miR-26a/PTEN在糖尿病小鼠视网膜神经变性中的作用及其机制

目的　探讨 microRNA-26a-5p (miR-26a)/PTEN在早期糖尿病小鼠视网膜神经变性（DRN）中的作用及其机制。方法　66只C57BL/6J小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病动物模型。实验组小鼠造模成功后随机分为糖尿病组和miR-26a组,miR-26a组小鼠玻璃体内注射miR-26a mimic上调视网膜组织中miR-26a的表达。玻璃体内注射2周后所有小鼠用100 g·L^-1水合氯醛腹腔注射麻醉并处死,立即摘除眼球。HE染色及透射电镜分别观察各组小鼠视网膜形态学及超微结构变化,免疫荧光半定量检测并定位PTEN、胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）在小鼠视网膜各层的表达,qRT-PCR测量各组小鼠视网膜中miR-26a、PTEN和GFAP的mRNA表达。结果　糖尿病组小鼠视网膜神经上皮层厚度较对照组变薄,视网膜神经节细胞(RGC)数量减少,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）;视网膜组织中miR-26a mRNA表达下降（P<0.05）,GFAP及PTEN的mRNA表达较对照组小鼠均明显升高（均为 P<0.05）。与糖尿病组小鼠相比,miR-26a组小鼠视网膜全层厚度明显增厚（均为 P<0.05）,RGC丢失减少,视网膜组织中miR-26a mRNA表达升高,而GFAP及PTEN的mRNA表达均降低,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）。结论　miR-26a可能通过下调视网膜组织中PTEN的表达减轻糖尿病小鼠的DRN。     

基于JAK2/STAT3通路分析姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响

目的　探讨姜黄素（CUR）对视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,并通过JAK2/STAT3通路探讨其机制,以期为CUR的临床应用提供理论依据。方法　健康雄性成年Sprague Dawley大鼠36只,随机分为假手术（Sham）组、RIRI组与CUR组,每组各12只。RIRI组和CUR组大鼠右眼采用高眼压法建立RIRI模型,Sham组仅将针头刺入大鼠右眼前房,不升高眼压。CUR组大鼠于建模前30 min腹腔注射CUR（100 mg·kg^-1）,RIRI组和Sham组大鼠腹腔注射等剂量生理盐水。造模后24 h,采用HE染色及免疫组织化学染色法观察各组大鼠视网膜形态及视网膜神经节细胞（RGC）数变化,Iba-1/CD16、Iba-1/Arg1免疫荧光双标法检测CUR对RIRI大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,免疫组织化学结合Western blot检测观察CUR对RIRI大鼠RGC及JAK2/STAT3通路信号分子表达的影响。结果　HE染色及免疫组织化学染色结果显示,Sham组大鼠视网膜细胞排列整齐,神经节细胞层见大量Brn-3a⁺细胞（即RGC）;与Sham组相比,造模后24 h,RIRI组大鼠内层视网膜厚度显著增加、RGC数显著减少,而CUR组大鼠内层视网膜厚度较RIRI组显著变薄,RGC数显著多于RIRI组（均为P<0.05）。免疫荧光双标染色结果显示,RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞（M1型小胶质细胞）数较Sham组显著增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞数显著少于RIRI组,但仍多于Sham组（均为P<0.05）;RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞（M2型胶质细胞）数较Sham组增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞数显著高于RIRI组（均为P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示,与Sham组相比,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均较Sham组增多,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均显著少于RIRI组（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,Sham组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平较低;造模后24 h,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3 蛋白表达显著升高,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量均较RIRI组显著下降,但仍高于Sham组（均为P<0.05）。结论　CUR可调控小胶质细胞由M1型向M2型极化,从而减轻大鼠RIRI,具有神经保护作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路激活有关。     

