中药促骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有多向分化潜能以及自我复制的能力,可借助一定诱导条件分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等成熟细胞,是目前骨组织工程中较为理想的种子细胞.选用中药作为诱导剂,较之以往应用的化学物质和细胞因子,能选择的作用靶点更广泛,且更加廉价实用.研究表明中药及其有效成分能够显著促进BMSCs向成...     

龟板对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化的影响

目的探讨益肾中药龟板对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外向成骨分化的影响.方法使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSCs的成骨变化.应用形态学、碱性磷酸酶组织化学染色、Von Kossa 染色、骨钙素测定等方法观察细胞成骨活性.结果形态学表明,MSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞外观.龟板组碱性磷酸酶、钙化结节、骨钙素明显升高,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05).结论 MSCs受龟板诱导高效地向成骨细胞分化,可以为体内骨组织工程提供种子细胞.     

骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞的成骨分化是近10年来骨组织工程种子细胞的研究热点,本文查阅相关文献,对近年骨髓间充质干细胞成骨分化进行综述.     

龟板提取物调控骨髓间充质干细胞中Id1表达的研究

目的观察龟板提取物在不同的时间点对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的影响。方法将构建成功的PGL3-Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞,龟板提取物分别作用于转染后的骨髓间充质干细胞36小时、3天、7天,每个时间点分别加入0,1,3,30,100μg/ml的龟板提取物,药物作用一定时间后收集细胞分别应用萤光素酶报告基因系统、RT-PCR检测Id1蛋白的表达。结果 36小时和3天时,小剂量的龟板提取物对分化抑制蛋白1的影响不大,随着时间和剂量的增加,龟板提取物量效依赖性地促进了Id1的表达;7天时,龟板提取物对Id1的促进作用逐渐减弱。结论龟板提取物促进了骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的表达,且其促进作用呈现增高-最强-减弱的特点。     

中药诱导骨髓间充质干细胞成软骨及成骨分化的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)不仅具有强大的自我更新能力、多向分化潜能,还兼具低免疫原性及归巢能力,是骨及软骨组织工程中理想的种子细胞。目前,诱导BMSCs分化的细胞因子由于价格昂贵和安全性问题而无法广泛应用于临床实践中。研究表明中药及其有效成分可诱导BMSCs分化,具有与细胞因子类似的生理活性。文章旨在对中药诱导BMSCs成软骨及成骨分化的研究进展进行综述,以期为骨科疾病的防治研究提供参考。     

骨髓间充质干细胞成骨分化信号通路的研究进展

骨髓由造血和基质系统组成,骨髓基质为造血系统提供结构和功能支持,其成骨潜能来源于基质系统的间充质干细胞（MSCs）。MSCs具有多向分化潜能,可以分化为骨、软骨、骨骼肌细胞、神经细胞、星型胶质细胞、心肌细胞、肝样细胞等。如何定向诱导其成骨分化是解决骨组织工程中种子细胞来源的一个前提。MSCs的成骨分化受到多种信号通路的调控,     

补肾法诱导骨髓间充质干细胞定向成骨分化的研究进展

中医学认为:肾主骨,生髓。骨的生成,发育,强弱,盛衰均与肾有密切关系。众多研究表明补肾法能诱导骨髓间质干细胞定向成骨分化,骨髓间质干细胞是多能细胞,通过诱导可分化成为骨、软骨、脂肪、肌腱,这是用现代科学技术更完善地阐释补肾法的理论依据,对防治骨质疏松症,骨坏死,骨缺损等也有重大价值。     

中药干预骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化及其机制的研究进展

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是来源于中胚层并具备多向分化潜力的多功能干细胞,是骨髓内成骨细胞和脂肪细胞的共同来源,且在成骨分化与成脂分化间维持着动态平衡。近年来的研究表明大量中药能够通过Wnt/β-catenin信号通路、Runx-2、ALP等相关成骨因子和PPAR-γ途径有效调控BMSCs的成骨分化和成脂分化。本文就中药对BMSCs成骨及成脂分化的影响效应和机制进行简要概括。     

补肾化痰法影响骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的:研究补肾化痰法对BMSCs成骨分化的影响,探讨补肾化痰法治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离培养纯化Wsitar大鼠BMSCs,诱导BMSCs成骨分化,观察补肾中药、化痰中药和补肾化痰中药分别对BMSCs成骨分化后茜素红染色及定量、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)mRNA表达影响。结果:补肾化痰中药能促进BMSCs成骨诱导后细胞体外钙化,提高细胞内ALP活性,上调OCN-mRNA表达。结论:补肾化痰法可以促进BMSCs向成骨细胞分化。     

