特异性免疫玻片法在外周血T淋巴细胞亚群检测中的应用

目的:探讨一种非流式T淋巴细胞亚群检测的新方法。方法:采用特异性免疫玻片法对120份全血CD3+、CD4+和CD8+T细胞进行检测,并与流式细胞术检测结果进行相关性分析。结果:两种方法检测CD3+、CD4+和CD8+T细胞的相关系数(r)分别为0.96、0.98和0.94,平均绝对误差分别为-21个细胞/μl、3个细胞/μl和26个细胞/μl。统计学处理发现,两种方法检测CD3+、CD4+和CD8+T细胞的结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:免疫玻片法可准确进行全血T淋巴细胞亚群计数,并具有试剂价格低廉、操作简单的特点,适用于基层和卫生资源缺乏地区的医疗机构。     

SARS患者急性期外周血CD3+、CD4+及CD8+细胞数量的变化

目的 探讨SARS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。方法 用全自动血细胞分析仪检测44例SARS患者外周血白细胞计数及分类，用流式细胞仪检测SARS患者外周血T淋巴细胞亚群；并与正常对照组比较。结果 与对照组比较，SARS组患者白细胞总数显著下降，淋巴细胞百分数和绝对数显著下降，粒细胞绝对数显著下降，粒细胞百分数显著增加；CD3^ 、CD4^ 和CD8^ 细胞绝对数显著下降，CD3^ 、CD4^ 及CD8^ 细胞百分数和CD4^ /CD8^ 比值与对照组比较无显著性差异。结论 SARS冠状病毒感染损伤患者细胞免疫功能。     

1例WHIM综合征患儿临床与免疫学特征研究

目的探讨1例CXCR4基因突变所导致的WHIM综合征患儿临床及免疫学特征。方法对1例以反复呼吸道感染、低丙种球蛋白血症、粒细胞缺乏和疣为主要临床表现的患儿行全基因组测序,并利用流式细胞术检测其外周血淋巴细胞亚群和PMA刺激前后淋巴细胞CXCR4表达变化。结果确诊1例由CXCR4基因杂合突变(c.1000C>T,p.R334X)导致的WHIM综合征患儿,PMA刺激后淋巴细胞CXCR4表达无降低,淋巴细胞亚群分析提示T、B细胞绝对数及相对数均减少,NK、中心记忆和效应记忆T细胞相对数升高,初始T细胞相对数明显降低。与健康人相比,患儿Tfh细胞相对数降低,进一步亚群分析显示Th1样细胞相对数升高而Th17样相对数降低。结论本研究从功能上证实该杂合突变可导致CXCR4内化功能受损,使CXCR4/CXCL12结合后下游信号持续活化,影响外周血淋巴细胞各亚群变化。发现WHIM综合征患者Tfh细胞及其亚群数量异常,提示此类患者体液免疫受损可能与Tfh数量变化所致生发中心功能障碍有关。CXCR4在维持免疫细胞稳态与功能行使中发挥重要的作用。     

应用四色荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨四色荧光标记流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后外周血淋巴细胞亚群:辅助性T淋巴细胞(CD4 ),抑制性和细胞毒T淋巴细胞(CD8 ),B淋巴细胞(CD19 ),NK(CD16 CD56 ) 细胞的绝对数和百分率等的变化.方法 收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂对照组,采用四色荧光标记流式细胞术对服用云芝丹参胶囊后的鼻咽癌患者外周抗凝全血的淋巴细胞亚群CD4 细胞、CD8 细胞、B细胞、NK细胞进行绝对计数和相对计数,并对两组结果进行比较分析.结果 四色荧光标记流式细胞术结果显示:接受放射治疗的鼻咽癌患者在服用云芝丹参胶囊16周后,外周血T淋巴细胞的绝对数和百分率,以及Ts、Th细胞绝对数的下降均明显低于安慰剂组(P＜0.05);中药组和安慰剂组NK细胞百分率的变化均显著增高(P＜0.05); 但两组NK细胞绝对值的变化不存在明显差异(P＞0.05).结论 云芝丹参能明显减轻放射治疗对鼻咽癌患者的淋巴毒性.     