腺苷A2A受体（A2AR）拮抗剂ZM241385对视网膜脱离动物模型视网膜光感受器细胞的保护作用

目的　探讨腺苷A_2A受体（A_2AR）拮抗剂ZM241385对视网膜脱离（RD）动物模型视网膜光感受器细胞的保护作用。方法　选取健康雄性SPF级C57BL/6J小鼠48只作为研究对象。将实验小鼠随机分为对照+二甲基亚砜（DMSO）组、对照+ZM241385组、RD+DMSO组、RD+ZM241385组,每组12只。RD模型建立后,实验小鼠立即腹腔注射ZM241385（3 mg·kg^-1,剂量不超过0.2 mL）或同体积DMSO,连续给药3 d。采用免疫荧光染色检测视网膜中Müller细胞谷氨酰胺合成酶(GS)的表达,Western blot检测单核细胞趋化蛋白（MCP）-1、肿瘤坏死因子（TNF）-α、Cleaved caspase 3和B细胞淋巴瘤抗体（Bcl）-2的表达。结果　免疫荧光染色结果显示:RD+DMSO组小鼠视网膜Müller细胞GS荧光强度较对照+DMSO组显著降低,而RD+ZM241385组小鼠视网膜Müller细胞GS荧光强度较RD+DMSO组显著升高。RD+DMSO组小鼠视网膜MCP-1、TNF-α蛋白表达水平较对照+DMSO组均显著升高,差异均有统计学意义（均为P<0.001）,而RD+ZM241385组小鼠视网膜MCP-1、TNF-α蛋白表达水平较RD+DMSO组均显著降低,差异均有统计学意义（均为P<0.001）。与对照+DMSO组相比,RD+DMSO组小鼠视网膜Cleaved caspase 3蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降,差异均有统计学意义（均为P<0.001）。而与RD+DMSO组相比,RD+ZM241385组小鼠视网膜Cleaved caspase 3蛋白表达水平显著下降,Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义（均为P<0.001）。结论　A_2AR拮抗剂ZM241385通过促进RD小鼠视网膜Müller细胞GS表达,抑制炎症细胞因子MCP-1、TNF-α的表达,缓解光感受器细胞凋亡。     

玻璃体内注射腺相关病毒介导原纤维蛋白-2基因干扰对小鼠视网膜的影响

目的　探讨玻璃体内注射腺相关病毒（AAV）介导原纤维蛋白-2（FBN2）基因干扰进行基因敲低对小鼠视网膜的影响。方法　54只8周龄C57BL/6J小鼠随机分为3 组:正常对照组、阴性对照组、AAV组。正常对照组小鼠正常饲养,阴性对照组和AAV组小鼠右眼玻璃体内分别注射3 μL阴性病毒或AAV。于注射后2周、3周、4周利用共焦扫描激光检眼镜（SLO）、视网膜电图（ERG）和光学相干断层扫描（OCT）分别检测各组小鼠眼底变化、视功能变化,并测量视网膜外核层（ONL）厚度,同时使用实时荧光定量 PCR（RT-PCR）、ELISA检测各组小鼠视网膜中FBN2 mRNA和蛋白表达水平。结果　SLO检测结果显示,AAV组小鼠玻璃体内注射后2周视网膜开始出现黄白色沉积物,并保持至实验结束。OCT检测结果显示,AAV组小鼠出现视网膜色素上皮层光带不规则、点状高密度反射区;注射后2周、3周、4周,AAV组小鼠视网膜ONL厚度均明显小于阴性对照组和正常对照组（均为P<0.05）。ERG检测结果显示,注射后2周、3周、4周与阴性对照组和正常对照组比较,AAV组小鼠视网膜Rod-b、Max-a波振幅均明显变小（均为P<0.05）。RT-PCR、ELISA检测结果显示,注射后2周、3周、4周与阴性对照组和正常对照组比较,AAV组小鼠视网膜中FBN2 mRNA和蛋白表达均明显降低（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射AAV介导FBN2基因干扰进行基因敲低可以引发小鼠视网膜病变。     

