脐带血移植治疗缺氧缺血性脑损伤和缺血性脑卒中的研究进展

人脐带血(human umbilical cord blood, HUCB)富含丰富的未成熟干细胞,这些干细胞具有修复受损组织的潜能.HUCB干细胞移植在动物模型中可以产生多种作用:神经保护、神经再生、抗炎、血管再生等作用.目前HUCB干细胞移植已被用于治疗血液系统疾病,其还可以用于神经系统疾病,并已在基础研究方面取得较大进展.本文简要讨论HUCB移植的治疗机制及在缺氧缺血性脑损伤和缺血性脑卒中的研究进展.     

脐带间充质干细胞通过调节IL-6延缓小鼠银屑病样皮损的研究

目的 通过咪喹莫特（IMQ）乳膏涂抹诱导产生银屑病样皮损的小鼠模型,观察人源脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对其整体和局部作用效果。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和hUC-MSCs组,模型组和hUC-MSCs组每日定时在小鼠裸露背部涂抹5% IMQ乳膏62.5 mg,对照组涂抹凡士林。在开始涂抹前1天（0 d）和涂抹后的第6天,对照组和模型组sc 200 μL的生理盐水,hUC-MSCs组每只小鼠sc 2×10⁶个hUC-MSCs。采用银屑病样皮损面积和疾病严重指数（PASI）评分标准观察银屑病样小鼠模型皮损变化情况;通过HE染色观察表皮层厚度,角质层角化程度及炎性细胞浸润程度;采集小鼠的静脉血,试剂盒法检测血清白细胞介素-6（IL-6）的浓度,评估小鼠炎症反应。结果 hUC-MSCs组与同期模型组比较,皮损症状轻,通过PASI积分趋势图可见,hUC-MSCs能延缓皮损出现,同时减缓皮损严重程度,加快皮损部分的恢复;HE染色显示,hUC-MSCs组角化不全的细胞明显减少,红细胞外溢真皮层增生和炎性细胞浸润程度明显低于模型组,造模后6 d表皮层厚度显著低于模型组（P<0.01）;hUC-MSCs组血清IL-6浓度在造模后的第12天显著低于模型组。结论 银屑病样小鼠模型sc hUC-MSCs后能延缓银屑病的发生,并减轻银屑病症状,加快银屑病样皮损部分的恢复,可能通过调节IL-6发挥免疫调节作用。     

人脐血MSCs的分离培养及向神经的诱导分化

目的探讨人脐血中分离所得到间充质干细胞（MSCs）向神经组织细胞诱导分化的实验条件。方法淋巴细胞分离液分离正常人脐血单个核细胞,利用差速消化法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型。取2至4代的MSCs加入含有维甲酸（RA）与神经生长因子（NGF）的诱导分化培养基将其定向诱导,免疫细胞化学染色检测诱导后的MSCs神经元和神经胶质细胞标志的表达。结果脐血MSCs每传一代,细胞数量增加约2～3倍。流式细胞仪检测,脐血MSCs不表达CD34,表达CD25、CD29、CD105、CD106。诱导后的细胞不仅形态类似神经元和神经胶质细胞,而且表达神经丝蛋白200（NF）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）。结论从人脐血中可以分离得到与骨髓相似的MSCs,并且能够在体外分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞。     

人源脐带间充质干细胞对膝骨关节炎模型大鼠的治疗作用

目的 观察人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对SD大鼠膝骨关节炎的治疗效果。方法 8周龄近交系SD雄性大鼠6只,均采用自身双侧对照研究。应用手术方法切断双膝关节前交叉韧带,手术后不固定伤肢,笼内自由活动。术后4周,右侧作为模型侧,左侧膝关节注射hUC-MSCs 100 μL（1×10⁷ cells/mL）。注射后4周,处死所有实验组大鼠并收取双侧膝关节标本,进行HE和甲苯胺蓝染色。结果 模型侧细胞排列紊乱,细胞簇集明显,有细胞消失、基质染色不均、软骨结构改变、表面凹凸不平、软骨层次较差等现象,表明软骨蜕变,骨关节炎形成;hUC-MSCs治疗侧与模型侧相比,软骨细胞排列基本整齐,呈柱状,细胞增生较多,细胞簇集明显减少,潮线较完整。软骨表面相对平滑,表明软骨处于损伤修复中。结论 hUC-MSCs移植治疗有助于改善大鼠膝骨关节炎,使大鼠关节软骨破坏减轻,促进软骨组织修复。     

