不同全自动酶免分析系统性能对比研究

目的比较中国烟台艾德康公司Elisa800型全自动酶免分析系统(简称Elisa800分析仪)和瑞士帝肯公司Freedom Evolyzer型全自动酶免分析系统(简称Freedom Evolyzer分析仪)在的基本使用性能。方法采用Elisa800分析仪、Freedom Evolyzer分析仪,以及相同的试剂盒,对相同的标本进行抗甲型肝炎病毒抗体、抗丙型肝炎病毒抗体、抗丁型肝炎病毒抗体、抗戊型肝炎病毒抗体、乙型肝炎病毒前S1抗原、乙型肝炎病毒前S2抗原检测。比较两台分析仪标本检测前处理操作步骤及操作时间,以及标本检测结果。结果两台分析仪检测结果完全一致,阳性符合率为100%。当标本量大于91份时,Freedom Evolyzer分析仪检测耗时约为Elisa800分析仪检测耗时的2倍。与Freedom Evolyzer分析仪相比,Elisa800分析仪标本前处理操作步骤由24步缩减为3步,处理操作时间由11min缩减至1min。结论 Elisa800分析仪与Freedom Evolyzer分析仪检测结果一致,但Elisa800分析仪检测耗时更短,操作更简便。     

全自动酶免分析系统定量检测ALT的应用

手工赖氏试管法定量 AL T,首先要定期制定标准曲线 ,然后按标准曲线进行计算 ,手工计算时要减去空白管 ,费工费时。因此 ,我们利用全自动酶免分析系统 ,采用现有 Au S.L ab2 .0软件读板 ,建立了微板赖氏定量方法 ,以不同量的丙酮酸为标准 ,每次试验仪器均可自动建立标准曲线 ,然后仪器自动给出各样品的卡门单位 ,现报告如下。1　对象和方法1.1　对象　郑州市无偿献血者。1.2　试剂及厂家　 AL T赖氏法试剂盒 (上海生物制品研究所 ) ;96微孔平底板 (丹麦 Nunc公司 )。1.3　仪器及厂家　RSP2 0 0全自动加样器 (瑞士 Tecan集团 ) ;BEP (…     

全自动酶免分析系统的应用分析

目的评价全自动酶免检测与手工检测的效果,探索全自动酶免检测中所遇问题的解决办法。方法利用HBsAg质控血清0．5、1ng／ml和抗-HCV质控血清1NCU／ml进行两种检测方法的孔间、板间精密度分析;采用HBsAg血清盘进行两种检测方法的特异性、灵敏度分析;采用加样间只用水冲针2次和加样间洗液冲针后再用水冲洗针内外壁的办法,探索消除携带污染问题的解决方法。结果全自动酶免检测的孔间、板间精密度均高于手工检测,二者检测的特异性、灵敏度均佳;但使用永久性加样针的样本处理器存在携带污染,可通过洗液冲洗后加水冲洗针内外壁或进一步调整冲洗液量、强度、次数来解决,同时对样本的稀释效应不应忽视。结论ELISA全自动酶免检测分析提高了血液检测的精密度水平,可确保血液检测质量和安全。     

新购全自动酶免分析系统使用前的确认

目的对本实验室新购进的一套全自动酶免分析系统进行正式启用前的确认,以判定其是否能满足预期的使用要求。方法对新进仪器进行安装、运行及性能确认,进行人员培训,仪器校准合格,最后形成确认报告。结果新进全自动酶免分析系统从人、机、料、法、环5个方面进行确认后,能够满足实验要求。结论全自动酶免分析系统经确认能满足实验室预期的使用要求,可正式投入使用。     

全自动酶免分析系统工作流程的优化

近几年实验室酶免自动化检测得到了快速的发展,各种新型的全自动仪器不断地推出。本中心于2003年引进了全自动酶免系统(FAME)。为了保证实验结果的准确性,我们通过几年的工作实践,总结了以下几个要点(以北京万泰试剂为例),供同行参考。1全自动酶免系统进板时差对加样时差的优化     