miR-22-3p对蓝光暴露下大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

目的　探讨miR-22-3p对蓝光暴露下的大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及机制。方法　取36只清洁级SD大鼠, 将12只SD大鼠随机分为2组:对照组与蓝光暴露组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养;蓝光暴露组大鼠先进行暗适应24 h,随后采用复方托吡卡胺散瞳,将大鼠暴露在蓝光（光照强度1500 lux）下2 h;另取24只大鼠随机分为4组:对照组、蓝光暴露组、AAV-miR22组、AAV-miR22&PTEN组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养,其余3组均接受蓝光暴露处理,AAV-miR22组注射1 μL含 2.5×10⁹ vg(基因组拷贝数)的AAV-7m8-miR-22-3p,AAV-miR22&PTEN组注射1 μL含2.5×10⁹ vg的AAV-7m8-miR-22-3p&PTEN,对照组与蓝光暴露组向大鼠玻璃体内注射1 μL生理盐水,注射结束使用氧氟沙星眼膏预防感染。取大鼠眼球组织行HE染色,在光学显微镜下观察检测神经节细胞层（GCL）、GCL至外核层 (ONL)的厚度,其中包含有内丛状层（IPL）、内核层(INL)、外丛状层（OPL）;采用NeuN免疫荧光组织化学染色标记RGC,计数视网膜上NeuN标记的阳性细胞数;TUNEL染色检测细胞凋亡;采用Lipofectamine 2000转染试剂盒转染阴性对照、miR-22-3p mimic、miR-22-3p inhibitor至RGC-5细胞,转染48 h后测定miR-22-3p表达量,转染成功即可采用Western blot检测PTEN蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR检测miR-22-3p表达,Western blot检测PTEN、p-Akt、Akt与Nrf2蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验在酶标仪上测定荧光素酶活性。结果　HE染色结果证实:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织萎缩,视网膜GCL、GCL至ONL厚度变薄（P<0.05）。另外,NeuN免疫荧光组织化学染色发现:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织RGC数减少（P<0.05）。实时荧光定量PCR实验结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内miR-22-3p相对表达量降低（P<0.05）。Western blot检测结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内PTEN蛋白的表达水平升高,Nrf2蛋白的表达水平和p-Akt/Akt蛋白表达比值均降低（均为P<0.05）;miR-22-3p能够负向调控PTEN蛋白在RGC内的表达水平（P<0.05）。HE染色结果显示:过表达miR-22-3p能够缓解蓝光诱导的大鼠视网膜萎缩,并且能够提高大鼠视网膜GCL、GCL至ONL厚度。NeuN免疫荧光组织化学染色结果证实:过表达miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN表达提高蓝光暴露大鼠视网膜上RGC数。TUNEL实验结果证实:miR-22-3p能够通过抑制PTEN表达缓解蓝光诱导的大鼠视网膜RGC凋亡。结论　miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN的表达,激活PI3K/Akt/Nrf2通路,缓解蓝光诱导的大鼠RGC凋亡。     

过表达TBK1通过调控RIPK1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨TANK结合激酶1（TBK1）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的作用机制。方法　按60 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素制备糖尿病模型。模型制备完成后,随机分成三组:糖尿病(DM)组、TBK1过表达(TBK1-OE)组 (大鼠玻璃体内单次注射TBK1过表达慢病毒载体5 μL,病毒滴度为 1.0×10⁹ IU·mL^-1)、TBK1空载体(TBK1-NC)组(玻璃体内注射等剂量病毒包装的阴性对照液),另取正常大鼠作为对照(CON)组,每组15只。12周后,免疫荧光染色检测大鼠视网膜TBK1蛋白表达定位,Hoechst 33342染色检测大鼠视网膜RGC凋亡,ELISA检测大鼠视网膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,Western blot检测大鼠视网膜TBK1、受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、Caspase-3蛋白相对表达量。结果　TBK1在大鼠RGC中特异表达。与CON组相比,DM组、TBK1-NC组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,TBK1蛋白相对表达量均明显降低(均为P<0.01);TBK1-OE组各指标均增加（均为P<0.01);而与DM组相比,TBK1-OE 组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,TBK1蛋白相对表达量明显增加(均为P<0.01)。而DM组与TBK1-NC组大鼠之间RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,TBK1、RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论　过表达TBK1对糖尿病大鼠RGC凋亡具有抑制作用,其机制与阻断RIPK1信号通路激活有关。     

