肾移植急性排斥受者外周血OX40 mRNA和Th1的变化及意义

目的 探讨外周血单个核细胞 OX40 mRNA和外周血 CD3+CD8- T辅助细胞（Th）1、Th2检测用于评估肾移植术后急性排斥的应用价值。方法 收集 2016年 1月—2017年 1月天津市第一中心医院器官移植中心行肾移植手术的 40例肾移植受者及 20名健康志愿者纳入研究,肾移植受者分为急性排斥组 20例和肾功能稳定组 20例。应用TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR)定量检测 3组外周血单个核细胞（PBMCs）中 OX40 mRNA水平,应用流式细胞术检测外周血 CD3+CD8-T淋巴细胞中 IFN-γ（Th1）和 IL-4（Th2）表达率。ROC曲线评价 OX40和 Th1对预 测急性排斥的诊断价值。结果 肾移植术后急性排斥组 PBMCs 中 OX40 mRNA水平明显高于肾功能稳定组以及健康对照组（P＜0.01）,肾功能稳定组 PBMCs 中 OX40 mRNA水平与健康对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。急性排斥组 Th1 表达率明显高于肾功能稳定组和正常对照组（P＜0.01）,3 组 Th2 表达率差异无统计学意义（P＞0.05）。OX40 mRNA 诊断急性排斥反应的 ROC 曲线下面积（AUC）为 0.903（95%CI：0.825~0.980）;Th1 的 AUC 为 0.731（95%CI：0.587~0.874）;两者联合诊断的 AUC 为 0.930（95%CI：0.859~1.001）。结论 监测肾移植受者外周血 OX40mRNA及 Th1细胞可以预测急性排斥反应。     

哮喘患者外周血T细胞OX40及血清sOX40L的表达和临床意义

目的 探讨支气管哮喘患者外周血T细胞OX40及血清可溶性OX40配体(sOX40L)的表达及意义.方法 流式细胞术检测65例支气管哮喘患者(发作期哮喘、缓解期哮喘)及30例健康志愿者(对照组)外周血T细胞表面OX40的表达水平,ELISA检测血清sOX40L的表达量,并测定用力1秒呼气率(FEV1％)、呼出气一氧化氮(FeNO)、外周血嗜酸性粒细胞(EOS)计数、总免疫球蛋白E(IgE)及哮喘控制测试问卷(ACT)评分.结果 发作期哮喘组患者外周血CD4+T细胞上OX40表达水平及血清sOX40L含量均显著高于缓解期患者和对照组(P＜0.05).相关分析显示,发作期哮喘组OX40表达与FeNO表达、EOS和IgE呈正相关;血清sOX40L表达与FeNO和EOS呈正相关,与FEV1％呈负相关.结论 OX40及血清sOX40L在哮喘患者外周血中异常增加,可作为反映支气管哮喘的炎性浸润程度和疾病严重程度的生物学指标.     

NFATc1与OX40-OX40L在ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化中的表达及意义

目的 探讨活化T细胞核因子c1(NFATc1)与OX40-OX40配体(OX40L)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)中的表达及意义.方法 选取16只ApoE-/-小鼠作为手术组,应用颈动脉硅胶圈植入法快速制作斑块模型;另选16只C57BL/6J小鼠作为对照组.免疫组化检测颈动脉粥样斑块中NFATc1表达,RT-PCR和流式细胞术分别检测淋巴细胞NFATc1、OX40及OX40L mRNA和蛋白表达.结果 NFATc1在手术组颈动脉斑块中显著表达,而在对照组中不表达;手术组NFATc1、OX40、OX40L mRNA和蛋白表达均明显高于对照组(P＜0.01);ApoE-/-小鼠NFATc1与OX40、OX40L表达均呈正相关(r分别为0.938、0.964,P＜0.01).结论 NFATc1与OX40-OX40L在AS发生发展中发挥着重要作用,NFATc1可能是受OX40-OX40L调控的下游分子.     

