尼克酰胺磷酸核糖转移酶在小鼠脑老化中的作用

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)可分布在细胞内和细胞外,已经发现NAMPT参与许多老年性疾病,如冠心病、糖尿病、高脂血症及癌症等,研究发现其代谢产物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)可通过SIRT1延缓动物衰老过程,年轻大小鼠脑内的NAMPT主要表达在神经元,参与神经元的代谢,并对脑缺血损伤及神经退行性疾病有保护作用。目的观察NAMPT在脑老化中的表达变化及其作用。方法对年轻(2～3个月)和老年(17～19个月)小鼠脑及血清进行NAMPT表达水平、分布及其产物水平的检测,并以NAMPT特异性抑制剂FK866模拟NAMPT降低,以重组NAMPT模拟细胞外NAMPT增加,观察对神经元和脑血管内皮细胞的影响。结果与年轻小鼠相比,老年小鼠脑NAMPT水平降低、而血清中NAMPT水平明显增高;老年小鼠脑内NAMPT水平在皮层和海马明显降低,而纹状体和小脑中的NAMPT水平维持不变;年轻小鼠NAMPT主要分布在神经元,老年小鼠脑内NAMPT主要分布于神经元和小胶质相比;老年小鼠脑内NAD水平在海马、纹状体和小脑明显降低,但皮层不变;NAMPT抑制剂FK866可浓度依赖性诱导神经元死亡;重组NAMPT处理是小鼠脑血管内皮细胞对缺糖缺氧损伤的易感性增加。结论老年时NAMPT的表达、分布及活性变化具有部位依赖性,NAMPT参与脑老化及老年性脑疾病的发生。     

环状RNA表达与肺腺癌生物学功能的关联性研究

目的：探索环状RNA(circRNA)表达水平与肺腺癌发病的关联性。方法：选取江苏大学附属人民医院胸外科接受部分或根治性手术治疗的肺腺癌患者25例，术中提取患者的肺腺癌组织和癌旁正常组织。采用高通量测序技术(RNA-seq)在5对肺组织中筛选肺腺癌组织异常表达的circRNA, qRT-PCR实验检测20对肺组织标本中测序差异表达倍数前10位的10个circRNA表达水平，circRNA/miRNA/mRNA(ceRNA)网络互作图分析部分差异表达的circRNA与miRNA、mRNA的互作关系，克隆实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测circRNA对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：测序结果显示，肺腺癌组织中共285个circRNA表达异常，其中102个circRNA表达上调，183个circRNA表达下调。qRT-PCR实验结果显示，测序结果中表达上调差异倍数前五位的circRNA和表达下调差异倍数前五位的circRNA异常表达方向与测序结果一致，且hsa＿circ＿0002360为表达差异倍数最高的circRNA。生物信息学分析显示，hsa＿circ＿0002...     

CD137L在肺癌细胞株的表达及其生物学功能

目的研究人CD137配体(CD137L)在人肺癌细胞株的表达及其生物学功能。方法采用RT-PCR及流式细胞术检测人CD137L在肺癌细胞株A549、H460、A2、SK-MES-1、SPC-A1的表达水平。用细胞计数试剂盒8检测A2细胞在PBS(A组)、IgG1-FC(B组)或CD137-FC(C组)包被处理后的增殖情况,并用Annexin V/PI双染方法检测其凋亡率。结果 CD137LmRNA及蛋白在多种肺癌细胞株上均有表达。C组细胞增殖较A、B组明显增加(P<0.05),但三组间细胞凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CD137L在各种肺癌细胞株上均有表达,CD137L介导的逆向信号能促进肺癌细胞增殖,可能在肺癌发生、进展中起重要作用。     

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶在脑胶质瘤的表达及其临床意义

目的 探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在脑胶质瘤细胞中的表达及其与患者生存时间的关系,以判断患者的预后,并指导胶质瘤术后化学治疗药物的合理选择.方法 选取手术切除的59例脑胶质瘤标本,经10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋;每例标本以5μm厚度连续切片,作HE染色确定病理组织类型;对患者的生存期进行调查;用免疫组化EnVision法检测脑胶质瘤细胞中MGMT的表达情况;免疫反应染色结果按照Krajewska法进行半定量分析;所有统计分析用SPSS17.0统计软件进行,采用卡方检验以及将MGMT表达与患者生存期绘制成Kaplan-Meier生存曲线,并进行log-rank检验和分析.结果 MGMT在脑胶质瘤的表达存在异质性;MGMT在不同病理级别的脑胶质瘤细胞中表达阳性率不同,差异无统计学意义(P>0.05);MGMT表达阳性患者生存时间低于表达阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05).结论 MGMT在脑胶质瘤的表达与肿瘤病理级别无关,MGMT的表达可作为判断预后的指标.     

