溴脱氧尿苷免疫细胞化学方法显示鸡内耳毛细胞增殖活动

建立溴脱氧尿苷（ＢｒｄＵ）免疫细胞化学方法显示增殖细胞。按１００ｍｇ／ｋｇ剂量给鸡腹腔注射ＤＮＡ合成的前体物质ＢｒｄＵ，６ｈ后处死动物，取小肠组织制备石蜡切片，通过免疫细胞化学方法，成功地显示了小肠上皮细胞中的Ｓ期增殖细胞。将此法用于观察鸡内耳感觉上皮细胞的生理性再生状态，结果发现鸡前庭感觉上皮中存在着低水平的增殖活动。ＢｒｄＵ免疫细胞化学方法省时，无需特别防护，且定位准确，是显示增殖细胞的理想方     

胎鼠听囊细胞体外培养研究

目的:了解哺乳动物听觉细胞的来源,探索听觉细胞前体细胞体外增殖和分化. 方法:取孕鼠胚胎听囊细胞进行体外培养,用免疫细胞化学方法,分别对培养的细胞进行细胞角蛋白、F-肌动蛋白和calretinin染色观察细胞特征;BrdU染色观察细胞增殖. 结果:培养的细胞在体外进行分化和增殖,细胞形态主要有上皮细胞形态、成纤维细胞形态和神经细胞形态3种. 对细胞角蛋白和F-肌动蛋白这两种上皮细胞的标志染色呈阳性. 在原代培养就出现calretinin染色明显阳性的细胞. 传代后结果仍为阳性着染,但强度减弱. BrdU染色显示培养细胞具有明显的增殖活性. 本研究共传8代,历时4 mo,细胞形态维持稳定. 结论:胎鼠听囊细胞在体外自然培养条件下可以分化或者增殖为未成熟毛细胞. 本研究为探索刺激听觉毛细胞再生的治疗方法提供研究思路和方法.     

Y迷宫训练对成年大鼠海马齿状回细胞的增殖作用

目的观察Y迷宫训练对成年大鼠海马齿状回(dentategyrus,DG)神经干细胞/前体细胞的增殖作用。方法通过Y迷宫训练,用5溴2脱氧尿嘧啶核苷(5bromo2deoxyuridine,BrdU)标记增殖细胞,用ABC免疫细胞化学方法观察成年大鼠海马齿状回细胞的增殖情况。结果Y迷宫训练组海马齿状回BrdU阳性细胞数明显多于对照组(P<0.05),且Y迷宫训练成绩的优劣与海马齿状回神经细胞增殖的多少存在相关性,学习成绩良好组齿状回BrdU阳性细胞数显著多于学习成绩低劣组(P<0.05)。结论Y迷宫训练可促进成年大鼠海马齿状回神经干细胞/前体细胞的增殖。     

人尿路变移上皮种子细胞的体外培养与鉴定

目的对人尿路变移上皮细胞进行原代和传代培养,探讨并建立细胞的培养体系,用于泌尿系统组织工程种子细胞的相关研究。方法采集人。肾脏手术标本的。肾盂、输尿管正常上皮组织利用组织块法,使用添加附加表皮生长因子（EGF）及牛垂体提取物（BPE）成分的角朊细胞无血清培养液（KSFM）进行细胞原代培养,用含EGF及BPE的KSFM进行传代培养。观察培养细胞的形态和增殖情况,经HE染色和免疫细胞化学sP法染色进行鉴定。结果培养制备的人尿路上皮细胞呈现典型的变移上皮细胞形态特征,原代培养9—12d时细胞汇合可达80％。免疫细胞化学染色显示细胞角蛋白（CKAE1/AE3）阳性。分离培养的为单一的人尿路变移上皮细胞,无成纤维细胞混杂。结论采用组织块法分离培养的人尿路变移上皮细胞在添加EGF及BPE的KSFM培养液中可维持良好的生物学特性,并具有一定的增殖传代能力。该培养体系所获得的细胞可用于人泌尿系统的基础研究及组织工程的进一步研究。     

