2014-2017年山西省沙门氏菌分子分型及耐药性研究

目的 了解山西省食源性疾病主动监测中沙门氏菌的药物敏感性,并对耐喹诺酮类药物的沙门氏菌进行了耐药基因与分子分型研究,为沙门氏菌临床治疗提供科学依据并初步了解沙门氏菌的耐药机制。方法 对 2014-2017年山西省食源性疾病主动监测病例中分离到的沙门氏菌进行血清学分型、药物敏感性试验以及对耐喹诺酮类药物的沙门氏菌进行耐药基因检测及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 137株沙门氏菌经诊断血清凝集后共分为16个血清型,主要为肠炎沙门氏菌51株、鼠伤寒沙门氏菌47株、其他沙门氏菌39株。 137株沙门氏菌对萘啶酸的耐药率最高,为56.93%;其次为四环素,耐药率为34.31%;对头孢噻肟、庆大霉素及头孢西丁的耐药率较低,分别为8.03%、5.84%及0.73%。对萘啶酸耐药的78株沙门氏菌,进行gyrA基因和parC基因点突变的测定,发现对萘啶酸耐药的沙门氏菌gyrA基因与parC基因检出点突变129个。51株肠炎沙门氏菌的相似度在70.6%~100%, 21株鼠伤寒沙门氏菌的相似度在58.9%~100%。结论 山西省沙门氏菌以肠炎沙门氏菌与鼠伤寒沙门氏菌为主。本地区沙门氏菌萘啶酸耐药情况最为严重,需要加强对沙门氏菌耐药的监测及喹诺酮类药物耐药机制的研究。     

河南省20株布鲁氏菌鉴定与PFGE分子分型研究

目的检测与分析河南省2010-2012年20株布氏菌型别及PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征。方法采集病人静脉血,分别以试管凝集试验(SAT)、双相血培养瓶分离培养、热裂解法制备DNA模板和AMOS-PCR鉴定4种布氏菌型别。采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对检出的布鲁氏菌进行分子分型鉴定。结果分离培养的20株布鲁氏菌经鉴定,19株为羊种,1株为牛种;羊种布鲁氏菌经XbaI酶切与脉冲场凝胶电泳后,共获得了8种不同带型,带型相似度在80%~100%之间,牛种与羊种菌株在带型相似度上差异较大,具有较好的分辨能力。结论河南省病人感染的布鲁氏菌以羊种为主要型别,AMOS-PCR与PFGE作为布鲁氏菌菌型鉴定与分子分型的技术手段,为布鲁氏菌病的病原学监测与应急检测提供依据。     

2015-2017年聊城市腹泻病例中沙门氏菌分子分型及耐药性研究

目的 对2015-2017年聊城地区主动监测哨点医院腹泻患者中分离到的沙门氏菌进行病原学分析,了解沙门氏菌的感染现状及血清型分布、分子分型特征和耐药情况。方法 对2015-2017年分离自腹泻患者的41株沙门氏菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药物敏感性测试,并用BioNumerics软件分析菌株之间的相似度,用微量肉汤稀释法进行菌株耐药性检测。结果 腹泻患者中沙门氏菌总分离率为7.16%,且不同年龄段分离率存在差异。分离的沙门氏菌共有8个血清型,其中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌分别为18株和7株,为优势血清型;PFGE分析发现41株菌共产生了34种不同的PFGE带型,相同血清型的沙门氏菌的PFGE带型比较相近,不同血清型的PFGE带型具有多态性,未发现菌株成簇存在现象。测试菌株对四环素耐药率最高为73.17%,多重耐药率达68.29%,发现6株携带不同耐药基因类型的产广谱β-内酰胺酶的鼠伤寒沙门氏菌。结论 聊城地区沙门氏菌具有一定的血清型及遗传的多样性,高耐药和多重耐药现象严重,应加强病例及环境联合耐药监测。     

