肺癌患者金属蛋白酶组织抑制因子—1基因表达的研究

目的了解金属蛋白酶组织抑制因子-1在肺癌发展过程中的作用。方法术中取19例肺癌患者癌组织及正常肺组织，提取组织总核糖核酸(RNA)，用逆转录共扩增定量多聚酶链反应(PCR)方法测定金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平。结果肺癌组织金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平明显高于正常肺组织(P＜0.01)，肺癌患者金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平与肿瘤大小呈负相关(r=-0.467，P＜0.05)；与肿瘤组织学类型无关。结论金属蛋白酶组织抑制因子-1在阻止肺癌的浸润、转移中可能起重要作用。     

甲基强的松龙预处理对缺血再灌注损伤脊髓中热休克蛋白27表达的影响

目的:观察不同时间预防性应用甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)后脊髓缺血再灌注损伤局部热休克蛋白27(HSP27)表达的变化,探讨MP预防脊髓缺血再灌注损伤的最佳用药时间.方法:75只SD大鼠随机分为A、B、C、D、E组.每组15只.A组仅暴露腹主动脉,而不做其他处理;B、C、D、E组均通过夹闭腹主动脉30min造成脊髓缺血再灌注损伤,C、D、E组分别于损伤前30min、1h、3h尾静脉注射30mg/kg MP,B组于损伤前30min尾静脉注射与MP组等容量的生理盐水.A组于术后3h、其他组于损伤后3h取脊髓标本固定、切片,行HE染色观察脊髓神经元胞体、胞核、核仁的形态,神经元的极性和尼氏体的染色情况;行免疫组化染色检测HSP27表达,用染色阳性物质平均吸光度值A代表相对含量.结果:HE染色显示,A组为正常的神经元表现;B组神经元胞体萎缩,胞核、核仁、尼氏体均显示不清,极性消失;C组胞体萎缩较B组明显减轻,可观察到胞核和核仁,极性存在,尼氏体显示欠均匀;D组胞体萎缩较重,个别神经元内无法分辨胞核、核仁,极性不明显,尼氏体染色不均匀:E组与B组比较无明显差别.A、B、C、D、E组的HSP27染色阳性物质平均吸光度值A分别为63.76±3.02、100.32±4.13、132.05±5.03、121.92±4.68、102.16±5.96,C组、D组HSP27表达均较B组增强(P<0.05),且C组与D组比较有显著性差异(P<0.05),E组和B组比较无显著性差异(P>0.05).结论:缺血再灌注损伤前30min使用MP可最大程度上调HSP27的表达,减轻脊髓缺血再灌注损伤.     

基质金属蛋白酶－9、细胞金属蛋白酶抑制因子－1在胃癌中的表达

目的：探讨基质金属蛋白酶－9（MMP－9）,组织金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）在胃癌中表达的意义。方法：采用免疫组化S－P法对47例胃癌组织进行MMP－9及TIMP－1的检测。结果：MMP－9,TIMP－1主要表达于癌周基质细胞,癌细胞少量表达,MMP－9,TIMP－1表达与胃癌患淋巴结转移（P＜0．01）,浆膜浸润相关（P＜0．01）;TIMP－1的表达与胃癌TNM分期相关（P＜0．05）,而MMP－9的表达与胃癌TNM分期无相关性（P＞0．05）。结论：MMP－9及TIMP－1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物。     

组织金属蛋白酶抑制因子-1在胃癌中的表达

目的 探讨组织金属蛋白酶抑制因子－1在胃癌中表达的意义。方法 采用免疫组化S－P法对47例胃癌组织进行TIMP－1的检测。结果 TIMP－1主要表达于胃癌癌周基质细胞，癌细胞少量表达，TIMP－1的表达强度与胃癌患者淋巴结转移（P＜0．01）、浆膜浸润（P＜0．01）、TNM分期（P＜0．05）均相关。结论 TIMP－1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物。     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的影响