庆大霉素耳中毒后鸡前庭感觉上皮细胞再生的实验研究

为探讨氨基糖甙类药物损伤后，鸡前庭感觉上皮细胞是否与听觉毛细胞一样具有再生能力，按每ｄ６０ｍｇ／ｋｇ剂量给鸡肌注庆大霉素，共１０ｄ。然后，分别于庆大霉素注射结束后第１、７ｄ，经腹腔注射细胞增殖标记物５－溴脱氧尿核苷（５－ｂｒｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ），６ｈ后处死动物，取颞骨制备石蜡切片，应用免疫细胞化学染色技术，观察损伤后前庭感觉上皮中的细胞增殖活动。结果发现：椭圆囊斑、球囊斑及壶腹嵴上均可见标记阳性细胞。从标记细胞核的解剖位置来看，标记支持细胞及标记毛细胞均可见。显示鸟纲动物前庭感觉上皮细胞具有较强的对抗病理损伤的再生修复能力     

尾加压素Ⅱ对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用

目的：研究尾加压素Ⅱ（UⅡ）对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用。方法：采用机械分离和酶消化法获取肾小管上皮细胞进行培养、鉴定;用免疫细胞化学法定位溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入到肾小管上皮细胞DNA内;用MTT和BrdU掺入法观察不同浓度UⅡ（0、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7和10^-6mol•L^-1）对肾小管上皮细胞增殖和DNA合成的影响,以确定其促丝裂作用。结果：培养的细胞经Cytokeratin-18免疫细胞化学染色后,强度不一和不均匀分布的棕黄色颗粒定位于大部分细胞的胞核周围和胞浆内。培养的肾小管上皮细胞经BrdU掺入和免疫细胞化学显色后,细胞核内有棕黄色颗粒沉着。10^-10 mol •L^-1 UⅡ组的MTT值、 BrdU掺入量与对照组（0 mol•L^-1 UⅡ）比较差异无显著性（P>0.05）;10^-9和10^-8mol•L^-1 UⅡ组的MTT值、BrdU掺入量高于对照组（P<0.01或P<0.05）;与对照组比较,10^-7和10^-6 mol•L^-1 UⅡ组的MTT值明显增加（P<0.05）,但增加的幅度较10^-9 和10^-8mol•L^-1 UⅡ组低,而BrdU掺入量无明显改变。结论：UⅡ对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞具有促丝裂作用。     

bFGF对新生大鼠内耳听觉细胞的增殖和分化的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的听觉感觉上皮细胞增殖和分化的影响?方法:取新生大鼠听觉上皮细胞进行体外培养,用BrdU和calretinin染色,以观察bFGF对细胞增殖和分化的影响?结果:①100?200 ng/ml bFGF组中的BrdU阳性着染的细胞分别占所观察细胞的36%和35%,与对照组相比有显著差异;而1?10 ng/ml bFGF组中的有丝分裂活动很微弱,分别为3%和7%?②100?200 ng/ml bFGF二组中calretinin阳性着染的细胞数量分别占所观察的细胞总数的7%和7.6%,1?10 ng/ml bFGF组中,calretinin阳性着染的细胞数量分别为0.5%和1.6%?结论:耳蜗上皮细胞的增殖活动和向毛细胞方向的分化受生长因子的调控,bFGF有较强的促增殖和促早期分化的作用?     

