分为2组,各选其中一组每日固定时间给予小檗碱(50 mg/kg)灌胃,另一组给予相同体积的生理盐水。连续给药3周后处死小鼠,实时荧光定量PCR和免疫组化法检测胰腺组织Ki-67、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Fas和Fas配体(Fas-L)mRNA和蛋白的表达,末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测胰腺组织β细胞凋亡数。结果:实验3周后,小檗碱干预db/db组小鼠的血糖、葡萄糖曲线下面积显著降低,胰岛素分泌显著改善(均P0.05);Bcl-2阳性表达率显著升高(P<0.01);Fas及Fas-L阳性率表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05);β细胞凋亡率下降(P     

阿司匹林联合瑞格列奈片对妊娠期糖尿病患者胰岛功能及血清脂肪因子的影响

目的 研究阿司匹林联合瑞格列奈片对妊娠期糖尿病患者胰岛功能及血清脂肪因子的影响。方法 选取山东省安丘市妇幼保健院2020年1月—2022年1月收治的80例妊娠期糖尿病为研究对象,依照随机数表法将其分为两组。对照组40例患者接受瑞格列奈片治疗,研究组40例患者接受瑞格列奈片联合阿司匹林治疗。观察两组患者的胰岛功能、血清脂肪因子、血糖指标、炎症因子指标、血浆黏度、血小板聚集率,比较两组患者治疗后不良妊娠结局发生率。结果 在治疗前,两组HOMA-IR、HOMA-β、内脂素、ANP、Omentin-1、瘦素、血糖各指标、炎症因子各指标、血浆黏度、血小板聚集率水平对比,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,研究组HOMA-IR、内脂素、瘦素、血糖各指标、炎症因子各指标、血浆黏度、血小板聚集率水平低于对照组,HOMA-β、ANP、Omentin-1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、研究组不良妊娠结局发生率为10.00%、12.50%,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 阿司匹林联合瑞格列奈片可调控妊娠期糖尿病患者胰岛功能及血清脂肪因子表达,...     

新生小鼠胰岛增殖及口袋蛋白家族、E2F转录因子表达变化

目的 观察新生小鼠胰岛细胞、细胞周期和视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）、视网膜母细胞瘤样蛋白1（p107）、视网膜母细胞瘤样蛋白2（p130）及E2F转录因子的变化特点,探讨其与胰岛细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化法检测出生第1、3和8周小鼠胰岛β/α细胞量、单个细胞面积和细胞数量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及蛋白印迹技术检测Rb、p107、p130和E2F转录因子mRNA和蛋白表达.结果 （1）小鼠3周和8周胰岛β/α细胞量显著高于1周（P＜0.05）;单个β/α细胞面积在3周时无明显差异,8周时扩大1.7倍（P＜0.01）;而β/α细胞数量在3周增加约3.5/3.7倍（P＜0.01）,8周与3周无明显差异.（2）1周和3周时G0/G1期细胞比8周明显减少（81.3±1.2、82.8±3.3比92.6±1.3,F=6.5,P＜0.05）,而G2/M期显著增多（13.4±1.4、12.2±1.8比5.5±0.5,F=6.3,P＜0.05）,细胞增殖指数明显增加（P＜0.05）.（3）8周时Rb mRNA表达明显低于1周和3周（P＜0.01）;3周和8周时p107 mRNA显著低于1周（P＜0.05）,而p130 mRNA显著高于1周（P＜0.05）,E2F-1、E2F-2 mRNA均显著低于1周（均P＜0.01）;8周时E2F-3 mRNA显著低于1周（P＜0.05）;而E2F-4、E2F-5 mRNA在3周和8周时表达增加.（4）8周时Rb和p107蛋白表达均比1周明显降低,p130表达显著增高,3周和8周时E2F1表达显著降低（均P＜0.05）.结论 新生小鼠胰岛细胞量扩增明显,以细胞数量增加为主,细胞增殖显著.Rb、p107、p130及其相关E2F转录因子的表达存在动态变化,可能参与细胞增殖的调控.     