目的　了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP1)基因表达的影响。方法　建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型。模型完成后予不同剂量hALR(每天 5 0、10 μg/kg体重 )治疗。在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ,用逆转录定量聚合酶链反应 (RT PCR)测定TIMP1的基因表达水平。结果　在两种模型中低剂量hALR治疗组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平在治疗过程中的不同阶段与模型组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;高剂量hALR组大鼠肝组织TIMP1的基因表达水平(四氯化碳模型 2 .13± 0 .2 0 ,1.3 6± 0 .13 ;白蛋白模型 3 .0 2± 0 .5 2 ,1.85± 0 .42 )均明显低于模型组(四氯化碳模型 3 .3 1± 0 .2 6,2 .40± 0 .2 3 ;白蛋白模型 4.60± 0 .73 ,3 .61± 0 .62 )。结论　重组人肝再生增强因子可抑制肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子 1的基因表达。     

基质金属蛋白酶-7和组织型金属蛋白酶抑制因子-1在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-7（MMP-7）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在膀胱移行细胞癌中的表达及意义。方法应用免疫组织化学技术检测60例膀胱移行细胞癌[Ⅰ级25例,Ⅱ级15例,Ⅲ级20例;浅表性膀胱癌（T1a-T1）29例,浸润性（T2-T4）31例]和5例正常膀胱组织中MMP-7和TIMP-1的表达情况,X2检验分析其表达与膀胱移行细胞癌分级分期的关系。结果MMP-7和TIMP-1在正常膀胱组织中不表达,而在膀胱移行细胞癌组织表达较强。60例膀胱移行细胞癌标本中MMP-7阳性表达40例（66．7％）。MMP-7的阳性表达率与肿瘤的病理分级显著相关,而与肿瘤的临床分期无明显相关性。60例膀胱移行细胞癌标本中TIMP-1阳性表达32例（53．3％）。TIMP-1在不同的组织分化程度,不同临床分期之间均差异无统计学意义（P〉0．05）。而MMP-7／TIMP-1表达比值与肿瘤的病理分级显著相关。结论MMP-7及MMP-7／TIMP-1比值可反映膀胱移行细胞癌的恶性程度,为膀胱移行细胞癌的预后判断提供一种新的参考指标。     

基质金属蛋白酶9及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1在大鼠外伤性脑水肿中的表达及意义

目的 探讨大鼠脑损伤中基质金属蛋白酶9(MMP9)及组织型基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)的表达变化规律及意义.方法 采用Feeney自由落体法制作大鼠轻度脑损伤模型,采用干湿重法测定脑组织含水量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对大鼠脑损伤模型中MMP9及TIMP1 mRNA进行检测并分析两者比值.结果 实验组脑组织含水量(BWC),MMP9mRNA及TIMP1 mRNA表达量及两者比值均明显高于对照组,P值分别为0.013、0.000、0.000及0.011,差异有统计学意义(P<0.05),MMP9 mRNA与TIMP1mRNA表达量及两者比值与BWC均呈正相关,r值分别为0.654、0.355(P<0.05).结论 MMP9/TIMP1的比例失衡可能在外伤性脑水肿的发生发展过程中起重要作用.     

大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞炎症蛋白-2α基因表达的变化

目的：探讨大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)mRNA表达的变化规律。方法：SD大鼠42只，随机分为7组，采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型，以逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法测定伤段脊髓MCP-1、MIP-1α mRNA表达情况。结果：正常脊髓组织内存在MCP-1、MIP-1α mRNA的表达，脊髓损伤后MCP-1、MIP-1αmRNA表达逐渐增强，MCF-1在伤后24h达到高峰，MIP-1α伤后6h达到高峰。结论：MCP—1、MIP-1α存在于正常的脊髓组织内，脊髓损伤后MCP-1、MIP-1α表达迅速增强，提示参与了继发性脊髓损伤过程，并可能是损伤因素。     

他克莫司对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响

目的探讨脊髓损伤后他克莫司（FK506）对热休克蛋白70表达的影响及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型。雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组（n=12）、损伤组（n=30）和FK506组（n=30）。FK506组伤后5min一次性经尾静脉注射FK506（0．3mg／kg）,假手术组和损伤组以相同方法给予0．9％的生理盐水。术后行脊髓功能评分;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测热休克蛋白70mRNA的表达;免疫组织化学染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和热休克蛋白70的表达;原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡。结果热休克蛋白70mRNA和蛋白的表达在FK506组较损伤组明显增加（P〈0．05）,分别于伤后6、24h达高峰;FK506组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达和神经细胞凋亡均较损伤组明显减少（P〈0．01,P〈0．05）;脊髓功能评分在FK506组显著优于损伤组（P〈0．05）。结论FK506能抑制脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活性,减轻神经细胞凋亡,促进脊髓功能恢复,其机制可能与诱导热休克蛋白70表达增加有关。     