GDNF家族成员artemin在大鼠视网膜神经节细胞中的表达及其功能

目的观察胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）家族成员artemin在正常大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）中的分布、表达及其功能。方法体外培养出生1～3d SD乳鼠的视网膜神经上皮细胞,免疫荧光染色检测RGCs中artemin的定位及表达,实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）对RGCs中artemin进行定量检测。并用40mmol／L葡萄糖处理细胞12h后,再进行上述检测,观察高糖对于RGCs中artemin表达的影响。结果免疫荧光的结果证实了培养的RGCs出现Thy1．1抗体阳性的红色荧光,且多重荧光标记显示RGCs同时存在显示绿色荧光的artelnin抗体和红色荧光的Thy1．1抗体,表明artemin在RGCs中有分布。正常对照组中Thy1．1抗体阳性的细胞为（442±9）个／高倍视野,而40mmol／L高糖培养组中为（263±7）个／高倍视野,差异有统计学意义（P〈0．05）。Real—time PCR对大鼠RGCs中artemin的mRNA水平进行定量分析,40mmol／L葡萄糖处理视网膜神经细胞12h后,artemin在视网膜神经细胞及RGCs的表达明显下降（P〈0．05）。结论研究发现在原代培养的大鼠视网膜神经细胞及RGCs巾均有artemin的表达,并且在高糖作用下表达下降,为进一步研究artemin对受损RGCs的保护作用提供了思路。     

金雀异黄酮对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨金雀异黄酮（GEN）对大鼠视网膜缺血-再灌注（I/R）损伤的保护作用。方法　选取30只健康SPF级大鼠，按照随机数字表法将其分为假手术组、I/R组和I/R+GEN组，每组各10只。I/R组和I/R+GEN组大鼠采用前房灌注生理盐水升高眼压法制备视网膜I/R损伤大鼠模型，I/R组大鼠术后每天给予注射生理盐水（1 mL·kg^-1·d^-1）；I/R+GEN组大鼠术后每天给予注射GEN （40 mL·kg^-1·d^-1）；假手术组大鼠行相应假手术后每天予以注射生理盐水（1 mL·kg^-1·d^-1），连续7 d后，颈椎脱臼法处死各组大鼠，取眼部组织。HE染色观察各组大鼠视网膜的形态以及内丛状层（IPL）、内核层（INL）和神经节细胞层（GCL）厚度；免疫荧光分析观察各组大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的存活率；TUNEL染色检测各组大鼠视网膜细胞凋亡水平；检测各组大鼠视网膜组织中过氧化氢酶（CAT）、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平以反映视网膜氧化应激状态；Western blot分析三组大鼠视网膜中NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达。结果　I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜总厚度分别为(114.37±7.32）μm、（155.31±6.83）μm和（178.98±13.65）μm（t=14.284，P<0.01），I/R组低于假手术组和I/R+GEN组，差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（18.95±5.06）μm、（17.62±4.69）μm和（19.03±4.74）μm，I/R+GEN组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（20.69±8.13）μm、（25.74±6.78）μm和（26.71±7.85）μm，假手术组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（11.73±3.15）μm、（11.97±3.56）μm和（12.59±3.24）μm（均为P<0.05），I/R组与假手术组和I/R+GEN组三个指标比较差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜中RGC相对存活率分别为（26.87±3.12）%、（73.46±7.80）% 和（100.00±5.64）%（t=16.825，P<0.01），I/R组RGC相对存活率低于假手术组和I/R+GEN组，差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜中CAT、MDA、SOD含量总体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01），I/R组与I/R+GEN组和假手术组三个指标比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示，三组大鼠视网膜中NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达总体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01），组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　GEN可通过提高视网膜细胞抗炎和抗氧化能力抑制视网膜细胞凋亡，从而起到对大鼠视网膜I/R损伤的保护作用。     

