槐耳颗粒免疫调控CXCL1在乳腺癌中的作用研究

目的研究CXCL1与乳腺癌增殖转移的相关性,为乳腺癌发病机制提供线索,探究中药槐耳颗粒对乳腺癌发生发展的影响及其发挥效应的机制,为乳腺癌的治疗提供理论依据。方法分别设置1 nmol/ml CXCL1组、0.1 nmol/ml CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体处理组、5 mg/ml槐耳颗粒组、10 mg/ml槐耳颗粒组及空白对照组6组。CCK8检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测槐耳颗粒组与空白对照组CXCL1表达量,ELISA检测各组细胞Survivin、VEGF、MMP13的表达量。结果 CCK8检测细胞增殖活性:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞增殖活性明显增高且存在剂量依赖关系,有统计学意义(P0.05);与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞增殖活性明显降低(P0.05);与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞增殖活性明显降低(P0.05)且存在剂量依赖关系;流式测细胞凋亡结果:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞凋亡率明显降低(P0.05)且存在剂量依赖关系,与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞凋亡率明显增高(P0.05),与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞凋亡率明显增高且随浓度增加作用增强(P0.05);CXCL1表达量:与空白对照组相比,槐耳颗粒组CXCL1表达量明显降低(P0.05),且存在剂量依赖关系;survivin、VEGF、MMP13表达量:与空白对照组相比,CXCL1处理组蛋白表达量明显增高(P0.05)且存在剂量依赖关系,anti-CXCR2中和抗体处理组蛋白表达量明显降低(P0.05),槐耳颗粒组蛋白表达量明显降低(P0.05)且存在剂量依赖关系。结论乳腺癌中CXCL1通过与其受体CXCR2结合促进survivin的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖抑制其凋亡,促进乳腺癌的发生;同时通过促进VEGF与MMP13的表达促进肿瘤血管的生成及细胞外基质的降解,提示CXCL1可能促进肿瘤转移。中药槐耳颗粒可通过抑制CXCL1表达而有效抑制乳腺癌细胞的增殖以及侵袭转移从而达到治疗效果。     

miR-335 调控 Survivin 和 NF-κB 表达对 B 细胞淋巴瘤细胞侵袭、迁移和凋亡的影响

目的：探讨miR-335调控Survivin和NF-κB表达对B细胞淋巴瘤细胞侵袭、迁移和凋亡的影响。方法：取对数生长期的B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-4,分为对照组（不做任何处理）、空转染组（转染空载体）和过表达组（转染miR-335）。转染48 h后采用RT-PCR和Western blot分别检测各组细胞miR-335水平和Survivin、NF-κB蛋白的相对表达量。采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：与对照组相比,空转染组miR-335表达水平、Survivin蛋白表达水平、细胞迁移率、侵袭细胞数和细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）,过表达组miR-335表达水平和细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,Survivin和NF-κB蛋白表达水平、细胞迁移率和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。与空转染组相比,过表达组miR-335表达水平和细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,Survivin和NF-κB蛋白表达水平、细胞迁移率和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。结论：miR-33...     

布托啡诺抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨布托啡诺抑制Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分组1:(2.5、5.0、10、20、40、80、160、320)μg/mL布托啡诺处理人卵巢癌细胞A2780,计算细胞半数抑制浓度（IC50）。实验分组2：对照组（正常培养）、布托啡诺组（13.24μg/mL布托啡诺）、布托啡诺+LPS组（13.24μg/mL布托啡诺+1μg/mL LPS）,CCK-8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞侵袭和迁移情况;蛋白质免疫印迹检测细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况。结果 细胞IC50为13.24μg/mL。与对照组相比,布托啡诺组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）;与布托啡诺组相比,布托啡诺+LPS组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平升高（P<0.05）,细胞凋...     