28 色流式对中轴型脊柱关节炎患者外周血中T 细胞亚群差异的鉴定

目的:高通量(28色流式细胞术)分析中轴型脊柱关节炎(ax-SpA)患者与健康志愿者外周血中T细胞亚群差异。方法:利用流式细胞仪搭建并优化28通道针对T细胞的流式染色方案。收集ax-SpA患者和健康志愿者的外周血,用密度梯度离心法分离获得PBMC细胞。28色流式抗体共同染色,并上机检测。结合FlowJo和R语言对CD4~+ T细胞和CD8~+ T细胞进行大数据处理。结果:CD4~+ T细胞可以分为10个细胞亚群,但在ax-SpA患者和健康志愿者之间无明显差异;CD8~+ T细胞可以分为14个细胞亚群,其中亚群8在ax-SpA患者和健康志愿者之间存在显著差异,且表达CD103。结论:CD103~+CD8~+ T细胞在ax-SpA患者外周血中比例明显升高,可能在其发病过程中发挥重要作用。     

流式细胞术检测CFSE标记人T细胞亚群增殖反应

目的探讨应用流式细胞术和活细胞荧光染料CFSE检测T淋巴细胞各亚群增殖反应的方法学。方法人外周血单个核细胞（PBMC）经CFSE染色后,分别用植物凝血素（PHA）、CD3 mAb和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）刺激,加IL-2扩增后,用流式细胞术检测活化增殖后T细胞各亚群的比例,并用ModFit软件分析各亚群的增殖动力模型。结果PHA和CD3 mAb主要活化总T细胞,CD8^＋T细胞的增殖优于CD4^＋T细胞,但CD4^＋T细胞前4代细胞明显多于CD8^＋T细胞。Mtb-Ag主要刺激γδT细胞增殖。结论以CFSE标记淋巴细胞,结合流式细胞术可有效检测出不同T细胞亚群对不同刺激剂的增殖反应以及增殖动力学变化。     

傣族健康成人及青少年T淋巴细胞亚群正常值调查

背景:健康状况下,T淋巴细胞亚群及其他免疫细胞在数量上保持相对稳定的状态,由于T淋巴细胞亚群的正常值受年龄、性别、种族等因素的影响,容易导致感染性疾病或自身免疫疾病的发生。因此建立正常参考值对判断不同疾病状态免疫功能、疾病进展以及恢复状态均具有重要意义。目的:调查健康傣族成人及青少年外周血T淋巴细胞亚群绝对计数正常值。方法:使用四色荧光抗体对392名健康傣族成人及青少年外周血T淋巴细胞亚群进行标记,采用FACSCalibur流式细胞仪进行检测并分析结果。结果与结论:82名傣族健康青少年外周血T淋巴细胞亚群绝对数均值及参考范围分别为:淋巴细胞为3054×106(1691×106～4845×106)L-1;CD3+细胞为2055×106(1183×106～3280×106)L-1;CD4+细胞为1072×106(583×106～1666×106)L-1;CD8+细胞为825×106(381×106～1665×106)L-1;CD4+/CD8+值为1.38(0.44～2.36)。310名成人T淋巴细胞亚群绝对数:淋巴细胞为2649×106(1243×106～4754×106)L-1;CD3+为1763×106(828×106～3115×106)L-1;CD4+为985×106(450×106～1708×106)L-1;CD8+为663×106(275×106～1335×106)L-1;CD4+/CD8+值为1.64(0.74～2.00)。男性淋巴细胞数和CD8+T淋巴细胞绝对数大于女性,而CD3+百分比和CD4+百分比低于女性(P0.05)。除CD4+T淋巴细胞绝对数外,各年龄层健康人淋巴细胞数、T淋巴细胞绝对数、CD8+T细胞绝对数及比例均不同,尤其是青少年组CD8+T淋巴细胞绝对数和CD8+%高于其他年龄组,且随年龄增加而降低。与中国不同地区健康人群比较,傣族健康人CD4+T淋巴细胞绝对数高于国内其他地区。此次调查建立了傣族人正常淋巴细胞、T淋巴细胞亚群的表型参考范围。     

中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及功能研究

目的通过研究中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及其功能, 为以恒河猴为模型的研究提供数据参考。方法通过优选抗体克隆和荧光配色, 确定了主要淋巴细胞亚群检测和T细胞功能检测Panel, 并用此方法分析15只健康中国恒河猴外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中T、B、NK等多种细胞亚群的比例, 以及在非特异性刺激条件下T细胞分泌细胞因子的能力。结果成功建立了两套多色流式Panel, Panel 1可同时检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocyte, CTL)、滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell, Tfh)、调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)、B细胞和NK细胞等多种淋巴细胞亚群, Panel 2可检测多种T细胞亚群功能和免疫检查点分子的表达。中国恒河猴PBMCs中主要淋巴细胞亚群比例的平均值分别为T细胞(75.32±7.73)%、B细胞(13.22±7.50)%、NK细胞(0.88±0.48)%、Tfh细胞(0.73±0.27)%、Treg细胞...     