急性视网膜缺血再灌注损伤后大鼠视网膜副凋亡和自噬的发生

目的　探讨大鼠急性视网膜缺血再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）后不同时间点视网膜中副凋亡及自噬的发生。方法　将30只健康成年SD雄性大鼠随机分为RIRI组及正常对照组。利用高眼压前房灌注法建立SD大鼠急性RIRI动物模型。正常对照组不做任何处理。急性RIRI后1 d、3 d、7 d、28 d各时间点取各组大鼠的视网膜组织,利用透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）检测视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）副凋亡及自噬的发生;利用免疫荧光染色法检测视网膜微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3）的表达。结果　急性RIRI后1 d持续至28 d,TEM可见RGCs细胞质空泡数量较正常对照组增高。急性RIRI后1 d持续至28 d,TEM可见RGCs细胞质中自噬体数量增加。正常对照组RGCs的细胞质中自噬体每50 μm²平均为0.79个,急性RIRI后7 d自噬体的平均数量达到高峰,每50 μm²平均为2.29个,与正常对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光法检测发现,与正常对照组相比,急性RIRI后1 d开始,RGCs的细胞质中LC3表达增加,并在整个实验期间持续高表达,正常对照组RGCs层的LC3阳性细胞百分比为15.90%,急性RIRI后1 d、28 d时LC3阳性细胞百分比分别为46.95%和52.30%,与正常对照组相比差异均具有统计学意义（均为P<0.05）。结论　急性RIRI后RGCs涉及副凋亡和自噬的激活,各种类型的程序性细胞死亡可作为单一细胞死亡的形式或多种细胞死亡形式共存,参与急性RIRI视网膜损伤。     

双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠血液流变学和视网膜微血管的影响

目的　探讨双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠血液流变学和视网膜微血管的影响。方法　取SPF级雄性SD大鼠72只,将大鼠随机分为6组:正常组、模型组、对照组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组12只。正常组和模型组大鼠给予生理盐水,对照组大鼠给予羟苯磺酸钙（等效给药浓度为5.8 mg·kg^-1）,高、中、低剂量组大鼠分别给予不同剂量的双丹明目胶囊（22.4 g·kg^-1、11.2 g·kg^-1、5.6 g·kg^-1）,分别是临床等效剂量的2.0倍、1.0倍、0.5倍,各组均按10 mL·kg^-1剂量灌胃。每周观察大鼠一次,连续12周,检测或量化相关指标。血液流变学指标包括全血黏度（WBV）、血浆黏度（PV）、红细胞沉降率（ESR）、红细胞压积（HCT）、纤维蛋白原含量（FIB）。对各个时期SD大鼠眼底图片通过海德堡共聚焦激光造影仪自带软件进行分析,对大鼠眼底视网膜动脉、静脉血管管径和视网膜微血管荧光素渗漏面积进行量化。结果　连续灌胃12周后,与模型组相比,对照组和高剂量组大鼠WBV、PV、ESR、HCT、FIB均降低（均为P<0.05）,中剂量组HCT也降低（P<0.01）;与高剂量组相比,低剂量组大鼠WBV、PV、ESR、HCT、FIB均升高,中剂量组大鼠除HCT外,各项指标亦均升高（均为P<0.01）。造模成功后,与正常组比较,其他各组大鼠视网膜动脉血管管径均变细,静脉血管管径均增粗（均为P<0.05）。干预12周后,高剂量组大鼠视网膜动脉血管管径接近正常组,静脉血管管径仍然变粗（均为P<0.05）;其他各组大鼠视网膜动脉血管管径普遍变细,静脉血管管径迂曲扩张（均为P<0.05）。与模型组相比,对照组和高剂量组大鼠视网膜微血管荧光素渗漏面积减小（均为P<0.01）;与对照组和高剂量组相比,中剂量组、低剂量组大鼠视网膜微血管荧光素渗漏面积均增大（均为P<0.01）。结论　双丹明目胶囊可以改善DR大鼠血液流变学状态,扩张视网膜动脉,改善视网膜血供,减少视网膜微血管荧光素渗漏面积。     

甲酰肽受体Fpr2在氧诱导视网膜病变小鼠新生血管形成中的作用及相关机制研究

目的 探讨甲酰肽受体Fpr2在氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠中对胶质细胞改变的影响,并探讨其在新生血管形成中的作用及机制.方法 将新生C57BL/6J小鼠、Fpr2-/-小鼠分别诱导建立OIR模型后分为氧诱导组和Fpr2-/-氧诱导组.正常对照组和Fpr2-/-组小鼠正常环境饲养.收集各组小鼠视网膜组织并制作成冰冻切片...     