TECAN RMP150全自动酶免分析仪性能评价

目的对TECANRMP150全自动酶免分析仪的性能进行评价。方法参考NCCLSEP5文件及有关文献,分别用零点漂移、不精密度、线性、交叉污染、加样精度、洗板残液量、准确度等试验对仪器的加样系统、洗板系统和比色系统进行评价。结果TECANRMP150全自动酶免分析仪零点漂移为±0.001;不精密度高、中、低值样本CV值分别为Swr:1.82%、2.34%、3.60%,Srr:1.26%、0.77%、3.20%,Sdd:1.20%、0.26%、2.27%,ST:1.80%、1.69%、4.26%;线性实验Y=0.0007 0.1131X,r=0.9999;交叉污染率为0.65%;加样精度变异系数为0.30%,洗板残液量平均每孔为0.0125~0.0625μl。结论TECANRMP150全自动酶免分析仪加样系统、洗板系统、比色系统性能可靠、操作简单,能够满足检验科ELISA实验全程自动化的需要。     

全自动酶免分析系统Microlab STAR IVD ELISA的校准

为确保全自动酶免分析系统Microlab(STAR IVDELISA安全、高效、无故障运行,确保检测质量,确保输血安全,我们对其作系统校验,现报告如下。1材料与方法1.1材料全自动酶免分析系统Microlab(STAR IVDELISA(HAMILTON公司);AG285型电子分析天平(梅特勒-托利多公司);10μl注射器(HAMILTON公司);专用仪器校准A、B液(FLUKA公司);酶标分析仪测试标准板(北京市计量检测科学研究院);温度校验板(HAMILTON公司)。1.2环境条件室温21℃,湿度45%,室内空气污染指数<Ⅱ级。1.3校准方法1)酶标仪:用ADAP程序控制酶标仪,取波长405、450…     

全自动酶免分析系统的期间核查管理

目的探讨期间核查管理在全自动酶免分析系统中的应用。方法在酶免分析系统的2次校准或检定时间间隔中期,采取多种核查方案对分析系统的性能进行核查,确认其是否满足检测性能要求。结果留样再测和2台或多台设备间的比对结果测量均值<±10%、批间变异<20%为核查通过,实验室间比对和利用血清盘再测结果与目标结果相符。结论有效的期间核查管理对于预防和发现不合格测量设备的误用具有重要的意义。     

全自动酶免系统在血站微量赖氏法检测ALT中的应用

全自动酶免系统在血站血液检测中的应用日益广泛，为解决ALT检测的自动化，各血站作了不少探索，如速率法、微量赖氏法、氧化酶法，但结果均不稳定。笔者应用全自动酶免处理系统，建立了一套结果稳定的ALT检测方法。     

TECAN RMP 150型全自动酶免仪应用评价

目的 评价TECAN RMP 150全自动酶免疫仪的性能及使用两年后加样系统的稳定性.方法 用称量法测定加样误差和洗板残液量;用甲基橙对比色系统进行零点飘移、通道差、精密度、线性等测定;用高浓度的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)了解仪器的交叉污染情况;35份临床标本经该仪器和Abbott AXSYM仪测定乙肝五项指标,测定结果进行比较.结果 经实验该仪器的各项指标均符合设计要求,两仪器对照试验乙肝五项的符合率为96.75%.结论 该仪器使用两年后性能仍稳定,能满足临床实验室工作需要.     

TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎血清学标志物的特异性评价

目的对TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）的特异性进行评价。方法参考美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP12-A、EP7-A及有关文献,分别通过加样针的携带污染、加样和加酶间隔时间、溶血干扰等试验对仪器的RSP150/8前处理系统和BEPⅢ后处理系统检测HBsAg、抗-HBs的特异性进行评价。结果标本HBsAg〉8 000 S/CO时,加样针仍未出现携带污染,而标本抗-HBs〉1 000 mIU/mL时加样针出现携带污染现象。已加样HBsAg、抗-HBs阴性及弱阳性标本的反应板室温放置30min内加酶以及标本中加入血红蛋白（浓度≤8 g/L）,未出现假阳性结果。结论高浓度的抗-HBs对加样容易产生携带污染。血红蛋白对HBsAg、抗-HBs试验的干扰并不明显。HBsAg、抗-HBs酶标板在室温放置30 min内加酶对检测结果影响不大。     

TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎血清学标志物的特异性评价

目的对TECAN全自动酶免分析系统检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)的特异性进行评价。方法参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP12-A、EP7-A及有关文献,分别通过加样针的携带污染、加样和加酶间隔时间、溶血干扰等试验对仪器的RSP150/8前处理系统和BEPⅢ后处理系统检测HBsAg、抗-HBs的特异性进行评价。结果标本HBsAg>8 000 S/CO时,加样针仍未出现携带污染,而标本抗-HBs>1 000 m IU/mL时加样针出现携带污染现象。已加样HBsAg、抗-HBs阴性及弱阳性标本的反应板室温放置30 min内加酶以及标本中加入血红蛋白(浓度≤8 g/L),未出现假阳性结果。结论高浓度的抗-HBs对加样容易产生携带污染。血红蛋白对HBsAg、抗-HBs试验的干扰并不明显。HBsAg、抗-HBs酶标板在室温放置30 min内加酶对检测结果影响不大。     

酶增强免疫分析法与微粒子酶联免疫吸附法检测他克莫司药物浓度的结果对比研究

目的对酶增强免疫分析法（EMIT）与微粒子酶联免疫吸附法（MEIA）进行比对实验,评估SYVAViva-E临床化学分析仪（简称SYVA Viva-E）和Abbott IMX分析仪（简称Abbott IMX）2种检测系统测定他克莫司（FK506）药物浓度的一致性。方法将Tac/Csa CONTROL质控品分别用SYVA Viva-E（EMIT）和Abbott IMX（MEIA）进行批内、批间精密度测定。FK506的靶值（检测范围）：A1水平为4.3（2.1～6.5）ng/mL、A2水平为8.9（5.3～12.5）ng/mL、A3水平为18.0（14.0～22.0）ng/mL。将158份临床患者样本分为极低浓度（0.1～〈2.0 ng/mL）、低浓度（2.0～〈8.0 ng/mL）、中浓度（8.0～〈14.0 ng/mL）、高浓度（14.0～〈20.0 ng/mL）和极高浓度（20.0～24.0 ng/mL）5个组,用SYVA Viva-E和Abbott IMX平行测定FK506浓度,观察2种检测系统测定临床样本的相关性。结果当FK506浓度处于A1水平时,SYVA Viva-E的批内、批间精密度及检测结果均值均高于Abbott IMX（P〈0.05）;处于A2、A3水平时,2种检测系统批内、批间精密度及检测结果均值相近,差异无统计学意义（P〉0.05）。Abbott IMX的检测精密度优于SYVA Viva-E。当临床样本浓度〈8.0 ng/mL时,SYVAViva-E检测结果的均值比Abbott IMX约高1.0 ng/mL,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与测定质控品的结果一致;当样本浓度≥8.0 ng/mL时,SYVA Viva-E检测结果的均值与Abbott IMX相近,二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。2种检测系统测定临床样本的总体相关性较好（r=0.977）,但SYVA Viva-E检测结果均略高于Abbott IMX。结论应用EMIT检测FK506时,其检测结果略高于MEIA,尤其在低浓度范围更加明显。2种检测系统在检测FK506浓度时可能存在系统偏差。     

Novel and sensitive noncompetitive enzyme immunoassay (hetero-two-site enzyme immunoassay) for alpha-human atrial natriuretic peptide in plasma.

A novel and sensitive noncompetitive enzyme immunoassay (hetero-two-site enzyme immunoassay) for alpha-human atrial natriuretic peptide (alpha-hANP) in plasma, which uses only one monoclonal IgG for the ring structure of alpha-hANP, is described. Plasma was filtered through polysaccharide membrane to separate peptides from proteins. The plasma filtrate was incubated with N-hydroxysuccinimidobiotin to biotinylate alpha-hANP and subsequently with a polystyrene ball coated with monoclonal IgG for the ring structure of alpha-hANP to trap biotinylated alpha-hANP. The polystyrene ball was washed to eliminate unreacted N-hydroxysuccinimidobiotin and other biotinylated substances, and biotinylated alpha-hANP was eluted from the polystyrene ball with HCl. The eluate was neutralized and incubated with horseradish peroxidase-labeled antibody IgG for the ring structure of alpha-hANP and subsequently with two streptavidin-coated polystyrene balls. Peroxidase activity bound to the streptavidin-coated polystyrene balls was assayed by fluorometry. The detection limit of alpha-hANP was 20 amol, and the assay range of plasma alpha-hANP was 0.8-1,200 ng/L using 100 microliters of plasma filtrates corresponding to 75 microliters of plasma. Plasma levels of hANP in healthy subjects were 9.8-21.5 ng/L. These values were significantly lower than those measured by a two-site enzyme immunoassay probably due to the presence of alpha-hANPs lacking some N-terminal amino acids, which were as reactive as alpha-hANP in the two-site enzyme immunoassay but less reactive in the hetero-two-site enzyme immunoassay.     

