p16,p15基因在多种原发恶性肿瘤与肿瘤细胞株中存在状态…

由于多种肿瘤细胞株存在ｐ１６、ｐ１５基因的缺失与点突变，而ｐ１６、ｐ１５蛋白本身又能抑制ＣＤＫ４、ＣＤＫ６的活性，阻止细胞增生，为了确定ｐ１６、ｐ１５基因在原发恶性肿瘤发生、发展过事的作用，应用多重ＰＣＲ、ＳＳＣＰ分析及直接ＤＮＡ序列测定技术检测分析了３５７例原发肿瘤、２９个肿瘤细胞株、９１例散发的多发生肿瘤患者及具有家族性肿瘤高发倾向的肿瘤患者的外周血标本，６１例健康成人外周血标本作为对照。结果     

喉癌p16、p15基因纯合性缺失的研究

目的 研究p16、p15基因缺失状态与喉癌发生、发展的关系。方法 提取喉癌新鲜组织中基因组DNA，采用聚合酶链反应技术，分别对80例喉癌进行p16基因第2外显子（p16E2）和67例喉癌进行p15基因第2外显子(p15E2）纯合性缺失研究。结果 检测p16E2弛合性缺失率为12.5%(10/80)，p15E2纯合性缺失率为11.94%（8／67），p16E2、p15E2共同缺失率为5.97%（4／67）。结论 p16E2和p15E2纯合缺失以及二者共同缺失与喉癌发生有相关性，可能在喉癌发生及恶性进展中起一定作用。     

原发胃癌中p16和p15基因表达及甲基化异常

为检测胃癌组织中抑癌基因p16,p15及其启动子区甲基化状态和P16、P15蛋白表达情况。选择p16、p15基因及启动子区域，用PCR－SSCP、MSP（甲基化特异的PCR）和测序法对100例胃癌患者的癌组织、癌旁正常组织和5例正常组织进行检测，同时用免疫组化法检测了癌组织和正常对照组织的P16和P15的表达。结果发现癌组织p16和p15基因启动子区甲基化率显著高于癌旁正常组织和正常对照；胃癌组织中，71％的病例P16表达阴性，54％的病例具有p16基因启动子区的高甲基化，无突变和纯合缺失检出；11％的病例P15表达阴性，9％的病例具有p15基因启动子区的高甲基化，p15异常与低分化胃癌有关，p15基因内含子1和外显子1内各发现1例DNA序列改变；癌组织中p16和p15基因启动子区甲基化与其蛋白表达密切相关。结果显示p16基因启动子区域高甲基化是胃癌中p16基因失活的关键因素之一，并在胃癌的发生发展中发挥重要作用；p15基因启动子区域高甲基化在胃癌中起一定作用。     

卵巢癌p16基因研究进展

ｐ１６ 基因定位于人类染色体９ｐ２１ ,是细胞周期的负调节因子。编码产物ｐ１６ 蛋白通过与细胞周期素 Ｄ 竞争性地结合 Ｃ Ｄ Ｋ４ 而抑制其活性,使细胞分裂在起始期受阻。当ｐ１６ 基因发生缺失或突变时其负调节作用丧失,使细胞异常分裂增殖进而发生肿瘤。研究发现在原发性卵巢癌及卵巢癌细胞系中均存在ｐ１６ 基因变异,表明其在卵巢癌发生及发展中起重要作用。     

胃癌中p16基因缺失与突变的研究

目的:调查胃癌患者p16基因的改变。方法:采用PCR和DNA测序方法,对36例胃癌患者肿瘤组织标本的p16基因外显子1、2和3进行检测,研究p16基因的缺失和突变情况。结果:发现2例有p16基因外显子1的纯合缺失,3例有外显子3的纯合缺失,缺失频率为13.89%,5例均为弥漫型胃癌。所有标本未检出点突变。结论:p16基因的缺失与胃癌的发生和发展有一定的联系。     

p16和p15基因缺失与造血系统恶性疾病

ｐ１６／ｐ１５基因为定位于染色体ｑｐ２１的抑癌因子，通过抑制细胞周期调节蛋白（ＣＹＣ）和细胞周期蛋白依赖性激酶Ｃ（ＣＤＫ）复合物的形成与激活，阻止细胞由Ｇ１期进入Ｓ期，从而减少细胞的异常生长及变异，防止肿瘤的发生和发展。ｐ１６／ｐ１５基因缺失与造血系统恶性疾病密切相关。肿瘤抑制基因ｐ１５，ｐ１６的发现，为基因治疗血液系统恶性肿瘤提供了新的途径。     