流式细胞仪检测大鼠外周血T细胞亚群(微量全血法)

本实验利用MRC W/OX系列单克隆抗体和流式细胞仪(Epics C型)首次建立了微量全血检测大鼠外周血T细胞亚群的方法,并报告了正常成鼠外周血T细胞亚群分布(n=60):OX-19+细胞占65.45±5.98％(SD),W3/25~+细胞占47.17±6.45％,OX-8~+细胞占24.26±6.18％。W3/25~+亚群和OX-8~+亚群比值为2.12±0.11(SEM)。部分标本流式细胞仪分析结果和荧光显微镜的结果无明显差异(P>0.05)。在抗体染色条件方面,发现当温育温度过高(30℃)时,染色阳性细胞率有明显下降(P<0.001)。实验证实,用微量全血染色不仅简便、可靠、重复性好,且用血量少。同时避免了常规Ficoll分离法时种种弊病。因此用本法可动态观察大鼠外周血T细胞亚群的变化,为进一步研究在药理、病理和免疫学实验中的细胞免疫功能变化提供了方便。     

乙醇降低人外周血T淋巴细胞活化并增加其凋亡

目的观察乙醇对人外周血T淋巴细胞亚群数量、活化功能及凋亡的影响。方法从健康供血者通过密度离心分离出外周血单个核细胞(PBMC),淋巴细胞与植物血凝素(PHA)和(30、 50)mL/L乙醇共同培养。培养12、 18、 36、 48 h后,采用流式细胞术检测各组淋巴细胞活化功能以及凋亡情况。结果 PBMC与乙醇共培养12 h后,在(30、 50)mL/L的乙醇培养条件下, T淋巴细胞的数量在12 h内无明显变化,但与空白对照相比, PHA组CD8~+ T细胞出现活化,而且50 mL/L乙醇可以抑制CD8~+ T细胞的活化。PBMC与乙醇共培养18 h,与单纯PHA组相比,乙醇和PHA联合组淋巴细胞数量减少,且随着乙醇剂量的增加淋巴细胞数量下降更明显,且PHA刺激T细胞活化减弱。PBMC与乙醇共培养36 h,与单纯PHA组相比,乙醇联合PHA处理组淋巴细胞的数量减少更显著,共培养48 h,淋巴细胞几乎消失。随着PBMC与乙醇共培养时间的延长和乙醇剂量的增加, CD3~+ T淋巴细胞凋亡比例升高。结论较高剂量乙醇处理的外周血T淋巴细胞活化减少,随着乙醇剂量的增加, T淋巴细胞及其亚群的细胞数量减少,可能与促进T淋巴细胞及其亚群凋亡有关。     

联合检测血清CEA及外周血T淋巴细胞、DNT细胞在肺癌诊断中的应用

目的 探讨肺部良、恶性病变鉴别的新方法.方法 采用流式细胞仪测定肺癌患者、肺良性病变患者及健康体检者三组血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞的表达水平.结果 联合检测血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞可将肺癌检出的灵敏度、特异度提高至90.8％、98.9％.结论 利用血清CEA及外周血T淋巴细胞亚群与DNT细胞联合检测,将明显提高肺癌诊断的灵敏度和特异度,有较大的临床应用价值.     

流式细胞术鉴定人外周血滤泡辅助性T细胞

目的:用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)鉴定正常人外周血单个核细胞(PBMC)中滤泡辅助性T(Tfh)细胞, 以便对其功能进行进一步研究.方法:密度梯度离心法分离人PBMC, 采用不同荧光素标记的抗CXCR5、 CD4及CD19抗体进行染色FCM分析, 鉴定出表型为CD4+CXCR5+的T细胞亚群.结果:外周血可以检测到CD4+CXCR5+T细胞亚群, 占CD4+T淋巴细胞百分比为(11.09±0.38)%, MFI值为25.78±0.72, 低于B细胞膜表面CXCR表达水平(MFI值为99.6±8.1).结论:健康人外周血存在一定比例的Tfh细胞, 应用FCM可以成功鉴定Tfh细胞, 为进一步研究其功能提供了良好的技术平台.     