尿液中金属蛋白酶-9与金属蛋白酶-1组织抑制因子的比值变化与非肌层浸润性膀胱癌的复发率的关系

本课题研究了膀胱癌患尿液及膀胱肿瘤组织中金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达，并分析了尿液中MMP-9及其抑制因子-金属蛋白酶-1组织抑制因子(TIMP—1)之间的关系，以揭示这些因素在膀胱癌临床诊断方面的意义。作以134例膀胱肿瘤患(7例为cis，76例Ta期，27例T1期，24例T2-T4期；其中40例为G1级，43例为G2级，44例为G3级)，33     

热激活蛋白70识别蛋白在脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及其意义

目的:探讨热激活蛋白70识别蛋白(heat shock cognate protein 70,HSC70)在兔脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia-reperfusion injury,SCIRI)后表达变化及其意义。方法:随机将36只新西兰白兔分成6组(每组6只),采用Zivin法建立兔SCIRI模型。A组只显露腹主动脉而不阻断血流,30min后关闭腹腔,取材(L3~L5段脊髓);B组阻断腹主动脉血流30min后关闭腹腔,取材;缺血再灌注组(C、D、E、F组)阻断腹主动脉血流30min后停止夹闭,再灌注6、12、24、48h时采用改良Tarlov评分分别进行运动功能评价后取材。应用差异蛋白质组学技术荧光差异双向凝胶电泳联合质谱分析筛选出应激相关蛋白HSC70,利用免疫印迹对质谱进行印证,结合免疫组化研究其在脊髓内的时空变化特点。结果:成功建立SCIRI兔模型,SCIRI后实验动物后肢功能逐渐好转,C~F组改良Tarlov评分分别为1.167±0.753、1.667±0.516、2.668±0.516和2.167±0.752分,再灌注24h达SCIRI早期最好水平,再灌注48h略有下降。应激相关蛋白HSC70在A组印迹清晰,B组印迹轻微加强,C组和D组印迹再次加强,E组印迹显著减弱至最低,F组印迹灰度回归至再灌注6~12h水平。A组灰质中部体积较小中间神经元胞浆见轻度免疫反应;B组灰质各部位神经元胞浆免疫反应程度与A组相当;C组胶质细胞核免疫反应加重;D组神经元免疫反应减轻,但胶质细胞及雪旺细胞核免疫反应较强烈;E组神经元免疫反应进一步减弱,低于A组水平;F组神经元胞浆免疫反应加重,胶质细胞及雪旺细胞核免疫反应仍强烈。结论:HSC70参与SCIRI发生和发展过程,可作为SCIRI预防、诊断和治疗的靶点。     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后质膜钙ATP同工酶2和神经内分泌蛋白7B2表达的影响

目的探讨甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓损伤后质膜钙ATP同工酶2(plasma membrane Ca2+-AT-Pase isoform 2)和神经内分泌蛋白7B2(neuroendrocrine protein 7B2)表达的影响.方法SD大鼠30只.随机分为假手术组、单纯脊髓损伤组(损伤组)、脊髓损伤+大剂量甲基强的松龙治疗组(MP组).应用改良Allen打击法致T8脊髓损伤.MP组大鼠尾静脉内注射大剂量MP(30mg/kg).损伤后24h将损伤平面上下0.5cm的脊髓组织切取,进行RT-PCR反应,检测质膜钙ATP同工酶2和神经内分泌蛋白7B2的基因表达情况.结果在术后24h假手术组质膜钙ATP同工酶2 mRNA表达的相对丰度为0.3232±0.0032,损伤组为0.1518±0.069,MP组为0.5721±0.1325,三组间有显著性差异,MP组大于假手术组(P＜0.05),假手术组大于损伤组(P＜0.01).假手术组神经内分泌蛋白7B2 mRNA表达的相对丰度为1.2289±0.1189,损伤组为0.5843±0.2951,MP组为1.2890±0.2268,MP组和假手术组与损伤组比较差异有显著性(P＜0.01),MP组与假手术组比较差异无显著性(P＞0.05).结论脊髓损伤后,细胞合成质膜钙ATP同工酶2明显降低,邻近损伤处的脊髓组织神经内分泌蛋白7B2的表达降低,大剂量MP能显著促进并逆转质膜钙ATP同工酶2表达的丰度,促进神经内分泌蛋白7B2的表达,发挥细胞保护作用.     

