胸腺素α_1单克隆抗体的产生与鉴定

通过骨髓瘤细胞系(P3—X63—Ag8.653)与一种BALB/c小鼠的脾细胞融合,已经产生一种对胸腺分泌的肽类激素-胸腺素α_1的单克隆抗体。这种小鼠是经过鼠IgG与胸腺素α_1复合物免疫过的,总免疫剂量为520μg,使用35％的聚乙二醇进行了成功的融合,产生了5株杂交瘤,这些杂交瘤可产生抗胸腺素α_1的单克隆抗血清。这些单克隆抗体有不同的种类和分型,可用酶联免疫吸附试验和特异的放射免疫分析法筛选。对含有Kappa或Lambda轻链和IgG-1、IgG2a及IgG2b重链的抗体进行了检测,进一步鉴定表明这些单克隆抗体既直接作用     

不同亚型磷脂抗体在人群中的诊疗价值

目的 探讨不同亚型(IgG、IgM和IgA型)抗心磷脂抗体(aCL)和不同亚型(IgG、IgM和IgA型)抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1抗体)在中国人群中的诊疗价值.方法 采用病例对照研究,选取2019年3月至2020年3月在北京顺义区医院就诊患者共900例(其中抗磷脂综合征45例),40例健康对照者.采用化学发光免疫测定法(CLIA),分别采用IgG、IgM和IgA单亚型试剂检测aCL和aβ2GP1抗体,在不同人群中的分布情况.正态分布数据的结果用均值标准差表示,两组间比较采用t检验,工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC).采用Logistic回归分析确定APS患者aPL同型阳性与临床表现之间的关系.SPSS 24.0对数据进行统计分析.结果 总体aCL患病率为9.23％,其中IgG亚型aCL最常见为8.44％,IgM和IgA亚型aCL患病率仅为2.78％和2.33％.总体aβ2GP1抗体患病率为10.1％,其中IgM亚型aβ2GP1抗体患病率最高为7.56％,其次IgG亚型aβ2GP1抗体患病率为6.11％,最低IgA亚型aβ2GP1抗体患病率为2.11％.IgG、IgM和IgA亚型单独抗体阳性率分别为57.8％、19.2％和3.61％;在aβ2GP1抗体阳性的受试者中,IgM、IgG、IgA单独阳性率分别为51.6％、20.1％和2.19％.与健康对照组相比,APS患者的aPL亚型特异性抗体阳性率明显升高.不同亚型APS抗磷脂抗体结果显示,总体PAPS和SPAPS,aCL和aβ2GP1抗体患病率分别为55.6％和57.8％,与PAPS相比SAPS患者aCL的阳性检出率更高(χ2=16.42,P<0.001;χ2=7.812,P=0.005).结论 IgG、IgM型抗心磷脂抗体和aβ2GP1抗体在诊断及判断病情程度中的应用优于其他亚型,IgA型抗心磷脂抗体和IgA抗β2糖蛋白1抗体为临床的诊疗价值极低,无论在实验室还是在临床实践中,IgA aPL的存在并没有为中国人群的APS诊断提供附加价值.     

用模式抗原OVA研究CTA1-DD／IgG佐剂的免疫调节作用

目的：进一步研究新型佐剂CTA1-DD/IgG的免疫调节作用。方法：小鼠经鼻内免疫抗原（鸡卵清白蛋白OVA）联合佐剂CTA1-DD或CTA1-DD/IgG复合物,用ELISA检测血清中OVA特异性IgG抗体生成和IgG抗体亚类,用酶联免疫斑点试验检测脾脏抗体分泌细胞。结果：CTA1-DD/IgG佐剂在小鼠中诱导血清特异性IgG抗体及脾脏特异性抗体分泌细胞的能力均高于CTA1-DD佐剂;CTA1-DD/IgG或CTA1-DD作为佐剂联合OVA免疫后IgG1、IgG2a、IgG2b 抗体皆提高,且IgG2a/IgG1＞1。结论：CTA1-DD/IgG佐剂的免疫调节作用强于CTA1-DD,且能产生混合IgG抗体亚型,促进平衡的免疫应答。     