不同时期移植人脐血 CD34+细胞对大鼠脊髓损伤修复的对比研究

目的 研究不同时期移植人脐血 CD34⁺细胞修复大鼠脊髓损伤的效果和机制。方法 免疫磁珠法从人新鲜脐血中分离得到 CD34⁺细胞。雌性 Wistar 大鼠 96 只, 以 IMPACTOR MODEL-Ⅱ脊髓损伤打击器建立 T10 脊髓损伤模型, 随机均分为免疫抑制剂应用组、 损伤后急性期移植组和损伤后亚急性期移植组, 对各组后肢功能恢复情况进行 BBB 评分, 损伤中心行双重免疫荧光染色、 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和血管明胶墨汁灌注观察。结果 损伤后第 8～56 天, 细胞急性期移植组的 BBB 评分高于其余 2 组(P < 0.05); TTC 染色示组织活力降低区域比例小于其余 2 组(P < 0.01); 明胶墨汁灌注示脊髓损伤中心血管密度大于其余 2 组(P < 0.01); 亚急性期移植组的细胞存活密度大于急性期移植组（个/视野： 7.51±1.00 vs 5.51±0.89, t=6.051, P < 0.01）, 2 组均未观察到移植细胞的神经分化。结论 人脐血 CD34⁺细胞急性期移植可通过提高脊髓损伤中心血管密度促进微循环恢复, 增加组织活力,促进大鼠脊髓损伤后肢体功能恢复。     

葛根素对脐带间质干细胞增殖与成骨分化的作用

葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提取的一种异黄酮类化合物[1]。已广泛应用于临床,可治疗多种疾病,如冠心病、心绞痛、心肌梗死等[2?4]。文献报道葛根素能够促进大鼠成骨细胞增殖,抑制破骨细胞的骨吸收活性,且能够促进大鼠骨髓间质干细胞     

脐带血干细胞移植治疗肝脏疾病的研究进展

脐带血干细胞(umbilical cord blood stem cells,UCBSC)移植是最有前景的干细胞移植之一.目前,UCBSC在肝脏疾病方面所作的基础实验研究显示,UCBSC可在体内外大量扩增并诱导分化为有肝功能的肝细胞样细胞.UCBSC移植治疗与肝脏疾病的关系,由于相关的临床应用研究较少,目前还没有确切定...     