热休克蛋白27在脊髓缺血再灌注的防护作用

热休克蛋白27(heat shock protein,HSP27)属于热休克蛋白家族中的小分子量家族,本文在回顾收集大量相关文献的基础上,分析了HSP27在脊髓缺血再灌注损伤中的表达意义和机制,阐明了HSP27具有抑制NO的生成、维持细胞蛋白稳定和加速细胞损伤修护的功能,同时HSP27还具有抗细胞凋亡、保护线粒体、抑制核转录因子活化等相关作用。进一步表明了热休克蛋白27在脊髓缺血再灌注中的保护作用。     

神经调节素对缺血再灌注损伤大鼠脊髓MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察神经调节素-1β(neuregulin-1β,NRG-1β)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后脊髓组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,并初步探讨其作用与机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组(n=16)、缺血再灌注组(模型组,n=16)、NRG-1β治疗组(n=16),对照组仅分离暴露腹主动脉,其余两组采用腹主动脉阻断法制备动物模型。治疗组在打开动脉夹后立即经尾静脉注射NRG-1β(10μg/kg),缺血再灌注模型组在打开动脉夹后立即经尾静脉注射等量的0.1mol/L的PBS缓冲液。于取材前3min根据改良Tarlov评分标准进行神经功能评分。分别于术后3h、6h、12h、24h取材(每个时间点4只),HE染色观察脊髓病理变化,免疫组化和Real-time PCR分别检测MMP-9、TIMP-1蛋白和m RNA水平的表达。结果:模型组在术后各时间点的Tarlov评分较对照组显著下降(P0.05),治疗组在术后6h、12h、24h的Tarlov评分较模型组显著增高(P0.05)。HE染色显示模型组和治疗组均存在脊髓组织损伤,但治疗组较模型组减轻。免疫组化结果显示,对照组未见MMP-9、TIMP-1阳性表达细胞;模型组MMP-9免疫阳性细胞数(个/高倍视野)在术后3h、6h、12h、24h分别为9.00±1.63、23.80±1.71、28.30±1.50、34.80±2.63,治疗组分别为8.50±0.58、17.80±0.96、20.80±3.50、30.00±2.16,其中6h、12h、24h治疗组与模型组相比阳性细胞数明显减少(P0.05)。模型组TIMP-1免疫阳性细胞数(个/高倍视野)在术后3h、6h、12h、24h分别为11.80±0.96、12.30±1.50、7.80±0.96、7.80±1.50,治疗组分别为12.30±0.96、13.80±0.96、10.50±1.73、10.30±0.96,其中12h、24h治疗组与模型组相比阳性细胞数明显增多(P0.05)。对照组MMP-9在术后3h、6h、12h、24h的m RNA表达量分别为4.93±0.21、4.95±0.24、4.96±0.25、4.98±0.23,模型组分别为5.38±0.25、6.53±0.31、6.87±0.29、7.53±0.33,治疗组分别为5.35±0.26、5.56±0.22、5.74±0.27、5.90±0.31,其中6h、12h、24h模型组与对照组比较MMP-9的m RNA表达量明显增加(P0.05),6h、12h、24h治疗组MMP-9的m RNA表达量较模型组明显减少(P0.05)。对照组TIMP-1在术后3h、6h、12h、24h的m RNA表达量分别为4.74±0.23、4.76±0.21、4.73±0.25、4.76±0.24,模型组分别为4.53±0.32、4.62±0.21、3.83±0.20、3.65±0.32,治疗组分别为4.55±0.26、4.65±0.27、4.28±0.22、4.25±0.24,其中12h、24h模型组与对照组比较TIMP-1的m RNA表达量明显减少(P0.05),12h、24h治疗组TIMP-1的m RNA表达量较模型组明显增加(P0.05)。结论 :神经调节素可在大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中发挥神经保护作用,该作用的实现可能与MMP-9的表达下调和TIMP-1的表达上调有关。     

