黑色普氏菌对人血红蛋白的利用和结合

目的：观察黑色普氏菌能否利用人血红蛋白作为其铁源并与其结合。方法：将黑色普氏菌接种于含有各种浓度血红蛋白的TSB－联吡啶培养基中，厌氧培养，分光光度计监测细菌生长。采用斑点印迹法观察黑色普氏菌能否与人血红蛋白结合。结果：人血红蛋白能够浓度依赖性地促进黑色普氏菌的生长，黑色普氏菌能够与人血红蛋白结合，其结合强度受pH影响，pH=5时结合能力最强。结论：黑色普氏菌能够有效地利用人血红蛋白作为其铁源并与其结合。     

口腔链球菌对伴放线嗜血菌生长影响的体外实验

目的：研究变异链球菌、血链球菌、远缘链球菌、唾液链球菌对伴放线嗜血菌生长的影响。方法：制备伴放线嗜血菌BHI琼脂板，将4种口腔链球菌菌悬液滴注于其上，兼性厌氧培养48h，观察有无抑菌现象。分别将4种口腔链球菌与伴放线嗜血菌等体积等浓度混合制成双菌种悬液在液体BHI中培养，每隔4h取浮游菌悬液梯度稀释，接种于BHI琼脂板上培养48h，计数伴放线嗜血菌占菌落总数的百分比：扫描电镜观察双菌种生物膜生长情况。结果：琼脂扩散实验显示，变异链球菌、血链球菌、远缘链球菌周围出现抑菌圈，唾液链球菌周围未出现抑菌圈。伴放线嗜血菌所占双菌种混合细菌的比例随时间延长呈下降趋势（p〈0．05）。生物膜观察显示，单菌种伴放线嗜血菌形成生物膜的时间较口腔链球菌时间长；双菌种混合培养时伴放线嗜血菌的量随时间推移而减少。结论：4种口腔链球菌抑制伴放线嗜血菌生长。     

口腔环境因素对血型链球菌和变形链球菌生长的影响：I.粘蛋白的影响

采用连续培养方法，以粘蛋白作为化学限定培养基中的限定性因子，观察血型链球菌（以下简称血链菌）和变形链球菌（以下简称变链菌）Ｉｎｇｂｒｉｔｔ（ｃ）的生长状态。结果显示变链菌不能生长于以粘蛋白作为唯一营养源的培养基中，而血链菌可以生长；两菌混合培养时的生长量均有所提高，表明两菌有协同降解粘蛋白作用。     

口腔环境因素对血型链球菌和变形链球菌生长的影响 Ⅰ．粘蛋白的影响

采用连续培养方法，以粘蛋白作为化学限定培养基中的限定性因子，观察血型链球菌（以下简称血链菌）和变形链球菌（以下称简称变链菌）Ｉｎｇｂｒｉｔｔ（ｃ）的生长状态。结果显示变链菌不能生长于以粘蛋白作为唯一营养源的培养基中，而血链菌可以生长；两菌混合培养时的生长量均有所提高，表明两菌有协同降解粘蛋白作用。     

对氨基苯甲酸对牙龈卟啉单胞菌生长代谢影响的研究

目的 通过对氨基苯甲酸（para-aminobenzoic acid,PABA)对牙龈卟啉单胞菌生长代谢的影响，研究血链球菌在龈下菌斑生态平衡中的作用。方法 在培养基中加入不同浓度的PABA，对牙龈卟啉单胞菌行常规厌氧培养，测定培养后的细菌浓度吸光度（A）值和胰酶样蛋白酶活性，并用扫描电镜观察菌细胞形态。结果 PABA能促进牙龈卟啉单胞菌的生长和胰酶样蛋白酶的活性，当PABA浓度为1mg/L时，其促进作用最强，随着PABA浓度的升高，促进作用降低，当PABA浓度为100mg/L时，无明显的促进作用。PABA还能对菌细胞的形态和粘附产生影响。结论 PABA能影响牙龈卟啉单胞菌的生长代谢，提示血链球菌可能对龈下菌班的微生态平衡具有调节作用。     

