昆母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞bax、bcl-2的影响

目的 观察昆母汤醇提液（KMT）对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）B淋巴细胞瘤-2基因（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）mRNA及蛋白的影响,探讨昆母汤治疗RA的部分作用机制。方法 滑膜组织取自行关节置换术或关节镜检查术的8例活动性类风湿关节炎（RA）患者,分离出FLS并进行原代培养,用逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）观察bax、bcl-2 mRNA表达的变化,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测bax、bcl-2蛋白含量的变化。结果 与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）组比较,KMT高剂量组可以明显促进bax mRNA表达,明显抑制bcl-2 mRNA表达,且bax mRNA/bcl-2 mRNA比值明显提高（P＜ 0.05,P＜ 0.01）;KMT中、高剂量组可以提高bax蛋白含量,各剂量组均可降低bcl-2蛋白含量,bax/bcl-2的蛋白比值明显提高（P＜ 0.05,P＜ 0.01）,且有一定的剂量依赖性。结论 昆母汤可能通过抑制bcl-2的表达,同时促进bax的表达,调节bax/bcl-2比值来发挥对RA-FLS的促凋亡作用,具有治疗RA的潜在价值。     

丹参注射液对人血清培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的 探讨丹参注射液对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者血清培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA FLSs）增殖的影响。方法 常规培养良好的RA FLSs,传代时用10%未灭活人血清（健康人血清和RA患者血清）作用24 h后,加入终浓度为0.4 mg/mL 丹参注射液,继续培养24 h。以10%胎牛血清作对照,光学显微镜观察人血清培养后和丹参注射液作用后的细胞形态变化;采用MTT法分析其增殖变化;流式细胞仪检测其凋亡;提取各组总RNA并逆转录,荧光定量PCR检测Bax mRNA表达。结果 （1） 无论是加入健康人血清还是RA患者血清后,细胞均能贴壁生长。相比而言胎牛血清组细胞背景较为干净,而人血清组细胞密度较胎牛血清组高,细胞形态无明显改变。（2）与胎牛血清组比较, MTT增殖实验显示, 健康人血清组和RA患者血清组的吸光度（OD）值均明显增高,差异有统计学意义（P<0.01）;加终浓度为0.4 mg/mL丹参注射液后,3组不同来源血清作用的细胞均受到不同程度的抑制（OD值显著降低,P<0.05）,且健康人血清组和RA患者血清组与胎牛血清组比较,OD值显著增加,差异有统计学意义（P<0.01）,健康人血清组与RA患者血清组比较,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（3） 与胎牛血清组比较,RA血清组凋亡率明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）;胎牛血清组和RA患者血清组,经0.4 mg/mL丹参作用后,与相应未加丹参组比较,凋亡率均显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）; FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,与胎牛血清组比较,健康人血清组和RA患者血清组的凋亡率均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。（4） FLSs经0.4 mg/mL丹参作用后,RA血清组和胎牛血清组Bax mRNA表达均增加,差异有统计学意义（P<0.01）; 与胎牛血清组比较,健康人血清组及RA患者血清组,Bax mRNA的表达变化明显,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 （1）虽然健康人血清能更好的利于RA FLSs的生长,但对于特定疾病的细胞生物学研究,如无相应疾病患者血清前提下,胎牛血清更能反映真实结果;（2）丹参注射液可通过促进RA FLSs凋亡而抑制其增殖。     

痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的：探讨痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖及凋亡抑制基因bcl-2mRNA、凋亡促进基因bax mRNA表达的影响。方法：FLS加入高、中、低剂量痹清饮培养72h,采用MTT法测定痹清饮对FLS的增殖抑制率,采用半定量RT-PCR方法测定痹清饮对FLS bcl-2、bax mRNA表达的影响。结果：痹清饮能明显抑制FLS增殖,增殖抑制率随药物浓度的升高而升高,痹清饮低、中及高剂量组增殖抑制率分别为22.7%、49.8%及72.9%;bax mRNA随痹清饮浓度增加而表达增强,bcl-2mRNA随痹清饮浓度增加而表达减弱。结论：痹清饮能有效抑制FLS增殖,诱导FLS凋亡。     

海藻多糖对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨海藻多糖对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synovialcytes,FLS)凋亡的影响及机制。     

痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的干预作用

目的:探讨痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖分化的影响。方法:分离培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞,不同浓度痹清饮作用后,与白芍总苷对照,MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞周期。结果:痹清饮能显著抑制成纤维滑膜细胞增殖分化,并且抑制作用呈明显的量效关系。结论:痹清饮可抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖,促进凋亡。     

蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡影响的研究

目的 :探究蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(FLS-RA)凋亡的影响。方法 :原代培养FLS-RA,MTT法测定蜂毒注射液对细胞增殖及细胞毒性作用,hoechst染色法观察凋亡小体,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果:组织块培养法培养2周后细胞向心性排列,呈梭形及三角形。经过3~5次传代,FLS-RA细胞逐渐纯化,以FLS为主(>95%),体外生长稳定。倒置相差显微镜观察细胞形态:细胞排列整齐,向心性排列,呈梭形或三角形,偶见圆形细胞,细胞核成卵圆形,居细胞中央,胞质均匀透亮。干预24 h:各组生存率低于空白对照组(P<0.05),浓度越高,生存率越低;蜂毒注射液处理48 h:各组生存率低于空白对照组(P<0.05),浓度越高,生存率越低;同浓度蜂毒注射液处理24 h生存率与48 h比较:48 h组小于24h组(P<0.05)。利用ORIGIN 5.0软件计算蜂毒注射液的半数抑制浓度(IC50)为(16.79±0.13)mg/L。实验组与阳性对照组中凋亡小体形态相似,细胞核呈致密浓染,颜色发白,而阴性对照组未见明显凋亡小体,细胞核未见固缩的染色质。B1区为细胞碎片,B2区为晚期凋亡和死亡的细胞,B3区为正常细胞,B4区为早期凋亡的细胞。由于B2区包含死亡的细胞,多选择B4区比较早期凋亡率。低浓度组蜂毒注射液作用FLS-RA细胞24 h,早期凋亡率大于空白对照组(P<0.05);高浓度组蜂毒注射液早期凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01),且大于低浓度组(P<0.05)。结论:蜂毒注射液可诱导成纤维样滑膜细胞凋亡,这可能是蜂毒治疗类风湿关节炎的机理之一。     

青藤碱联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的 观察青藤碱（sinomenine,SIN）联合甲氨蝶呤（methotrexate, MTX）对体外培养类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast like synoviocytes,FLS）增殖、凋亡及其破骨细胞分化因子表达的影响。方法 从RA患者滑膜组织分离培养FLS,分为SIN1、2、3、4组,MTX1、2、3、4组,联合1、2、3、4组,分别加入0.001、0.010、0.100、1.000 mg/mL SIN,0.001、0.010、0.100、1.000 mg/mL MTX,0.001 mg/mL SIN+0.001 mg/mL MTX,0.010 mg/mL SIN+0.010 mg/mL MTX,0.100 mg/mL SIN+0.100 mg/mL MTX,1.000 mg/mL SIN+1.000 mg/mL MTX的含药培养基,并以未加药物的培养基作为对照组,共13组,每组设3个复孔。采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;半定量RT PCR检测FLS NF-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）mRNA表达水平。结果 与对照组比较,各药物组RA FLS增殖OD值均降低, 联合3组RA FLS凋亡OD值、OPG mRNA表达升高,RANKL mRNA表达降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;与联合3组比较,SIN 3组及MTX 3组RA FLS增殖OD值升高（P<0.05）。结论 SIN与MTX联合对RA FLS具有协同抑制效应,这可能是二者联用抑制RA骨破坏的机制之一。     

桂枝附子汤对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及分泌的影响

目的：探讨桂枝附子汤(Guizhi Fuzi Decoction, GFD)对TNF-α(Tumor necrosis factor alfa, TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(Human Fibroblast-Like Synoviocytes:Rheumatoid Arthritis, HFLS-RA)增殖及分泌的影响及机制。方法：分组为：空白组对照;TNF-α组;甲氨蝶呤(Methotrexate, MTX)组;桂枝附子汤高、中、低剂量组。用TNF-α(10 ng/ml) 刺激HFLS-RA细胞,并加入不同浓度的桂枝附子汤(200ug/ml、400ug/ml、800ug/ml)作用后,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力;ELISA(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)及qPCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测MMP3(Matrix metalloproteinases 3,MMP3)、IL-1β(Interleukin-1β,IL...     

清热活血方对肿瘤坏死因子α诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞迁移和黏附的影响

目的观察清热活血方治疗活动期类风湿关节炎的可能作用机制。方法分离类风湿关节炎患者的滑膜组织制备原代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）,采用肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导RA-FLS的迁移和黏附。设空白组（不加药物及TNF-α干预）、诱导组（10或20ng/mlTNF-α诱导）、清热活血方低、中、高剂量组（20、100、500ng/ml清热活血方+TNF-α诱导）。检测各组细胞迁移距离及面积、细胞黏附OD值和黏附抑制率,并检测细胞中PI3K/Akt信号通路相关蛋白（PI3K、p-Akt、Akt）表达。结果与空白组比较,诱导组细胞迁移距离及面积增加、黏附OD值增大、PI3K及p-Akt蛋白表达升高（P<0.01）;与诱导组比较,清热活血方各剂量组均可抑制细胞的迁移和黏附以及PI3K、p-Akt蛋白表达,并以500ng/ml效果最好（P<0.05或P<0.01）。结论清热活血方可能通过下调RA-FLS中PI3K、p-Akt蛋白表达,抑制RA-FLS的迁移和黏附,从而减缓滑膜炎症和关节破坏的进展。     

