肠杆菌科细菌KPC型碳青霉烯酶的研究

目的了解某院临床分离的肠杆菌科细菌产KPC型碳青霉烯酶情况及其基因型别。方法收集该院2009—2010年临床分离的肠杆菌科细菌1 801株,经药敏试验筛选出耐药性高的菌株,采用改良Hodge试验和聚合酶链反应(PCR)扩增检测细菌产KPC型碳青霉烯酶情况,并测序分析其基因型别。结果 1 801株肠杆菌科细菌中,有783株(43.48%)对第三代头孢菌素耐药,其中4株还对碳青霉烯类抗菌药物耐药;改良Hodge试验初筛出2株耐药菌株,经PCR扩增证实为碳青霉烯酶blaKPC-2基因。结论该院已出现产KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因的肠杆菌科细菌,临床与实验室应加强监测和控制。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因检测

目的 对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药性分析及碳青霉烯酶基因检测,为临床正确选择抗菌药物提供依据.方法 采用K-B法检测15株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对18种抗菌药物的耐药性,以WHONET5.5软件分析细菌耐药表型,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,以聚合酶链反应检测blaKPC、blaIMP、blaVIM、balNDM基因并进行测序.结果 2008年1月-2009年12月共分离到非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌15株,改良Hodge试验检出14株含碳青霉烯酶,检出率为93.3％;PCR结果显示14株携带blaKPC,未检出blaIMP、blaVIM、blaNDM基因,与改良Hodge试验一致.结论 blaKPC是肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物主要原因,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶具有很好的敏感性.     

携带bla_(KPC-2)型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类耐药机制研究

目的了解临床分离的携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药机制,为临床治疗提供参考依据。方法在2008年11月-2009年7月从住院患者中分离19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析两种喹诺酮类药物作用靶位编码基因(gyrA、parC)和5种质粒介导的喹诺酮类耐药相关基因。结果 19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌gyrA和parC基因PCR扩增均阳性,1株(5.3%)aac(6′)-Ⅰb-cr基因阳性,qnrA、qnrB、qnrS和qepA基因均阴性;序列分析结果表明,19株gyrA和parC基因均发生突变,分别导致gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)出现两个位点错义突变,导致第83位丝氨酸(Ser)被异亮氨酸(Ile)取代、第87位天冬氨酸(Asp)被甘氨酸(Gly)取代,parC基因QRDR出现1个位点错义突变,导致第80位丝氨酸被异亮氨酸取代。结论染色体介导的耐药机制仍是临床分离的携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物耐药主要机制。     

耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌碳青霉烯酶基因检测研究

目的对南充地区耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(CRAB)的碳青霉烯酶耐药基因进行检测分析,初步了解该地区CRAB耐药机制。方法收集南充市两所三甲医院临床感染患者送检标本检出的90株非重复CRAB,采用改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶,PCR扩增技术检测OXA-23 like、OXA-24 like、OXA-51 like、OXA-58 like、IMP、VIM型碳青霉烯酶基因以及NDM-1"超级细菌"耐药基因。结果改良Hodge试验阳性共72株,阳性率80.0%;全部菌株携带OXA-51-like基因,79株携带OXA-23-like基因,检出率为87.8%,其余基因扩增均为阴性。结论该地区CRAB的耐药机制与产OXA-23型碳青霉烯酶有关,未发现其他碳青霉烯酶耐药基因参与。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC-2与NDM-1基因的研究

目的检测耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况以及KPC-2和NDM-1耐药基因的检出,分析耐碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制。方法采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA纸片协同试验和AmpC酶三维试验检测29株耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况;PCR法检测KPC-2及NDM-1两种碳青霉烯酶耐药基因。结果 29株分离菌中26株菌改良Hodge试验阳性,7株亚胺培南-EDTA纸片协同试验阳性,7株AmpC酶三维试验阳性,16株携带KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因,占55.17%,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是产碳青霉烯酶。     