人脐血干细胞经外周静脉移植治疗失代偿期肝硬化的临床研究

摘要： 目的 探讨人脐血干细胞经外周静脉移植治疗不同程度肝硬化患者的疗效及安全性。方法 失代偿期肝硬化患者 65 例, 分为干细胞组 34 例, 其中 Child-Pugh A 级 13 例、 B 级 14 例、 C 级 7 例, 在常规保肝治疗的基础上给予脐血干细胞移植治疗; 对照组 31 例, 其中 Child-Pugh A 级 11 例、 B 级 13 例、 C 级 7 例, 给予常规保肝治疗。于治疗后 2、 4、 12 及 24 周观察不同程度肝硬化患者肝功能和凝血功能变化, 并观察临床症状改善以及不良反应发生情况。结果 （1） 临床症状改善情况： Child-Pugh A、 B 级患者干细胞组临床症状较对照组明显改善。Child-Pugh C 级患者 2 组临床症状改善程度差异无统计学意义。（2） 肝功能和凝血功能改善情况： Child-Pugh A、 B 级患者干细胞组白蛋白 （ALB）、 凝血酶原活动度 （PTA） 治疗后 2、 4、 12、 24 周均较治疗前升高, 且干细胞组于 12、 24 周均较对照组升高; 干细胞组胆碱酯酶 （CHE） 治疗后 4、 12、 24 周均较治疗前升高, 但与对照组比较差异无统计学意义; 2 组丙氨酸转氨酶 （ALT）、 天冬氨酸转氨酶 （AST）、 总胆红素 （TBIL） 比较差异均无统计学意义。干细胞组 Child-Pugh C 级患者治疗后 ALT、 AST、 TBIL、 ALB、 CHE、 PTA 与治疗前及对照组比较差异均无统计学意义。（3） 所有患者均未发生严重不良反应及并发症。结论 经外周静脉移植脐血干细胞治疗失代偿期肝硬化患者安全有效, Child-Pugh A、 B 级患者的疗效优于 Child-Pugh C 级患者。     

L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对大鼠局灶性脑缺血诱导的神经元凋亡的影响,探讨L-NA对脑缺血的保护作用及其机制.方法健康雄性SD大鼠,体重250～300 g,随机分为假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组).IS和L-NA组按缺血后时间分为三个亚组:2 h、6 h、12 h.每组6只大鼠.L-NA组每次按20mg/kg,ip给药,每日2次,连续3 d.IS组给等容量的生理盐水.插线法制备大鼠大脑中动脉阻断模型.采用流式细胞仪(FCM)检测脑组织细胞凋亡率,Western blot法和免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达,FCM和免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果大鼠脑缺血后,细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达差异无显著性,Bcl-2/Bax降低,缺血12 h治疗3 d时,L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达显著低于相应的IS组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax高于IS组,缺血2、6 h治疗3 d L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达和Bcl-2/Bax与IS组比,差异无显著性.结论缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,可能与降低Caspase-3、增加Bcl-2表达、降低Bax蛋白表达、调节Bcl-2/Bax蛋白平衡有关.     

人脐带间充质干细胞对传统胎盘屏障模型屏障功能的影响及作用机制

目的 通过构建体外胎盘屏障模型,研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对传统胎盘屏障模型功能的影响及其可能的分子机制。方法 将hUC-MSC、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人滋养层细胞(HTR-8)共同培养于transwell中建立体外胎盘屏障模型,设置对照组(HUVEC+HTR-8)、forskolin组(HUVEC+HTR-8+forskolin)、MSC组(HUVEC+HTR-8+hUC-MSC)、MSC+forskolin组(HUVEC+HTR-8+hUC-MSC+forskolin),通过测量跨膜电阻值、荧光黄CH的渗透性以及P-糖蛋白(P-gp)的活性,评估各组体外胎盘屏障模型的功能;利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Westernblotting检测各组体外胎盘屏障模型中P-gp、紧密连接蛋白5(Claudin-5)、闭合小环蛋白-1(ZO-1)、ZO-2、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的mRNA及蛋白表达水平;利用LC-MS/MS检测阿替洛尔、米诺地尔、美托洛尔3种渗透性工具药透过各组体外胎盘屏障模型的表观渗透系数(P_app),验证模型的功能完整性。结果 与对照组相比,forskolin、MSC、MSC+forskolin组的跨膜电阻值均显著增高(P<0.05、0.001)、P-gp外排功能均增强、荧光黄的P_app值均显著降低(P<0.05、0.01、0.001),且二者联用后作用效果尤为显著,表明该模型具备完整的屏障功能,且MSC+forskolin屏障功能最好;qRT-PCR和Western blotting结果显示,与对照组相比,forskolin组P-gp、ZO-1、ZO-2、CD31的表达显著增加(P<0.05、0.01、0.001),MSC组P-gp、Claudin5、ZO-1和CD31的表达也显著增加(P<0.05、0.01、0.001);联合应用后,各蛋白的mRNA及蛋白表达水平均更显著增加(P<0.01、0.001),表明hUC-MSC增强传统胎盘屏障功能;与对照组相比,各实验组的P_app值均降低,MSC+forskolin组3个工具药均差异显著,美托洛尔差异最显著。结论 hUC-MSC通过增强传统胎盘屏障模型中紧密连接蛋白和外排蛋白的表达,进一步增强了传统胎盘屏障模型的屏障功能。     

