缺失抑制bcr-abl所致白血病细胞中Stat-5α磷酸化

 目的　研究经bcr-abl诱导形成的白血病细胞中β-catenin缺失对Stat-5α蛋白磷酸化水平的影响。方法　利用已经建立的特异性骨髓造血系统β-catenin基因敲除小鼠,分离其骨髓细胞,应用逆病毒感染方法将外源性bcr-abl基因片段导入β-catenin缺失的骨髓细胞内,免疫荧光和Western blotting方法检测Stat-5α蛋白磷酸化水平,应用real-time PCR及Western blotting分别检测β-catenin缺失细胞及对照细胞bcr-abl转录及蛋白表达。结果　与对照组相比,β-catenin缺失的白血病细胞Stat-5α磷酸化水平明显降低,而Stat-5α总蛋白量变化不明显;Western blotting结果显示β-catenin缺失的慢性髓细胞白血病（CML）细胞中酪氨酸磷酸化总水平及bcr-abl蛋白表达明显降低,而β-catenin缺失的急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞中酪氨酸磷酸化总水平及bcr-abl蛋白表达无明显改变。结论　bcr-abl诱导形成的白血病转化细胞中,β-catenin缺失抑制bcr-abl蛋白表达及Stat-5α磷酸化。     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

RNAi介导PEG10基因沉默对肝癌HepG2细胞Wnt/β-catenin信号通路及增殖的影响

目的 探讨PEG10基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响在人肝癌发病机制中的作用,为肝癌的基因治疗提供新思路.方法 应用脂质体转染技术将靶向PEG10的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染HepG2细胞,利用半定量RT-PCR分别检测PEG10、β-catenin和Wnt1基因...     

Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇抗急性T淋巴细胞白血病中的作用机制研究

目的:通过细胞水平和动物模型探讨Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇体内外抗急性T淋巴细胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL）中的作用及其可能机制。方法:细胞实验（人淋巴细胞白血病Molt-4和Jurkat细胞）分为空白对照组（Control组）、二甲基亚砜组（DMSO组）和白藜芦醇处理组（Res组）,动物实验分为正常对照组（Control组）、T-ALL模型组（T-ALL组）和白藜芦醇处理组（Res组）。采用CCK-8法检测白藜芦醇对Molt-4和Jurkat细胞增殖能力的影响,选取适合的给药浓度进行后续实验;尾静脉注射ICN1-GFP+ T-ALL细胞建立T-ALL小鼠模型;采用流式细胞术检测小鼠外周血中ICN1-GFP+ T-ALL细胞百分比,监测T-ALL小鼠造模后的一般情况;应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）分别检测细胞和小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA的表达水平;应用蛋白免疫印迹法（Western Blot法）分别检测细胞和小鼠脾脏组织中β-catenin、TCF-1、LEF-1、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表达水平。结果:白藜芦醇明显抑制Molt-4和Jurkat细胞增殖能力（P＜0.01）,抑制作用随白藜芦醇浓度增加逐渐增强（P＜0.01）;经白藜芦醇处理后,Molt-4和Jurkat细胞中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）,β-catenin、TCF-1、LEF-1及其靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平均显著降低（P＜0.05）;T-ALL小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）,β-catenin、TCF-1、LEF-1及靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平显著升高（P＜0.01）;经白藜芦醇处理后,小鼠外周血中GFP+白血病细胞比例明显下降（P＜0.01）,c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）,各蛋白表达水平明显下调（P＜0.01）。结论:在T-ALL细胞株和动物模型中,白藜芦醇可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF-1和LEF-1的表达进而抑制靶蛋白c-Myc和Cyclin D1水平,发挥抗急性T淋巴细胞白血病作用。     

PKF118-310对白血病K562细胞凋亡的影响及其机制

目的：探讨小分子化合物PKF118-310对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度PKF118-310处理K562细胞,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测其对细胞增殖的抑制;免疫荧光法观察细胞核β-catenin／TCF转录复合物的形成;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、caspase-8、XIAP、bcl-2、β-catenin、TCF、C-myc及cyclin D1的表达。结果PKF118-310能够抑制K562细胞生长,其对K562细胞在24、48、72 h的半数抑制浓度（IC50）值分别为5.388、3.290、1.566μmol ／L。细胞核内形成β-catenin／TCF转录复合物。分别用1.6、3.2μmol／L的PKF118-310作用于K562细胞48 h后,经Annexin V-FITC／碘化丙啶（PI）双标检测细胞凋亡率分别为（48.0±0.9）%、（80.2±1.2）%,均高于对照组的（1.2±0.6）%（均P＜0.05）。不同浓度PKF118-310处理K562细胞72 h后,caspase-3及caspase-8蛋白表达均高于对照组（均P＜0.05）,而XIAP、bcl-2、β-catenin、TCF、c-myc及cyclin D1蛋白表达均低于对照组（均P＜0.05）。结论PKF118-310可抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡。     

LINC01140 通过 miR-452-5p/Wnt/β -catenin 轴调控食管鳞状细胞癌 Eca109细胞的增殖与侵袭

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01140在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组 织及细胞中的表达及其对Eca109细胞增殖与侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2012年3月至2015年5月河北医科大学第 四医院收治的 133 例 ESCC 患者的临床资料和 GEPIA 数据库中收集的 182 例 ESCC 组织及 286 例食管正常黏膜组织的 LINC01140表达数据,以及 ESCC 细胞系 Kyse150、Eca109 和 TE13。用 qPCR 法检测癌组织和细胞中LINC01140的表达水平, 分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。分别将pcDNA3.1-LINC01140、阴性对照（pcDNA3.1-NC）或 miR-452-5p mimic及阴性对照（miR-NC）转染到Eca109细胞,MTS、Transwell实验分别检测细胞的增殖与侵袭能力。用双荧光报告基因实验 及 TOP/FOP 报告基因系统检测 LINC01140 与 miR-452-5p 的靶向结合作用及 LINC01140 对 Wnt/β-catenin 通路活化水平的影 响。结果：LINC01140在ESCC组织和细胞中表达均显著下调（均P<0.01）,LINC01140 低表达与 ESCC 患者年龄、淋巴结 转移、TNM分期及OS密切相关（均P<0.05）。LINC01140过表达明显抑制 Eca109 细胞的增殖及侵袭能力（均P<0.01）。机制 研究表明,LINC01140可能通过竞争结合miR-452-5p影响Wnt/β-catenin信号通路的活化水平继而调控Eca109细胞的恶性生物学 行为。结论：LINC01140通过靶向miR-452-5p/Wnt/β-catenin轴促进ESCC细胞的增殖与侵袭能力,其有望成为ESCC患者靶向 治疗的潜在靶点及预后评估的标志物。