O1群霍乱弧菌PFGE分子分型和菌株流行能力关系研究

目的 调查福建省1962-2005年不同流行时期、不同流行血清群的O1群埃尔托型霍乱弧菌(EVC)的菌株间的遗传关联度和基因组的多态性;探讨不同PFGE型(簇)和霍乱菌株流行能力的关系。方法 运用脉冲场凝胶电泳分子分型(PFGE)技术,对福建省1962-2005年代表性霍乱菌株进行分型,结合流行病学背景资料探讨不同PFGE型(簇)和相关霍乱菌株的流行能力。结果 77株霍乱菌株按100%的相似度分为61个PFGE型,按照90%的相似度可得到5个主要的PFGE簇,命名为G1-G5;52株小川型霍乱弧菌,按照100%的相似度分为47个PFGE型,按照90%的相似度可得到4个主要的PFGE簇[G1(o)-G4(o)];25株稻叶型霍乱弧菌按照100%的相似度分为15个PFGE型,按照90%的相似度,可得到2个主要的PFGE簇[G1(i)-G2(i)]。各个流行时期的菌株均有优势的PFGE簇,散发的菌株呈现分散的PFGE型,没有集中趋势。结论 福建省3次流行的霍乱菌株有遗传关联性,在流行过程中产生基因变异出现新的优势PFGF簇;各地区间的霍乱流行有传播上的相关性。小川型G2(o)PFGE簇和稻叶型G1(i)PFGE簇的菌株有引起霍乱持续流行的能力,后者更有引发大规模病例数的能力。     

2011-2013年河南省鼠伤寒沙门菌耐药与分子分型研究

目的 分析2011-2013年河南省鼠伤寒沙门菌临床分离株的耐药状况与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型带型,为以鼠伤寒沙门菌为代表的食源性疾病暴发预警、调查、溯源及公共卫生意义上的抗生素使用策略提供基线与参考数据。方法 根据国际PulseNet 细菌性传染病分子分型监测网络公布的沙门菌PFGE分型技术与美国临床与实验室标准协会(CLSI)沙门菌K-B法药敏测试方案,对2011-2013年分离自我省5个哨点医院的72株鼠伤寒沙门菌进行13种抗生素的药敏测试与PFGE分子分型分析。结果 72株沙门菌对8类13种抗生素均有不同程度的耐药,有65株为多重耐药菌株(90.3%),其中耐3~5种的为6株(8.3%),耐6~8种的为34株(47.2%),耐9~10种的为10株(13.9%)。72株鼠伤寒沙门菌经Xba Ⅰ酶切与脉冲场凝胶电泳后,获得45种带型,每种带型包含菌株数1~9株不等,相似度区间为65.6%~100%。结论 河南省临床分离的鼠伤寒沙门菌耐药状况普遍比较严重,PFGE带型呈现出多样性的同时又具有较显著的优势带型特点,部分带型与其对应的耐药谱具有一定的关联性与相同的聚集性。     

河南省20株布鲁氏菌鉴定与PFGE分子分型研究北大核心CSCD

目的 检测与分析河南省2010-2012年20株布氏菌型别及PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征。方法 采集病人静脉血,分别以试管凝集试验（SAT）、双相血培养瓶分离培养、热裂解法制备DNA模板和AMOS-PCR鉴定4种布氏菌型别。采用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对检出的布鲁氏菌进行分子分型鉴定。结果 分离培养的20株布鲁氏菌经鉴定,19株为羊种,1株为牛种;羊种布鲁氏菌经XbaI酶切与脉冲场凝胶电泳后,共获得了8种不同带型,带型相似度在80%~100%之间,牛种与羊种菌株在带型相似度上差异较大,具有较好的分辨能力。结论 河南省病人感染的布鲁氏菌以羊种为主要型别,AMOS-PCR与PFGE作为布鲁氏菌菌型鉴定与分子分型的技术手段,为布鲁氏菌病的病原学监测与应急检测提供依据。     