低氧培养环境对脐带间充质干细胞增殖及生物学特性的影响

目的 研究低氧环境对人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）增殖及生物学特性的影响。方法 分别在5% O₂和21% O₂环境下培养hUCMSCs,使用群体倍增时间（PDT）评价hUCMSCs的增殖情况;流式细胞术检测细胞表面标志CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR的表达;培养基诱导分化后,茜素红-S对含钙骨细胞染色检测成骨诱导分化,油红O对脂滴染色检测成脂诱导分化,阿尔新蓝8GX对蛋白多糖检测软骨诱导分化;羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法检测hUCMSCs对植物血凝素P（PHA-P）刺激的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制作用,并应用流式细胞术检测对CD8+T细胞的抑制作用;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子2（IGF-2）、转化生长因子β（TGF-β）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、基质细胞衍生生长因子1（SDF-1）、神经生长因子（NGF）mRNA表达;试剂盒法检测细胞培养上清中IGF-2浓度。结果 21% O₂和5% O₂环境培养的hUCMSCs表面标志CD73、CD90、CD105的表达均为阳性（＞95%）,CD34、CD45、HLA-DR的表达均为阴性（＜2%）,均具有成骨、成脂、成软骨三系分化的能力;5% O₂组的PDT均显著小于21% O₂组（P＜0.05）;PBMC经PHA-P刺激后观察到细胞增殖聚集,与hUCMSCs共培养后几乎没有聚集出现,与PBMC＋PHA-P组比较,PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs（21%或5% O₂）组子代细胞明显减少,PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs（5% O₂）组PBMC抑制率为（61.44±0.92）%,与PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs （21% O₂）抑制率（60.48±4.00）%相当,无统计学差异,且两组hUCMSCs对CD8+T细胞的抑制作用无统计学差异。与21% O₂组比较,5% O₂组hUCMSCs HIF-1α、IGF-2、SDF-1、HGF、VEGF、bFGF、NGF mRNA表达水平显著升高（P＜0.05、0.001）,TGF-β无明显变化; 5% O₂组hUCMSCs培养上清IGF-2水平显著高于21% O₂组（P＜0.001）。结论 5% O₂环境可使hUCMSCs的增殖能力和相关生长因子的表达增强,尤其是IGF-2,但依然保持着与21% O₂环境培养的hUCMSCs相似的表型、分化能力以及淋巴细胞增殖抑制能力。     

凝胶法测定脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素

目的 探讨凝胶法测定人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的可行性。方法 收集人脐带间充质干细胞培养72 h的上清为供试品。参照《中国药典》2020年版第三部通则1143细菌内毒素检查法中凝胶法的具体要求和步骤对鲎试剂进行灵敏度复核,对供试品进行干扰初筛试验、干扰试验和供试品细菌内毒素的测定。结果 鲎试剂灵敏度测定值为0.125EU/mL,在0.5λ～2.0λ符合规定,可用于后续试验。供试品1、2、4倍稀释对鲎试剂均无干扰;干扰试验验证2倍稀释供试品对细菌内毒素凝胶法检测无干扰作用;采用凝胶法测定2倍稀释供试品的细菌内毒素含量均≤0.5 EU/mL,判定供试品中细菌内毒素含量合格。结论 凝胶法可用于人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的检测。     

