脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制

目的：探讨脂多糖（LPS）活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子－1α（HIF-1α）的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）中的作用。 方法： 应用HIF-1α 诱骗法（HIF-1α decoy）抑制其作用，并用Western blotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。 结果： HIF-1α蛋白含量在LPS组（1.95±0.57）和HIF-1α decoy组（1.89±0.59）均明显高于对照组（0.41±0.14，P＜0.05）；HIF-1α mRNA的表达在对照组（0.7838±0.3183）、LPS组（0.7622±0.3387）和HIF-1α decoy组（0.8155±0.3594）之间无显著差异（P>0.05）；LPS刺激24 h后，大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组（61 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组（90 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），但 HIF-1α decoy组TNF-α的产生仍然高于对照组（61 ng/L vs 94 ng/L, P<0.05）。 结论： 大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调，并且促进TNF-α的产生，提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。     

去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑的保护作用

目的： 研究去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型新生血管形成的影响。方法：新生7 d SD大鼠建立HIE模型，模型组和治疗组建模前24 h分别用去铁胺或生理盐水注射。第1 d、3 d、7 d和14 d处死大鼠，检测缺氧缺血（左）侧脑组织毛细血管密度(BCDI)、增生毛细血管数、脑含水量、脑萎缩程度及其血管内皮生长因子(VEGF)和低氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA表达。结果：治疗组左脑含水量和左脑萎缩比显著低于模型组(P<0.01)；左侧脑组织增生毛细血管数目显著高于模型组［(2.01±0.31)条/HPF vs (0.90±0.25)条/HPF ,P<0.01］。去铁胺显著上调左侧脑组织VEGF 和HIF-1α mRNA表达［12 h时VEGF：(1.41±0.07) vs (1.10±0.15)，P<0.05；HIF-1α：(1.49±0.12) vs (1.11±0.16)，P<0.05］。结论:去铁胺可能通过上调脑组织HIF-1α和VEGF表达，促进缺氧缺血脑组织新生血管形成，减轻缺氧缺血性脑损伤。     

低氧诱导因子1α诱导卵巢癌细胞周期阻滞的研究

目的：探讨低氧诱导因子1α（HIF-1α）对卵巢癌细胞周期的阻滞作用。方法: 采用化学性低氧诱导剂氯化钴（CoCl2）和物理性低氧培养箱两种方法对体外培养的卵巢癌SW626细胞诱导低氧，用诱骗法（decoy）阻断HIF-1α功能，Western blotting、RT-PCR和流式细胞术分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达水平和细胞周期比率。结果： B1组(3.75±1.31)和C1组(3.48±1.01) HIF-1α蛋白表达水平明显高于A1组(0.97±0.31)（P<0.05), decoy法对HIF-1α蛋白表达没有明显影响(P>0.05)；A1组（0.65±0.32）和B1组（0.64±0.34）HIF-1α mRNA表达水平明显低于C1组（1.28±0.62）（P<0.05），decoy法对HIF-1α mRNA 表达没有明显影响（P>0.05）；流式细胞术检测发现B1组（81.78±24.33）和C1组（77.62±22.76）G0/G1期细胞比率显著高于A1组（49.49±18.54）（P<0.05）；B2组（61.54±20.84）明显低于B1组（P<0.05），C2组明显低于C1组（56.03±21.42），而A1组和A2组之间无明显差异（P>0.05）。结论：CoCl2或物理性低氧均能明显诱导卵巢癌细胞SW626 G0/G1期细胞周期阻滞和HIF-1α的表达，HIF-1α在低氧引起的卵巢癌细胞SW626的细胞周期阻滞中起重要作用。     

