严重胸部外伤继发CD4^＋T淋巴细胞分化异常的研究

目的严重创伤可导致机体炎症及免疫反应失调,并由此引起严重感染、多脏器功能衰竭甚至死亡。本研究旨在发现继发于严重胸部外伤的CD4＋T淋巴细胞向Th1、Th2细胞异常分化等免疫失衡现象。方法采用细胞内因子染色及流式细胞术等方法对2009至2010年收治的10例严重胸部外伤患者（APACHⅡ20.5±6.6）伤后7天的外周血CD4^＋T细胞向Th1/Th2细胞分化,并分别以10例健康人及10例胸部轻伤患者（APACHⅡ4.5±1.5）作为对照。结果相较于健康人,重伤组CD4^＋T细胞向Th1、Th2分化均明显增高（Th1：13.8±2.6%,P≤0.01、Th2：4.9±2.2%,P≤0.05）,但Th1/Th2分化的比例明显下降（Th1/Th2：2.82±0.6,P≤0.01）,健康人与轻伤组患者无明显差异。结论严重胸部外伤破坏机体Th1/Th2反应的平衡,其可能成为机体细胞免疫功能紊乱、继发严重感染的机制之一。     

硬膜外阻滞对妊高征大鼠子宫、胎盘组织CD4+及CD8+T淋巴细胞的影响

目的观察硬膜外阻滞对妊高征（PIH）大鼠子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的影响。方法健康雌性Wistar大鼠,鼠龄3～4个月,体重230～300g,40只孕鼠于孕14d时随机分为4组（n=10）：对照组（A组）、PIH组（B组）、假手术组（C组）、治疗组（D组）。B组、C组、D组采用皮下注射甲基L-精氨酸甲酯的方法制备PIH模型,25mg/次,2次/d,连续7d；A组相同时点给予等容量生理盐水0．25ml；C组行硬膜外导管置入术；D组行硬膜外导管置入术,每天由导管注入0．125%布比卡因50μl,连续7d。孕22d时处死大鼠,测定子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋mRNA、CD8^＋mRNA的表达水平。结果各组CD4^＋表达和CD4^＋mRNA表达差异无统计学意义（P＞0．05）；与A组比较,B组、C组CD8^＋表达降低（P＜0．05）；与B组和C组比较,D组CD8^＋表达和CD8^＋mRNA表达升高（P＜0．05）。结论硬膜外阻滞可增加PIH大鼠子宫、胎盘组织CD8^＋T淋巴细胞。     

CD4+CD25+调节性T细胞/辅助性T细胞17在脓毒症大鼠中的作用

目的 观察CD4+ CD25+调节T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)细胞在脓毒症大鼠炎性免疫反应中的作用.方法 110只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症(CLP)组,采用改良的盲肠结扎穿孔术(CLP)制作大鼠脓毒症模型.采用流式细胞术检测CD14+单核细胞表面人类白细胞抗原-DR基因(HLA-DR)表达率、Treg细胞及TH17细胞比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-17炎性因子蛋白表达.结果 与假手术组比较:(1)伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制,CD14+单核细胞HLA-DR表达率＜30％,IL-10/TNF-α比值(27.41 ±7.04比6.63 ±2.60)明显增高(P＜0.01).(2)术后96 h脓毒症大鼠Treg细胞[(11.91±3.88)％比(6.57±2.60)％,P＜0.01]和Th17细胞[(5.14±0.29)％比(2.85±0.07)％,P＜0.01]表达明显增高.(3)术后96 h脓毒症组前炎性细胞因子IL-6[(42.31±15.89) ng/L比(6.32 ±3.18) ng/L,P＜0.01]、IL-10[(69.89 ±20.78) ng/L比(13.58±5.37) ng/L,P＜0.01]、TNF-α[(5.03±3.10) ng/L比(2.77±1.10) ng/L,P＜0.01]、TGF-β[(4.99±2.01) ng/L比(1.88±1.07) ng/L,P＜0.01]、IL-17[(92.77±11.64) ng/L比(7.58±2.30) ng/L,P＜0.01]表达明显增高.结论 伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制;在大鼠脓毒症的发生发展中,Treg细胞介导的免疫抑制及Th17细胞介导免疫激活反应同时存在;脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致Treg细胞/Th17细胞失衡的原因之一.     