CDK抑制剂olomoucine对星形胶质细胞增殖活化的影响

目的 观察体外培养的星形胶质细胞(astrocyte，AS)对物理损伤的反应，探讨细胞周期调控对AS活化及增殖的影响。方法 建立体外培养大鼠纯化的AS机械损伤模型，利用免疫细胞化学方法观察损伤区的细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)的动态变化；以及周期素依赖的蛋白激酶(CDK)选择性抑制剂olomoucine干预后PCNA、BrdU表达的变化。结果 物理损伤后24h，损伤边缘区AS明显活化，细胞数目增加、胞体肥大，且交织成网状；PCNA表达增强，BrdU阳性细胞比率增加，大量AS进入增殖期。特异性细胞周期抑制剂olomoucine干预后，AS的PCNA表达增强被抑制，胞体肥大程度减轻，BrdU阳性细胞比率减少。结论 损伤刺激可促使胶质细胞细胞周期(cell cycle)启动、反心性增殖活化：olomoucine可以通过抑制CDK调控反应性AS的肥大、增殖。     

胚胎大鼠脑内神经干细胞增殖和分化特性的初步探讨

目的 观察胎鼠发育过程中脑内神经干细胞增殖、迁移和分化特点。方法 在妊娠8～10d、12～13d和15～16d的孕鼠，分别于腹膜腔内注射BrdU，妊娠17d时取其胎鼠脑组织制备切片，免疫细胞化学方法观察BrdU标记的增殖细胞密度和分布；取E13d、E15d和E17d胎鼠皮质，分离获得神经细胞并制备成滴片，免疫细胞化学方法抗nestin和抗NeuN染色，观察不同胚期胎鼠皮质神经干细胞和神经元细胞比例。结果 E8～10d时BrdU标记的细胞主要分布于脑室周围和顶叶皮质；E12～13d时BrdU标记的细胞主要分布于脑室周围、基底节区和顶叶皮质；E15～16d时BrdU标记的细胞主要分布于丘脑和颞叶皮质。E13d、E15d和E17d胎鼠皮质nestin免疫反应阳性细胞比例随胚龄增加而逐渐减少（分别为66．4％、32．1％和3．4％），NeuN免疫反应阳性细胞比例逐渐增加（分别为17．2％、35．6％和92．3％）。结论 胎鼠发育过程中脑内神经干细胞增殖并按一定模式顺序迁移至各脑区，至出生前皮质神经细胞已基本分化成熟。     

表皮细胞悬液与胶原海绵联合移植的研究

目的 用皮下植入方法研究表皮细胞悬液与胶原海绵联合移植的形态学变化,评价胶原海绵的生物相容性。方法 以昆明小鼠为动物模型,实验组移植胶原海绵及表皮细胞悬液(以BrdU标记表皮细胞),对照组单纯移植胶原海绵,于术后3、7、10、16、30天取材进行组织学、免疫细胞化学检测。结果 实验组各时段均可见生长活跃、增殖旺盛的表皮细胞;BrdU染色阳性。与对照组相比,胶原海绵降解吸收快。结论 胶原海绵具有良好的细胞相容性和组织相容性,可作为皮肤组织工程理想的载体材料。     

人类神经前体细胞大鼠胎脑内移植研究

目的探讨人类神经前体细胞大鼠胎脑侧脑室内移植后的移行和分布。方法采用机械方法从胎脑中分离神经细胞,应用N2培养基进行培养,细胞用携带LacZ基因的腺病毒或BrdU标记,移植到孕期为16~18d的胎鼠侧脑室内,检查出生后不同时期脑组织中移植细胞的分布和移行。结果成功培养出人类的神经干细胞,细胞聚集形成神经球,呈悬浮状态,大部分细胞表达神经前体细胞的标志物巢蛋白,这种细胞能够分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。神经干细胞在体内和体外可以稳定表达外源性基因,移植到胎鼠脑内,人类胚胎神经前体细胞广泛移行并分布于宿主的脑组织中,结合到大鼠的前脑、中脑和后脑,形成广泛的嵌合现象。结论神经干细胞可以稳定表达外源性基因,移植到发育期的脑内,能够整合到脑组织中,形成广泛的嵌合现象。     