沙门氏菌CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型及变异研究

目的 通过对不同血清型中沙门氏菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶分子基因型别、脉冲场凝胶电泳(PFGE)溯源分析及CTX-M氨基酸位点变异情况,研究CTX-M各型别流行特征及在超级耐药克隆中的作用。方法 对来源于江苏及周围地区的61株CTX-M阳性的肠炎沙门氏菌(S. enteritidis)、印第安纳沙门氏菌(S. indiana)、汤卜逊沙门氏菌(S. thompson)等进行CTX-M型别鉴定、PFGE分子分型、全基因测序对不同型别CTX-M氨基酸位点变异分析。 结果 61株菌株分为3个CTX-M群6个型。S. indiana含有6种CTX-M基因型,主要型别是CTX-M- 65和CTX-M- 55; S. enteritidis和S.thompson主要型分别为CTX-M- 55、CTX-M- 65。 PFGE聚类分型有19个型。A2型是携带CTX-M-55型S. enteritidis; B4、B8、B9型是携带CTX-M-55型或CTX-M-65型的S. indiana; D2为携带CTX-M-65型的S.thompson。CTX基因组序列分析显示,在CTX-M-1群、CTX-M-9群、CTX-M-64群易变化氨基酸位点分别是4、3、12个。结论 本地区主要CTX型别为CTX-M-55型或CTX-M-65型,S. indiana是CTX基因主要来源。位于质粒上的CTX-M基因复杂且多变是S. indiana超级耐药克隆形成并广泛流行重要原因之一。     

福氏志贺菌PFGE和MLVA分子分型方法的应用与评价

目的 比较和评价脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和多位点可变数目串联重复序列分析技术(MLVA)在福建地区福氏志贺菌研究中的应用。方法 运用PFGE和MLVA技术对43株分离自福建地区的福氏志贺菌进行分子分型,结合流行病学资料分析比较分型效果。结果 43株福氏志贺菌经PFGE分型后相似度在61.70%~100%之间,按照100%的相似水平可分为36个PFGE型,没有优势PFGE型别,分辨系数为0.992 2,存在4个优势簇(G1~G4);福氏志贺菌经MLVA分型后,按照100%的相似水平可分为41个MLVA型别,遗传关联度介于6.207％～100％之间,没有优势MLVA型别,分辨系数为0.997 8,得到5个优势基因群(Cluster1~5)。在最小生成树上,部分F4c与Fx亲缘关系较近,并都由F2a和F1a分支而来,表现出一定的遗传关系。结论 两种分型方法的分辨率基本一致,PFGE分型结果与流行病学背景资料及血清型别基本吻合,MLVA在分析菌株种群进化关系上更具优势。     

2018-2021年南山区食物中毒中肠炎沙门氏菌与布利丹沙门氏菌遗传特征和耐药性分析北大核心CSCD

目的分析2018-2021年南山区食物中毒样品中分离的肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis S.Enteritidis)与布利丹沙门氏菌(Salmonella Blegdam.S.Blegdam),从遗传特征和耐药性角度了解细菌间的亲缘进化关系和耐药特征、为食源性疾病暴发溯源和临床诊治提供参考依据。方法分别对33株沙门氏菌采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)与全基因组序列方法(Whole genome sequencing,WGS)分析,同时测定30种药物的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。结果33株菌分为8个PFGE型别,MLST型均为ST11型。全基因组k-mer系统发生树可见9簇。氨苄西林(AMP)、头孢唑啉(CFZ)、萘啶酸(NAL)、磺胺异噁唑(Sul)4种抗菌药物的检出率较高,均大于50%。20株菌对3类以上的药物耐药(60.60%),属于多重耐药,7株菌产ESBL酶。15株菌的耐药基因与耐药表型完全符合。结论2018-2021年,南山区由沙门氏菌引起的食物中毒事件中,沙门氏菌的总体遗传距离较近,但与数据库中其它肠炎沙门氏菌遗传距离较远,自成一簇。本研究中的沙门氏菌多重耐药现象严重,需加强对多重耐药株的监控及抗菌药物使用的监管。     