抑制Survivin表达对胰腺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨以Survivin为靶基因的胰腺癌基因治疗的可能性,为胰腺癌基因治疗提供依据.方法 采用化学合成的小十扰RNA(siRNA)和pGCSi载体中的小发夹RNA(shRNA)抑制胰腺癌细胞系PaTu8988的Sunrivin基因表达,通过观察胰腺癌细胞株Survivin基因表达的下调以及细胞形态、细胞凋亡、细胞活力、凋亡信号途径等的改变评价Survivin作为靶基因的治疗效果.结果 不同序列的siRNA和shRNA抑制胰腺癌细胞Survivin的表达后,Survivin mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05);碘化吡啶(PI)染色法观察发现RNA干扰(RNAi)后细胞出现核皱缩、细胞凋亡率>20%;流式细胞仪检测发现RNAi后在G0/G1期前出现了亚二倍体峰(P<0.05);Western blot法检测发现RNAi后Casptrqe-3被激活(P<0.05).结论 通过抑制胰腺癌细胞PaTu8988的Survivin表达可以诱导肿瘤细胞启动凋亡程序,加速肿瘤细胞凋亡,由此可望提高胰腺癌的治疗效果.     

硝基酪氨酸在糖尿病大鼠胰岛中的表达及普罗布考的干预作用

目的观察硝基酪氨酸（NT）在糖尿病大鼠胰岛中的表达,以及普罗布考的干预对其表达和对胰岛β细胞的影响。方法大鼠高脂高糖饲料喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素30mg／kg复制2型糖尿病大鼠模型,普罗布考组（PB组）每天同时灌胃普罗布考500mg／kg,10周后测定空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（Fins）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）,计算胰岛素敏感指数（ISI）,用免疫组化的方法观察NT在胰岛中的表达。结果糖尿病组（DM组）及PB组大鼠的FPG、TG、TC及MDA水平较正常对照组（NC组）明显增加（P〈0．01）,NT的平均光密度也明显高于NC组（P〈0．01）,但PB组上述指标的测定显著低于DM组（P〈0．01）;DM组和PB组大鼠的SOD水平、ISI明显低于NC组（P〈0．01）,PB组这些指标的测定显著高于DM组（P〈0．01）;NC组和PB组的Fins比较差异没有统计学意义,但都明显高于DM组（P〈0．01）。结论NT在胰岛的表达增强,普罗布考作为抗氧化剂,对于STZ引起的或糖尿病引起的氧化应激,均在一定程度上减轻其损伤,保护了胰岛功能。     

Survivin在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨Survivin在胰腺癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测42例胰腺癌和10例正常胰腺组织中Survivin的表达。结果42例胰腺癌中有34例出现阳性表达，阳性率为81.95％；正常胰腺组织中未见Survivin表达。Survivin的表达与肿瘤TNM分期、分化程度存在显著正相关。结论Survivin表达水平在胰腺癌的发生、发展中具有重要意义，可作为预后不良的生物学指标。     

Down-regulation of survivin expression by small interfering RNA induces pancreatic cancer cell apoptosis and enhances its radiosensitivity

AIM: To investigate the inhibitory effect of small interfering RNA (siRNA) on the expression of survivin in pancreatic cancer cell line PC-2 and the role of siRNA in inducing PC-2 cell apoptosis and enhancing its radiosensitivity. METHODS: A siRNA plasmid expression vector against survivin was constructed and transfected into PC-2 cells with LipofectamineTM 2000. The down regulation of survivin expression was detected by semi-quantitive RT-PCR and immunohistochemical SP method and the role of siRNA in inducing PC-2 cell apoptosis and enhancing its radiosensitivity was detected by flow cytometry. RESULTS: The sequence-specific siRNA efficiently and specifically down-regulated the expression of survivin at both mRNA and protein levels. The expression inhibition ratio was 81.25% at mRNA level detected by semi-quantitive RT-PCR and 74.24% at protein level detected by immunohistochemical method. Forty-eight hours after transfection,apoptosis was induced in 7.03% cells by siRNA and in 14.58% cells by siRNA combined with radiation. CONCLUSION: The siRNA plasmid expression vector against survivin can inhibit the expression of survivin in PC-2 cells efficiently and specifically. Inhibiting the expression of survivin can induce ipoptosis of PC-2 cells and enhance its radiosensitivity significantly. RNAi against survivin is of potential value in gene t(?)erapy of pancreatic cancer.     