黄芪对免疫无应答艾滋病患者CD4＋T淋巴细胞数的影响

艾滋病全球广泛流行、破坏性极强,病死率高,目前尚无预防疫苗和根治措施。人体感染艾滋病病毒（human immunodeifciency virus,HIV）后,HIV主要侵犯CD4＋的免疫细胞,在侵入细胞中大量繁殖,最终使免疫细胞完全破坏。目前已证实,高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy,HAART）可促使HIV感染者的免疫功能重建,这也是近年来艾滋病治疗获得的重大进展之一。但是仍有20%～30%患者的HIV载量被完全抑制,而CD4^＋T细胞计数并未显著升高,这些被称为免疫无应答。中药黄芪具有提高人体免疫力的作用早已被人们认可,为探索黄芪是否对免疫无应答的艾滋病患者CD4^＋T淋巴细胞数的增加具有促进作用,本研究对HAART治疗的免疫无应答的艾滋病患者加用中药黄芪联合治疗1年,观察CD4^＋T淋巴细胞计数的变化。     

自然成熟型树突状细胞对 CD4+CD25+调节性 T细胞扩增的影响

目的：探讨自然成熟型树突状细胞对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞扩增机制。方法：提取DAB／2小鼠脾脏及肝脏细胞,流式细胞仪分离树突状细胞,测定其纯度及表型,加入C3H／HeJ小鼠提取的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞混合培养,测定其增殖活性。利用CD4^＋CD25-T细胞测定扩增后的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的免疫抑制活性。结果：成熟型树突状细胞表达高水平的共刺激分子CD40、CD80及CD86,对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞扩增效果明显。与新鲜分离的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞一样,扩增的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞高表达Foxp3,而且均保持了其抑制活性。结论：自然成熟型树突状细胞能扩增CD4^＋CD25^＋调节性T细胞,且扩增后的调节性T细胞保持了其表达活性和抑制活性。     

脓毒症患者外周血CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞的凋亡及Bcl-2蛋白表达

目的探讨脓毒症患者外周血淋巴细胞凋亡及其与Bcl-2蛋白表达的关系。方法采集44例脓毒症患者（脓毒症组，年龄19～86岁）和25例健康体检者（正常对照组，年龄29～80岁）的外周静脉血5ml，采用流式细胞仪分别检测CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞凋亡率和Bcl-2蛋白表达。分析细胞凋亡率与Bcl-2蛋白表达的相关性。脓毒症诊断标准参考1991年美国胸科医师协会和美国危重病医学会联席会议制定的诊断标准。结果与正常对照组比较，脓毒症组患者CD3^＋、CD4^＋T淋巴细胞凋亡率升高，Bcl-2蛋白表达下降（P〈0．05），CD8^＋T淋巴细胞凋亡率及其Bcl-2蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0．05），CD3^＋、CD4^＋T淋巴细胞凋亡率分别与其Bcl-2蛋白表达呈负相关（r=-0．389，P〈0．05；r=-0．689，P〈0．05）。结论脓毒症患者细胞免疫功能异常可能与Bcl-2蛋白表达下调导致淋巴细胞凋亡增加有关。     

雷公藤多苷对IgA肾病CD4＋CD25high调节性T细胞及Th1、Th2影响

目的：探讨CD4＋CD25high调节性T细胞（Treg）及辅助性T细胞亚群（Th1、Th2）比例失衡在IgA肾病（IgAN）免疫发病机制中的作用,以及使用雷公藤多苷（tripterygium wilfordii glycoside,TW）治疗后对IgAN 的 Treg、Th1、Th2及Th1/Th2的比例影响.方法：用流式细胞分析仪检测30例IgAN患者,使用雷公藤多苷治疗前后的外周血Treg、Th1、Th2及Th1/Th2的比例.并与健康对照组进行比较,两组间比较采用t检验.结果：IgA N患者外周血Treg的比例明显高于健康人（P＜0.01）;IgAN患者外周血中,Th2细胞比例显著高于健康对照组（P＜0.01）;IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组（P＜0.01）.使用TW （1 mg·kg-1·d-1）治疗 IgAN 3个月后,可显著降低IgAN患者外周血Treg（P＜0.01）,但治疗后Treg仍高于健康对照组（P＜0.05）;显著降低Th2细胞比例（P＜0.05）,显著升高Th1/Th2比值（P＜0.01）;且治疗后IgAN的尿蛋白明显降低（P＜0.01）,血清白蛋白升高（P＜0.05）.结论：TW可改善IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱,对IgAN治疗具有一定作用.     