低氧及一氧化氮对SW480细胞缺氧诱导因子-1α、VEGF及iNOS 表达的初步研究

目的：观察一氧化氮(NO)对低氧培养的人结肠腺癌细胞株SW480中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法： 运用免疫细胞化学检测HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白表达，Western blot检测HIF-1α蛋白表达。原位杂交法检测HIF-1α mRNA表达。结果： 免疫细胞化学染色图像分析结果显示：低氧组细胞HIF-1α、VEGF和iNOS蛋白表达水平显著高于常氧组(P<0.01，P<0.01，P<0.05)和低氧＋genistein（三羟基异黄酮）组（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。低氧条件下，SNP（硝普钠）显著抑制HIF-1α、VEGF蛋白的表达,但对iNOS表达无明显影响；NOC5（NO发生剂）诱导HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白的表达；NO抑制剂L-NAME(N-硝基精氨酸甲酯)则抑制3者的表达。 Western blot结果显示：低氧培养条件下，HIF-1α呈强表达，给予genistein能显著抑制其表达；而给予SNP和L-NAME后，蛋白表达量减少，给予NOC5，则蛋白表达增强。原位杂交结果显示：常氧组、低氧组及低氧＋genistein组、低氧＋SNP组、低氧＋NOC5组、低氧＋L-NAME组HIF-1α mRNA表达A值组间均无显著差异。结论： 低氧诱导SW480细胞HIF-1α蛋白表达量增高，从而上调VEGF和iNOS表达。低氧条件下，NO供体SNP抑制SW480细胞HIF-1α蛋白及VEGF表达，而另一种供体NOC5则促进HIF-1α表达，两种供体对HIF-1表达的影响可能存在不同的机制。     

HIF-1α基因沉默对大鼠肝癌CBRH-7919细胞p27和Ki67表达的影响

目的: 探讨沉默缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因对大鼠肝癌CBRH-7919细胞在缺氧状态下p27和Ki67表达的影响。方法: 选用大鼠肝癌细胞株CBRH-7919作为研究对象,利用氯化钻(CoCl₂)模拟缺氧状态。构建HIF-1α siRNA特异性载体,利用小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF-1α基因。应用real-time RT-PCR和Western blotting方法分别检测肝癌细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化,用Western blotting方法检测肝癌细胞 p27和Ki67 蛋白的表达变化。应用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果: 在缺氧条件下,肝癌细胞HIF-1α mRNA及蛋白表达显著增多(P<0.05)。HIF-1α基因被沉默后,HIF-1α mRNA和蛋白表达以及Ki67蛋白表达量明显减少(P<0.05),p27蛋白表达量显著增多(P<0.05)。转染组G₀/G₁期的肝癌细胞数量明显多于对照组,S期细胞显著减少(P<0.05)。 结论: 缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α的表达;特异性siRNA沉默HIF-1α,可能通过促进p27的表达和抑制Ki67的表达,在一定程度上抑制了肝癌细胞的增殖。     

CXCL8、HIF-1α在宫腔粘连子宫内膜组织表达及相关性分析

目的 探讨CXC趋化因子配体-8(CXCL8)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在宫腔粘连（IUA）患者子宫内膜组织中的表达及相关性。方法 收集2018年6月至2020年9月行宫腔粘连分离手术（TCRA）治疗的IUA患者60例,IUA患者在行TCRA前判断IUA严重程度,轻度19例（轻度IUA组）,中度22例（中度IUA组）,重度19例（重度IUA组）。收集同期在本院因子宫纵隔、输卵管性不育行常规宫腔镜检查的25例患者为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测所有组织中CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA表达水平;Western blot检测组织中CXCL8、HIF-1α蛋白表达。免疫组化法检测组织中CXCL8、HIF-1α表达。Pearson法分析IUA患者子宫内膜组织中CXCL8、HIF-1α的相关性。结果 与对照组相比,轻度IUA组、中度IUA组、重度IUA组CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA及蛋白表达水平依次升高（P<0.05）;Pearson相关性分析显示,IUA患者子宫内膜组织CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA相对表达水平呈正相关（P<...     