肠炎沙门菌食物中毒中PFGE的应用

目的对2014年武汉市某区一起食物中毒事件的病原体进行分离鉴定及同源性分析。方法参照GB4789-2012和WS/T 13-1996的方法进行病原菌的分离培养,对检出菌进行表型鉴定;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对检出菌及实验室收集的其他肠炎沙门氏菌进行分子分型和流行病学特征分析;采用WHO推荐的改良K-B法对检出菌进行抗生素敏感试验结果流行病学调查及实验室病原学检测证实,本起事件是一起由肠炎沙门氏菌引起的食物中毒,共分离到18株肠炎沙门氏菌。分离自该事件可疑食物及患者肛拭子的肠炎沙门氏菌相似系数为100%,与同一时期散发临床患者分离的肠炎沙门氏菌相似系数约为90%,与2012年健康体检分离株及2013年、2014年临床患者分离株最小相似系数>90%。此次食物中毒株对所检测药物敏感性较好。结论此次食物中毒病原菌为本地区流行的肠炎沙门氏菌优势株。PFGE可用于细菌性食物中毒的溯源分析。     

福建省鼠伤寒沙门菌PFGE分子分型和耐药的关联性研究

目的 分析福建省鼠伤寒沙门菌的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型和耐药结果之间的关联性,探讨二者的内在联系。 方法 对福建省66株鼠伤寒沙门菌进行PFGE分子分型和药敏试验,并对分子分型和药敏试验结果进行关联性分析。 结果 66株鼠伤寒沙门菌分为32个PFGE型,P1、P8型为优势型别,其中40.9%（27/66）的菌株为P1型,10.6%（7/66）的菌株为P8型, 51.52%（34/66）的试验菌株归于P1和P8型别;耐药结果经聚类分析,可将抗生素分为4类,其中头孢类和环丙沙星（氟喹诺酮类）是较高敏感药物,敏感率分别为94.42%（61/66）和62.12%（41/66）;P1型在多重耐药严重的菌株中（>6耐）为优势型别,占该类菌株数的56.82%,以6耐为分界,P1型菌株在两组中的分布存在差异,并具有统计学意义;P8型菌株在两组中的分布差异无统计学意义。结论 P1和P8型是福建省鼠伤寒沙门菌的PFGE分型的优势基因型,其中P1型与多重耐药严重的菌株（>6耐）间存在着关联性;头孢类和环丙沙星（氟喹诺酮类）仍是当前治疗福建省严重耐药鼠伤寒菌的主要药物。     

泰安市感染性腹泻非伤寒沙门菌耐药监测及分型研究

目的分离鉴定泰安市腹泻病沙门菌的血清型分布、耐药性及PFGE分子分型和同源性特点。方法对分离自泰安市腹泻病人的粪便标本中的31株沙门菌进行生化鉴定和血清分型,采用微量肉汤稀释法对其进行16种抗生素敏感试验,利用PFGE进行分子分型及聚类分析。结果 31株沙门菌分属于10种血清型,肠炎沙门菌占35.5%(11/31)为优势血清型;31株沙门菌对头孢西丁和亚胺培南100%敏感,对磺胺异唑的耐药率为77.42%(24/31);31株沙门菌按照100%的相似度可分为17个PFGE型。结论药敏显示所检测样本存在较为严重的多重耐药性,肠炎沙门菌遗传变异在该地区相对较为保守,且存在散发流行的可能,提示应做好肠炎沙门菌传染病的早期预警及防控。     

江西省C群脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及PFGE分子特征分析

目的 分析江西省2006-2010年分离的C群脑膜炎奈瑟菌的药物敏感性及分子特征。方法 采用E-test试纸条检测方法对38株C群脑膜炎奈瑟菌菌株进行体外抗菌药物敏感性检测,利用脉冲场凝胶电泳技术(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,PFGE)进行分子特征分析。结果 所有菌株对氯霉素、美洛培南、阿奇霉素、米洛环素、头孢噻肟、头孢曲松和利福平均敏感;15(39.5%)株菌株对青霉素不敏感,18(47.4%)株对氨苄西林不敏感,25(65.8%)株对环丙沙星耐药,23(60.5%)株对左氧氟沙星耐药,11(28.9%)株对复方新诺明不敏感。PFGE分型显示以AH1和AH2型为主,并且同一地区的带型以同一种带型为主。结论 江西省2006-2010年分离C群脑膜炎奈瑟菌株对喹诺酮类药物具有较高的耐药性,还有大部分菌对磺胺类和青霉素类药物也不敏感。PFGE分型特征虽然呈多态性,但是以AH1和AH2型为优势克隆型。     