传染性单核细胞增多症患儿外周血淋巴细胞亚群的分布及意义

探讨传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)患儿外周血中淋巴细胞亚群的分布及临床意义。采用流式细胞术检测131例IM患儿和50例体检健康儿童外周血中淋巴细胞亚群的表达,131例IM患儿中有26例患儿收集到对应的丙种球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)治疗后全血,流式细胞术检测淋巴细胞亚群在IM患儿IVIG治疗前后分布比例的差异。结果显示,与健康对照组相比,IM患儿CD3~+T细胞和CD8+T细胞的表达水平明显增高(均P<0.000 1),CD4~+T细胞、NK细胞、B淋巴细胞及CD4~+/CD8+T细胞比值水平明显降低(均P<0.000 1)。IM患儿急性期CD4~+、CD8~+T细胞及CD4~+/CD8~+T细胞比值升高及降低水平与患儿外周血异型淋巴细胞升高的百分率呈现正相关趋势。与IVIG治疗前相比,IM患儿IVIG治疗后外周血CD3~+T细胞和CD8~+T细胞的表达水平有所减低,但仍高于健康对照组(均P<0.01),治疗后CD4~+T细胞、NK细胞、B淋巴细胞及CD4~+/CD8~+T细胞比值水平增高,但其中治疗后CD4~+T细胞、B淋巴细胞及CD4~+/CD8~+T细胞比值水平仍显著低于健康对照组(均P<0.01)。综上所述,检测淋巴细胞亚群对IM患儿的细胞免疫状况评估、辅助诊断和指导治疗具有重要的临床意义。     

HIV/AIDS患者外周血T淋巴细胞亚群的研究

目的 通过对HIV/AIDS患者外周血T淋巴细胞亚群进行分析,探讨初始、记忆和效应T细胞各亚群的变化情况及其与疾病进展的关系.方法 应用流式细胞仪检测15例正常人,79例HIV/AIDS患者CD4<200组17例、200≤CD4≤500组45例和CD4>500组17例.外周血淋巴细胞中T细胞各亚群绝对数及百分比.结果随着疾病进展,CD4+ 初始细胞(Naive)计数和比例均逐渐减少(P<0.001);CD4+中枢性记忆T细胞(Tcm)计数逐渐降低(P<0.001),但百分比逐渐升高(P=0.002);CD4+效应记忆性T细胞(TEMA)百分比上升(P<0.001);CD8+Naive细胞计数及百分比均逐渐下降(P<0.05);CD8+ TCM、TEM和终末分化的效应性记忆T细胞(TEMRA)的计数及百分比,各组间差异均无统计学意义(P>0.05).结论 HIV感染者外周血T淋巴细胞亚群发生显著变化,幼稚型T淋巴细胞数目逐渐减少,功能型T淋巴细胞数目增加.本研究有助于对HIV致病机制的研究及疾病进展的监测.     

免疫性血小板减少症患儿外周血Treg细胞GITR表达及临床意义

目的：探讨免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血Treg细胞GITR表达，以及GITR表达与淋巴细胞亚群、炎症因子、ITP病程的相关性。方法：下载GSE23754数据集(来自GEO数据库)，GSEA分析ITP患儿外周血GITR mRNA水平与细胞免疫相关信号通路的相关性。收集华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院2020年12月至2021年2月新确诊的ITP患儿(n=34)和同期健康体检儿童(n=46)外周血，qPCR检测外周血单个核细胞(PBMC)GITR mRNA表达；CBA法检测外周血血清中炎症因子水平；流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群和T细胞GITR表达。结果：GSE23754数据集GSEA分析结果显示，ITP患儿GITR mRNA表达与效应T细胞功能信号通路呈负相关(NES=-1.30,P=0.035)。Pearson相关分析结果显示，新确诊ITP患儿PBMC的GITR mRNA表达与外周血CD8⁺T细胞数及IL-2、TNF-α水平呈负相关(均P<0.05)。流式细胞术结果显示，GITR主要在儿童外周血Treg细胞表面表达，且ITP患儿Treg细胞...     