对氨基苯甲酸对变形链球菌生长影响的体外实验

目的:探讨不同浓度的对氨基苯甲酸(PABA)对变链菌生长的影响。方法:将变形链球菌ATCC25175(血清c 型)在改良Carlsson培养基中厌氧培养,实验组在其中加入不同浓度(10-10~10-3gPL)的PABA液厌氧培养48 h后采用紫外可见分光光度仪测定细菌浓度OD值(K=550 nm),并在琼脂平板上培养观察细菌生长情况,进行菌落计数。结果:菌液比浊及菌落计数结果均表明PABA确有促进变链菌生长的能力,当PABA的浓度从10-10~10-4gPL增大时,其促进变链菌生长的能力增强,但当PABA浓度增大到10-3gPL,则促进变链菌生长的能力开始下降。当PABA 浓度为10-9~10-3gPL时,实验组的细菌生长明显高于对照组(P<0105)。结论:当PABA的浓度为10-4gPL时,其促进变链菌生长的能力达最强,高于或低于此浓度,这种促生长作用均下降。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究—细胞形态，生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的：建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法．；采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养，通过光镜，透射电镜，生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果：两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显判别，传代培养时牙龄纤维细胞有接触抑制现象，而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长，牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显，生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龄成纤维细胞；碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的判别。结论：体外培养的两种细胞在形态及排列上相似，但百细胞亚型的组成上存在差异。     

乳过氧化物酶系统对血型链球菌和变形链球菌生长的影响

目的：探讨乳过氧化物酶系统在口腔微生态环境中对链球菌族生长和菌种平衡的影响。方法：将血型链球菌３４和变形链球菌Ｉｎｇｂｒｉｔ（ｃ）分为纯培养和混合培养等实验组，用连续培养方法，给予乳过氧化物酶（ＬＰＯ）、硫氰酸盐、Ｈ２Ｏ２，采用活菌计数法检测两菌的生长状态。结果：血型链球菌３４在参入乳过氧化物酶因素的培养液中，其生长量较为平稳，有较强的抵抗力，而变形链球菌的生长量显著下降；混合培养中两菌的生长量均有所提高。结论：两菌的共生可以提高它们对乳过氧化物酶系统的抵抗力；血形链球菌ＬＰＯ系统的高抵抗力与其在早期牙菌斑中占优势是相一致的。     

牙周病优势菌群内毒素脂多糖对人牙龈成纤维细胞生长繁殖的影响

将牙周病优势菌之 LPS 作用于体外培养的 HGF,计数不同时间点细胞浓度的变化,观察 LPS 对HGF 生长曲线、相对增殖率的影响。结果发现 LPS 对 HGF 的生长繁殖具有抑制作用,表现为细胞浓度减小,生长曲线降低变平,相对增殖率下降。抑制作用在HGF对数生长期最明显。抑制能力以 H.act29523和 Y4,F.nec,F.nuc 的 LPS 最强,次为 B.g,B.5,B.m 的 LPS,再次为 C.g,C.o,C.s的 LPS,后者与 E.coli 的 LPS 的抑制能力接近。     

新生牛牙周膜细胞的生物学特性研究

目的：观察新生牛牙周膜细胞的生物学特性,为牙周组织工程研究寻找合适的种子细胞。方法：采用组织块法体外培养新生牛牙周膜细胞,观察其形态特点,取第3代培养细胞测定细胞24h贴壁率、生长曲线和分裂指数。结果：新生牛的牙周膜细胞呈梭形或星形,贴壁率高,生长曲线呈“S”形,分裂相多。原代培养成功率100％。结论：新生牛牙周膜细胞体外原代培养成功率高,细胞生长迅速,分裂较快,可考虑用于牙周组织工程的实验研究。     

The measurement of growth curve and generation time of lactobacillus]

OBJECTIVE:The purpose of this test was to understand the growth pattern of lactobacillus for the research of its cariogenicity. METHODS: The growth quantity of lactobacillus which was culture in a constant condition was measured periodically by spectrophotometry and flora counting,and its growth curve and generation time were measured. RESULTS: It was found that the logarithmic phase of lactobacillus was 6-16 hours after it was cultured.And its generatin time was 54 minutes. CONCLUSIN: The growth curve of lactobacillus was in accordance with streptococcus mutan.     