改良Hodge试验检测KPC型碳青霉烯酶的临床应用

目的 探讨改良Hodge试验检测KPC型碳青霉烯酶最佳底物以及这种检测方法在临床上的应用.方法 收集213株多药耐药的肠杆菌科细菌,选用亚胺培南、美罗培南、厄他培南为改良Hodge试验的不同底物筛选产碳青霉烯酶表型株;采用聚合酶链反应(PCR)及耐药基因测序分析细菌的耐药基因型.结果 从213株肠杆菌科细菌中检出12株改良Hodge试验阳性株,其中7株为大肠埃希菌,2株为弗氏柠檬酸杆菌,臭鼻克雷伯菌、肺炎克雷伯菌、聚团泛菌各1株;12株改良Hodge试验阳性菌体外药敏试验结果显示,对临床常用抗菌药物均耐药;PCR法扩增出5株阳性株,分别为2株大肠埃希菌,臭鼻克雷伯菌、肺炎克雷伯菌、聚团泛菌各1株;扩增产物经基因测序Blast比对均为KPC-2型碳青霉烯酶.结论 改良Hodge试验的最佳底物为厄他培南,美罗培南效果较差;5株耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌携带KPC-2型碳青霉烯酶.     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌同源性分析及blaKPC-2基因的检测

目的对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行同源性分析及blaKPC-2基因检测。方法采用最低抑菌浓度琼脂稀释法检测30株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对17种抗菌药物的敏感性,以WHONET 5.4软件分析细菌耐药表型,以脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株的基因型,以聚合酶链反应检测blaKPC-2基因、并进行基因测序。结果 30株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药表型模式有6种,其中泛耐药及仅对妥布霉素敏感的菌株共22株,占73.3%;PFGE图谱分析有5种类型,其中Ⅰ型菌株流行为主,占80.0%;从7号试验菌株检测出blaKPC-2基因,其他试验菌株均未检测出blaKPC-2基因。结论 30株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌存在高度同源性的菌株流行,并有一株细菌检测出blaKPC-2基因,临床科室及医院感染部门应采取措施控制这些菌株在医院内的传播。     

大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药机制初步研究

目的分析大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药的可能机制,为医院感染预防控制工作提供基础数据。方法收集深圳市第三人民医院、深圳市龙岗区人民医院、深圳市人民医院和中国科学院血液病医院2015年7月-2017年6月临床标本中筛选出的60株碳青霉烯异质性耐药大肠埃希菌(CHEC),采用改良Hodge实验检测菌株是否产碳青霉烯酶,PCR法检测菌株耐药基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测基因的同源性,并将菌株分型,同时通过菌落谱型分析实验(PAP)和亚群传代实验证实异质性耐药进化为完全耐药的过程。结果改良Hodge试验结果,60株CHEC中,20株产碳青霉烯酶,阳性率为33.33%,均携带耐药基因,17株为KPC型,3株为IMP型;随机选取17株CHEC进行PFGE分型,结果显示电泳图谱差异性较大;PAP结果显示,CHEC亚群经抗菌药物选择传代后,PAP曲线向右移动。结论医院筛选出的CHEC菌株无同源性,碳青霉烯异质性耐药的发生可能与CHEC菌株携带KPC、IMP等耐药基因有关,并且异质性耐药是完全耐药进化的中间阶段。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究临床分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的分子流行病学及耐药机制,为制定预防控制该类细菌传播提供系统的试验数据和参考依据。方法收集并鉴定碳青霉烯类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌40株,肠杆菌基因间重复性一致性序列-PCR(ERIC-PCR)分析菌株的分子流行病学;药敏试验采用琼脂稀释法,改良Hodge方法检测碳青霉烯酶,EDTA-Na2双纸片协同法检测金属β-内酰胺酶,PCR及耐药基因克隆测序方法研究细菌的耐药机制,质粒结合试验确定耐药基因的转移性。结果 40株肺炎克雷伯菌仅对多黏菌素和替加环素显示了较好的敏感性;改良Hodge试验阳性30株,金属酶检测试验结果均为阴性;ERIC-PCR将40株肺炎克雷伯菌分为4型,以Ⅰ型为主;PCR结果显示,KPC-2型32株、CTX-M-9型27株、SHV型22株、TEM型19株,其中有25株同时携带≥3种的耐药基因;质粒接合试验显示,3株分离菌株成功传递了对碳青霉烯类的耐药性。结论医院存在质粒介导的碳青霉烯类耐药性的水平传播;耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制主要是产KPC-2碳青霉烯酶,CTX-M-9、SHV和TEM型β-内酰胺酶同时参与其多药耐药机制。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因型及同源性分析