p16基因与急性白血病

多种肿瘤抑制基因 p16在细胞增殖周期调控中发挥重要作用 ,p16基因及其表达产物的异常改变与肿瘤的发生发展密切相关。急性白血病患者 DNA中可检测到 p16基因纯合缺失、突变及甲基化等异常变化 ,导致细胞中 p16蛋白表达异常 ,影响细胞的正常功能。对急性白血病 p16基因及其表达产物的研究 ,为急性白血病的药物及基因治疗提供了理论依据     

p16基因与急性白血病

多种肿瘤抑制基因p16在细胞增殖周期调控中发挥重要作用，p16基因及其表达产物的异常改变与肿瘤的发生发展密切相关。急性白血病患者DNA中可检测到p16基因纯合缺失、突变及甲基化等异常变化，导致细胞中p16蛋白表达异常，影响细胞的正常功能。对急性白血病p16基因及其表达产物的研究，为急性白血病的药物及基因治疗提供了理论依据。     

p16基因在肺癌中表达的研究

癌症是一种危害人类健康的恶性疾病,目前研究表明,许多细胞周期调节因子与癌症的发生和发展有着密切的关系。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ１６,其编码基因为ＭＴＳ１／ｐ１６ＣＤＫ４Ｉ,简称ｐ１６基因,为该研究领域较引人注目的研究热点。自１９９４年美国的Ｋａｍｂ［１］和Ｃａｒ－ｓｏｎ首次发表了有关ｐ１６基因的研究工作以来,人们对其进行了大量的研究。ｐ１６基因编码一个相对分子质量为１６×１０３的蛋白质,此蛋白质是一种细胞周期蛋白依赖性激酶４（ＣＤＫ４）的抑制因子（ＣＤＫ４Ｉ）。我们应用免疫组化Ｓ－Ｐ方法…     

原发性肝癌中MTS1/p16基因缺失的研究

肝癌的发生和发展是多种遗传改变的累积造成的，原发性肝细胞癌（ｈｅｐａｔｉｃｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）的发生、发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关。ＭＴＳ１／ｐ１６是新发现的多重抑癌基因（ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｕｍｏｕｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ，ＭＴＳ１）现已证实，ＭＴＳ１／ｐ１６在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变［１，２］。我们采用差别聚合酶链反应技术分析了３４例原发性肝细胞癌组织、癌旁组织和１０例肝炎后肝硬变肝组织的ＭＴＳ１／ｐ１６外显子２的缺失，以便了解ＭＴＳ１／ｐ１６基因…     

中国人食管癌 p16 基因突变分析

为了解ｐ１６基因与中国人食管癌遗传易感性的关系，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法和ＤＮＡ序列测定法对４０例食管癌及相应手术切端正常组织ＤＮＡ标本ｐ１６基因进行研究，结果在４０例食管癌标本ＤＮＡ中共发现ＤＮＡ变异１４例，其中９例存在有ｐ１６基因的错义突变和剪接位点突变，５例分别在密码子４１和１４０存在与白种人已发现的相同的正常多态现象，而相应的正常手术切端组织标本中未发现有错义突变和剪接位点突变。提示：（１）中国人食管癌中存在较高频率的ｐ１６基因突变，并以错义突变为主；（２）高发区和普通人群食管癌标本中ｐ１６基因突变频率未见差异；（３）正常对照手术切端组织未发现相应体细胞突变。表明ｐ１６基因突变在中国人食管癌发展过程中属较晚期的改变。     

大白鼠肝癌细胞系FSK7901, FSK 7902及其实体瘤的表皮角蛋白免疫细胞化学定位

我们制备了牛表皮角蛋白(EK)的家兔抗体,并表明这种抗体可被用来作为肝内胆管细胞性肝癌的特异性标志物,以与肝细胞肝癌鉴别。在实体瘤中,FSK 7901、FSK 7902细胞系的组织学结构分别与肝内胆管细胞性肝癌和肝细胞肝癌相同,免疫荧光和PAP染色都表明,FSK7901细胞EK阳性,而实体瘤中的绝大多数FSK7902细胞EK阴性。因而作者认为,FSK 7901、FSK 7902细胞系分别属于胆管细胞性肝癌和肝细胞肝癌。FSK7902细胞系的实体瘤中,极少数癌细胞呈EK阳性。作者推测,它们可能是含有或正在形成Mallory小体的细胞。     