双重染色显示Cajal细胞和NOS神经在胎儿小肠肌间神经丛的分布

目的研究Cajal细胞与NOS神经在胎儿小肠肌间神经丛的分布模式.方法采用18～26周龄胎儿小肠全层铺片和冰冻切片的NADPH-黄递酶(NADPH-d)组织化学法和c-kit免疫细胞化学双重染色.结果胎儿肌间神经丛周围Cajal细胞体为梭形或卵圆形,核周胞质较少,常见2～3个细长的突起,彼此间形成完整的独立细胞网络.NOS阳性神经广泛分布于小肠的肌间神经丛和环肌内,其中,以肌间神经丛最为丰富,构成神经节、节间束及三级神经纤维网的主要神经成分.肌间神经节内的NOS阳性神经元轮廓较清晰,多数为DogielⅠ型神经元,成簇密集分布,每个神经节内含有数个至数10个NOS阳性神经元.NADPH-d和c-kit免疫细胞化学双重染色未发现NOS阳性神经和Cajal细胞有共存现象,但NOS阳性神经纤维的走行与Cajal细胞及突起间的距离较近.结论本研究结果提示在胚胎发育中晚期,肌间神经丛的抑制性神经递质NO可能已具备对Cajal细胞及胃肠平滑肌调控的结构基础.     

溴脱氧尿嘧啶核苷掺入标记口腔肿瘤的研究

目的 :观察和探讨非放射性核素 溴脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)标记在口腔肿瘤增殖研究中的价值。方法 :用 80 μg/ml的BrdU体外掺入舌癌细胞或舌癌组织 ,标本连续切片与增殖细胞核抗原 (PCNA)表达比较 ;相同孵育时间的细胞与流式细胞术 (FCM)定量S期细胞数比较。结果 :BrdU标记细胞核大浑圆 ,呈散在或姊妹细胞分布 ,子代细胞染色稍淡。BrdU掺入和PCNA表达之间无显著性差异 (P >0 0 5 )。FCM测定的S期细胞数显著多于BrdU掺入的细胞数 (P <0 0 0 1)。结论 :BrdU标记可用于口腔肿瘤细胞增殖研究 ,其应用潜力较大。     

大鼠胚胎大脑皮层源性神经干细胞体外培养及增殖分化特点

目的 建立大鼠胚脑皮层神经干细胞体外培养及鉴定技术,探讨其增殖分化特性,为应用神经干细胞移植治疗神经疾病提供基础。方法 采用含有丝分裂源表皮生长因子(EGF)的无血清培养基培养SD大鼠孕14．5d的胚胎大脑皮层神经干细胞,应用免疫细胞化学方法了解其增殖分化特性;以单细胞克隆实验及BrdU免疫标记证实神经干细胞自我增殖能力。结果 培养细胞在EGF作用下可分裂增殖,并表达神经干细胞特异性抗原nestin,分化细胞MAP2及GFAP抗原表达阳性。结论 SD大鼠胚脑皮层可分离培养出神经干细胞;并具有增殖、自我更新能力和多向分化潜能特性。     

胰岛素样生长因子-1对神经干细胞增殖分化的影响

目的 寻找影响神经元和胶质细胞分化的外在因素，探素胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法 从E14的SD大鼠大脑中分离神经干细胞，分别用IGF-1、EGF和bFGF处理，台盼蓝染色确定活细胞数量，BrdU标记并分析细胞增殖能力，免疫细胞化学法鉴定神经干细胞、新生细胞和分化细胞。结果 分离得到的细胞表现出NSCs特性，用IGF-1、EGF和bFGF处理后均显示增殖效应，并能分化为神经元和胶质细胞样细胞。结论 IGF-1能促进NSCs增殖，并诱导其向神经元样和胶质细胞样细胞分化。     

BrdU标记在大鼠生精细胞体外培养中的应用

目的探讨应用5-溴-2-脱氧尿苷（5-bromo-2-deoxy-uridine，Brdu）标记检测大鼠生精细胞体外的分化、发育情况。方法采用BtdU体内标记生精细胞的DNA，免疫细胞化学法跟踪观察大鼠生精细胞在体外培养中的分化、发育情况。结果培养前在体内标记BrdU的细胞为初级精母细胞。经培养后在BrdU标记的细胞中出现早期精子细胞。结论大鼠生精细胞体外培养过程中，应用BrdU标记能检测生精细胞的分化、发育情况。     