脐带间充质干细胞治疗自身免疫性肝病患者的疗效

目的探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)治疗自身免疫性肝病(AILD)的疗效。方法对7例AILD患者通过外周静脉移植UC-MSCs,分析治疗前后疗效及安全性。结果与治疗前比较,UC-MSCs治疗后,全部患者饮食、睡眠、体力、疲劳等临床症状均有明显改善,ALB、ALT及AST明显好转(P<0.05),TBil、ALP及GGT亦有所改善(P>0.05)。治疗前后的安全性指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 UC-MSCs治疗可明显减轻AILD患者的临床症状,改善其肝功能,且安全性好。     

体外培养人脐带血间充质干细胞向胰岛细胞分化及对糖尿病治疗的实验研究

目的研究人脐带血间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能及其移植后对糖尿病大鼠的治疗效果。方法体外分离培养HUCB-MSCs,在胰岛细胞培养条件下经药物定向诱导其分化;免疫组化对诱导细胞进行胰岛β细胞标记鉴定;双硫腙染色鉴定锌离子表达及检测胰岛样细胞的移植效果。结果 HUCB-MSCs经诱导后,免疫细胞化学染色显示表达人胰岛素;双硫腙染色呈棕红色;移植后2周,胰岛样细胞组血糖浓度明显降低。结论 HUCB-MSCs在体外诱导培养条件下,具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这种细胞可能为Ⅰ型糖尿病提供一条新的治疗途径。     

不同剂量人脐带间充质干细胞异种移植对大鼠血液学及肝肾功能影响的研究

目的 观察不同剂量的人脐带胶样组织间充质干细胞(hUMSCs)经静脉移植入大鼠体内对血常规及肝肾功能等指标的影响.方法 ①体外培养人脐带间充质干细胞;利用流式细胞仪鉴定第4代hUMSCs表面抗原的表达;标准试剂盒鉴定第4代hUMSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能;②182～203 g的50只SD大鼠随机分为5组:空白对照组;盐水组;3.5×107/kg干细胞移植为干细胞Ⅰ组;3.5×108/kg干细胞移植为干细胞Ⅱ组;3.5×109/kg干细胞移植为干细胞Ⅲ组;注射后第11天,腹主动脉取血,监测和比较血常规和生化指标,分析比较各项指标的变化和差异.结果 ①第4代hUMSCs特异性表面抗原CD73、CD90和CD105表达强阳性,能分成脂细胞和成骨细胞,比例分别为98.4％和95.7％;②注射干细胞后实验动物全部存活,第11天时实验组24项血常规指标与空白对照组相比差异无统计学意义;③于细胞组血糖较空白对照组明显降低[(8.4±1.6),(7.7±1.6),(7.1±1.6) mmol/L比(9.6±4.9)mmol/L];干细胞组糖化血清白蛋白较空白对照组明显降低[(0.69±0.10),(0.68±0.12),(0.65±0.08) mmol/L比(0.85±0.14) mmol/L];干细胞组的心肌酶水平较空白对照组明显降低[(184±8),(155±24),(144±18)U/L比(223±21) U/L,P＜0.05].结论 不同剂量hUMSCs经尾静脉注射入大鼠体内引起血糖、糖化血红蛋白和心肌酶等的降低,且与剂量相关,选择适当剂量的干细胞移植将对临床治疗效果起到重要的作用.     