松果菊苷诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的:探讨松果菊苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用及可能的机制。方法:MTT实验观察不同浓度(7.867×10~3mg/L,78.67mg/L,0.7867mg/L,7.867×10~(-3)mg/L)松果菊苷对细胞增殖的影响,采用ELISA测定不同浓度松果菊苷组的碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的表达,评价成骨分化的能力。免疫荧光和Western blot检测BMP2、Smad1、Runx2蛋白的表达,RT-PCR检测BMP2、Smad1、Runx2 m RNA的表达,分析成骨分化的可能作用机制。结果:MTT实验结果显示78.67mg/L和0.7867mg/L的松果菊苷促进细胞增殖的能力较好。经典成骨诱导组(10%FBS+3.061×103mg/Lβ-甘油磷酸钠+3.925×10-3mg/L地塞米松+8.806mg/L维生素C)和78.67mg/L的松果菊苷组的ALP(48.07)和BGP(141.67)表达均明显增强。经典成骨诱导组和松果菊苷组的BMP2、Smad1、Runx2蛋白表达及BMP2、Smad1、Runx2 m RNA表达明显增强。结论:松果菊苷可以促进体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,其作用机制与BMP2、Smad1、Runx2表达增加有关。     

戴村骨伤膏提取液对胎盘源性间充质干细胞成骨诱导分化的影响

目的:为了研究戴村骨伤膏对骨折愈合的影响,我们通过人胎盘源性间充质干细胞(hPMSC)的体外细胞试验,观察药物对干细胞成骨诱导分化的影响。方法:在体外培养的hPMSC中,加入不同药物剂量浓度的实验药液和成骨诱导液混合液,诱导2~4周后进行检测。采用偶氮偶联法进行碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞形成。Von Kossa染色法鉴定钙结节形成。以鼠抗人I型胶原单克隆抗体为一抗,羊抗鼠SABC为二抗,进行免疫组织化学染色。用流式细胞仪检测细胞表面标志。结果:hPMSC在诱导培养基培养条件下3 d出现细胞变粗,1周后细胞变为多角形或者是圆锥形,周边出现丝状突出,2周可见细胞基质矿化物逐渐出现,形成多层小结结构。实验2周后细胞基质内出现钙化,4周Von Kossa染色钙结节阳性,程度随药物剂量递增,药物诱导组(50mg.L-1)可见大量的黑色钙结节,单纯诱导组可见少量黑色钙结节形成,而对照组在任何时间都没有阳性反应。药物诱导2周后细胞碱性磷酸酶染色阳性,并且程度与药物剂量成正比,而单纯诱导液组的染色为弱阳性,未经诱导的显示阴性。经流式细胞术检测细胞表型发现经诱导而成的成骨细胞细胞表型无改变,表明其来源来自间充质干细胞。结论:戴村骨伤膏提取液能促进胎盘源性间充质干细胞成骨诱导分化,并且随药物剂量增加而效果提高。     

小檗碱对兔血脂代谢及维生素D受体和胰岛素诱导基因2基因表达的影响

目的研究小檗碱对高脂模型兔血脂代谢的影响,并探讨其调血脂作用是否与维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、胰岛素诱导基因2(insulin-induced gene 2,Insig-2)的表达变化有关。方法雄性新西兰大耳白兔40只随机分为对照组、模型组、阳性药非诺贝特(30 mg/kg)组和小檗碱低、高剂量(28、112 mg/kg)组。兔喂饲高脂饲料8周建立高脂模型,给药8周后测定各组兔血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白a(LPa)等指标的水平。RT-PCR法检测脂肪组织中VDR和Insig-2基因表达的变化。结果与对照组比较,模型组兔血清TC、TG、LDL-C、ApoB及LPa水平明显升高(P<0.05),而ApoA1水平则明显降低(P<0.05);经小檗碱处理后,兔血清中TC、TG、LDL-C、ApoB及LPa的水平较模型组显著降低(P<0.05),同时ApoA1水平则明显升高(P<0.05);RT-PCR检测结果显示,小檗碱干预后兔脂肪组织中VDR、Insig-2 mRNA的表达较模型组显著升高(P<0.05),且低剂量小檗碱的效果更明显。结论小檗碱具有明显的调血脂作用,其机制可能是通过上调脂肪组织VDR和Insig-2 mRNA表达来实现的。     

心肌微环境下丹酚酸B诱导MSCs 向心肌样细胞分化的研究

[目的]复制心肌缺血-再灌注损伤模型,体外模拟心肌缺氧复氧微环境,观察丹酚酸B(SalB)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的作用。[方法]通过向MSCs培养体系中添加心肌细胞裂解液的方法,体外模拟心肌微环境。自成年大鼠骨髓中分离MSCs,设对照组(A组)、心肌细胞裂解液(TJ)组(B组)、SalB组(C组)、TJ+SalB组(D组)。培养4周,观察细胞形态,并采用免疫荧光技术检测cTnT的表达。[结果]除A组MSCs无明显的肌样细胞形成,各诱导组均有肌样细胞分化,D组与C组相比,cTnT表达率明显增高,差异有统计学意义。[结论]心肌细胞裂解液可以诱导MSCs向心肌样细胞分化;心肌微环境的建立有利于SalB诱导MSCs向心肌样细胞分化。     