人胎小肠肥大细胞与肽能神经的分布和发育研究

目的研究人胎小肠壁P物质（SP）和降钙素基因相关肽（CGRP）-免疫反应性（IR）肽能神经的分布和发育规律,探讨小肠壁内肥大细胞（MC）与SP、CGRP-IR肽能神经的关系。方法取人胎小肠分别进行甲苯胺蓝（TB）和免疫组织化学染色。结果第14周开始,胎儿小肠壁黏膜下层、肌层间结缔组织中偶见SP能、CGRP能神经纤维及神经元,免疫反应渐强,神经元从浅棕色到深棕色,神经纤维呈串珠状或点线状;从小肠壁TB特殊染色MC和SP、CGRP免疫组织化学相邻切片上看,部分MC内存在SP、CGRP免疫反应阳性物质。结论人胎小肠壁黏膜下和肌间神经丛存在SP-IR、CGRP—IR肽能神经元和神经纤维;某些MC共存有SP—IR、CGRP-IR肽能活性物质。     

脑梗死后自体神经干细胞原位增殖与分化的实验研究

目的研究成年大鼠脑梗死后自体神经干细胞的原位增殖和分化。方法雄性Wistar大鼠共112只,分对照组(12只)、脑梗死后1d组(20只)、脑梗死后3d组(20只)、脑梗死后7d组(20只)、脑梗死后14d组(20只)、脑梗死后28d组(20只)。大鼠于不同的时间处死,并取出大脑,处死前均注射5-溴胱氧腺苷嘧啶(BrdU)。用免疫组织化学方法动态检测BrdU、Musashil、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核性蛋白(NeuN)的表达。BrdU、Musashil确定神经干细胞的增殖,GFAP、NeuN确定神经干细胞的分化。结果与对照组相比,大鼠海马BrdU^ 细胞和BrdU^ ／Musashil^ 细胞数在脑梗死后1d组开始增加,7d组达到高峰,28d组接近正常水平;BrdU^ ／GFAP^ 细胞数无明显变化;BrdU^ ／NeuN^ 细胞数在脑梗死后14d组开始增加,28d组最多。结论大鼠脑梗死激活自体神经干细胞原位增殖,并且大多数增殖的神经干细胞分化成神经元。     

豚鼠小肠EC细胞的免疫细胞化学和银染法的比较研究

本实验利用同一切片标本，在光镜水平上，对豚鼠小肠ＥＣ细胞进行了免疫细胞化学和不同银染法的比较研究。实验结果显示，全部Ｍａｓｓｏｎ－Ｆｏｎｔａｎａ亲银染色阳性细胞均呈ＰＡＰ染色阳性；另一方面，小部分（１５％）Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ嗜银染色阳性细胞却表现为亲银染色和ＰＡＰ染色双阴性。以上结果表明，在显示ＥＣ细胞上，亲银染色具有很高的特异性，因此仍不失为一种经济和实用的方法；嗜银染色显示ＥＣ细胞，尽管其敏感性稍高于亲银染色法，但不具有免疫细胞化学与亲银染色技术那样明显的特异性。     

A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections

1　Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　　ＩｔｉｓｋｎｏｗｎｂｙａｌｌｔｈａｔｐｕｒｉｆｉｅｄｓａｍｐｌｅＤＮＡｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏｃａｒｒｙｏｕｔｔｈｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｂｅｃａｕｓｅｏｆｉｔｓｈｉｇｈｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ .ＩｎｔｉｓｓｕｅｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙＨｏｄｇｋｉｎｓｄｉｓｅａｓｅ ,ｔｈｅｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｅｌｅｍｅｎｔｓ ,Ｈ/Ｒ Ｓｃｅｌｌｓ (ｕｓｕａｌｌｙｌｅｓｓｔｈａｎ 1% )ａｍｉｄｓｔａｍａｊｏｒｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ,ｐｌａ…