高良姜素对青光眼大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 研究高良姜素对青光眼大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法 取48只SD大鼠随机分为对照组、对照+高良姜素组、高眼压组和高眼压+高良姜素组,每组12只(12眼)。对照+高良姜素组和高眼压+高良姜素组大鼠接受高良姜素滴眼液治疗,对照组和高眼压组大鼠则接受相同剂量二甲基亚砜溶剂滴眼。于造模后第0～28天监测大鼠眼压,并于造模后第28天处死大鼠,收集各组大鼠右眼球,并采用HE染色观察大鼠视网膜形态变化,采用免疫组织化学染色分析各组大鼠视网膜中GFAP、Toll样受体4(TLR4)和NOD样受体3(NLRP3)表达。从4只4 d龄大鼠视网膜中分离RGC,分为空白组、光气组和CoCl₂+高良姜素组。光气组和光气+高良姜素组RGC与200μmol·L^-1 CoCl₂一起孵育48 h,光气+高良姜素组RGC中加入20μmol·L^-1高良姜素干预48 h。收集各组细胞,采用流式细胞术和Western blot检测RGC的凋亡率及相关蛋白的相对表达情况,并采用ELISA检测空白组、光气组和光气+高良姜素...     

circRNA＿0051079通过靶向miR-26a-5p/PTEN轴诱导视网膜神经变性的分子机制

目的 探讨circ＿0051079对缺血/再灌注(I/R)损伤诱导的视网膜神经变性的影响及机制。方法 从C57BL/6J乳鼠眼球中分离视网膜神经节细胞(RGC),随机分为对照组、siRNA组(转染阴性siRNA)、si＿circ＿0051079组(转染si-circ-0051079干扰RNA)、模拟物对照组(转染Scr mimic)、miR-26a-5p组(转染miR-26a-5p mimic)、miR-26a-5p+vector组(转染pcDNA 3.1)、miR-26a-5p+PTEN组(转染pcDNA 3.1-PTEN),分别在正常、缺氧(体积分数1%O₂暴露)或氧化应激(50μmol·L^-1H₂O₂暴露)条件下培养24 h,进行RT-qPCR、CCK-8、TUNEL、RNA免疫沉淀(RIP)等检测。于15只C57BL/6小鼠左眼中建立I/R损伤模型,对侧眼保持正常眼压作为对照,I/R损伤后0 d、3 d和7 d各取5只小鼠收集视网膜检测circ＿0051079表达。另取20只C57BL/6小...     

miR-155-5p/SOCS1在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的 探讨miR-155-5p/细胞因子信号转导抑制物1(SOCS1)在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用及典必殊能否抑制miR-155-5p/SOCS1 通路延缓排斥反应.方法 建立大鼠角膜移植模型,随机分为对照组、自体移植组、同种异体移植组、同种异体移植+典必殊组(典必殊组).术后每天按Larkin 法行角膜植片排斥...     

褪黑素联合锌对H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨褪黑素（MT）联合锌（Zn）对H₂O₂诱导的人视网膜色素上皮（ARPE）细胞氧化损伤的保护作用。方法　常规培养ARPE细胞株（ARPE-19）,利用不同浓度H₂O₂处理ARPE-19细胞,将细胞存活率接近50%的H₂O₂浓度作为氧化损伤浓度。将ARPE-19细胞分为:不同浓度MT（10^-5 mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-7mol·L^-1）+ZnCl₂（15 μmol·L^-1）组,ZnCl₂组（采用15 μmol·L^-1 ZnCl₂培养细胞）,H₂O₂组（不添加MT和ZnCl₂培养细胞）,空白对照组（细胞不做任何处理）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用试剂盒测量各组细胞内活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）的含量。ELISA检测各组细胞内白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达量。结果　当H₂O₂浓度为300 μmol·L^-1时,细胞存活率为(54.31±1.91)%,此时细胞存活率接近50%,后续实验中均选择该浓度作为氧化损伤浓度。ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞凋亡率分别为3.05%、1.17%、1.50%、1.71%,与空白对照组（0）相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.76倍、1.59倍、1.41倍,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.13倍和1.25倍,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组细胞内MDA的含量较空白对照组显著提高 （P<0.05）;ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内MDA的含量均较空白对照组稍增加,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1MT+ZnCl₂组和10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均略高于空白对照组,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　MT联合Zn能有效降低H₂O₂损伤所致ARPE-19细胞内ROS的含量,随之减少细胞内MDA的含量,同时也能抑制IL-6和TNF-α的表达量,从而起到保护RPE细胞的作用。     