细胞因子在CD4+CD25+调节性T淋巴细胞介导的免疫耐受中的生物学特性及作用机制

CD4+ CD25+调节性T淋巴细胞是一种免疫抑制性细胞,分泌抑制性细胞因子是其发挥免疫抑制作用的主要方式之一.随着研究结果的不断深入,人类发现诸如白细胞介素2、γ　干扰素、转化生长因子β、白细胞介素4、白细胞介素10等细胞因子在调节性T淋巴细胞的分化发育及免疫抑制功能等过程中发挥着十分重要的作用,其数量的变化或者功能的紊乱都会对调节性T淋巴细胞甚至机体造成影响.     

HIV-1慢性感染者CD8＋T淋巴细胞CD127表达与CD8＋T淋巴细胞凋亡的关系

目的 研究HIV-1慢性感染者CD8＋T淋巴细胞表面CD127（白细胞介素-7受体α链,IL-7Rα）分子的表达及临床意义.方法 收集24例HIV-1慢性感染者和12名健康人群的外周血,分离外周血单核细胞（PBMC）,用直接免疫荧光染色法标记并用流式细胞仪检测T淋巴细胞表面CD127表达和CD8＋T淋巴细胞的自发凋亡,并对CD8＋T淋巴细胞CD127的表达与CD4＋T淋巴细胞计数、HIV RNA载量以及CD8＋T淋巴细胞自发凋亡作相关性分析.组间比较采用Mann-Whitney U检验,Spearman评价组间相关性.结果 与健康对照组比较,HIV-1慢性感染组中CD8＋T淋巴细胞CD127的表达显著下降,差异具有统计学意义（Z=-4.796,P＜0.01）.CD8＋T淋巴细胞CD127的表达与患者CD4＋T淋巴细胞计数呈显著正相关（r=0.817,P＜0.01）,与血浆HIV RNA载量和CD8＋T淋巴细胞的自发凋亡呈显著负相关（r=-0.442和-0.688,P＜0.05和＜0.01）.结论 HIV-1慢性感染组CD8＋T淋巴细胞CD127表达进行性下降可能是导致细胞接受存活信号能力降低和发生凋亡的重要原因,提示IL-7可能是治疗HIV感染的新途径.     

甲磺司特对慢性非细菌性前列腺炎大鼠CD4+T淋巴细胞及IL-6的影响

目的 观察甲磺司特(Suplatast tosilate)对慢性非细菌性前列腺炎(chronic abacterial prostatitis,CAP)大鼠前列腺组织中CD4+T淋巴细胞及白介素-6(IL-6)表达的影响,研究甲磺司特对CAP的治疗作用及机制.方法 将36只老龄SD大鼠随机分为CAP模型组、甲磺司特低剂量治疗组、甲磺司特高剂量治疗组,每组12只.观察大鼠前列腺组织的病理形态学变化;免疫组化法检测CD4及IL-6在备组大鼠前列腺中的表达.结果 (1)CAP模型组大鼠前列腺的病理形态学改变符合人类CAP的特点;甲磺司特治疗组前列腺的炎症明显改善;(2)甲磺司特治疗组CD4及IL-6的表达低于模型组(P＜0.01):(3)甲磺司特高剂量治疗组CD4及IL-6的表达低于甲磺司特低剂量治疗组(P＜0.01).结论 甲磺司特对CAP具有治疗作用,其机制可能是抑制了前列腺组织中CD4+T淋巴细胞等炎症细胞的浸润及IL-6等促炎性细胞因子的过高表达.     