药物流产出血模型小鼠雌、孕激素水平与Th17/Treg亚群的关系#br#

摘要：目的　研究药物流产出血模型小鼠的雌、孕激素水平与Th17/Treg亚群的关系。方法　选取清洁级Balb/c雌性小鼠32只,通过随机数字表法分为正常妊娠组（A组）、小剂量米非司酮组（B组）、大剂量米非司酮组（C组）、米非司酮+宫清颗粒组（D组）,每组8只。B、C、D组小鼠于妊娠第6天时分别使用米非司酮0.88 mg·kg-1·d-1、1.5 mg·kg-1·d-1及米非司酮（1.5 mg·kg-1·d-1）+宫清颗粒组（308.16 mg·kg-1·d-1）灌胃。采用改良碱性正铁血红素法检测子宫出血量;采用放射免疫法检测血清雌二醇（E2）、孕酮（P）水平;采用流式细胞术双染色法检测子宫组织Th17（CD3+CD4+IL-17A+）、Treg（CD4+CD25+Foxp3+）及Th17/Treg亚群比值;采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测子宫组织白细胞介素（IL）-17A、IL-10、转化生长因子（TGF）-β mRNA水平。结果　B、C、D组子宫出血量依次减少。药物流产后,A、B、C、D组小鼠E2水平依次升高,而P水平依次降低。Th17亚群依次升高,Treg亚群依次降低,Th17/Treg亚群比值依次升高（均P＜0.05）。IL-17A mRNA相对表达量依次升高,而IL-10、TGF-β mRNA相对表达量依次降低（均P＜0.05）。血清E2与Th17、Th17/Treg和IL-17A水平呈正相关,与Treg、IL-10和TGF-β水平呈负相关;血清P与Treg、IL-10和TGF-β水平呈正相关,与Th17、Th17/Treg和IL-17A水平呈负相关（均P＜0.05）。结论　药物流产后的异常子宫出血血清E2、P水平变化与Th17/Treg亚群比值变化关系密切,诱导Th17/Treg亚群向Th17偏移有助于减少子宫出血。     

OX40和OX40L在胃癌及癌前病变中的表达分析

目的研究Oxford 40（OX40）和OX40配体（OX40L）在胃癌及癌前病变中的表达及其意义。方法收集复旦大学附属中山医院内镜中心胃部内镜黏膜下剥离术标本43例,分为慢性非萎缩性胃炎、胃黏膜上皮轻中度不典型增生、胃黏膜上皮重度不典型增生或胃癌3组,采用EnVision二步法检测各种病变中OX40、OX40L的实质细胞表达,并分析其与病变临床病理特征的关系。结果 OX40的实质细胞表达在胃黏膜上皮重度不典型增生中较胃癌、胃黏膜上皮轻中度不典型增生、慢性非萎缩性胃炎中高（P〈0.05）。OX40L的实质细胞表达在胃黏膜上皮轻中度不典型增生、胃黏膜上皮重度不典型增生或胃癌中较慢性非萎缩性胃炎中高（P〈0.05）。结论 OX40、OX40L参与机体抗不典型增生和抗肿瘤免疫反应,其表达的变化可能与胃癌的发生、发展有关。     

OX40-OX40L相互作用对C57BL/6小鼠淋巴细胞活性的影响

目的探讨OX40-OX40L相互作用对C57BL/6小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子表达的影响。方法应用MTT法检测小鼠淋巴细胞增殖;ELISA法检测淋巴细胞表达细胞因子IL-4、IL-2及INF-γ表达。结果与对照组比较,Anti-OX40特异性刺激OX40-OX40L轴后,小鼠淋巴细胞增殖增强,分泌IL-2和INF-γ含量明显增加,48h细胞增殖最佳;IL-4含量无明显变化。应用特异性anti-OX40L抗体阻断OX40-OX40L轴后,淋巴细胞增殖及分泌细胞因子IL-2和INF-γ含量明显受到抑制。结论 OX40-OX40L相互作用能够调控C57BL/6小鼠脾淋巴细胞增殖及促炎性细胞因子表达。     

激活血管平滑肌细胞OX40-OX40L系统对其增殖及迁移能力的影响

目的 研究OX40-OX40L轴的激活对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移能力的影响.方法 原代培养大鼠主动脉VSMC并传代,培养液中添加OX40L(0、0.1、1、10或20 mg/L)刺激24 h,或在培养基中加入选定浓度OX40L 10 mg/L,刺激6、12、24、36、48 h.以CCK-8法测定VSMC增殖率,以划痕法测定VSMC迁移率.结果 在OX40L浓度从0～20 mg/L范围内,刺激24 h后,VSMC的增殖、迁移能力的增强与OX40L浓度呈剂量依赖性,并明显大于OX40L 0 mg/L组(P＜0.05).OX40L浓度达到10 mg/L时,VSMC的增殖、迁移能力已接近最大值.应用10 mg/L的OX40L刺激不同时间(6、12、24、36、48 h)后,发现随着刺激时间的延长,VSMC增殖、迁移能力逐渐增强;刺激至24 h,VSMC增殖能力达到最大值.结论 OX40-OX40L轴的激活可能通过促进VSMC的增殖及迁移影响动脉粥样斑块的进展.     