沉默HIF-1α基因表达对大鼠肝癌细胞增殖的影响

 目的： 探讨沉默缺氧诱导因子　1α（HIF-1α）基因表达对缺氧状态下肝癌细胞增殖的影响。方法：选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴（CoCl2）建立缺氧模型。制备3组特异性较强的HIF-1α siRNA-脂质体复合物,转染于肝癌细胞。利用real-time RT-PCR、Western blotting等方法分别检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、p21和cyclin D1在mRNA和（或）蛋白水平的表达。MTT及BrdU 掺入实验检测细胞增殖的变化。结果：缺氧条件下,肝癌细胞的HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达显著增多（P<0.05）。HIF-1α基因表达沉默后,HIF-1α、VEGF及cyclin D1 mRNA和（或）蛋白表达明显减少（P<0.05）,p21蛋白表达明显增加（P<0.05）。HIF-1α siRNA转染组的BrdU阳性细胞比例明显少于对照组(P<0.05)。结论：沉默HIF-1α基因表达对缺氧状态下肝癌细胞的增殖有显著抑制作用。     

大鼠缺氧性肺动脉高压过程中缺氧诱导因子1α和血红素氧合酶1的变化

目的：观察缺氧大鼠肺小血管壁缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血红素氧合酶1（HO-1）基因表达。方法： 40只雄性Wistar大鼠随机分成缺氧0、3、7、14和21 d组。测平均肺动脉压（mPAP），血管形态学指标，右室肥大指数(RVHI)，HO-1活性和HIF-1α, HO-1 基因表达。结果： 缺氧7 d mPAP高于对照组，缺氧14 d达到高峰并维持于此水平。肺血管重塑，RVHI改变在缺氧14 d后出现。HIF-1α蛋白在对照组表达不明显，各缺氧组血管内膜均为阳性。在中膜，HIF-1α蛋白缺氧3 d开始增高，第7 d达到高峰，14 d和21 d后下降，HIF-1α mRNA缺氧14 d增高, 此后维持于高水平。HO-1蛋白在缺氧7 d后增高，14 d后达到高水平，并持续于高水平。HO-1 mRNA缺氧3 d增高，7 d达高峰，之后下降。结论： HIF-1α和HO-1 均在大鼠缺氧性肺动脉高压的发病机制中发挥作用，且HIF-1α与HO-1基因表达可能有相互调控。     

低氧诱导大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF-α的机制

目的：研究低氧诱导肺泡巨噬细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及HIF-1α对肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法：应用HIF-1α诱骗法(HIF-1α decoy)抑制低氧(3％O2，5％CO2，92％N2)培养的肺泡巨噬细胞中HIF-1α的作用，并用免疫组织化学、Western blot、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果：HIF-1α在常氧对照组肺泡巨噬细胞核中表达呈阴性，在低氧组和HIF-1α decoy组表达呈阳性；低氧组和HIF-1α decoy组中HIF-1α蛋白的含量显著高于常氧对照组(P<0.05)。HIF-1α mRNA的含量在低氧组和HIF-1α decoy组明显高于常氧对照组(P<0.05)；培养的巨噬细胞上清液中TNF-α的含量在低氧组(115±17 ng／L)明显高于常氧对照组(69±13 ng／L，P<0.05)和HIF-1α decoy组(81±15 ng／L，P<0.05)。结论： 低氧可明显诱导肺泡巨噬细胞HIF-1α的表达和活性增强，后者能促进TNF-α的产生，提示在可导致肺部低氧的炎症性疾病如COPD中HIF-1α可能发挥重要作用。     