醛糖还原酶抑制剂对小鼠胰岛体外培养时胰岛素分泌的影响

观察了ＩＣＩ１２８４３６（Ｓｔａｔｉ），一种新型醛糖还原酶抑制剂（ＡＲＩ），使体外培养时小鼠胰岛山梨醇形成减少后，葡萄糖诱发快速与慢速相胰岛素释放的变化情况。培养４８或９６小时后，葡萄糖诱发快速或慢速相胰岛素释放，ＡＲＩ组（１０ｍｇ／Ｌ）与对照组胰岛比较均无显著性差异。说明ＡＲＩ虽可使胰岛山梨醇形成减低，但其对葡萄糖诱发胰岛素释放无明显影响。提示胰岛山梨醇可能无确切促进胰岛素分泌的作用。     

In vitro pancreatic B-cell response of hyperinsulinemic rats. Differences between pregnancy and VMH-lesions

Summary We investigatedin vitro the pancreatic B-cell response of hyperinsulinemic animals compared to that of controls with the aim of clarifying if the hyperinsulinemia is related to an alteration of the islet insulin secretion. Hyperinsulinemia was induced by pregnancy (observation at 19.5 days) and electrolytic lesions of the hypothalamic nucleus ventromedialis (2 days after lesion). The kinetics of the glucose dose/response curves (measured during a 60 min incubation period) differed markedly in the two hyperinsulinemic conditions. Whereas the islets from pregnant rats were characterized by a lowered glucose threshold, an enhanced half-maximal and maximal secretion rate, those of lesioned rats showed only an increased half-maximal and maximal secretion response in spite of a comparable islet insulin content. When culturing islets of hyperinsulinemic animals up to 6 days, the insulin secretion of those prepared from VMH-lesioned rats behaved identically to controls, whereas the islets of pregnant rats maintained their enhanced sensitivity at a glucose concentration of 5 mmol/l. These results confirm that the pancreatic B-cell response contributed significantly to the hyperinsulinemia, but different mechanisms are likely to be responsible for the altered B-cell secretion.     

舒林酸经survivin/Aurora B途径对人胰腺癌细胞分裂的阻断效应

目的 观察舒林酸处理胰腺癌细胞BxPC3后对survivin、Aurora B表达及细胞周期和增殖的影响,探讨舒林酸的作用机制.方法 应用MTT法检测舒林酸对BxPC3细胞的增殖抑制作用,RT-PCR法检测survivin mRNA、Aurora B mRNA的表达,Western blot法检测survivin蛋白表达及Aurora BThr-232磷酸化水平,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 舒林酸呈时间和剂量依赖性抑制BxPC3细胞增殖.经500μmoL/L舒林酸作用细胞48 h后,survivin mRNA和Aurora B mRNA表达量分别从1.56和0.66下降到0.44和0.11(P<0.01);survivin蛋白表达从1.27下降到0.21(P<0.01),Aurora BThr-232磷酸化水平从0.47下降到0.25(P<0.01);G0/G1期细胞比例从(56.65±1.93)%升高到(70.58±3.21)%(P<0.01).结论 舒林酸通过下调survivin表达,降低Aurora B的活性,从而影响染色体过客复合物蛋白(CPC)对细胞染色体的排列和分离作用,使大量细胞停滞在G0/G1期,从而抑制细胞的有丝分裂.