异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响

为观察异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响 ,将供体豚鼠和受体SD大鼠随机分成对照组 (a组 )、全身照射组 (b组 )、照射 +胸腺注射组 (c组 ) ,a组大鼠腹腔内注射经处理的豚鼠脾淋巴细胞 (5× 10 6个 ) ,7d后流式细胞仪法检测抗豚鼠IgM及IgG类天然抗体水平的变化 ,b、c组在腹腔注射异种抗原前 17d接受全身照射 ,c组大鼠另在全身照射后 3d接受胸腺内豚鼠脾淋巴细胞注射。结果表明 :a组和b组中 ,腹腔注射后两类天然抗体的水平均明显上升 (P <0 0 1) ,c组中 ,腹腔注射后IgM类的水平亦明显上升 (P <0 0 1) ,而IgG类上升受抑。提示异种胸腺修饰能抑制IgG类天然抗体的生成 ,但对IgM类天然抗体的产生无明显影响。     

抗CRP杂交瘤单克隆抗体的制备及研究

应用杂交瘤技术融合Sp2/0瘤细胞与CRP免疫的BALB/c小鼠脾细胞,经选择培养和细胞克隆,建立了4株抗CRP特异性单克隆抗体分泌细胞株242B3、242C4、263A5与263B5,其染色体均在Zn=62～67间,抗体Ig鉴定分别为IgG2a、IgG2a、IgG2b和IgG2b腹水抗体效价为1～3×10~(-5)。     

C-myc单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备与鉴定鼠抗C-myc蛋白单克隆抗体。方法利用C-myc蛋白做免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA法筛选、有限稀释法克隆、单克隆抗体Ig亚型鉴定,获得2株能够稳定分泌抗C-myc特异性抗体的杂交瘤细胞株,再将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔诱使小鼠产生腹水。结果获得2株可稳定分泌抗C-myc抗体的杂交瘤细胞株,命名为SHH-1H11,SHH-2A9,Ig亚型分别为IgG1亚类和IgM。细胞培养上清效价分别为1:10240、1:5 120;小鼠腹水效价分别为1:64 000、1:32 000。结论制备的C-myc单克隆抗体仅与C-myc蛋白反应,与其他蛋白没有交叉反应,表明获得的单克隆抗体的特异性很高。     

IgD的分子生物学

脊椎动物可以产生抗体对外源性物质进行应答,这种应答是由抗原特异性相同而效应功能不同的多种抗体的相继产生完成的。抗体的效应部位或种类是由其重链恒定区(C_H区)决定的。在小鼠,已发现有8种免疫球蛋白:IgM、IgD、IgG_3、IgG1、IgG2b、IgG2a、IgE和IgA、H链用相应的希腊字母表示,在12号染色体DNA上编码它们的基因依次为μ、δ、γ~3、γ~1、γ~(2b)、γ~(2a)、ε、α。轻     

弗氏佐剂与氢氧化铝佐剂对诱导小鼠获得性免疫应答作用的比较

为研究、比较不同佐剂对诱导小鼠产生获得性免疫应答的不同作用,以卵清白蛋白(OVA)为抗原,分别混合完全弗氏佐剂(CFA)或Al(OH)3佐剂,对C57BL/6小鼠进行常规免疫,采用流式细胞技术对细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4进行检测;ELISA方法对特异性抗OVA抗体滴度及抗体亚型进行了检测。结果显示在免疫后CFA组产生以IFN-γ为主的细胞因子而Al(OH)3组产生以IL-4为主的细胞因子;两组中均产生特异性抗OVA IgG抗体,但CFA组以IgG2a亚型为主,而Al(OH)3组则以IgG1亚型为主,不产生IgG2a亚型抗体。实验表明,经CFA加抗原免疫后机体产生的免疫应答以Th1型细胞免疫为主,抗体类型为IgG2a;而Al(OH)3佐剂则诱导机体产生Th2型细胞免疫应答,抗体类型为IgG1。     