无锡市腹泻病人沙门菌的病原学特征及分子分型研究

目的分析无锡市腹泻人群中分离的沙门菌的流行特征;同时比较主要血清型菌株间的脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型差异,为沙门菌感染的防控提供实验数据。方法收集2015年无锡市腹泻病人的粪便标本,分别进行沙门菌的分离鉴定、药敏试验、血清型分型以及PFGE分型分析。结果 756份粪便标本中共分离到32株沙门菌,阳性率为4.23%;检出时间主要集中在5~10月份,感染人群以老年人为主。药敏试验说明无锡地区的沙门菌对氨苄西林的耐药率最高,达56.25%;对环丙沙星和头孢他啶的耐药率最低,均为6.25%。32株沙门菌共鉴定出11种血清型,以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,分别占31.25%和21.88%。对这2种血清型的沙门菌进行PFGE分析,显示肠炎沙门菌所有带型的相似度均在85%以上,鼠伤寒沙门菌的带型各不相同。结论无锡市沙门菌的感染具有明显季节和年龄分布差异性,流行的优势血清型为肠炎沙门菌。无锡市需同时加强对食品和环境中沙门菌的监测。     

鸡源肠炎沙门氏菌对抗菌药物的耐药性分析

目的 调查鸡源肠炎沙门氏菌临床分离株耐药特征。方法 从山东省不同来源分离肠炎沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法对菌株进行19种抗菌药物敏感性分析;通过PCR方法对菌株携带的耐药基因进行检测;采用脉冲场凝胶电泳对不同场所分离的菌株进行PFGE分型。结果 肠炎沙门氏菌分离率为17.94%(178株),菌株对氨苄西林耐药率达到68.54%、对四环素耐药率达到66.85%、对磺胺甲恶唑和萘啶酸耐药率达到100%。而对庆大霉素、氯霉素、多粘菌素敏感,耐药率在5.62%以下。68.54%的菌株(122株)携带Ⅰ型整合子、bla_TEM和tetA基因。不同场所分离的肠炎沙门氏菌表现4种PFGE谱型。结论 山东省分离的肠炎沙门氏菌对青霉素类、四环素类药物耐药,携带Ⅰ型整合子、bla_TEM 和tetA耐药基因是导致菌株耐药的主要因素。     

兰州地区腹泻患儿沙门菌耐药性与分子分型分析

目的 了解兰州地区腹泻患儿沙门菌的血清型分布特征,耐药状况及分子分型特征,为儿童沙门菌感染的防治提供依据。方法 2018-2020年收集兰州地区哨点医院腹泻患儿粪便标本中分离的149株沙门菌菌株进行血清学分型、药物敏感试验和脉冲场电泳分型。结果 腹泻患儿感染沙门菌以夏秋季为主,1~3岁幼儿居多,占59.73%。149株沙门菌分为33个血清型,其中肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为优势血清型,分别占30.87%和28.19%。沙门菌对氨苄西林耐药率最高为79.87%,多重耐药率为78.52%,其中鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌多重耐药率分别为80.95%、76.09%。经PFGE分子分型将肠炎沙门菌分为20个带型,包含2株及以上的带型有6种;鼠伤寒沙门菌分为30个带型,ST1带型包含2株菌。结论 兰州市腹泻患儿中沙门菌以非伤寒沙门菌为主,耐药率呈上升趋势,多重耐药严重,肠炎沙门菌PFGE分型同源性较高,鼠伤寒沙门菌带型呈多样性分布。     