当归拈痛汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞自噬与凋亡的影响

目的:研究当归拈痛汤对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞自噬与凋亡的影响,进一步探讨当归拈痛汤防治RA的相关机制.方法:收集临床RA患者的滑膜组织,分离出成纤维样滑膜细胞(FLS)并进行培养,将RA-FLS细胞分为4组,分别为空白血清组、当归拈痛汤含药血清低、中、高剂量组.通过划痕实验,transwell侵袭实验检测...     

针刺对多发梗塞性痴呆模型大鼠海马bcl-2及bax的影响

目的:观察针刺对多发梗塞性痴呆模型大鼠海马bcl-2和bax mRNA及蛋白表达的影响。方法:通过向颈内动脉注入自体血栓的方法建立大鼠MID模型。将大鼠随机分为模型组、针刺组、非穴组和假手术组;针刺组取人中、内关、风池穴,非穴组取双侧肋下两固定非穴点,每日针刺1次;模型组与假手术组进行与针刺组和非穴组相同时间、相同程度的捉抓。连续针刺2 w后断头处死大鼠,取左侧大脑。原位杂交和免疫组化法观察海马bcl-2和bax mRNA及蛋白的表达。结果:模型组bcl-2和bax mRNA和蛋白的表达均增加;针刺后,bcl-2 mRNA和蛋白的表达进一步增加,bax mRNA和蛋白的表达减少。结论:针刺可促进MID模型大鼠海马bcl-2的表达,抑制bax的表达,从而保护脑组织,且这种作用具有穴位特异性。     

针刺对高脂大鼠主动脉内皮bcl-2和bax的影响

目的:探讨高脂饮食对SD大鼠主动脉内皮凋亡的影响以及针刺对该影响的作用.方法:17只刚断乳的SD大鼠经高脂喂养12周后检测血清NO和MPO,按体重随机分为模型组(8只)和针刺组(9只),干预4周后检测血清NO、MPO和主动脉NO、SOD、MDA、bax、bcl-2,并设普食对照组(9只).结果:模型组血清MPO和主动脉MDA、bax均明显高于对照组,血清和主动脉NO、主动脉SOD和bcl-2明显低于对照组;针刺后血清MPO和主动脉MDA、bax明显降低,血清和主动脉NO、主动脉SOD和bcl-2明显增加.结论:高脂饮食增加了SD大鼠主动脉内皮的氧化应激水平,造成主动脉内皮凋亡增加;针刺能够减轻高脂饮食大鼠主动脉内皮的氧化应激,改善主动脉内皮的凋亡.     

补肾活血方对兔骨性关节炎软骨细胞中bax、bcl-2表达影响的实验研究

目的 观察兔软骨细胞bcl-2、bax的表达来探讨补肾活血方治疗骨性关节炎作用机理. 方法 将48只新西兰白兔随机分为空白组、模型组、阳性对照组和补肾活血方组,通过免疫组化现察关节软骨中bcl-2、bax的表达. 结果 免疫组化染色显示模型组、阳性对照组和补肾活血方组bcl-2阳性表达率与空白组比较均显著增加(P<0....     

含碘中药对甲亢大鼠细胞凋亡基因bcl-2及bax表达的影响

目的:观察不同浓度含碘中药对甲亢大鼠模型甲状腺组织bcl-2、baxmRNA表达的影响.方法:制作大鼠甲状腺机能亢进模型,灌服不同浓度含碘中药复方及其他对照药物进行治疗,然后RT-PCR法检测各组大鼠甲状腺组织bcl-2、bax mRNA水平.结果:含碘较低的中药复方较之含碘高的中药复方在增加bcl-2mRNA表达及减少bax mRNA表达上具有显著性的差异.结论:小剂量含碘中药复方对实验性甲亢大鼠甲状腺细胞具有保护作用.     