用反向被动血凝抑制试验进行乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的位阻分析

本文报告获得28株分泌抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞系,均为抗HBsAg“a”决定簇抗体。产生鼠IgM抗体的有一个细胞系;IgG1 18个系;IgG 2a 1个系;IgG 2b 6个系;IgG 3两个系。采用反向被动血凝抑制法测定了其中24种McAb的交互抑制现象。24种McAb可分为10个不同的抑制群。并对这种简单易行的位阻分析方法在实用中的价值做了讨论。     

三种类型CpG-ODN作为蛋白亚单位疫苗佐剂的比较研究

目的 比较A、B和C3种类型CpG-ODN在动物模型中的疫苗佐剂活性,为设计高活性的新型人用疫苗佐剂提供理论基础.方法 用不同CpG-ODN刺激体外培养的小鼠脾细胞,检测上清中的IFN-γ和IgM,从而确定3种类型的CpG-ODN.以基因工程乙肝表面抗原(HBsAg)为模型抗原、不同类型CpG-ODN为佐剂免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测被免动物血清中抗原特异性ISG、IgG1和IgG2a抗体.结果 小鼠免疫结果表明,与Al(OH),对照组相比,3种类型CpG-ODN均具有良好的疫苗佐剂活性,但B和C型CpG-ODN诱生的抗原特异性IgG和IgG2a抗体水平远高于A型CpG-ODN.虽然A型CpG-ODN也能够显著增强总抗体水平,但并不改变IgG1和IgG2a抗体亚型的比值.这与B和C型CpG-ODN能够极大地促进TH1类免疫应答并降低IgG1/IgG2a比值明显不同,提示不同类型CpG-ODN可能通过不同机制起到疫苗佐剂作用.结论 不同类型CpG-ODN具有不同疫苗佐剂活性,B和c型CpG.ODN在小鼠体内的体液免疫佐剂效果优于A型CpG.ODN.     

纯化小鼠IgM腹水单克隆抗体方法的探索

本文选用了混有大量IgG的小鼠IgM腹水单克隆抗体(Ps-1)。采取三种不同方案提纯抗体:A、盐析一层析法;B、低渗透析一层析法,即单克隆抗体(McAb)透析后所得的沉淀及上清部份分别层析;C、二次层析法。比较了它们的蛋白得率、免疫活性和纯度。A、B、C方案所得抗体蛋白量分别是0.62,1.43,2.2mg/ml腹水,各占腹水蛋白的3.8％,9.0％,14％。电泳纯度在90％左右,Ig亚型鉴定均是к链的IgM抗体,并与IgG、IgA无交叉。提纯后抗体均保持免疫活性。     

HCA587蛋白疫苗诱导的抗体与抗肿瘤相关性的研究

目的检测HCA587蛋白疫苗在小鼠体内诱导的抗体水平,并分析抗体效价与抗肿瘤作用的相关性。方法按照不同的免疫方案以液体形式尾根部皮下注射给小鼠,将肿瘤细胞在小鼠左侧胁腹部皮下接种以建立肿瘤模型。用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测抗体总IgG或IgG各亚型的水平,并用游标卡尺测量肿瘤大小。结果 HCA587蛋白疫苗诱导的抗HCA587抗体总IgG效价高于1∶1 024×104,其水平与肿瘤大小呈显著负相关。γ-干扰素(IFN-γ)敲除后,该疫苗的抗肿瘤效果完全消失,同时抗HCA587的IgG2a亚型效价显著下降。结论 HCA587蛋白疫苗诱导的IgG抗体效价很高,具有一定的抗肿瘤作用,其中IgG2a可能与抗肿瘤关系密切。     

抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

目的制备了赤潮毒素大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法用人工抗原大田软海绵酸-小牛血清蛋白偶联物(OA-BSA)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术经初筛、复筛和亚克隆,筛选到1株可稳定分泌抗OA单克隆抗体的杂交瘤细胞株3H4。对抗体效价、亚型、特异性、敏感性进行免疫学鉴定与分析。结果抗体亚型为IgG2b;腹水效价为1∶1.28×106;50%抑制质量浓度为2.852 ng/ml;最低检测限为0.45 ng/ml;电泳结果显示抗体,由1条重链和1条轻链组成;与OA同系物PTX1、GYM、SPT1、YTX交叉反应率为0。结论制备的OA单抗效价和特异性均较好,可用于OA的免疫学检测。     