新型免疫检查点HHLA2在人肺腺癌中的表达及其临床意义

目的:免疫检查点在包括人肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)的免疫治疗中取得了突破性进展,而HHLA2(Human endogenous retrovirus-H long terminal repeat-associating protein 2,人内源性逆转录病毒H长末端重复结合蛋白2)是最近发现的免疫调节分子B7同源家族的成员。本文研究HHLA2在LUAD中的表达情况和临床意义。方法:采用免疫组化方法检测74例LUAD患者及相应的癌旁组织中HHLA2的表达情况。结果:与癌旁组织相比, HHLA2在LUAD的肿瘤组织中显著过表达(P0.05),但并未发现与其他临床病理参数的相关性。结论:HHLA2与肺腺癌的发生有关,是潜在的免疫治疗靶点。     

雄激素和雌激素受体在肺腺癌和肺鳞癌中的表达

目的 探讨雄激素受体和雌激素受体在肺腺癌、鳞癌中的表达及其与预后的关系.方法 应用免疫组化SP法检测54例肺腺癌和78例鳞癌组织标本中雄激素受体(AR)和雌激素受体(ER)的表达,并分析其与临床特性及生存率的关系.结果 AR和ER总阳性率分别为21.2%(28/132)和18.2%(24/132).非小细胞肺癌(NSCLC)组织中AR的阳性表达与TNM分期及N分期(淋巴结转移情况)相关.AR表达阳性组3年生存率显著低于阴性组(21.4%vs.45.2%)(P<0.05);ER表达阳性组3年生存率低于阴性组(29.2%vs.42.6%)(P>0.05).结论 AR的阳性表达与NSCLC淋巴结转移和肿瘤进展可能相关,并且预后较差.     

CRIPTO-1在肺腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测组蛋白去CRIPTO-1在肺腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测60例肺腺癌及20例正常肺组织中CRIPTO-1蛋白表达的情况,并分析其表达与肺腺癌临床病理特征的关系。结果 CRIPTO-1蛋白在肺腺癌组织中的阳性表达率（65.0%）显著高于正常肺组织（15.0%）,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。其蛋白表达与肺腺癌组织的分化程度、临床分期、组织学分型及淋巴结转移均密切相关,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CRIPTO-1的过表达可能与肺腺癌的发生、发展有关,并对判断肺腺癌患者的生物学行为具有一定的意义。     

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对哈萨克族食管正常上皮细胞甲基转移酶表达及活性的影响

目的体外实验检测N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对哈萨克族食管正常上皮细胞DNA甲基转移酶的表达及活性改变,以此探讨亚硝胺类化合物致食管上皮组织发生恶变的表遗传机制。方法以0、0.75、1.50和3.00μg/ml MNNG处理哈萨克族正常食管上皮细胞24 h,采用高效液相色谱法(HPLC)和DNA甲基转移酶活性检测试剂盒检测细胞基因组DNA整体甲基化水平和DNA甲基转移酶活性的改变;并采用RT-PCR和Western Blot法检测DNA甲基转移酶mRNA及蛋白表达。结果 1.50和3.00μg/ml MNNG组与对照组比较细胞基因组DNA整体甲基化水平分别降低8.07%和17.58%,且各染毒组之间比较差异有统计学意义(F=60.342,P0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b酶活性均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r=0.967,P0.01;r=0.897,P0.01;r=0.716,P0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA及蛋白表达水平均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r=0.814,P0.05;r=0.732,P0.01;r=0.578,P0.05;r=0.944,P0.01;r=0.900,P0.01;r=0.887,P0.01)。结论 MNNG可致哈族正常食管上皮细胞基因组DNA整体甲基化水平下降,提高DNMT1、DNMT3a、DNMT3b表达及活性。     