内毒素诱导退变人椎间盘髓核细胞凋亡

目的观察内毒素(LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kapp B(NF-κB)的活化与细胞凋亡的相互关系。方法体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,采用CCK-8法测定LPS在不同浓度下(100、200、500和1 000μg/m L)对髓核细胞增殖影响,并筛选合适的刺激浓度;设立空白对照组,单纯LPS(500μg/m L)刺激组,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500μg/m L)刺激组,以Hochest33258染色以及Annexin V-PI双标法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、NF-κB结合蛋白P65以及磷酸化P-P65的表达。结果 CCK-8实验结果显示当LPS浓度为500μg/m L能明显降低细胞的活力。与空白对照组相比,单纯LPS刺激组细胞凋亡率上升(P0.05),P-P65表达明显增加,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也增高(P0.05)。而与单纯LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组细胞凋亡率下降(P0.05),P-P65表达明显降低,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也降低(P0.05)。结论 NF-κB信号通路可能与椎间盘退变时髓核细胞凋亡的发生密切相关,值得进一步研究。     

蒙花苷通过调控IKK/NF-κB信号通路抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭

目的:探究蒙花苷(LIN)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的分子机制。方法:用不同浓度(5、 10、 20、 40、 80和160μmol/L)的LIN处理MCF-7、MDA-MB-231和MCF-10A细胞24 h后,CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测Snail、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκB激酶α/β(p-IKKα/β)和磷酸化p65(p-p65)的蛋白水平。结果:LIN可剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞活力(P0.05),IC_(50)为55.89μmol/L;20μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞集落形成率显著降低(P0.05);与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞迁移率和侵袭率显著降低(P0.05),Snail和MMP-9的蛋白水平下调(P0.05),E-cadherin的蛋白水平上调(P0.05),IKKα/β和p65蛋白的磷酸化水平降低,IκBα的蛋白水平上调(P0.05);同时,IKK-16(IKKα/β抑制剂)和PDTC(NF-κB抑制剂)也可下调MDA-MB-231细胞中Snail和MMP-9的蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin的蛋白水平(P0.05)。结论:LIN可能通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化而下调Snail和MMP-9蛋白水平并上调E-cadherin蛋白水平,最终导致MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力降低。     

RNA干扰ATF5基因下调NF-κB信号诱导脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨RNA干扰转录激活因子5(ATF5)基因表达对脑胶质瘤细胞活力、凋亡率及NF-κB信号通路的影响。方法:将设计合成的ATF5特异性siRNA(siATF5组)和阴性对照siRNA(NC组)分别转染人脑胶质瘤U251细胞,采用NF-κB信号通路抑制剂PDTC处理细胞,MTT法、流式细胞术及Western blot法分别检测细胞活力、凋亡率及ATF5、血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶2(COX-2)、 p-p65、p-IκB和Bax的蛋白水平。结果:转染siATF5的U251细胞中ATF5的蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与空白对照组比较,siATF5组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,VEGF、COX-2、 p-p65和p-IκB的蛋白水平明显降低,Bax的蛋白水平明显升高(P0.05)。与siATF5组相比,siATF5和PDTC同时处理的U251细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P0.05)。结论:下调ATF5基因表达可降低脑胶质瘤细胞的活力,诱导细胞凋亡,降低免疫抑制因子VEGF和COX-2表达,其机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

原钙黏蛋白10通过NF-κB/cyclin D1信号通路抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖

目的:探讨原钙黏蛋白10(PCDH10)对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用RTPCR法检测4种人乳腺癌细胞和正常乳腺上皮MCF-10A细胞中PCDH10的mRNA表达;将PCDH10慢病毒表达载体(pLV-PCDH10)感染MDA-MB-231细胞,建立稳定表达PCDH10的细胞系,同时设置空白对照(blank)和阴性对照(pLV-NC)细胞;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和集落形成实验检测细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、核因子κB p65亚基(NF-κB p65)和NF-κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达。结果:人乳腺癌细胞中PCDH10的mRNA水平表达均低于正常乳腺上皮MCF-10A细胞(P0.05)。经RT-PCR与Western blot验证,稳定过表达PCDH10的人乳腺癌MDA-MB-231细胞构建成功;与pLV-NC组相比,过表达PCDH10可显著抑制细胞增殖(P0.05),诱导细胞发生G1期阻滞;Western blot结果表明,同pLV-NC组比较,过表达PCDH10可显著下调cyclin D1和CDK4蛋白表达,降低NF-κB p65和IκBα蛋白的磷酸化水平(P0.05)。结论:PCDH10可抑制乳腺癌细胞增殖,阻滞细胞周期进程,其机制可能与NF-κB/cyclin D1信号通路有关。     