肠病毒71型分离株的鉴定及免疫原性研究

目的 在对肠病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株进行鉴定的基础上,对其诱导小鼠产生的免疫应答水平进行研究,拟为进一步的EV71候选疫苗研究奠定基础.方法 超速离心纯化病毒后,采用磷钨酸负染法通过电镜观察病毒形态、大小;采用特异性EV71单抗通过间接免疫荧光法(IFA)检测病毒的特异性;合成EV71特异性引物,通过RT-PCR对病毒进行分子生物学鉴定;病毒的VP1基因序列测定后,与其他EV71序列进行比较,绘制种系发育树,确定病毒基因型;通过腹腔注射途径免疫小鼠,免疫后分离血清通过微量细胞病变抑制法测定血清中和抗体效价,ELISA法检测血清抗体水平和抗体亚型水平.结果 电镜下可观察到典型的圆形病毒颗粒,直径为20～30 nm,呈典型的肠病毒形态;085和087株病毒感染细胞中均能观察到黄绿色荧光,提示该两株病毒可与EV71单抗特异性结合;RT-PCR可以从病毒感染细胞中扩增出226 bp大小的特异性产物带,而采用CA16特异性引物则不能扩增出相应大小的产物带;基于VP1基因序列的种系发育分析显示,087和085株均为C4基因型;085和087株EV71免疫小鼠后可诱导产生能中和包括其本身在内的多个病毒株的中和抗体,针对同一株中和病毒,实验组间差异无统计学意义;针对不同中和病毒株,各实验组中和本株、523-07T株的能力明显高于FY-02T株(P<0.05);ELISA法检测结果显示,接种灭活前后的EV71病毒085和087株后均能诱导小鼠产生抗EV71特异性IgG;IgG亚型为IgG1/IgG2a混合型,灭活病毒免疫组小鼠血清EV71特异性IgG、IgG1、IgG2a水平明显高于活病毒免疫组(P<0.05).两株病毒之间差异无统计学意义.结论 本研究分离到的085和087株病毒均为EV71 C4基因亚型,并具有一定的免疫原性.     

用反向被动血凝抑制试验进行乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的位阻分析

本文报告获得28株分泌抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞系，均为抗HBsAg“a”决定簇抗体。产生鼠IgM抗体的有一个细胞系：IgGl 18个系；IgG 2a 1个系：IgG 2b 6个系；IgG 3两个系。采用反向被动血凝抑制法测定了其中24种MeAb的交互抑制现象。24种McAb可分为10个不同的抑制群。并对这种简单易行的位阻分析方法在实用中的价值做了讨论。     

Fcgr2b基因及H-2复合体对SLE模型小鼠IgG抗体产生的调节作用

目的:分析Fcgr2b基因对SLE小鼠血清总IgG抗体产生的影响;Fcgr2b基因单独及Fcgr2b基因与H-2复合体共同作用对SLE小鼠血清IgG抗DNA抗体产生的调控。方法:建立(NZB×NZW)F1×NZW回交小鼠模型,用特异性荧光抗体染色,流式细胞术检测及PCR技术进行基因分型,以ELISA法测定血清总IgG及抗DNA抗体水平进行分析比较。采用扩增片段长度多态性(AmpFLP)分析NZB,NZW小鼠Fcgr2b基因启动子区是否有多态性。结果:(NZB×NZW)F1×NZW回交小鼠Fc-gr2b基因B/W型组血清总IgG水平明显高于W/W型组(P<0.0001)。Fcgr2b基因独作用时,回交小鼠Fcgr2b基因B/W型组与W/W型组间血清IgG抗DNA抗体水平差异不显著(P>0.05)。Fcgr2b基因与H-2复合体共同作用时,H-2复合体为d/z型时,无论Fcgr2b基因是B/W型或W/W型,其血清IgG抗DNA抗体水平明显高于含H-2复合体Z/Z型组(P<0.01);H-2复合体为d/z型时,含Fcgr2b基因B/W型组血清IgG抗DNA抗体水平明显高于W/W型组(P<0.01)。NZB小鼠Fcgr2b基因启动子区扩增片段长度短于非自身免疫病小鼠NZW,C57BL/6及BALB/c小鼠,提示可能存在碱基缺失。结论:血清总IgG水平由Fcgr2b基因调控;IgG抗DNA抗体产生主要由H-2复合体调控,Fcgr2b基因单独作用对该抗体产生的影响不明显,但与H-2复合体具有协同作用。     