关节置换患者外周血调节T细胞水平变化及其临床意义

目的探讨调节性T细胞(Treg)与关节置换假体植入的关系及临床意义。方法 2009年1月至2009年6月将人工髋关节置换手术患者及同期无假体植入的关节镜手术患者分为两组,用流式细胞仪检测术前及术后3 d外周血Treg水平并进行统计学分析。结果关节置换组术前外周血中Treg的水平为(2.99±1.33),术后为(4.66±1.96),两者比较差异有统计学意义(P0.01);非假体植入组术前为(3.36±1.61),术后为(3.47±1.83),两者比较差异无统计学意义(P0.05);术后关节置换组与非假体植入组对比,两组间Treg水平的差异有统计学意义(P0.01)。结论假体植入体内可使患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平显著升高,提示关节置换假体感染引起的免疫反应与单纯组织感染时的免疫反应不同,T细胞能否成为假体感染的病情进展及疗效评估的指标有待进一步研究。     

胸腺五肽对重度创伤失血性休克大鼠复苏中外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的观察早期加用胸腺五肽（TP-5）对重度创伤失血性休克复苏大鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法 72只健康雄性SD大鼠随机均分为两组,股骨干骨折合并股动脉放血使MAP控制在（35±5）mm Hg 90 min建立重度创伤失血性休克大鼠模型,Ⅰ组选用复方乳酸钠复苏,Ⅱ组采用复方乳酸钠加用TP-5。两组在休克前（T₁）、复苏前（T₂）、休克复苏后12 h（T₃）、24 h（T₄）、48 h（T₅）、72 h（T₆）时各取6只大鼠静脉血以流式细胞仪测量T淋巴细胞亚群含量。结果与T₁时相比,T₂、T₃时两组CD4+含量和CD4+/CD8+比值均有明显降低（P<0.01）,CD8+含量明显升高（P<0.01）,于T₃时达峰值。T₃～T₆时Ⅱ组CD4+含量、CD4+/CD8+比值明显高于Ⅰ组,CD8+含量明显低于Ⅰ组（P<0.05和P<0.01）。结论重度创伤失血性休克大鼠复苏联合应用胸腺五肽较单纯复苏治疗可促进CD4+含量的增加和CD4+/CD8+平衡,从而可能提高机体细胞免疫能力。     

CD4~+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系

目的探讨CD4+T淋巴细胞内三磷腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量与原发性肝癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发的关系。方法 64例次肝癌肝移植,56名健康志愿者(对照组)纳入该研究。采集外周血标本,用ImmuKnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T淋巴细胞内ATP值。根据样本采集时肝癌肝移植患者是否发生肝癌复发,将采集的64份全血标本分为非复发组(51份)和复发组(13份)。结果健康对照组、非复发组、复发组的CD4+T淋巴细胞内ATP含量分别为(459±121)ng/ml、(308±101)ng/ml、(138±97)ng/ml,复发组的ATP值明显低于非复发组和对照组。ATP值降低(147ng/ml)时肝癌复发的风险明显增加,与肝癌复发存在良好的相关性。结论 CD4+T淋巴细胞内ATP含量与肝癌肝移植术后肿瘤复发具有良好相关性,监测肝癌肝移植术后患者的上述指标对评估其免疫状态、制定个体化治疗方案具有实用价值。     

外源性IL-2对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞影响的实验研究

目的：探讨IL-2对CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tregs）的增殖及功能的影响。方法：提取B6小鼠脾脏细胞,流式细胞仪分离CD4＋CD25＋Tregs,将新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs与抗CD3单克隆抗体、同种同系抗原递呈细胞（APCs）及外源性IL-2共同培养,测定其增殖活性;并检测体外扩增后的CD4＋CD25＋Tregs的免疫抑制活性及其Foxp3的表达。结果：与外源性IL-2共同培养的CD4＋CD25＋Tregs增殖程度强烈,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs抑制CD4＋CD25-T细胞增殖活性的能力与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs相似（P〉0.05）。体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs的Foxp3表达与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs亦相似（P〉0.05）。结论：外源性IL-2能够消除CD4＋CD25＋Tregs的无反应状态,且体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs保持了其抑制活性。     