赖氨大黄酸通过抑制EGFR信号通路诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡

目的 研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖、凋亡的影响及EGFR信号通路在其中的作用.方法 应用MTT法检测RHL对CaSki细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测EGFR信号通路蛋白表达水平及其蛋白磷酸化水平.结果 RHL能有效抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,48和72 h的ⅠC50值分别是84.57 μmol/L和74.79μmol/L,RHL能诱导CaSki细胞凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够抑制EGFR、AKT蛋白磷酸化,并显著下调NF-κB、BCL-2及Survivin蛋白的水平(P＜0.01),同时RHL还上调BAX蛋白的表达(P＜0.01).结论 RHL可能通过EGFR/AKT/NF-κB/Survivin信号通路诱导CaSki细胞凋亡.     

IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡能力的影响北大核心CSCD

目的:探究过表达IL-24对乳腺癌细胞CXCR4表达及肿瘤细胞侵袭、迁移及凋亡的影响与机制。方法:免疫组织化学染色(IHC)检测乳腺癌与癌旁正常乳腺组织CXCR4与其配体CXCL12表达,并分析其相关性;Western blot检测CXCR4在人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453和MDA-MB-231中的表达;采用慢病毒稳转技术在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中过表达IL-24,免疫荧光显微镜、RT-PCR和ELISA检测感染效率;将细胞分为5组:LV-IL-24组(感染过表达IL-24慢病毒)、LV-NC组(感染阴性对照慢病毒)、AMD3100组(采用CXCR4/CXCL12轴阻滞剂AMD3100进行培养)、LV-IL-24+AMD3100组(采用AMD3100进行培养的感染过表达IL-24慢病毒的细胞)、阴性对照组(正常培养的MDAMB-231细胞);Transwell、划痕实验和Annexin V-FITC细胞凋亡实验检测上述各组细胞侵袭、迁移及凋亡;Western blot检测各组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平及凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达。结果:CXCR4与CXCL12在乳腺癌组织中的表达均显著高于正常乳腺组织,且二者表达呈正相关;与MCF-10A细胞相比,CXCR4在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-453及MDA-MB-231中表达明显增加(P<0.05),以MDA-MB-231最为显著(P<0.01)。转染过表达IL-24的慢病毒后,MDA-MB-231细胞IL-24 mRNA与蛋白表达均显著增加(P<0.05);与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞侵袭、迁移能力均显著降低(P<0.05),而凋亡率明显提高(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,LV-IL-24组、AMD3100组和LV-IL-24+AMD3100组细胞CXCR4、AKT与mTOR蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),而凋亡相关蛋白Bax与cleaved-Caspase-3表达明显增加(P<0.05),LV-IL-24+AMD3100组变化最为显著(P<0.01)。结论:乳腺癌细胞中过表达IL-24可抑制CXCR4表达,通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路降低肿瘤细胞侵袭、迁移能力,促进其凋亡,联合使用CXCR4/CXCL12阻滞剂AMD3100可显著提高IL-24的上述抑癌效应。     

右美托咪定对骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响.方法将细胞分Control、DEX 0.01、0.1及1μmol/L组.BrdU检测细胞增殖,transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,免疫印迹检测Ki67、PCNA、Bcl-2、VEGF、MMP-2、MMP-9、NF-κB p65及其下游蛋白表达水平、p38 MAPK表达及其下游蛋白磷酸化比值.结果与Control组比较,DEX 0.1、1μmol/L组BrdU阳性细胞百分比、侵袭细胞数、划痕闭合率和Ki67、PCNA、Bcl-2、VEGF、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,抑制p38 MAPK、NF-κB信号通路的激活.结论DEX通过调控p38 MAPK及NF-κB表达抑制骨巨细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移.     

AP2M1抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭

目的 探究接头相关蛋白质复合体2亚基μ1(AP2M1)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖和侵袭的调控作用。方法 将人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-LY8分为对照组、NC-LV组、AP2M1-LV组。用Lipofectamine 2000进行细胞转染。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测AP2M1、表皮生长因子受体(EGFR)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和p-蛋白质激酶B(AKT)蛋白表达。结果 与对照组相比,AP2M1-shRNA组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均降低(P<0.05),相对细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05);EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均升高(P<0.05)。与对照组相比,AP2M1-LV组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),相对细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P...     

siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

CXCL8/CXCR1驱动FOXS1蛋白促进食管癌ECA109细胞增殖、侵袭及迁移

为了探讨CXC趋化因子配体8(CXC motif chemokine ligand 8,CXCL8)/CXC趋化因子受体1(CXC chemokine receptor 1,CXCR1)对体外人食管癌细胞ECA109增殖、凋亡及侵袭迁移的影响，并观察其与叉头框家族S1(forkhead box S1,FOXS1)蛋白的关系，将人食管癌细胞ECA109转染后分为对照组、CXCL8组、CXCL8+Con-siRNA组和CXCL8+CXCR1-siRNA组。CXCL8终浓度为10μg/mL。采用MTT试验检测细胞增殖情况，克隆试验检测克隆形成情况，流式细胞仪进行细胞凋亡测试，侵袭与迁移能力由Transwell试验和划痕试验测定，Western blotting检测细胞中CXCR1、FOXS1蛋白表达水平。结果显示，与对照组比较，CXCL8能够显著促进ECA109细胞增殖、克隆、侵袭和迁移(P<0.05),而干扰CXCR1后这些作用被阻断(P<0.05)。CXCL8组、CXCL8+Con-siRNA组细胞凋亡率与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05),CXCL8+CXC...     

TRAF6基因对宫颈癌细胞体外生物学行为的影响及其相关机制

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因对于宫颈癌细胞生长、增殖、凋亡及浸润转移等生物学行为的影响,为将来人宫颈癌的生物治疗提供实验依据.方法:采用Western印迹方法检测TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki和C33A)中的表达,构建TRAF6-shRNA干扰表达载体并转染人宫颈癌Hela细胞,而后使用MTT法、流式细胞仪分析法、Transwell侵袭小室实验法等方法分析TRAF6对Hela细胞活力、周期、凋亡以及迁移等生物学行为的影响,同时检测TRAF6对其靶基因NF-κB表达的影响,以及Cyclin D1,easpase 3和MMP-9等蛋白影响.结果:TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki及C33A)中高表达,TRAF6 shRNA转染组Hela细胞的活力、增殖能力以及迁移能力明显低于阴性对照组和空白对照组Hela细胞(P＜0.05),TRAF6 shRNA转染组发生凋亡的Hela细胞所占比例明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),阴性对照组和空白对照组Hela细胞的活力、增殖能力、凋亡情况以及迁移能力无明显差异;TRAF6 shRNA转染组Hela细胞中NF-κB,Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),caspase 3蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),NF-κB,Cyclin D1,caspase 3和MMP-9在阴性对照组和空白对照组表达没有明显变化.结论:TRAF6基因可能具有促进Hela细胞生长增殖及其侵袭迁移能力,抑制Hela细胞凋亡的作用,TRAF6基因的表达下调可能与人宫颈癌Hela细胞迁移能力下降、凋亡能力增加有关.     

缺氧条件下CXCL13通过MAPK信号通路促进人骨髓间充质干细胞增殖和自噬

目的探索CXC趋化因子配体13(CXCL13)对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)自噬和增殖的影响及机制。方法 hBMSC分为对照组、缺氧组、 CXCL13处理组、 CXCL13和SB203580的联合处理组。除对照组外,其余各组均在920 mL/L N_2、 30 mL/L O_2和50 mL/L CO_2建立的细胞缺氧模型下进行培养。缺氧组不进行任何处理, CXCL13处理组给予50 ng/mL CXCL13重组蛋白刺激,联合处理组则预先添加20μmol/L丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580,培养30 min后,再以50 ng/mL CXCL13刺激。分别采用噻唑蓝(MTT)法检测hBMSC增殖活性, annexinⅤ-FITC/PI双标记结合流式细胞术检测hBMSC的凋亡, Western blot法检测hBMSC的核因子κB(NF-κB)、 beclin-1蛋白水平, ELISA检测细胞裂解液自噬相关蛋白7(ATG7)的含量。结果与缺氧组及联合处理组相比, CXCL13处理组hBMSC的细胞增殖活性、 beclin-1及NF-κB蛋白水平均升高、凋亡率明显降低;细胞裂解液ATG7水平升高。结论缺氧环境下, CXCL13通过MAPK/NF-κB信号通路促进hBMSC自噬和增殖。     