双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程的蛋白表达

目的:研究中药复方双龙方(人参,丹参)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化过程的蛋白表达;方法:采用双龙方含药血清对中国小型猪MSCs定向诱导分化为心肌样细胞的过程进行人工干预。对分化前后细胞蛋白进行二维电泳分离,PDQuest软件分析蛋白点的表达情况;对差异蛋白进行质谱分析并加以鉴定。结果:成功鉴定16个蛋白,通过对成功鉴定的蛋白功能进行数据库检索,表明这些蛋白的差异表达可能与中药干预过程有关;结论:双龙方含药血清对MSCs体外定向分化过程有一定的辅助作用;同时表明蛋白质组学技术可以应用于细胞增殖、分化和凋亡等过程的机理分析。     

Notch和BMP信号通路介导红景天苷促进小鼠骨髓间充质干细胞向神经元细胞定向分化研究

目的探讨BMP和Notch信号通路介导红景天苷诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞定向分化的分子机制。方法实验分为对照组、红景天苷诱导组和阻断组。利用细胞免疫荧光化学方法、Real-Time PCR方法和Western blotting方法分别研究了红景天苷对MSCs的增殖、形态以及对BMP和Notch信号通路的影响。结果红景天苷影响MSCs的增殖且促进其形成神经元样细胞;细胞免疫荧光结果显示,红景天苷可降低Notch1和Jadge1阳性表达率(P0.05);红景天苷诱导细胞12~72 h时,Notch1和Hes1 m RNA表达丰度明显下调(P0.05);特异性阻断剂DAPT阻断Notch信号通路后,神经元细胞标志分子NSE、MAP-2和β-tubulin III m RNA和NSE、β-tubulin III蛋白的表达水平与阻断前比较显著上调(P0.05)。12 h时Smad5和Smad8 m RNA的表达水平显著上调(P0.01),且12和24 h时Smad1/5/8蛋白表达上调(P0.05);Noggin阻断BMP信号通路后,NSE、MAP-2和β-tubulin III m RNA的表达丰度与诱导组比较明显下调(P0.05);DAPT和Noggin同时阻断Notch和BMP信号通路后,与单独阻断BMP信号通路后比较,MAP-2和β-tubulin III m RNA的表达上调,NSE和β-tubulin III蛋白的表达水平上调(P0.05)。结论红景天苷通过抑制Notch信号通路、激活BMP信号通路诱导MSCs向神经元细胞定向分化。     

中药对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化影响的研究概况

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有在体内及体外向神经细胞分化的潜能，为多种神经系统疾病的细胞治疗提供了新的思路。开展中药定向诱导间充质干细胞向神经细胞分化研究，可望为今后临床神经细胞移植提供安全有效的诱导分化剂，也可为中医药在间充质干细胞领域的应用开辟新的途径。     

麦门冬汤对大鼠骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的影响

[目的]观察麦门冬汤含药血清对促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向肺泡上皮细胞分化的影响。[方法]分别予麦门冬汤大鼠血清、肺纤维化模型大鼠血清、肺纤维化模型大鼠+麦门冬汤血清对绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞(GFP-BMSC)进行干预14 d,通过免疫组化、实时荧光定量聚核酶链反应(qPCR)方法,检测各组GFPBMSC细胞肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白-5(AQP-5)蛋白及mRNA的表达。[结果]模型组、模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5蛋白表达明显高于DMEM对照组、麦门冬汤组(P0.01),其中模型+麦门冬汤组SP-C、AQP5表达明显高于模型组(P0.01)。[结论]麦门冬汤在肺纤维化环境中可促进GFP-BMSC向肺泡上皮细胞分化,该作用可能是其改善肺纤维化的重要机制。     

丹酚酸B对大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中Desmin、α-actinmRNA表达的影响

[目的]探讨丹参单体丹酚酸B(SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Desmin和α-actin mRNA的表达,确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点.[方法]选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增.免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定.分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azaeytidine,5-aza)及250μg/L SalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24 h,于诱导后第4周,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PcR)法检测Desmin、α-actin mRNA的表达.[结果] 1)第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达.2)诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-aza+SalB组的Desmin和α-actin mRNA表达明显增强.[结论] SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用.     

Cyclin D1启动子在养精胶囊促进小鼠精原干细胞增殖中的作用※

目的 研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞（SSCs）增殖的分子机制。方法 将不同浓度的养精胶囊提取物加入SSCs中培养48 h,CCK-8检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,荧光素酶报告基因检测Cyclin D1启动子的活性,qRT-PCR以及免疫荧光检测Cyclin D1的表达。之后进行阻断实验,在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1,同样的方法检测细胞的增殖活性、细胞周期、Cyclin D1启动子的活性以及Cyclin D1的表达情况。结果 低、中、高浓度的养精胶囊可以促进SSCs的增殖,提高S期细胞的比例,增强Cyclin D1启动子的活性,促进Cyclin D1的表达。阻断Cyclin D1后,SSCs的增殖活性降低,S期细胞比例减少,Cyclin D1启动子的活性降低,Cyclin D1的表达减少。结论 养精胶囊通过增强Cyclin D1启动子的活性提高Cyclin D1的转录和翻译水平,进而促进SSCs增殖。