HIF-1α和MMP-2在大鼠脑出血灶周脑组织中的表达

目的：通过动态观察脑出血灶周脑组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达，探讨HIF-1α和MMP-2表达之间的联系。方法：50只SD大鼠随机分成假手术组和脑出血模型组，分别于术后6 h，24 h，72 h，7 d，21 d处死大鼠。RT-PCR方法检测脑出血灶周组织HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达及免疫组织化学方法检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达，并对HIF-1α和MMP-2的表达进行相关分析。结果：模型组术后灶周组织出现HIF-1α, MMP-2 mRNA表达上调和大量黄色的HIF-1α，MMP-2蛋白阳性细胞，于24~72 h达高峰。HIF-1α mRNA及其蛋白表达分别与MMP-2 mRNA及其蛋白表达呈正相关(分别r=0.588, P=0.002; r=0.765, P＜0.001)。结论：脑出血灶周脑组织中HIF-1α和MMP-2的表达上调，且HIF-1α可能调控MMP-2的表达。     

雷帕霉素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞表达和释放HMGB1的机制

目的：探讨雷帕霉素抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞表达和释放HMGB1的作用机制。方法:传代培养的小鼠RAW264.7细胞分5组接种于6孔板，即仅加培养液的对照组；加250 μg/L LPS的诱导组； 诱导组基础上加100 μg/L雷帕霉素的干预组；干预组基础上加rTNF-α 50 μg/L的抗干预组；及抗干预组基础上加抗鼠TNF-α 100 μg/L的抗体中和组。培养4 h后，ELISA法检测对照组、诱导组和干预组上清液中TNF-α水平；培养24 h后，RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞内HMGB1 mRNA表达水平和上清液中HMGB1含量。结果:培养4 h，干预组上清液中TNF-α水平与对照组比无显著差异（P>0.05），但明显低于诱导组（P<0.05）；培养24 h, 与对照组比，诱导组细胞内HMGB1 mRNA表达明显增强（P<0.05），上清液中HMGB1含量也明显增多（P<0.05）；干预组明显减少了HMGB1 mRNA表达及上清液中HMGB1含量（P<0.05）； 与干预组比，抗干预组细胞HMGB1 mRNA表达及上清液中HMGB1含量明显增加（P<0.05）；抗体中和组细胞HMGB1 mRNA表达水平及上清液中HMGB1含量和干预组无显著差异（P>0.05）。 结论:雷帕霉素抑制LPS诱导RAW264.7细胞表达和释放HMGB1，可能部分地与其抑制TNF-α的表达有关。     

通心络对缺氧预适应小鼠脑组织细胞凋亡因子表达的影响

目的:观察缺氧预适应小鼠脑组织细胞凋亡因子表达的变化以及通心络的干预作用。方法:将小鼠随机分为预适应组(对照组)与通心络组2组,通心络组按1.52g生药·kg-1·d-1,灌胃给药,5d后进行实验。2组动物分别进行0次(H0)、1次(H1)、3次(H3)、5次(H5)重复缺氧暴露,小鼠置于低氧密闭罐中,通过小鼠呼吸消耗罐内氧造成罐内低氧,以小鼠出现喘呼吸为低氧耐受极限,然后将小鼠转到另一低氧密闭罐中,依此类推,连续进行5次低氧。观察它们的缺氧耐受时间,以及脑组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(Bax)、B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(Bcl-2)蛋白的表达。结果:随着缺氧次数的增加,对照组与通心络组缺氧耐受时间均依次增强,HIF-1α、Bcl-2蛋白表达逐渐增强(P0.01或P0.05);Bax蛋白在1次缺氧时明显增加,后逐渐降低(P0.01或P0.05)。与对照组比较,通心络组各次缺氧时间增长,HIF-1α、Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达下降(P0.01或P0.05)。结论:缺氧预适应具有强大的自适应能力,HIF-1α、Bcl-2蛋白表达增强和Bax表达下降可能是缺氧预适应小鼠缺氧自适应的机制之一。通心络能够明显增强机体的自适应能力,提高小鼠对急性缺氧的耐受性。     