Syndecan-1在肺腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究Syndecan-1在肺腺癌组织中的表达情况及其与肺腺癌患者临床病理特征和预后的关系。方法用免疫组织化学法(SP法)检测76例肺腺癌组织及其癌旁正常肺组织中Syndecan-1的表达情况,并分析Syndecan-1表达与肺腺癌各项临床病理指标以及患者预后的相关性。结果在肺腺癌组织中Syndecan-1的染色结果为:25例(32.9%)阴性,18例(23.7%)弱阳性,19例(25.0%)阳性,14例(18.4%)强阳性;其中低表达者43例(56.6%),高表达者33例(43.4%)。在癌旁正常肺组织中,Syndecan-1染色结果为:29例(38.2%)阳性,47例(61.8%)强阳性;均为高表达。肺腺癌组织中Syndecan-1低表达与肿瘤分化程度(χ2=5.545,P=0.032)、卫星结节(χ2=6.061,P=0.018)、区域淋巴结转移(χ2=7.727,P=0.01)、pTNM分期(χ2=14.434,P<0.001)等因素相关。Syndecan-1低表达组患者术后三年生存率为14.0%,明显低于高表达组患者30.3%,差异具有统计学意义(χ2=12.555,P<0.001)。结论Syndecan-1可能参与了肺腺癌的发生发展,Syndecan-1与肺腺癌的临床病理特征及预后关系密切,可以作为肺腺癌的独立预后预测因子。     

Expression and biological function of CD137L in lung cancer cell lines

目的 研究人CD137配体(CD137L)在人肺癌细胞株的表达及其生物学功能.方法 采用RT-PCR及流式细胞术检测人CD137L在肺癌细胞株A549、H460、A2、SK-MES-1、SPC-A1的表达水平.用细胞计数试剂盒8检测A2细胞在PBS(A组)、IgG1-FC(B组)或CD137-FC(C组)包被处理后的增殖情况,并用Annexin V/PI双染方法检测其凋亡率.结果 CD137L mRNA及蛋白在多种肺癌细胞株上均有表达.C组细胞增殖较A、B组明显增加(P＜0.05),但三组间细胞凋亡率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CD137L在各种肺癌细胞株上均有表达,CD137L介导的逆向信号能促进肺癌细胞增殖,可能在肺癌发生、进展中起重要作用.     

YTH结构域家族蛋白 2和叉头蛋白转录因子 3在肺腺癌中的表达关系研究

目的分析 YTH结构域家族蛋白 2(YTHDF2)及叉头蛋白转录因子 3(FOXO3)在肺腺癌病人中的表达及与预后的关系。方法收集 2020年 1月至 2021年 5月在郑州大学第一附属医院行手术治疗的肺腺癌病人癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织 5 cm以上) 80对,收集病人临床病理资料;利用癌症基因组图谱( TCGA)数据库查询 YTHDF2、FOXO3基因在肺腺癌中的表达水平;采用免疫组织化学法检测 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的表达情况;分析 YTHDF2、FOXO3蛋白水平与肺腺癌病人临床病理资料的关系;分析肺腺癌中 YTHDF2与 FOXO3基因表达水平的相关性;对病人进行为期 3年的随访,分析病人 3年累积生存率。结果 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的高表达率分别为 34.00%、26.00%,明显低于癌旁正常组织中 79.48%、61.54%(P<0.05)。 YTHDF2蛋白表达情况与肺腺癌病人年龄、淋巴结转移和分化程度相关( P<0.05);与 TNM分期、性别无关( P>0.05); FOXO3蛋白表达情况与肺腺癌病人性别和分化程度相关(P<0.05);肺腺癌组织中 YTHDF2蛋白高表达组和低表达组病人 3年累积生存率分别为 53.30%、14.00%,经 log-rank比较,差异有统计学意义( P<0.05); FOXO3蛋白高表达组和低表达组病人 3年累积生存率分别为 64.50%、12.20%,经 Log-Rank比较,差异有统计学意义( P<0.05)。结论 YTHDF2、 FOXO3在肺腺癌组织中均低表达,与病人肿瘤分化程度及 3年累积生存率有关,有望成为评估肺腺癌病人预后的生物标志物。     

正常肺及肺腺癌组织中细支气管肺泡干细胞相关指标的表达

目的检测人正常肺及肺腺癌组织中细支气管肺泡干细胞（BASC）相关指标,明确BASC是否在人肺组织中存在及其组织定位。方法采用组织免疫荧光方法将经过脱蜡、抗原修复好的组织切片通过5％脱脂奶粉溶液封闭检测,再通过先后加入一抗、二抗以及染核、封片等在荧光显微镜下观察,判定结果时可见合成蛋白复合物（SPC）和八聚体结合转录因子4（OCT4）阳性表达细胞呈绿色,Clara细胞分泌蛋白（CCSP）阳性表达细胞呈红色,而SPC／CCSP或CCSP／OCT4双阳性细胞呈黄色,细胞核呈蓝色。结果在人正常肺组织中可检测到SPC、CCSP及OCT4。免疫荧光检测显示,正常肺组织中均可检测到SPC、CCSP双阳性表达细胞,呈现BASC的表型特征,且均表达OCT4,定位于细支气管一肺泡导管连接处。在人肺腺癌组织中亦可检测到BASC样癌干细胞,在30例肺腺癌组织中26例同时检测出SPC及CCSP,属检测出BASC病例。18例同时检测出OCT4表达。结论人正常肺组织中可检测到BASC,且在肺腺癌组织中可检测到具有BASC表型特征的癌干细胞,提示人肺腺癌可能源自BASC的恶性转化。     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系的建立及生物学特性研究