神经慢性卡压后基质金属蛋白酶及其组织抑制物在神经中的表达

目的 观察大鼠坐骨神经慢性卡压后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂( TIMP-1)在神经中的表达.方法 将90只雄性SD大鼠随机分为对照组和卡压组.根据Mackinnon法建立神经慢性卡压模型,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术检测神经干内MMP-9和TIMP-1的表达.结果 神经慢性卡压2周时神经纤维脱髓鞘;4周时结缔组织增生;12周后神经内纤维分隔进行性增多,神经纤维化.早期,MMP-9和TIMP-1表达增加,MMP-9mRNA在2周达峰值0.0485,TIMP-1 10周达峰值0.1592,MMP-9/TIMP-1明显升高;后期,MMP-9显著降低,TIMP-1继续升高,MMP-9/TIMP-1显著降低.结论 周围神经慢性卡压后神经纤维化,其机制可能与神经中MMP-9/TIMP-1比值早期增高、晚期降低有关.     

红花对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的调节

目的 观察红花对HSC-T6细胞基质分解素-1(MMP3)及其抑制因子基因表达的影响.方法 以不同浓度的红花(1.0、0.5 g/L)作用于培养的肝星状细胞株HSC-T6细胞48 h,收集细胞,提取总RNA;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MMP3及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达水平.结果 MMP3基因表达水平在红花1.0、0.5 g/L两组分别为2.80±0.36、2.52±0.32,而空白对照组为2.13 ±0.30.TIMP-1基因表达水平在红花1.0、0.5 g/L两组分别为1.66±0.23、2.04±0.30,而空白对照组为4.03±0.56.结论 红花可增强HSC-T6细胞MMP3的基因表达,并显著抑制HSC-T6细胞TIMP-1的基因表达,且与剂量有关.     

Neuroprotective effect of neuregulin-1β on spinal cord ischemia reperfusion injury

Objective: This study was designed to see if neuregulin-1β (NRG-1β) plays a protective role in spinal cord ischemia and reperfusion injury (SCII).Design: Animal research.Setting: China.Participants: NA.Interventions: Forty-eight SD rats were randomly divided into control group (n = 16), SCII model group (n = 16) and NRG-1β-treated group (n = 16). In control group, the abdominal aorta was isolated but not clipped. The rats in NRG-1β-treated group were treated with 10μg/kg NRG-1β during developing SCII model.Outcome Measures: Neurological scores were evaluated. At 3, 6, 12 and 24 h after the reperfusion, rats were killed. Pathological changes of spinal cord were assessed with HE staining, and immunohistochemical staining of matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1). MMP-9 and TIMP-1 mRNA levels were assessed using real-time PCR.Results: NRG-1β reduced the damage of SCII in the rats. The expression of MMP-9 protein and mRNA in NRG-1β treatment group was significantly lower than the model group (P < 0.05) at 6 h, 12 h and 24 h after the perfusion. The expression of TIMP-1 protein and mRNA in the treatment group was significantly higher than the model group at 12 h and 24 h after the perfusion.Conclusion: NRG-1β reduced the reperfusion damage in rat model of SCII, in which process MMP-9 and TIMP-1 were probably involved.     

大剂量甲基强的松龙对大鼠损伤脊髓GAP-43 mRNA表达的影响

目的：研究大剂量甲基强的松龙（ＭＰ）对大鼠脊髓损伤后ＧＡＰ－４３ ｍＲＮＡ的表达,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果：术后７ｄ大剂量ＭＰ组ＧＡＰ－４３ ｍＲＮＡ的表达,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果：术后７ｄ大剂量ＭＰ组ＧＡＰ－４３ ｍＲＮＡ蛋白表达比单纯损伤组增加约１倍,大剂量ＭＰ组损伤脊髓高表达ＧＡＰ－４３ ｍＲＮＡ持续到术后４周,单纯损伤组仅持续到术后１周。增加的ＧＡＰ－４３