OX40Ig修饰大鼠脂肪间充质干细胞的实验研究

目的 构建含OX40融合蛋白（OX40Ig）基因修饰的大鼠脂肪间充质干细胞（ADSCs）即ADSCsOX40Ig,探讨其 在体外对淋巴细胞的免疫调节作用。方法 构建pcDNA3.1（+）/OX40Ig融合基因表达载体,采用核转染技术转染大 鼠ADSCs,Western blot检测ADSCs中OX40Ig表达水平。ADSCs与大鼠异基因淋巴细胞共培养后分为对照组（反应 细胞+刺激细胞）、ADSCs组（反应细胞+刺激细胞+ADSCs）及ADSCsOX40Ig组（反应细胞+刺激细胞+ADSCsOX40Ig）,MTT法 检测淋巴细胞增殖抑制率,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测淋巴细胞内干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-10及 转化生长因子（TGF）-β mRNA表达。结果 经测序鉴定验证,pcDNA3.1（+）/OX40Ig质粒构建成功,转染ADSCs后 OX40Ig蛋白呈高表达;与ADSCs组比较,ADSCsOX40Ig显著增强异基因淋巴细胞增殖抑制率（P＜0.05）;对照组、ADSCs 组及 ADSCsOX40Ig组的 IFN-γ mRNA 相对表达水平依次降低,而 IL-10、TGF-β mRNA 相对表达水平依次升高（P＜ 0.05）。结论 ADSCsOX40Ig较单纯ADSCs能更好地发挥对异基因淋巴细胞的免疫调节作用。     

蛇床子素调控JAK2/STAT3通路对毛细支气管炎模型小鼠Th1/Th2失衡的影响

目的 探究蛇床子素对毛细支气管炎小鼠模型中Th1/Th2细胞比例失衡的影响及可能的作用机制。方法 用呼吸道合胞病毒（RSV）滴鼻法构建毛细支气管炎小鼠模型。将60只SPF级雄性BALB/c小鼠（6～8周龄）随机为5组：对照组,模型组,Cuc组,蛇床子素组和蛇床子素+Cuc组,每组12只。Cuc组腹腔注射1 mg·kg^-1 Cucurbitacin I,蛇床子素组给予80 mg·kg^-1蛇床子素灌胃,蛇床子素+Cuc组给予80 mg·kg^-1蛇床子素灌胃的同时腹腔注射1 mg·kg^-1 Cucurbitacin I,正常组和模型组均给予0.5%CMC-Na灌胃和等量生理盐水腹腔注射,每天1次,连续7 d。用流式细胞仪检测外周血Th1/Th2细胞比例;用酶联免疫吸附测定法检测肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素（IL）-2、干扰素γ（IFN-γ）、IL-4、IL-13水平;计算各组小鼠的胸腺、脾指数;蛋白质印迹法检测肺组织Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活因子3（STAT3）通路相关蛋白的表...     

急性冠脉综合征患者血清TNF受体-配体家族高表达的临床意义

目的 探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清可溶性肿瘤坏死因子(TNF)受体-配体家族CD40L、OX40L及CD137水平变化的临床意义.方法 ELISA法检测稳定型心绞痛组(SA组,50例)、不稳定心绞痛组(UA组,50例)、急性心肌梗死组(AMI组,80例)患者和正常对照组(C组,40例)的血清可溶性CD40L、OX40L及CD137水平.结果 UA组血清CD40L为(18.6±4.7)ng/ml,OX40L为(22.5±4.3)ng/ml,CD137为(27.8±7.1)ng/ml;AMI组血清CD40L为(20.7±5.2)ng/ml,OX40L为(24.2±4.6) ng/ml,CD137为(30.2±6.5) ng/ml.两组上述三项指标均明显高于SA组的(6.6±2.1) ng/ml、(9.5±2.5) ng/ml和(7.2±2.3)ng/ml和C组的(7.0±2.2)ng/ml、(9.1±2.4) ng/ml和(7.3±2.4)ng/ml(P＜0.05).ACS患者血清CD40L、OX40L及CD137水平与心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平及冠脉复杂狭窄显著相关.结论 血清CD40L、OX40L及CD137水平升高是冠脉斑块不稳定的活动性标志物.     