华蟾素对晶状体上皮细胞增殖及bcl-2 mRNA、bax mRNA表达影响

目的 探讨华蟾素对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)增殖及凋亡抑制基因bcl-2 mRNA、凋亡促进基因bax mRNA表达的影响。     

针刺对多发梗死性痴呆模型大鼠大脑皮质bcl-2及bax的影响

[目的]观察针刺对多发梗死性痴呆（MID）模型大鼠大脑皮层bcl-2和bax mRNA及蛋白表达的影响.[方法]通过向颈内动脉注入自体血栓的方法建立大鼠MID模型.将大鼠随机分为模型组、针刺组、非穴组和假手术组.针刺组取人中、内关、风池穴,非穴组取双侧胁下两固定非穴点,针刺1次/d.模型组与假手术组进行与针刺组和非穴组相同时间、相同程度的捉抓.连续针刺2周后断头处死,取左侧大脑.原位杂交和免疫组化法观察皮层bcl-2和baxmRNA及蛋白的表达.[结果]模型组bcl-2和bax mRNA和蛋白的表达均增加;针刺后,bcl-2mRNA和蛋白的表达进一步增加,bax mRNA和蛋白的表达减少.[结论]针刺可促进MID模型大鼠大脑皮层bcl-2的表达,抑制bax的表达,从而保护脑组织,且这种作用具有穴位特异性.     

愈风颗粒对MCAO大鼠神经细胞凋亡及bcl-2，bax表达影响的实验研究

目的：研究愈风颗粒对大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型脑神经细胞凋亡及bcl-2，bax表达的影响；方法：将MCAO大鼠分为3组：中药组，西药组及模型组，另设正常组做对照。观察各组大鼠脑组织TUNEL及bcl-2，bax表达的变化；结果：模型组大鼠脑组织TUNEL阳性数，bcl-2，bax阳性细胞数显著高于正常组，bcl-2／bax比值显著低于正常组（均P〈0．01）；中药组及西药组脑组织TUNEL阳性数，bax阳性细胞数显著低于模型组，bcl-2阳性细胞数及bcl-2／bax比值显著高于模型组（均P〈0．01）。结论：愈风颗粒有明显的抗凋亡作用，其作用机制可能与下调促凋亡基因bax水平，上调抗凋亡基因bcl-2水平，提高bcl-2／bax比值有关。     

扶正抑瘤颗粒对H22瘤细胞bax、bcl-2及 caspase-3蛋白表达的影响

目的观察扶正抑瘤颗粒对H 22瘤细胞bax、bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响.方法采用免疫组织化学方法检测瘤组织切片中bax、bcl-2及caspase-3的蛋白表达.结果扶正抑瘤颗粒各治疗组bax及caspase-3的IOD值均高于模型组,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05);扶正抑瘤颗粒各治疗组bcl-2的IOD值均低于模型组,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).结论通过促进bax及caspase-3的蛋白表达、抑制bcl-2基因的蛋白表达来诱导H22瘤细胞凋亡,进而发挥抑瘤效应.     

妊娠高血压疾病患者胎盘组织中细胞凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达及意义

目的研究胎盘组织中细胞凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达与妊娠高血压疾病发病关系。方法采用免疫组织化学方法(SP),对10例正常晚孕妇和30例妊娠高血压的胎盘组织中bax和bcl-2蛋白的表达水平检测。结果bax在正常和轻度子痫前期、轻度子痫前期和重度子痫前期、重度子痫前期和子痫胎盘组织中呈增高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。在正常和重度子痫前期、正常和子痫、轻度子痫前期和子痫胎盘组织中,bax表达明显增强(P<0.05,P<0.001,P<0.01)。bcl-2在正常、轻度子痫前期、重度子痫前期、子痫胎盘组织中表达呈增高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。在正常和轻度子痫前期、轻度子痫前期和重度子痫前期、重度子痫前期和子痫胎盘组织中bax/bcl-2无显著性差异(P>0.05)。在正常和重度子痫前期、正常和子痫、轻度子痫前期和子痫胎盘组织中bax/bcl-2有显著性差异(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。结论正常晚孕妇及轻度子痫前期中bax/bcl-2呈平衡趋势,重度子痫前期和子痫中呈失衡状态,即细胞凋亡调控基因蛋白bax和bcl-2蛋白是否平衡,将影响胎盘结构与功能,妊娠期高血压疾病的发生、发展与细胞凋亡失衡有关。     

保元活血颗粒对老年气虚肾虚证患者CD11b/CD18、bcl-2/bax表达的影响

[目的]通过测定外周血粒细胞黏附分子CD11b/CD18、凋亡相关基因bcl-2/bax表达的变化,探讨保元活血颗粒对老年气虚肾虚证患者的临床治疗作用。[方法]60例老年气虚肾虚证患者被随机分为两组,30例使用保元活血颗粒治疗,30例为空白对照组,通过流式细胞仪和图像分析系统,观察外周血粒细胞黏附分子CD11b/CD18、凋亡相关基因bcl-2/bax的表达变化。[结果]保元活血颗粒可使老年气虚肾虚证患者CD11b/CD18表达明显下降(P<0.01),bcl-2/bax表达明显提升(P<0.01)。[结论]保元活血颗粒对老年气虚肾虚证患者的黏附分子CD11b/CD18、凋亡基因bcl-2/bax有调节作用,这可能是保元活血颗粒治疗老年气虚肾虚证的作用机制之一。