2010-2018年安徽省马鞍山市腹泻患者中非伤寒沙门菌的分子分型与耐药性研究

目的 了解马鞍山地区腹泻监测人群非伤寒沙门菌的感染状况、血清学分布、分子分型与耐药性等特征。方法 对2010-2018年腹泻患者中分离的非伤寒沙门菌进行血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药物敏感性试验。结果 从2 998例腹泻患者中检出非伤寒沙门菌腹泻263例(8.8%),其中2例为2种非伤寒沙门菌混合感染;6-7月份非伤寒沙门菌感染率较高,05岁年龄组感染率最高(15.9%)(χ²=72.98,P<0.001);265株非伤寒沙门菌分为36个血清型,优势血清型为阿贡纳沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌;阿贡纳沙门菌的PFGE带型分布较集中,有菌株成簇存在的现象;测试菌株总耐药率为95.6%(66/69),多重耐药率为82.6%(57/69);测试菌株对AMP(79.7%)、STR(75.3%)和Sul(66.6%)耐药率较高,对AMI和AZI 完全敏感;发现2株ESBLs的菌株,均为多重耐药菌株;鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌对不同药物的敏感性有所不同,前者对喹诺酮类药物较敏感,而后者对四环素类药物较敏感。结论 马鞍山地区优势血清型为阿贡纳沙门菌,与其他地区不同。阿贡纳沙门菌有成簇存在的情况,提示有既往暴发的可能。总耐药及多重耐药现象严重,应谨慎用药并加强对病例的耐药监测。     

深圳地区四家医院感染性腹泻来源沙门菌耐药性及分子分型研究

目的分析2012-2016年深圳地区感染性腹泻沙门菌耐药状况及分子型别特征,为沙门菌感染防控提供科学依据。方法收集深圳地区四家医院的137株沙门菌,传统血清学方法鉴定沙门菌血清型,微量肉汤稀释法测定菌株药物敏感性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)对鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌作分子同源性分析。结果 137株沙门菌可分为30种菌型,鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是本地优势菌型。菌株对链霉素、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸钾耐药最为严重,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、大环内酯类抗生素的耐药呈逐年增高的趋势。49株鼠伤寒沙门菌经脉冲场凝胶电泳可获得38种带型,相似度65.5%~100%,TY18为优势带型;27株肠炎沙门菌经脉冲场凝胶电泳可获得9种带型,相似度61.8%~100%,EN7为优势带型。结论感染性腹泻来源沙门菌耐药状况比较严重,菌株PFGE带型多样化,呈高度散发,部分带型与其耐药谱之间具有一定的聚集与关联性。     

深圳市龙岗区鼠伤寒沙门菌耐药性和分子分型研究

目的研究深圳市龙岗区2010~2012年腹泻病人分离株鼠伤寒沙门菌的耐药性和分子分型。方法按国标GB 4789.4-2010对腹泻标本进行分离培养和生化及血清学鉴定,确定为鼠伤寒沙门菌的菌株采用纸片扩散法（K-B法）检测对22种抗生素的敏感性,通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）对菌株进行分子分型,限制性内切酶XbaI为首选酶,AvrⅡ为次选酶,利用BioNumerics软件对酶切电泳图谱进行同源性分析。结果共分离出48株鼠伤寒沙门菌,50%的菌株来自7岁以下儿童患者。60.0%以上的鼠伤寒沙门菌对四环素和氨苄西林耐药。有34株菌株（占70.8%）耐3种及以上药物,耐8~10种药物有11株（占22.9%）,所有菌株对头孢西丁、美罗培南、亚胺培南和左氧氟沙星均敏感,多重耐药株在该区域普遍存在。XbaⅠ酶切分成40个带型,有6个型别,各含2~3株,AvrⅡ二次酶切将其重新分成12个型,其中XAP2、XAP3型2株。结论深圳市龙岗区鼠伤寒沙门菌分离株多重耐药较为严重,婴幼儿是重点防治人群。经PFGE分型鼠伤寒沙门菌菌型较多,说明本地区存在多个不同克隆株。