脐带血干细胞移植治疗非肝炎后肝硬化的临床研究

目的探讨脐带血干细胞经肝动脉灌注移植治疗非肝炎后肝硬化的临床疗效。方法 12例非肝炎后肝硬化失代偿期患者,经肝动脉灌注人脐带血干细胞悬液10～15mL,术前1周,术后1周、1个月及3个月观察丙氨酸转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、纤维蛋白原(FIB)水平变化,同时观察临床症状及体征的改善情况。结果所有患者均顺利移植,患者术后3个月时纳差、乏力、腹胀、腹水均较术前明显改善(P<0.05或P<0.01);患者ALT术后1周较术前升高,术后1个月时下降至术前水平,术后3个月时较术前明显降低。ALB术后1周较术前轻度降低,术后1个月时升至术前水平,术后3个月时较术前明显升高但仍低于正常值(35～50g/L)。TBIL术后1周时均值较术前有所升高,但差异无统计学意义,术后1个月时降至术前水平,术后3个月时较术前明显减低(P<0.05)。血浆FIB术后1周较术前稍有降低,但差异无统计学意义,术后1个月时升至术前水平,术后3个月时较术前明显升高,但仍低于正常值(2～4g/L)。结论脐带血干细胞经肝动脉灌注移植治疗非肝炎后肝硬化安全可靠,近期疗效显著。     

糖基化终末产物调节氧化应激影响脐血间充质干细胞增殖及普罗布考保护作用

目的探讨糖基化终末产物(AGEs)对人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及普罗布考的保护作用。方法体外分离培养脐血MSCs,应用流式细胞术对细胞表面抗原CD34、CD45、CD105进行表型鉴定。将MSCs分为白蛋白(BSA)对照组、糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)浓度效应组和普罗布考干预组。应用WST法检测各组细胞增殖情况。应用二氯醋酸荧光素探针和氧化应激检测试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果流式细胞鉴定显示,脐血MSCs不表达CD34、CD45,表达CD105。与对照组相比,AGE-BSA组增殖能力下降,ROS含量增加,SOD和GSH-Px活性下降。与AGE-BSA组相比,普罗布考在10、20、50、100μmol/L范围内促进细胞增殖,降低细胞ROS含量,增加SOD和GSH-Px活性。结论 AGEs能够调节氧化应激,抑制脐血MSCs增殖。普罗布考的作用机制可能是通过抑制ROS生成和提高抗氧化酶活性来保护脐血MSCs增殖能力。     

地塞米松提高TRAIL基因修饰的脐带间充质干细胞对急性B淋巴细胞白血病细胞的杀伤作用及机制研究

目的 构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因修饰的脐带间充质干细胞（TRAIL-MSCs）,并检测其联合地塞米松（DEX）对急性B淋巴细胞白血病（Nalm-6）细胞的影响。方法 通过慢病毒载体将SPD-TRAIL基因转染UC-MSCs构建TRAIL-MSCs,使其能够表达十二聚体TRAIL蛋白（dTRAIL）。通过CCK-8法、流式细胞术、显微镜光镜下观察细胞形态及密度检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs、DEX（25 μmol/L）、DEX（25 μmol/L）＋UC-MSCs组和DEX（25 μmol/L）＋TRAIL-MSCs对Nalm-6细胞增殖、凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR及Western blotting法检测各组Nalm-6细胞表面DR4、DR5 mRNA和蛋白表达。结果 成功构建了能够稳定表达dTRAIL蛋白的TRAIL-MSCs工作库细胞。与对照组比较,UC-MSCs、TRAIL-MSCs显著抑制Nalm-6细胞增殖（P<0.01）,但抑制率均在30%以下,DEX抑制率约为43%,而DEX联合TRAIL-MSCs抑制率达85%,与TRAIL-MSCs和DEX组比较差异显著（P<0.01）。显微镜下观察结果显示,不同处理方式对肿瘤细胞Nalm-6均有一定的杀伤作用,其中以DEX与TRAIL-MSCs联合用药组的杀伤作用最明显。TRAIL-MSCs可以促进Nalm-6细胞凋亡,凋亡率达10%,DEX组凋亡率达到15%,与对照组比较有显著差异（P<0.05、0.01）;而DEX＋TRAIL-MSCs组凋亡率达36%,与DEX和TRAIL-MSCs组比较有显著差异（P<0.01）。与对照组比较,TRAIL-MSCs组DR4、DR5 mRNA表达量显著降低（P<0.01）;DEX可以促进DR4、DR5 mRNA表达,与对照组比较差异显著（P<0.01）;DEX＋TRAIL-MSCs组较DEX组DR4、DR5 mRNA表达均显著降低（P<0.01）;各组蛋白检测结果与mRNA结果基本一致。结论 DEX可以显著提高TRAIL-MSCs对Nalm-6细胞的杀伤作用,或将成为一种颇具潜力的血液肿瘤治疗新手段;其机制与DEX显著提高DR4、DR5表达,增强Nalm-6细胞对TRAIL蛋白的敏感性相关。     