抗重组志贺毒素ⅡB亚基单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的 制备出高效价的抗重组志贺毒素ⅡB亚基(rStx2B)单克隆抗体.方法 以融合蛋白EspA-Stx2B作为抗原,免疫Balb/c小鼠,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞;运用细胞杂交瘤技术制备,运用间接ELISA法筛选产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株;体内诱生法产生腹水,饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,再采用HiTrap rProtein A柱进一步纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚型,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位.结果 获得3株产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株Stx2B-1H9、Stx2B-1H10、Stx2B-3E5,Ig亚型分别为IgG1κ型,IgG2aκ型,IgG2bκ型,亲和力常数分别为7.36×108、6.94×108、5.85×108.结论 成功制备3株稳定分泌抗rStx2B的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高,为应用这些单克隆抗体建立免疫亲和层析法纯化天然志贺毒素Ⅱ,鉴定Stx2B的表位,研究针对EHEC O157:H7感染的治疗性抗体奠定了基础.     

高致病性人禽流感H5N1疫苗滴鼻免疫应答效果的初步研究

目的 通过高致病性人禽流感H5N1全病毒-MF59佐剂疫苗滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价该疫苗所诱导的系统免疫与黏膜免疫应答效果.方法 以不同剂量抗原按比例与MF59佐剂配伍制成粘膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,二免2周采血检测血清IgG、IgM效价及血清中HAI(HA inhibitor)的中和抗体效价,同时收集鼻、肺灌洗液,检测其lgG和slgA抗体效价.结果 H5NI+MF59组血清抗体效价较H5NI组有显著升高(P＜0.01);在各剂量组中,随着剂量的增加抗体效价呈上升趋势.12μg腭后抗体效价呈下降趋势,以HSNI+MF59(12μg)组效价最高;肺鼻灌洗液中,均可检测到特异性分泌型IrA、IsG,其中特异性分泌型IgA效价略高于IgG;抗体亚型的分布以IgG1、IgG2b为主.结论 灭活高致病性禽流感全病毒H5N1在佐剂MF59作用下可诱导机体产生体液免疫应答,同时还可以在黏膜局部产生特异性分泌型IgA、IsG,为高致病人禽流感病毒I-15N1黏膜疫苗的研制奠定了基础.     

用抗独特型单克隆抗体治疗具有同型转换变异抗体的小鼠B细胞淋巴瘤

在以前的研究中,应用同系抗独特型单克隆抗体对38C13鼠B细胞淋巴瘤进行了体内治疗,果结表明,IgG2a同型抗体抑制C3H小鼠肿瘤生长的作用(70％长期存活)较两种IgG_1型抗体(10％和20％存活)以及另一种IgG_1型抗体(0％存活更为有效)。人为了单独测定抗体型别在这些抗肿瘤作用的地位,应用有限稀释法从分泌低效力IgG_1和IgG_2抗体的杂交瘤培养物中分离两族同型变异体。一族由IgG_1(亲)、lgG_2a和IgG2b组成,另一族由IgG2b     

ELISA夹心法鉴定单克隆抗体Ig亚类

单克隆抗体Ig亚类的鉴定,国内外常用琼脂双扩散法,但由于该法所需浓度较大,且受抗原、抗体浓度比的影响,灵敏度较低。常需浓缩杂交瘤培养上清液,且实验需时较长,给实验带来许多不便。作者以ELISA夹心法测定McAbs Ig亚类,并以琼脂双扩散法为对照。鉴定了16份McAbs,主要步骤是:以5种抗鼠Ig亚类抗血清〔IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3和IgM(sigma)〕包被反应板,加入杂交瘤培养上清波,再加酶标记