宫颈癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞的检测及其临床意义

为探讨宫颈癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性检测的临床意义,采用流式细胞仪测定宫颈癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性,以正常人作对照分析。结果表明,宫颈癌患者外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、NK细胞数量及CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋比值较正常对照组均明显下降（P〈0.05）,而CD3＋CD8＋细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与宫颈癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3＋细胞、CD3＋CD4＋细胞、CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋细胞比值及NK细胞数量越低,CD3＋CD8＋细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异（P〈0.05）。实验结果提示,宫颈癌患者细胞免疫功能低下,且临床病理分期越晚,其免疫功能越低,检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于宫颈癌患者的免疫监测。     

重组干扰素协同PHA诱生淋巴细胞治疗原因不明性习惯性流产的研究

目的探讨原因不明性习惯性流产患者与其外周血T淋巴细胞免疫功能的关系,比较通过诱生与非诱生免疫疗法,对原因不明性习惯性流产患者T淋巴细胞亚群的变化及免疫治疗的疗效的观察。方法采用流式细胞仪,对42例原因不明性习惯性流产和15例正常妇女的外周血T淋巴细胞亚群进行检测,并对原因不明性习惯性流产患者随机分成2组,分别进行常规治疗和经诱生后免疫治疗,对其治疗后的外周血T淋巴细胞进行检测。结果与对照组相比,原因不明性习惯性流产CD4 细胞百分含量增加和CD8 细胞百分含量下降。CD4 /CD8 比值升高,二者比较P<0.05具有显著性。经过诱生免疫和常规免疫治疗前后的T细胞亚群检测发现,CD4 细胞百分含量有所下降,而CD8 细胞百分含量有所上升,二者比较P<0.05具有显著性。结论原因不明性习惯性流产可能与外周血CD8 下降有关,经主动免疫可以诱导体内CD8 的数量,有效改善妊娠免疫机制,从而提高妊娠成功率。     

右美托咪定对结直肠癌手术患者围手术期细胞免疫功能的影响

目的 观察结直肠癌手术患者在全身麻醉过程中使用右美托咪定后围手术期免疫功能的变化.方法 选择全身麻醉下行结直肠癌根治术患者40例,随机分为一般全身麻醉组(对照组,n=20)和加用右美托咪定全身麻醉组(试验组,n=20),分别于术前1d、术后24 h、术后72 h采用流式细胞术检测患者外周血T细胞亚群、NK细胞的绝对数值.结果 对照组、试验组两组组内比较患者术后24 h及术后72h外周血T细胞亚群、NK细胞绝对计数均较术前1d降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,试验组术后24 h及术后72 h患者外周血T细胞亚群、NK细胞绝对计数升高,差异有统计学意义[术后72 h CD3+CD4+淋巴细胞绝对值:试验组(511.85± 110.59)细胞/μl,对照组(390.25±128.05)细胞/μl,P＜0.05].结论 右美托咪啶能明显改善结直肠癌患者围手术期T细胞亚群、NK细胞的减少,减轻结直肠癌患者围手术期免疫抑制状态.     

人T细胞亚群的微量全血染色法

本研究建立了人T细胞亚群的微量全血染色法,观察了红细胞溶解液、血细胞与OKT McAb共育时间、洗液及OKT McAb用量等因素对染色率的影响。本法只需0.4ml全血即可得到CD_3、CD_4、CD_8亚群的百分率,同时避免了传统的Ficoll分离法用血量多、淋巴细胞部分选择性丢失等缺点。     

恢复期SARS患者淋巴细胞亚群分布及其与T淋巴细胞Ag-NOR含量相关性的初步分析

目的　通过检测恢复期SARS患者外周血淋巴细胞亚群分布及其与T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白 (Ag NOR)含量的相关性分析 ,探讨恢复期SARS患者的免疫状态及淋巴细胞亚群与活性状态改变的关系。方法　以流式细胞术检测患者外周血淋巴细胞亚群 ,用KL型免疫图像分析系统检测外周血T淋巴细胞Ag NOR ,对两者进行相关分析。结果　恢复期患者T淋巴细胞总数及CD4 +亚群基本正常 ,而CD8+亚群偏高 ,CD4 +/CD8+降低 ,CD4 +/CD8+<1的比例占 37.4 % ,激活T细胞中以CD8+细胞为主。B细胞比例正常。NK细胞明显低于对照组。重症患者CD4 +、CD4 +/CD8+、CD1 9+CD5+降低及CD8+、CD3+HLA DR+升高。 50岁以上及使用大剂量激素患者CD3+HLA DR+升高。淋巴细胞Ag NOR的含量 (IS % )在正常范围 ,但患者IS值呈偏态分布 ,低于正常范围者占 4 4.99%。淋巴细胞Ag NOR的含量与CD3+、NK、CD3+HLA DR+、CD3+CD2 5+在统计学上具有相关性。结论　恢复期SARS患者免疫功能趋于恢复正常 ,但部分患者的淋巴细胞亚群数量及淋巴细胞活性仍未恢复正常 ,这些病人在临床症状得到改善之后 ,尚需一定时间的观察随访 ,以了解SARS病毒对人体免疫机能的长期影响。