葡萄籽原花青素调控NLRP3/Caspase-1通路介导的焦亡途径对糖尿病视网膜病变大鼠的保护作用

目的　探讨葡萄籽原花青素调控NLRP3/Caspase-1通路介导的焦亡途径对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠的保护作用。方法　建立DR大鼠模型，随机分为模型组、葡萄籽原花青素组、VX-765组、葡萄籽原花青素+VX-765组（每组各12只），另取12只大鼠为对照组，药物干预14 d，HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理学变化；TUNEL染色检测各组大鼠视网膜神经节细胞（RGC）焦亡情况；采用试剂盒测定各组大鼠视网膜组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）及血清中炎症因子糖基化终末产物（AGEs）、白细胞介素（IL）-1β与IL-18水平；Western blot检测各组大鼠视网膜组织NLRP3/Caspase-1通路蛋白表达水平。结果　与对照组相比，模型组大鼠视网膜组织明显变薄，结构疏松，细胞结构层次紊乱、排列不规则，RGC变少、稀疏，呈现严重病理损伤变化，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β、IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均显著升高（均为P<0.05），SOD与CAT水平均显著降低（均为P<0.05）。与模型组相比，葡萄籽原花青素组、VX-765组大鼠视网膜组织形态结构得到恢复，病理损伤均有不同程度减轻，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β与IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均降低（均为P<0.05），SOD与CAT水平均升高（均为P<0.05）。与葡萄籽原花青素组及VX-765组分别相比，葡萄籽原花青素+VX-765组大鼠视网膜组织病理损伤进一步减轻，形态结构几乎恢复正常，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β与IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均降低（均为P<0.05），SOD与CAT水平均升高（均为P<0.05）。结论　葡萄籽原花青素可以抑制炎症发生发展，增强DR大鼠抗氧化活性，减轻过氧化反应，缓解视网膜组织病理学损伤，减少RGC焦亡，可能是通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。     

巩膜上静脉烙闭法建立大鼠高眼压模型对视网膜微观结构的影响

目的　观察巩膜上静脉烙闭法建立的大鼠高眼压模型对视网膜微观结构的影响，为青光眼视神经损伤及保护机制提供研究基础。方法　选取不同体质量SD大鼠40只，分为A组（150~200 g）、B组（>200~250 g）、C组（>250~300 g）、D组（>300~350 g），每组各10只，分别测量3 d白天及夜间基线眼压。随机选取SD大鼠（雌雄随机，250~300 g）40只，术前测量3 d基线眼压，以右眼为实验眼，烙闭实验眼3~4支巩膜上静脉，以左眼为对照眼，于术后即刻、1~7 d、14 d、21 d、28 d分别测量实验眼和对照眼眼压。于术前及术后28 d分别用光学相干断层扫描(optical coherence tomography，OCT)仪测量视网膜厚度。于术后28 d处死大鼠，行石蜡包埋、苏木精伊红（hematoxylin eosin，HE）染色，计数视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）并测量视网膜厚度。结果　不同体质量大鼠昼夜眼压比较差异均有统计学意义（均为P<0.001）。A组大鼠眼压较其他3组眼压低（均为P<0.05）。巩膜上静脉烙闭术后即刻实验眼眼压达到峰值，较对照眼高122%（P<0.001），之后缓慢下降，到术后14 d、21 d实验眼眼压较对照眼分别升高约41%、20%（均为P<0.001），到术后28 d实验眼与对照眼眼压差异无统计学意义（P>0.05）。OCT提示内层视网膜变薄（均为P<0.001）。HE染色切片结果提示RGCs数量减少，内、中、外层视网膜均变薄（均为P<0.05），且以内层变化最明显（P<0.001）。结论　大鼠基线眼压昼夜存在差异，白天眼压较夜间眼压低，低体质量（150~200 g）大鼠眼压偏低。烙闭大鼠巩膜上静脉能维持3周的眼压升高，且能使视网膜变薄、RGCs数量减少，故巩膜上静脉烙闭法是建立大鼠高眼压模型的有效方法。