目的随着抗生素的不合理应用,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant klebsiella pneumoniae,CRKP)感染率呈逐年增长趋势,对临床抗感染预防有严重影响。本研究旨在探讨CRKP耐药基因型和同源性,为临床预防及治疗提供参考。方法收集焦作市第四人民医院2017-07-01-2019-01-31临床分离的20株CRKP,采用碳青霉烯酶失活法试验和改良Hodge试验对产酶表型检测,耐药相关基因通过PCR方法扩增,试验菌的同源性采用质谱技术分析。结果阿米卡星和替加环素耐药率分别为70.00%和100.00%,其他抗菌药物耐药率均>90.00%。碳青霉烯酶改良Hodge试验(modified Hodge test,MHT)阳性和CIM菌阳性均为65.00%,两种表型符合率为92.31%。未检出基因的占20.00%,同时存在两种耐药基因的占25.00%,同时存在3种耐药基因的占35.00%。MHT菌株产碳青霉烯酶的特异度为85.71%,灵敏度为92.31%,假阳性率和假阴性率均为7.69%。CIM菌株产碳青霉烯酶的特异度为100.00%,灵敏度为100.00%。20株细菌质谱同源性主要有B型(35.00%)及A型(65.00%)。结论 CRKP分离率较高,通常携带多种耐药基因型。A型是同源性的重要流行株。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制与分子流行病学特征

目的了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的碳青霉烯酶基因携带情况及分子流行病学特点,为医院感染控制和临床治疗提供实验室依据。方法收集山东省泰安市中心医院2014年1—11月临床分离的CRKP 13株,采用Walk Away 96 PLUS型全自动细菌分析仪进行细菌鉴定和药敏试验;改良Hodge试验及EDTA协同试验进行碳青霉烯酶表型的确认;采用多聚酶链反应(PCR)方法扩增相关碳青霉烯类耐药基因(bla KPC、bla IMP、bla VIM、bla GIM及bla NDM-1)并测序;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)调查菌株的克隆相关性并进行流行病学比较。结果 13株CRKP主要来源于痰(7株,53.85%)及尿(4株,30.77%),对复方磺胺甲口恶唑、四环素的耐药率较低(均40%),对其他抗菌药物(除阿米卡星)的耐药率均70%,对碳青霉烯类药物的耐药率均为100%;13株细菌改良Hodge试验均为阳性,5株细菌EDTA协同试验阳性;经PCR测序确认,碳青霉烯酶基因中,bla KPC基因最常见(13/13),其次为bla NDM-1基因(5/13),未发现其基因bla IMP、bla VIM和bla GIM;PFGE聚类结果显示,13株肺炎克雷伯菌被分为5型,主要为C型(9/13),且均属于ST11,其他分别为ST37、ST626、ST628和ST668型。结论碳青霉烯酶基因bla KPC与bla NDM-1是引起该院肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因,ST11是主要的克隆类型,医院需尽快强化医院感染预防控制措施。     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺类耐药机制研究

目的 调查多药耐药肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶基因的存在情况.方法 收集2010年3-5月浙江大学附属第一医院住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌共15株,先做β-内酰胺酶分型,再做改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶表型,然后采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析40种β-内酰胺酶基因.结果 15株多药耐药肺炎克雷伯菌共检出TEM-1 12株、KPC-2 9株、KPC-2-like 2株、OXA- 30 1株,检出率分别为80.00％、60.00％、13.33％、6.67％,2号株与6号株KPC基因为KPC新的变异型(KPC-2-like,GenBank登录号:HQ258934);其他基因均未检出.结论 该组15株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物与细菌产4种β-内酰胺基因相关.     