促矿化液对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的比较大鼠成骨细胞在矿化条件与非矿化条件下增殖和分化的过程,评价促矿化液对其生理功能的影响,明确促矿化液加入细胞培养环境的适宜时间。方法取SD大鼠头盖骨做成骨细胞原代培养,将增殖稳定后的第4代细胞分别在矿化条件和非矿化条件下培养,检测其形态、碱性磷酸酶活性、细胞周期等。结果大鼠成骨细胞增殖基本稳定后促矿化液组与无促矿化液组细胞分裂增殖指数相似,但前者碱性磷酸酶活性明显较高且持久。结论成骨细胞增殖基本稳定后加入促矿化液对细胞增殖无影响,但可明显促进细胞矿化功能,是加入促矿化液诱导细胞矿化功能的较好时机。     

婴幼儿血管瘤细胞系XPTS-1和动物模型的建立

目的 建立婴幼儿血管瘤源性血管内皮细胞系(hemangioma-derived endothelial cell line,HemEC)及其动物模型.方法 采用组织块法进行HemEC体外培养,制作HemEC生长曲线,免疫组化法行Ⅷ因子相关抗原鉴定,流式细胞仪鉴定HemEC的血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor2,VEGFR-2)的表达,分析HemEC染色体核型,采用异体移植的方法将HemEC接种于裸鼠皮下,观察肿瘤的生长情况,进行组织病理学检查.结果 培养的细胞生长活跃,传到第16代时细胞增殖增快,自发永生化,共传代培养70代以上,体外培养时间1年,冻存、复苏多次,细胞仍生长良好,具有HemEC的形态学特征,细胞群体倍增时间约为22 h,Ⅷ因子和VEGFR-2均阳性表达,HemEC的染色体表现为非正常的二倍体特征,染色体数介于二倍体和三倍体之间,将其命名为XPTS-1.该婴幼儿血管瘤动物模型的组织病理学特征与婴幼儿血管瘤的组织病理学特征基本一致.结论 本研究建立的HemEC自发转化、永生化,其形态学特征和生物学特性符合HemEC的特性,既具有一般转化细胞系的饱和密度生长、接触性抑制、停泊依赖性生长等特性,又具有致瘤性等特性,符合婴幼儿血管瘤组织病理学特性,该模型的组织病理学特征与婴幼儿血管瘤的组织病理学特征基本一致.

Abstract：

Objective To establish an immortalized human infancy hemangioma-derived endothelial cell line (HemEC) and animal model of human infancy hemangioma. Methods Hemangioma-derived endothelial cells from specimen of human infancy hemangioma were cultured in vitro and monocloed, and then its growth curve was made, karyomorphism of chromosome analyzed, morphologic characteristics observe,factor Ⅷ related antigen identified by immunohistochemical method. Vascular endothelial growth factor receptor 2(VEGFR-2) was detected by flow cytometry. HemEC were inoculated subcutaneously in athymicmouse to establish animal model of infancy hemangioma. The animal model was observed closely and its pathological characteristic was also studied. Results The cultural cells grew active, and immortalized spontaneously when they were subcultured on sixteenth generation. This cell line was cultivated for more than 70 times within one year and in good condition after freezing and resuscitating once and again, and had the morphologic character of HemEC. The cell population doubling time was 22 h. Factor Ⅷ and VEGFR-2 were expressed positively. Karyo type analysis of the cell line showed abnormal diploid with the modal chromosomal number varying between diploid and triploid. The cell line was then named XPTS-1. The animal model of infancy hemangioma was successfully established and its character of histopathology was similar with that of infancy hemangioma. Conclusions The cell line of HemEC was successfully established and immortalized spontaneously, and had the morphologic and biological character of HemEC. The animal model of infancy hemangioma was successfully established and showed the character of histopathology similar with that of infancy hemangioma.     

牙髓成纤维细胞传代培养与冻存复苏后生长情况比较

目的：比较牙髓成纤维细胞在体外传代培养及冻存复苏后细胞生长情况的差异,探讨其应用价值。方法：采用组织块培养法对牙髓组织标本进行体外成纤维细胞的原代及传代培养,观察成纤维细胞形态及生物学特性,选取第4代处于对数生长期的细胞梯度降温后置入液氮中（196℃）保存3个月,比较经传代培养细胞与复苏后成纤维细胞的生长情况,用MTT法分别绘制细胞生长曲线,比较细胞生长情况。结果：经冻存保存3个月后牙髓细胞复苏率超过80%,而细胞形态未见明显的改变。复苏后细胞生长较对照组慢,进入对数生长期的时间较对照组略长。但两者生长曲线基本一致。结论：牙髓成纤维细胞传代培养与冷冻复苏后形态及生长特性基本相同,冻存的成纤维细胞可以成功的复苏。     