大鼠同种异体动脉移植中CD4和CD8淋巴细胞数比值的变化及意义

目的 研究大鼠同种异体动脉移植术前后T淋巴细胞亚群CD4淋巴细胞计数和CD8淋巴细胞计数比值的变化及与急性免疫排斥反应的关系。方法 将45只SD雄性成年大白鼠建立同种异体动脉移植模型,按手术先后随机分为对照组(20只):取未经任何处理新鲜同种异体股动脉作移植。实验组(25只):用经深低温冷冻保存的同种异体股动脉作移植。应用免疫荧光染色技术及流式细胞仪检测2组大鼠术前和术后3、7、14、20d共5个时间组的CD4、CD8阳性细胞百分率,并计算其比值。结果 实验组术后CD4/CD8较术前无明显变化,血管通畅率为100％,未见免疫排斥反应。对照组术后CD4/CD8比值比术前显著增高(P<0.01),20 d时间组的血管通畅率为45％。术后第3天CD4/CD8比值与急性免疫排斥反应程度呈正相关。结论 深低温冷冻保存的大鼠同种异体动脉移植后CD4/CD8比值的变化和术前无明显变化,可作为术后急性免疫排斥反应的免疫学监测指标。     

86例膜性肾病回顾性分析及对CD4^＋CD^25＋调节性T细胞的初步研究

目的：回顾性总结、分析86例膜性肾病患者的临床表现、实验室检查及肾活检病理的特点及相互联系,认识膜性肾病的发病和流行病学特点。通过对特发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy,IMN）患者和正常人外周血CD4＋CD2＋5调节性T细胞（Treg细胞）数量的检测,了解Treg在IMN患者外周血的变化规律,探讨其在IMN发病中的作用。方法：2004年3月～2008年12月间病理确诊为膜性肾病患者86例,分析患者一般资料、病理类型和临床特征。选择2007年～2008年IMN患者10例,随机选取与IMN患者年龄相匹配的健康志愿者10例,检测所有对象外周血Treg细胞数量。结果：（1）86例膜性肾病患者,其中IMN68例,占80%,4例患者随访后确诊为恶性肿瘤;继发性膜性肾病18例（其中乙肝病毒相关性肾炎5例,狼疮性肾炎4例,移植肾肾小球肾炎1例）,占20%。（2）IMN免疫荧光以IgG沉积为主,乙肝病毒相关性肾炎C1q沉积较IMN多（P〈0.05）,并均存在HBsAg沉积,与IMN相比狼疮性肾炎C1q沉积明显增多,C4也多于IMN（P〈0.05）。（3）病理分期分布特点：Ⅱ期膜性肾病多见。（4）IMN患者治疗前外周血Treg细胞占CD4＋淋巴细胞的百分比为（7.46±0.94）%,正常对照组为（6.54±1.0）%。结论：（1）根据病因分为IMN及继发性膜性肾病两种,男性发病率大于女性,中老年多发,继发性膜性肾病的年龄及性别分布根据病因的不同而有所不同,临床表现均以肾病综合征表现为主;IMN发病率明显大于继发性膜性肾病。（2）免疫荧光检查：IMN以IgG及C3沉积为主,乙肝病毒相关性肾炎均存在乙肝表面抗原,狼疮性肾炎与乙肝病毒相关性肾炎的C1q沉积较特发性膜性肾病明显增多（P〈0.05）。（3）IMN患者外周血Treg细胞数量较正常人增多。     

大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能鉴定

目的：研究利用免疫磁珠分选法稳定分离正常大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的方法。方法：采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾组织CD4^＋CD25^＋T细胞。首先采用藻红蛋白（PE）标记的抗CD25抗体和抗PE多功能磁珠试剂盒阳性分选CD25^＋T细胞,再用抗异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体和抗IgG磁珠阳性分选获得CD4^＋CD25^＋T细胞。分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度,台盼蓝染色检测细胞存活率,体外增殖实验检测其对CD4^＋CD25^-T细胞的免疫抑制作用。结果：两次阳性分选后获得的CD4^＋CD25^＋T细胞纯度为（90.4±1.6）%,细胞存活率为（92.6±2.4）%。体外增殖实验表明,CD4^＋CD25^＋T细胞能明显抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖（P〈0.01）。结论：采用免疫磁珠法两次阳性分选,可稳定地获得纯度理想并有免疫抑制功能的大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞。     

肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2在调节性T细胞中的表达

目的:观察肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2(TIPE2)在CD4<'+>CD25<'+>调节性T细胞(CD4<'+>CD25<'+>Treg)中的表达.方法:免疫磁珠法分离正常BALB/C小鼠脾脏CD4<'+>CD25<'+>Tregs,流式细胞术鉴定CD4<'+>CD25<'+>Treg的纯度.激光共聚焦荧光法检...