鲍曼不动杆菌SHV型β-内酰胺酶耐药基因分子流行病学研究

目的 分析自临床分离的产SHV型β-内酰胺酶(β-lactamases,BLA)多重耐药鲍曼不动杆菌的SHV型BLA耐药基因序列并确定其所产BLA耐药基因亚型。方法 在2000年7月至2002年12月间从临床分离60株鲍曼不动杆菌,经药敏试验、超广谱β-内酰胺酶(FSBLs)表型确证试验和SHV型BLA耐药基因的聚合酶链反应(PCR)检测,筛选出2株具有多重耐药特性、SHV基因型均阳性的分离株(HZ02、HZ10株),对耐药基因进行序列分析。结果 在2001年6月至2002年1月间分离到的18株(30.0％)鲍曼不动杆菌质粒上携带SNV型BLA耐药基因;NZ02株和NZ10株的SHVPCR扩增阳性,其基因片段分别含825个和833个核苷酸,与Nuesch-lnderbinen等首先发现的SHV-12亚型ESBLs编码基因序列(GenBank注册号:X98105)完全相同。结论 30.0％鲍曼不动杆菌质粒上携带SHV型(超广谱)β-内酰胺酶耐药基因并引起一次医院感染爆发。同时证实在我国浙江省湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌中存在产SHV-12亚型ESBL_s耐药基因菌株。     

重症监护病房耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌分子及临床特征分析

探讨重症监护病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）碳青霉烯酶分布情况,并比较耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pn...     

肺炎克雷伯菌对季铵盐消毒剂及复方新诺明耐药相关基因检测

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)季铵盐消毒剂及复方新诺明耐药相关基因存在状况。方法在2005年9月~2006年4月从住院患者中分离出25株肺炎克雷伯菌,采用PCR及序列分析的方法分析5种基因qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA5、dfrA12和dfrA17。结果25株肺炎克雷伯菌中,qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA5、dfrA12和dfrA17基因阳性株数分别为21(84.0%)、0、6(24.0%)、6(24.0%)和0;qacE△1-sul1阳性基因测序比对与已在美国核苷酸序列数据库(GenBank)中登录的qacE△1-sul1基因序列完全同源。结论临床分离的肺炎克雷伯菌中qacE△1-sul1基因阳性率很高,对复方新诺明耐药与菌株携带dfrA5、dfrA12和qacE△1-sul1基因有关。     

69株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因检测分析

目的了解耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌耐药基因的携带情况。方法收集69株浙江省人民医院住院病人耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌株,改良Hodge试验进行KPC型碳青霉烯酶初筛检测,PCR法进行HSV、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、GES、VEB、IMP、VIM、SME、KPC、IMI/NMC、NDM基因检测,并对部分阳性基因进行测序。结果 69株肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阳性48株,阳性率63.8%。PCR检测结果为56株(81.2%)携带KPC基因,60株(87%)携带HSV,20株(29.0%)携带OXA-3基因;3株(4.35%)肺炎克雷伯菌携带OXA-1基因。对KPC基因测序结果为KPC-2亚型。结论本次检测的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌携带KPC-2基因为主,应加强院感监测和预防。     