非小细胞肺癌中p16基因的突变研究

目的　探讨ｐ１６ 基因在非小细胞肺癌发生发展过程中所起作用。方法　应用 Ｐ Ｃ Ｒ 与双链 Ｄ Ｎ Ａ 直接测序技术对４０ 例非小细胞肺癌中ｐ１６ 基因外显子２ 的纯合缺失与序列改变进行了研究。结果４０ 例非小细胞肺癌中有２ 例存在ｐ１６ 基因外显子２ 的纯合缺失；１４ 例肿瘤 Ｄ Ｎ Ａ 样品中检出ｐ１６ 基因外显子２ 的１９ 个点突变和１ 个移码突变。其中８ 个突变位于１２１ 位密码子中３８０ 位碱基处。结论　ｐ１６ 基因点突变在非小细胞肺癌中发生频率较高，是参与非小细胞肺癌发生发展的主要突变形式。非小细胞肺癌中ｐ１６ 基因的突变热点为１２１ 位密码子中３８０ 位碱基的转换与颠换。     

不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位

目的 通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SCC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系.方法 上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度.结果 B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中.结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致.结论 B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达.     

多种垂体外肿瘤细胞系ACTH基因表达的研究

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交 、免疫细胞化学电镜技术，以垂体ＡＣＴＨ瘤细胞系为对照，从转录、释译及亚细胞水平检测了５种垂体外不同病理组织来源的肿瘤细胞系ＡＣＴＨ基因表达，包括属于ＡＰＵＤ系统的两种人小细胞肺癌，３种非ＡＰＵＤ系统肿瘤：肺腺癌和肝癌。     

Wilm瘤中p16基因缺失一例报告

为调查ｐ１６基因在Ｗｉｌｍ瘤中的改变，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对手术治疗的２４例Ｗｉｌｍ瘤患者肿瘤组织标本，进行了ｐ１６基因第１，２，３外显子的突变筛查，结果未发现异常泳动带。用双重对照ＰＣＲ，发现一例ｐ１６基因的纯合缺失。这一结果支持Ｗｉｌｍ瘤的发生涉及多个基因改变的假说     

软组织平滑肌肉瘤中肿瘤抑制基因p15,p16的表达

目的：探讨p15,p16蛋白在软组织平滑肌肉瘤（LMS）及平滑肌瘤（LM）的表达情况及其意义,方法：采用免疫组织化学方法检测38例LMS及20例LM标本的p15,p16蛋白表达情况,结果：在LMS,p15,p16的阴性率分别为18．42％及42．1％,二者差异有显著性。p15在LM的阴性率为60％,高于LMS。38例LMSp15和p16总异常率为52．6％,其中Ⅰ级LMS异常率显著高于Ⅱ、Ⅲ级。随访15例LMS,复发死亡组p15和p16异常率达75％,高于无复发组。结论：在LMSp16表达缺失比p15缺失更为常见,p15的缺失在LM在比在LMS常见,LMS的发生发展及预后p15及p16共同失活有关。     

外源FHIT基因对不同FHIT基因状态肺癌细胞系恶性增殖的影响及其机理的研究

目的研究外源FHIT基因对不同FHIT基因背景肺癌细胞系恶性增殖的影响并探讨抑癌机理.方法用Lipofectamine介导PEGFP-FHIT真核表达质粒转染受体细胞系并建立稳定转染细胞系.RT-PCR、免疫组织化学及Western blot方法鉴定转染细胞中外源FHIT基因和蛋白的表达.细胞集落形成实验研究外源FHIT基因对肺癌细胞恶性增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡.Western blot检测母系及转染细胞系中p21^Waf/cip蛋白的表达.结果3种受体细胞转染外源FHIT基因后均检测到FHIT mRNA和蛋白的表达.集落形成实验801D-FHIT（46.3%）、A2-FHIT（43.7%）、A549-FHIT（32.7%）细胞集落形成率比801D（58.2%）、A2（60.3%）、A549（52.8%）的低,差异有显著性（P〈0.01）.FACS分析细胞周期显示：801D-FHIT、A2-FHIT和A549-FHIT细胞分别出现了G1、S和G2/M期阻滞.转染FHIT基因的801D-FHIT、A2-FHIT和A549-FHIT细胞p21^Waf/cip蛋白表达增加. 结论外源FHIT基因能够抑制不同FHIT基因背景的肺癌细胞的恶性增殖,并引起细胞周期改变,不同FHIT基因背景的细胞产生细胞周期阻滞的时间不同.FHIT基因通过促进p21^Waf/cip蛋白的表达来调节细胞周期.