Homogeneous enzyme immunoassay for macromolecular antigens using avidin biotin enzyme

A unique homogeneous enzyme immunoassay used for the determination of haptens and macromolecular antigens has been developed. It consists of avidin–antigen conjugate, anti-ligand antibody, and biotin enzyme (propionyl-CoA carboxylase). The immunological reaction of the conjugate with antibodies specific to ligand sterically prevents enzyme inactivation by avidin. Goat IgG and theophylline were used as model antigens. Avidin–theophylline conjugate inhibited 100% of enzyme activity. Avidin goat IgG conjugate inhibited 90% of enzyme activity. In this method, the measurable range of theophylline was from 500 ng/ml to 50 μg/ml, and for goat IgG, it was 1–1000 μg/ml.     

氧化型琼脂糖凝胶基片结合酶免疫反应的蛋白质分子微阵列

目的 研制适于常规免疫学检查的蛋白质分子微阵列。方法 利用分子组装技术,以琼脂糖凝胶为基质,于玻片表面制成自组装膜,经过碘酸钠氧化后再与戊二醛分子偶联,而成为具有双功能分子层的薄膜。基片表面衍生的醛基可与各类抗原（如重组多肽,磷脂和DNA）,辣根过氧化物酶及抗体分子中的氨基形成Schiff's碱共价连接。结果 基于上述原理,制作生物分子微阵列,优选出IgG分子的最佳点样浓度为100μg/ml,点样量以50nl为宜。通过不同的实验模式,成功地在基片表面建立了酶免疫检测体系,可敏感特异地检出抗原,抗体分子及酶与底物之间的相互作用。结论 该法最突出的优点在于减少了样本和试剂用量,可对多种自身抗体实施高通量的平行分析,以酶－度物（HRP－DAWB－H2O2）作为芯片信号显示系统,结果较为直观,具有较大的实用性和应用前景。     

An enzyme immunoassay for polymorphonuclear leucocyte-mediated fibrinogenolysis

Upon stimulation, polymorphonuclear leucocytes (PMNs) release potent serine proteases, i.e. elastase, cathepsin G and proteinase 3, which contribute to the degradation of tissue and plasma components. Here, we describe the development of a plasma test to assess PMN-mediated fibrinogenolysis as a biochemical marker for actual PMN-derived proteolysis in vivo , useful for monitoring therapeutic efficacy, i.e. of elastase inhibitors. We generated a monoclonal antibody (MAb), designated 1-1/B3, with a high affinity for elastase-degraded fibrinogen (EDF). The epitope for 1-1/B3 becomes exposed in a time-dependent manner during digestion of fibrinogen with purified PMN-derived serine proteases and with isolated PMNs in vitro . However, 1-1/B3 does not react with plasma fibrinogen or with fibrin(ogen) degradation products generated by plasmin or by other active proteases that may occur locally, i.e. metalloproteases and lysosomal cathepsins. On the basis of MAb 1-1/B3, we developed a plasma test for the assessment of PMN-mediated fibrin(ogen) degradation products (PMN-FDP). In a panel of control plasmas, we observed concentrations of PMN-FDP of 8.2 ± 0.9 ng mL⁻¹ ( n  = 18). These values were increased twofold in patients with α₁-proteinase inhibitor deficiency (18.6 ± 3.3 ng mL⁻¹; n  = 12;  P  < 0.0001) and even more in patients with sepsis (365.7 ± 97.7 ng mL⁻¹; n  = 16;  P  < 0.0001). Furthermore, synovial tissue extracts from patients with rheumatoid arthritis contained increased levels of PMN-FDP, compared with synovial tissue extracts ( P  < 0.005) from patients with osteoarthritis.