血流感染肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究

目的了解临床血流感染肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制,为其治疗提供实验依据。方法收集浙江省人民医院2016年1月-12月门诊及住院患者血流感染肺炎克雷伯菌72株,应用法国梅里埃VITEK 2 Compact检测肺炎克雷伯菌药物敏感性;应用PCR法检测相关碳青霉烯酶耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMI、blaIMP和blaOXA-48),应用MLST方法检测菌株克隆型别。结果 2016年1月-12月门诊及住院患者血流感染肺炎克雷伯菌72株,其中碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP) 48株,占66.7%,碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP) 24株,占33.3%;肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物敏感性均较低,特别是β-内酰胺类抗菌药物。替加环素体外显示出极高敏感性,仅4.2%菌株耐药;24株菌株全部检出blaKPC-2基因,其他耐药基因未检出。结论本院血流感染肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制主要是产KPC-2酶。碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌在本院呈克隆播散趋势,应引起临床高度重视。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的研究

目的:研究耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及耐药基因类型,为合理使用抗菌药物及监测院内感染等提供有效的科学指导。方法:对医院收治的肺炎患者分离出的29株CRKP,采用改良碳青霉烯类失活(mCIM)试验法检测肺炎克雷伯菌中的碳青霉烯酶,通过聚合酶链反应(PCR)及测序方法对碳青霉烯酶基因KPC、IMP、NDM型、超广谱β内酰胺酶基因(ESBLs)、TEM、SHV、CTX-M型以及AmpC酶基因DHA进行检测。结果:29株耐药菌株对大部分临床常用抗菌药物高度耐药,对氟喹诺酮类抗菌药物和氨基糖苷类抗菌药物有较高的敏感性。表型确认试验中7株改良Hodge实验阳性,18株mCIM试验阳性。20株(占68.97%)菌检测到碳青霉烯酶基因,其中KPC为17.24%(5/29),IMP为13.79%(4/29),NDM为37.93%(11/29)。25株(占86.20%)菌检测到ESBLs菌株的基因,其中TEM型为62.07%(18/29),SHV型为79.31%(23/29),CTX-M型为62.07%(18/29)。3株菌检测到AmpC酶基因,其中DHA为10.34%(3/29)。29株CRKP中有14株既表达了碳青霉烯酶基因又表达了ESBLs的基因,共同表达率为48.28%。对耐药基因抽取其中部分阳性结果进行测序后均为目标基因,其中KPC为KPC-2、NDM为NDM-1。结论:29株CRKP对多种抗生素耐药率均较高,且对碳青霉类抗菌药物的耐药基因型主要为KPC-2和NDM-1,故加强院内感染预防控制措施,防止此类菌株的播散。     

江西地区鲍曼不动杆菌NDM-1及其他碳青霉烯酶基因检测研究

目的了解江西地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)NDM-1及其他碳青霉烯酶基因携带情况,为预防和控制医院感染提供实验室依据。方法收集2015年1月—2016年6月江西地区3所三级甲等医院临床标本分离的CRAB共64株,采用K-B法测定其对常用抗菌药物的敏感性,采用改良Hodge试验和EDTA协同试验筛查CRAB产碳青霉烯酶和金属酶的情况,采用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,对产NDM-1的鲍曼不动杆菌进行接合试验。结果 CRAB对氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星耐药率高达95.31%、98.44%、90.63%、54.69%。CRAB菌株改良Hodge试验阳性率为76.56%,EDTA协同试验阳性率为96.88%。PCR扩增结果显示,87.50%(56株)的CRAB携带OXA-23、VIM-1基因,18.75%(12株)携带SIM基因,3.13%(2株)携带OXA-24基因,26.56%(17株)携带NDM-1基因。携带NDM-1基因的CRAB均来自于南昌大学第一附属医院,其中64.70%(11/17)表现为泛耐药。接合试验结果显示,携带NDM-1基因的菌株可将NDM-1基因传递给受体菌大肠埃希菌J53,使其获得对亚胺培南的耐药性。结论该地区临床分离的CRAB耐药率高,碳青霉烯酶基因以OXA-23、VIM-1基因型为主,检出NDM-1基因阳性CRAB,NDM-1基因可能存在医院内的克隆传播,应尽快采取有效措施预防和控制NDM-1基因阳性CRAB的传播。