In vitro toxicity screening of magnetite nanoparticles by applying mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord lining

Despite the growing interest in nanoparticles (NPs), their toxicity has not yet been defined and the development of new strategies and predictive models are required. Human stem cells (SCs) offer a promising and innovative cell‐based model. Among SCs, mesenchymal SCs (MSCs) derived from cord lining membrane (CL) may represent a new species‐specific tool for establishing efficient platforms for primary screening and toxicity/safety testing of NPs. Superparamagnetic iron oxide NPs, including magnetite (Fe₃O₄NPs), have aroused great public health and scientific concerns despite their extensive uses. In this study, CL‐MSCs were characterized and applied for in vitro toxicity screening of Fe₃O₄NPs. Cytotoxicity, internalization/uptake, differentiation and proliferative capacity were evaluated after exposure to different Fe₃O₄NP concentrations. Data were compared with those obtained from bone marrow (BM)‐MSCs. We observed, at early passages (P3), that: (1) cytotoxicity occurred at 10 μg/mL in CL‐MSCs and 100 μg/mL in BM‐MSCs (no differences in toxicity, between CL‐ and BM‐MSCs, were observed at higher dosage, 100‐300 μg/mL); (2) cell density decrease and monolayer features loss were affected at ≥50 μg/mL in CL‐MSCs only; and (3) NP uptake was concentration‐dependent in both MSCs. After 100 μg/mL Fe₃O₄NP exposures, the capacity of proliferation was decreased (P5‐P9) in CL‐MSCs without morphology alteration. Moreover, a progressive decrease of intracellular Fe₃O₄NPs was observed over culture time. Antigen surface expression and multilineage differentiation were not influenced. These findings suggest that CL‐MSCs could be used as a reliable cell‐based model for Fe₃O₄NP toxicity screening evaluation and support the use of this approach for improving the confidence degree on the safety of NPs to predict health outcomes.     

盐酸埃他卡林对大鼠局灶性脑缺血后脑组织损伤和血液流变学的作用

目的研究盐酸埃他卡林(Ipt)对局灶性脑缺血后脑组织损伤保护作用及对血液流变学变化的影响。方法线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血。神经功能行为学评分参考Longa法,脑水肿形成检测采用Ellis公式,TTC染色法测定脑梗死范围。以DPH为荧光探针,采用荧光偏振法测定脑缺血6h后红细胞膜脂流动性,微粘度。结果脑缺血6h后,脑梗死范围达对侧脑半球的(24.75±6.66)%,预防性给予Ipt(1.0～4.0mg·kg-1,ip)可使脑梗死范围分别减少0.95%,6.6%(P<0.05),14.34%(P<0.01)。Ipt2.0和4.0mg·kg-1还可降低大鼠的神经功能行为评分及脑组织含水量。尼莫地平(Nim)0.3mg·kg-1也可减少脑梗死范围,降低脑组织含水量,降低神经功能行为评分。脑缺血6h后,红细胞变形能力下降,红细胞膜脂流动性降低,红细胞聚集程度及膜微粘度皆明显提高。预防性给予Ipt(2.0～4.0mg·kg-1,ip)及Nim0.3mg·kg-1可显著改善上述血液流变学指标。Ipt4.0mg·kg-1治疗作用的时间窗为3h,超过4h则治疗作用不显著。Nim0.3mg·kg-1治疗作用不明显。结论盐酸埃他卡林对局灶性脑缺血引起的脑损伤有一定的保护作用。