肝细胞生长因子对牙髓细胞增殖的影响

目的　探讨肝细胞生长因子对牙髓细胞生长增殖的影响。方法　以体外培养的牙髓细胞为实验对象,以 不同浓度肝细胞生长因子作用于牙髓细胞,通过二甲基噻唑二苯基四唑溴盐比色法对细胞的增殖情况进行研究, 用流式细胞术对细胞的周期进行分析。结果　1~200μg/L的肝细胞生长因子可明显促进牙髓细胞的增殖 (P<0·05),100μg/L为最大效应浓度。100μg/L的肝细胞生长因子作用牙髓细胞3 d对其细胞周期无显著性影响, 作用5 d缩短了G1期,增加了S期比例。结论　肝细胞生长因子对牙髓细胞的增殖有促进作用。     

维甲酸处理前后外胚间充质细胞中CyclinD1蛋白表达的定量分析

探讨维甲酸对胎鼠面突外胚间充质细胞的作用和ＣｙｃｌｉｎＤ１变化之间的关系。方法：原代培养ＧＤ１２＾１５（妊娠第１２天第１５小时）胎鼠面突的外胚间充质细胞,原代培养细胞后,观察维甲酸处理前后细胞生长曲线的变化,要用免疫组织化学和图像分析仪对维甲酸处理后ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白的表达变化进行定量分析。结果：维甲酸处理后,外胚间充质细胞的生长受到抑制,正常的外胚间充质细胞中,ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达量较高,维     

连续培养猪牙乳头细胞的免疫组化分析

目的探讨连续培养的牙乳头细胞的功能学特征。方法连续培养钟状期猪牙乳头细胞,应用间接法免疫组化检测各代细胞的牙本质涎蛋白（DSP）、核心结合因子1（Cbfa1）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）、骨桥蛋白（OPN）、骨粘蛋白（ON）、骨钙蛋白（OCN）等的表达情况,并以第4代猪骨髓基质细胞及人成纤维细胞作为对照组。结果免疫组化结果可见连续培养的各代猪牙乳头细胞均表达DSP、ColⅠ及ON,所有各代猪牙乳头细胞均未见OCN表达,ColⅢ只在第1代的少量细胞中有表达,Cbfa1及OPN在各代细胞中均有表达。结论体外培养的猪牙乳头细胞具有旺盛的分泌能力,可能具有形成钙化组织的潜能和形成牙本质样结构的可能性。     

层粘连蛋白对体外培养颌下腺细胞影响的研究

目的：研究层粘连蛋白（laminin，LN）对鼠颌下腺细胞（rat submandibular gland cells，RSGCs）生长及分泌功能的影响。方法：取对数生长期的第2代大鼠颌下腺细胞用于实验，按加入不同浓度LN分4组（0、5．0、25．0和50．0mg／L）进行培养，相差显微镜的观察，绘制生长曲线，MTT比色法、自动生化分析仪检测LN对细胞增殖及淀粉酶分泌功能的影响。结果：培养的RSGCs免疫组化鉴定CK8．13、S-100蛋白染色呈阳性，波形丝蛋白染色呈阴性。培养72h后MTT法检测5．0-50．0mg／LLN组细胞吸光度A值与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。培养96h后检测培养液中淀粉酶的含量，各浓度组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：LN能促进RSGCs的黏附和增殖并保持RSGCs的正常分泌功能。     

生长期兔髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞生物学特性的比较研究

目的 建立软骨细胞体外培养模型,研究纤维软骨和透明软骨的生物学差异。 方法 分离4周龄雌性兔双侧髁突软骨和膝关节骨骺软骨,采用胰酶和胶原酶联合消化的方法收集软骨细胞,分别进行体外培养并连续传代至P10。使用倒置显微镜观察细胞形态;采用阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色的方法分别对髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞进行鉴定;用细胞计数的方法绘制生长曲线;运用荧光定量PCR和Western印迹技术对软骨特异性指标Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan进行检测,并使用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。 结果 倒置显微镜观察示,髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞形态均会随细胞传代而发生改变,且P2代以后改变明显;基因和蛋白水平的检测均证实P2代后软骨细胞去分化明显。阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定结果均为阳性,对照组为阴性。实时定量荧光PCR和Western印迹结果证明：在纤维软骨中,Ⅰ型胶原的表达量高于透明软骨;而Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达量却明显低于透明软骨。 结论 使用本方法培养软骨细胞简单有效;髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞体外培养均存在去分化现象,且两者Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达存在显著差异,生物学特性并不相同。