磷酸肌醇3－激酶调控缺氧诱导因子1α对大鼠缺氧性肺动脉高压的作用

目的:观察缺氧性肺动脉高压（HPH）大鼠肺组织中蛋白激酶B（AKT））和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及血管内皮生长因子(VEGF)的表达，探讨磷酸肌醇3-激酶（PI3K）通路与HIF-1α和VEGF的关系及其在HPH发病中的可能机制。 方法:40只成年雄性Wistar大鼠随机分成对照组、低氧3、7、14和21 d组，每组8只，测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、右室肥大指数（RVHI）、血管形态学指标Western印迹检测磷酸化AKT(P-AKT)；原位杂交和免疫组化检测HIF-1α的表达。免疫组化检测P-AKT和VEGF水平。 结果:① 低氧7 d起大鼠mPAP、管壁厚度与血管外径比值及管壁面积与血管面积比值分别为(23.53 ±1.78)mmHg, (45.5±3.1)%和(54.7±3.2)%,与对照组［(16.15±1.97)mmHg、(36.8±2.5)%、(63.2±2.5)%］比较差异显著(P＜0.05),低氧14 d起稳定于高水平;低氧14 d RVHI为(26.5±2.9)%,与对照组［(22.9±2.2)%］比较差异也显著(P＜0.05)。②p-AKT蛋白在对照组表达不明显，缺氧3 d后表达上升，与对照组比较差异显著(P＜0.05)，且在缺氧3 d、7 d、14 d、21 d组肺小动脉内膜、中膜表达均为阳性。③HIF-1α蛋白对照组表达不明显，缺氧3 d、7 d、14 d、21 d组肺血管内膜均为阳性，肺血管中膜，缺氧3 d组表达开始升高（0.209±0.009），与对照组比较差异显著(P＜0.05),缺氧7 d达高峰（0.232±0.008,P＜0.05），14 d和21 d下降；HIF-1α mRNA在对照组肺动脉血管壁内表达弱阳性，缺氧3 d和7 d肺血管中表达无明显变化，与对照组比较差异无显著(P＞0.05)。缺氧14 d后表达增高(0.305±0.104, P＜0.05),并持续维持于高水平。VEGF蛋白水平在低氧7 d显著高于对照组(0.188±0.018, P<0.05),14 d达高峰(0.238±0.017, P<0.05)。相关分析表明mPAP与肺血管重塑呈正相关(r=0.983, P<0.01)。在肺小血管内膜:P-AKT与 HIF-1α蛋白呈正相关(r=0.883, P<0.01)， HIF-1α与VEGF蛋白呈正相关(r=0.897, P<0.01)。 结论:磷酸化AKT与HIF-1α和VEGF均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用。磷酸化AKT可能通过使HIF-1α蛋白表达增加的方式上调HIF-1α，进而上调下游目标基因VEGF，导致HPH的发生和发展。     

circ＿0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制

目的 探讨环状RNA(circRNA)circ＿0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制。方法 收集2018年1月至2021年4月见未出现转移的肺腺癌患者46例、出现转移的肺腺癌患者42例和健康者50例。通过RT-qPCR检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和circ＿0014130的水平。通过Pearson检测二者的相关性。肺腺癌细胞分为对照组、缺氧组、si-circ＿0014130组、缺氧+si-circ＿0014130组。通过转染抑制circ＿0014130,通过降低氧气浓度（10%）构建体外缺氧环境。比较各组细胞的迁移和侵袭能力。结果 肺腺癌组患者血清中的HIF-1α mRNA(2.14±0.27)和circ＿0014130(2.59±0.23)水平均显著高于健康组（分别为1.00±0.16、1.00±0.14）(P<0.01);肺腺癌转移组的HIF-1α mRNA(3.85±0.42)和circ＿0014130(4.36±0.44)水平均显著高于健康组和肺腺癌组（P<0.01）;HIF-1...     