目的 探讨紫杉醇(Taxol)诱导的人肺腺癌细胞A549耐药细胞系A549/Taxol生物学特性和耐药机制.方法 采用Taxol浓度递增间歇诱导法,建立A549/Taxol细胞系,MTT法测定耐药性,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室法检测细胞侵袭力,荧光定量RTPCR检测乳腺癌易感基因1(BRCA1)、受体相关蛋白80(RAP80)、微管相关蛋白T(Tau)、多药耐药基因1(MDR1)mRNA表达水平.结果 A549/Taxol细胞对Taxol及多西紫杉醇均有耐药性,对前者耐药性更强(RI=48.36 vs.27.21)(P＜0.01).与A549细胞相比,A549/Taxol细胞G1期的细胞比例增加[(50.56±0.25)％ vs.(57.75±0.16)％],而S期细胞比例减少[(37.85±1.48)％ vs.(30.21±1.87)％],细胞凋亡率增加幅度减小[(56.43±1.12)％ vs.(9.23±1.18)％],细胞侵袭力增强[(38.6±9.97)个vs.(116.8±21.73)个],BRCA1、RAP80 mRNA表达降低,而MDR1、Tau mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论 成功建立Taxol耐药细胞系A549/Taxol,有助于进一步研究肺癌耐药机制.     

肺鳞癌和腺癌中E－钙黏附素和基质金属蛋白酶－9的病理意义

目的：检测肺癌组织中E－钙黏附素（E－cadherin）和基质金属蛋白酶－9（ matrix metalloproteinase－9,MMP－9）的表达,并对两者与临床病理特征的关系进行了研究。方法应用免疫组织化学方法,对138例肺鳞癌和肺腺癌以及对应的癌旁正常肺组织中E－cadherin和MMP－9蛋白的表达情况进行了检测。结果肺癌组织中E－cadherin的阳性表达率为28．99％（40／138）,正常肺组织为66．67％（92／138）,两者比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）;在肺癌组织中,MMP－9的阳性表达率为59．42％（82／138）,正常肺组织为29．71％（41／138）,两者比较,差异有统计学意义（P＜0．05）;E－cadherin和MMP－9的表达水平均与肺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及术后生存时间有明显相关（ P ＜0．05）;两者的表达与病理类型、性别、年龄、吸烟史无关（ P ＞0．05）;E－cadherin蛋白的表达与MMP－9蛋白的表达呈负相关（ P ＜0．05）。结论 E－cadherin低表达与MMP－9高表达是肺癌侵袭转移的重要生物学指标。     

肺癌组织中前列腺素E合成酶和环氧化酶的表达及生物学意义

目的 探讨前列腺素E合成酶( mPGES-1)和环氧化酶(COX-2)在肺癌组织中的表达及生物学意义.方法 采用RT-PCR检测肺癌及癌旁组织中mPGES-1、COX-2 mRNA的表达,同时采用免疫组织化学S-P法检测相应标本中mPGES-1和COX-2蛋白的表达.结果 肺癌组织中mPGES-1和COX-2 mRNA的表达量均明显高于癌旁组织(均P ＜0.05);mPGES-1蛋白阳性表达率在肺癌组织中为66.7％ (40/60)明显高于相应癌旁组织中的10.0％ (6/60)(x2=20.38,P＜0.01);COX-2蛋白的阳性表达率在肺癌组织中为73.3％(44/60)明显高于在相应的癌旁组织中的13.3％ (8/60)(x2=21.99,P＜0.01).肺癌组织中mPGES-1和COX-2蛋白的阳性表达率与肿瘤大小、组织类型无关(均P＞0.05),而与淋巴结转移、TNM分期、分化程度等有关(均P＜0.05).结论 mPGES-1和COX-2的高表达可能在肺癌的发生发展中起着重要作用,可能为肺癌的早期诊断和开发肺癌的靶向治疗提供一定的临床依据.