骨膜蛋白siRNA转染抑制ox-LDL诱导的人主动脉内皮细胞系损伤

目的探讨骨膜蛋白(Postn)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞系(HAECs)损伤的影响及其作用机制。方法将HAECs随机分为4组:对照组、ox-LDL组、Postn siRNA组和negative siRNA组。RT-q PCR检测mRNA水平;Western blot检测蛋白表达;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;EMSA检测NF-κB的DNA结合能力。结果与对照组相比,ox-LDL组Postn的mRNA和蛋白水平显著提高(P0.05);细胞增殖能力降低(P0.05);细胞凋亡率升高(P0.05);VCAM1、ICAM1、E-selectin、IL-1β、IL-6、TNF-α、p65和p-IκB-α的蛋白表达水平显著上调(P0.05),且NF-κB的DNA结合能力提高(P0.05),Postn siRNA转染能够逆转以上结果。结论 Postn siRNA转染能够抑制ox-LDL诱导的内皮细胞损伤,这可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

加味生脉饮含药血清对乳腺癌相关血管内皮细胞生物学行为的影响

目的探讨加味生脉饮含药血清对乳腺癌相关血管内皮细胞生物学行为的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为空白对照(Control)组、乳腺癌MCF-7细胞条件培养基(BC_CM)组、乳腺癌MCF-7细胞条件培养基+加味生脉饮含药血清(BC_CM+mSL_S)组、加味生脉饮含药血清(mSL_S)组,对4组细胞进行不同条件的细胞培养48h。通过CCK-8试验检测各组的细胞增殖活性;通过免疫荧光检测活化Caspase-3(cCasp3)以评价各组细胞凋亡状态;通过Transwell试验检测各组细胞迁移活性;通过Western Blotting检测磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT水平。结果暴露于乳腺癌MCF-7细胞条件培养基后HUVECs增殖速率明显增高,迁移活性显著增强,细胞存活增殖迁移相关信号蛋白磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT的表达水平显著上调。进一步以加味生脉饮含药血清处理,可使经乳腺癌细胞条件培养基诱导后血管形成相关生物学行为活跃的内皮细胞增殖水平明显降低,细胞凋亡现象显著加剧,细胞迁移活性受到明显抑制,磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT的表达量显著下降。结论加味生脉饮含药血清对乳腺癌相关血管内皮细胞生物学行为的有抑制作用。     

大麻素WIN55,212-2抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和侵袭迁移

目的研究大麻素WIN55,212-2(WIN)对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法应用CCK-8法分析(0、1、5、10、20)μmol/L WIN对SMMC-7721细胞活力的影响;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察各组细胞形态改变;异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白P53、P21、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达;采用TranswellTM侵袭实验及划痕实验检测细胞侵袭、迁移的能力,Western blot法检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)蛋白水平。结果 WIN抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理后的细胞,经Hoechst33258染色,可发现细胞核浓缩、破碎,引起明显细胞凋亡;凋亡相关蛋白P53、P21、Bax激活,抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降;AKT、p-AKT、p-ERK水平下降,而ERK总蛋白无明显变化;与对照组比较,WIN处理后的SMMC-7721细胞侵袭和迁移的能力均显著降低,MMP-14蛋白水平也下降。结论 WIN能抑制SMMC-7721细胞增殖和诱导其凋亡,与WIN激活P53,抑制AKT、p-AKT、p-ERK表达有关。WIN通过下调MMP-14蛋白水平,抑制SMMC-7721细胞侵袭和迁移。     

川楝素对人卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨川楝素(toosendanin,TSN)对人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法:用不同浓度川楝素处理人卵巢癌CAVO-3和SKVO-3细胞,采用CCK-8法检测TSN处理12、24、48、72和96 h后的细胞存活率;通过细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测TSN对人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的表达情况。结果:TSN抑制CAVO-3和SKVO-3细胞活力(P0.05)。与对照组相比,TSN组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力明显降低,且NF-κB p65和E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin和Snail表达下降(P0.05);而加入NF-κB抑制剂BAY11-7082至TSN处理的细胞后明显逆转了以上效应,与TSN组相比,TSN+BAY11-7082组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力显著升高,且E-cadherin表达下降,N-cadherin、vimentin和Snail表达升高(P0.05)。结论:川楝素能抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制由NF-κB/Snail信号通路所介导的上皮-间充质转化过程有关。