神经调节因子对MDA-MB-231细胞mtp53和HIF-1α的影响及意义

 目的：探讨在ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231中,神经调节因子（NRGs）/ ErbB2信号通路对突变型p53（mtp53）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响及意义。方法：免疫细胞化学法和Western blotting检测MDA-MB-231细胞中神经调节因子（NRG）的表达。应用rbB2受体功能抑制剂AG825处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡; Western blotting检测mtp53、HIF-1α蛋白表达;RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达。结果：神经调节因子在乳腺癌细胞MDA-MB-231呈显著表达,Western blotting实验可见分子量44 kD的NRG抗体阳性反应条带。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825后,MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效、量效依赖关系(P<0.01);细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞凋亡增加（P<0.05）;mtp53、HIF-1α蛋白表达减少(P<0.05);HIF-1α mRNA表达减少(P<0.05)。结论：ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231存在神经调节因子分泌,可能通过神经调节因子自分泌或旁分泌配体作用方式使ErbB2受体信号转导处于激活状态,上调mtp53和HIF-1α的表达,促进肿瘤细胞的增殖、存活能力和抑制凋亡。     

HIF-2α调控心肌细胞中IL-6表达对心肌缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)调控心肌细胞中IL-6表达对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用.方法 8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠构建MIRI模型,一部分小鼠分为对照组(注射生理盐水)和HIF-2α shRNA组(注射含HIF-2αshRNA3的生理盐水),获取小鼠心肌细胞探讨HIF-2α对IL-6的调控和对MIRI的作用;一部分小鼠分为对照组(注射生理盐水)和IL-6 shRNA组(注射含IL-6 shRNA的生理盐水),获取小鼠心肌细胞探讨IL-6对MIRI的作用.结果 HIF-2α shRNA组缺氧/复氧后的心肌细胞凋亡率、心肌梗塞面积高于对照组(P＜0.05);缺氧/复氧处理后的心肌细胞HIF-2α及IL-6的蛋白表达量高于常氧环境下,HIF-2α shRNA组HIF-2α、IL-6的蛋白表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);ChIP实验结果显示低氧状态下HIF-2α抗体募集的IL-6基因的启动区域的DNA丰富度高于常氧组(P＜0.05);IL-6 shRNA组缺氧/复氧后的心肌梗塞面积大于对照组(P＜0.05).结论 HIF-2α可保护心肌抗MIRI,同时参与转录调控IL-6的表达.     

低氧对食管癌Eca109细胞体外迁移及侵袭的影响

 目的 探讨低氧对食管癌迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法 采用CoCl2化学低氧法模拟肿瘤低氧微环境,半定量RT-PCR和免疫细胞化学分别检测不同低氧时相时食管癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、E-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA及蛋白的表达。Western印迹法检测雷帕霉素联合低氧处理Eca109细胞后,HIF-1α、E-钙粘蛋白及MMP-2的变化。细胞划痕试验和Transwell实验检测雷帕霉素联合低氧对Eca109细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 Eca109细胞在低氧状态下,HIF-1αmRNA无明显变化（P>0.05）,仅蛋白表达增多;E-钙粘蛋白的mRNA表达明显降低（P<0.05）,蛋白表达减少;MMP-2 mRNA表达明显升高（P<0.05）,蛋白表达增多。雷帕霉素在低氧状态下可显著抑制HIF-1α及MMP-2表达,促进E-钙粘蛋白高表达。经雷帕霉素处理后,Eca109细胞在低氧状态下,迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少（P<0.05）。结论 低氧使Eca109细胞中HIF-1α蛋白表达增多,后者可能通过下调E-钙粘蛋白、上调MMP-2表达促进食管癌在低氧状态下的迁移及侵袭。     

缺氧诱导因子-1α在大鼠放射性口腔黏膜炎中的表达及意义

目的: 检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及蛋白在大鼠放射性口腔黏膜炎组织中的表达水平，并探讨其在ROM中的作用机制。方法: 建立放射性口腔黏膜炎SD大鼠模型，左侧颊黏膜为试验侧，右侧颊黏膜为自身对照侧，切取左、右侧颊黏膜，用半定量RT-PCR检测各标本HIF-1α的mRNA相对表达值，采用免疫组化SABC法检测HIF-1α蛋白在黏膜炎组织中的表达部位及表达强度。结果: 成功地建立了SD大鼠放射性口腔黏膜炎动物模型；RT-PCR结果显示ROM黏膜组织能够表达HIF-1α mRNA，而右侧自身对照组基本不表达HIF-1α mRNA；免疫组化结果显示：HIF-1α蛋白在ROM黏膜组织中能广泛表达。 结论: 放射性口腔黏膜炎组织有HIF-1α mRNA及蛋白的表达，其表达与放射性口腔黏膜炎的严重程度有关。     

miR-7靶向缺氧诱导因子1α对肝癌细胞的影响

目的：探究微小RNA-7(miR-7)靶向缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肝癌细胞迁移、凋亡及干细胞特性的影响。方法 ：采用慢病毒转染肝癌细胞MGCC97H,分为对照组、miR-7模拟物组、miR-7干扰组（转染miR-7模拟物组+干扰物）、HIF-1α过表达组（转染pc-HIF1α）和共转染组（转染miR-7模拟物+pc-HIF1α）,RT-PCR检测各组细胞miR-7、HIF-1α mRNA表达量,免疫印迹检测各组HIF-1α蛋白的表达量,Transwell实验检测细胞迁移能力,流式细胞法检测细胞凋亡情况,软琼脂克隆形成实验分析其干细胞特性,荧光素酶实验验证miR-7与HIF-1α靶向关系。结果 ：miR-7模拟物组细胞HIF-1α蛋白表达、迁移率、克隆形成率低于对照组,凋亡率高于对照组;HIF-1α过表达组细胞迁移率、克隆形成率高于对照组,凋亡率低于对照组;共转染组HIF-1α蛋白表达、细胞迁移率、克隆形成率低于HIF-1α过表达组,凋亡率高于HIF-1α过表达组。结论 ：miR-7靶向HIF-1α可降低肝癌细胞迁移能力及干细胞特性,促进细胞凋亡,miR-7及HIF-1α可能是...     

TNF-α诱导的胰岛素抵抗对小鼠脂肪组织INSIG2和SCAP表达的影响

目的： 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的胰岛素抵抗（IR）对脂代谢相关基因INSIG1、INSIG2、SCAP和SREBP表达的影响。 方法：健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,分别给予腹腔注射TNF-α（6 μg·kg-1·d-1、3 μg·kg-1·d-1和1 μg·kg-1·d-1）和生理盐水（NC组）每天2次,共7 d。采用静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT）评价小鼠胰岛素敏感性和糖代谢的变化,用酶法测定胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸等变化,用RT-PCR法检测脂肪组织胰岛素诱导基因1和2（INSIG1、INSIG2）、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白（SCAP）和固醇调节元件结合蛋白 （SREBP）基因的RNA表达,并用Western blotting检测INSIG2蛋白的表达。结果： TNF-α 处理后,小鼠空腹血糖（FBG）、血浆胰岛素和游离脂肪酸 (FFA) 水平均明显增高（P<0.01和P<0.05）。IVGTT结果显示,TNF-α（6 μg·kg-1·d-1）组糖耐量低减,葡萄糖刺激后胰岛素释放水平明显高于其它3组。TNF-α（6 μg·kg-1·d-1）组小鼠脂肪组织中INSIG2 mRNA表达明显高于对照组（P<0.01）,其蛋白水平也明显高于对照组（P<0.05）。TNF-α（6 μg·kg-1·d-1）组小鼠脂肪组织SCAP mRNA表达也明显高于对照组（P<0.05）。两组小鼠脂肪组织INSIG1和SREPP1 mRNA表达无明显差异(P<0.05)。 结论：INSIG2和SCAP的变化可能与TNF-α 所导致的脂代谢紊乱有关。