Therapeutic strategies for the costimulatory molecule OX40 in T-cell-mediated immunity

The T cell co-stimulatory molecule OX40 and its cognate ligand OX40L have attracted broad research interest as a therapeutic target in T cell-mediated diseases. Accumulating preclinical evidence highlights the therapeutic efficacy of both agonist and blockade of the OX40–OX40L interaction. Despite this progress, many questions about the immuno-modulator roles of OX40 on T cell function remain unanswered. In this review we summarize the impact of the OX40–OX40L interaction on T cell subsets, including Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg, Tfh, and CD8⁺ T cells, to gain a comprehensive understanding of anti-OX40 mAb-based therapies. The potential therapeutic application of the OX40–OX40L interaction in autoimmunity diseases and cancer immunotherapy are further discussed; OX40–OX40L blockade may ameliorate autoantigen-specific T cell responses and reduce immune activity in autoimmunity diseases. We also explore the rationale of targeting OX40–OX40L interactions in cancer immunotherapy. Ligation of OX40 with targeted agonist anti-OX40 mAbs conveys activating signals to T cells. When combined with other therapeutic treatments, such as anti-PD-1 or anti-CTLA-4 blockade, cytokines, chemotherapy, or radiotherapy, the anti-tumor activity of agonist anti-OX40 treatment will be further enhanced. These data collectively suggest great potential for OX40-mediated therapies.     

支气管哮喘患者外周血Th1、Th2与Th17细胞表达水平及临床意义

目的 探讨外周血Th1、Th2与Th17细胞在支气管哮喘患者中的表达水平及临床意义.方法 选取2015年1月-2016年2月诊治的支气管哮喘40例,均为急性发作期,治疗1周后为缓解期,选取同期健康人40例作为对照组.检测支气管哮喘急性发作期、缓解期和对照组外周血Th1、Th2与Th17细胞水平,观察外周血中干扰素(IFN)-白介素(IL)-4及IL-17的表达情况.结果 支气管哮喘组急性发作期和缓解期Th1、Th1/Th2、IFN-γ的表达水平低于对照组,且急性发作期低于缓解期(P＜0.05);支气管哮喘组急性发作期和缓解期Th2、Th17、IL-4、IL-17表达水平高于对照组,且急性发作期高于缓解期(P＜0.05).结论 支气管哮喘患者外周血Th1、Th2与Th17细胞表达水平失衡,导致IFN-γ、IL-4及IL-17异常分泌,可能参与支气管哮喘的发病.     

实验性矽肺大鼠肺组织中Th1/Th2型细胞因子的变化及意义

目的研究实验性矽肺大鼠在染尘后不同时间肺组织中Th1型细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4的变化,初步探讨Th1/Th2型细胞因子与矽肺发病机制的关系。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为模型组18只、对照组12只。模型组以非暴露方式气管内一次性注入1 ml二氧化硅悬液（40 g·L^-1）建立大鼠矽肺模型,对照组气管内注入等量的灭菌生理盐水。分别在染尘后第1、7、14、21、28、35天各处死3只模型组和2只对照组大鼠,免疫组化SABC法观察肺组织中IFN-γ和IL-4的表达情况,用图像分析系统进行定量分析。结果与对照组相比,染尘后第1、7、14、21天,模型组大鼠肺组织中IFN-γ表达明显增强（P〈0.05）;IL-4的表达显著减少（P〈0.05）。染尘后第28、35天,模型组大鼠肺组织中IFN-γ表达与对照组没有显著性差异（P〉0.05）;而IL-4的表达量大量增加,明显高于对照组（P〈0.05）。结论矽肺发展早期以Th1型细胞因子发挥细胞免疫调节作用为主;后期Th2型细胞因子分泌增加,体液免疫增强。     

Synovial fluid OX40T lymphocytes of patients with rheumatoid arthritis display a Th2/Th0 polarization

Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease in which T-cell activation plays a pivotal role in the induction of articular damage. CD4+/OX40+ T cells accumulate in the synovial fluid (SF) of RA patients, which suggests that they are involved in the pathogenesis of the disease. In this study, we assessed the intracellular cytokine production of peripheral blood and SF CD4+ and CD4+/OX40+ T cells from RA patients in order to evaluate their role in this disorder. Our results show that SF CD4+ cells are predominantly interferon gamma (IFN-gamma)-positive and express a Th1-like cytokine pattern. In SF, significantly more CD4+/OX40+ T cells expressed interleukin-4 (IL-4) and IL4/IFN-gamma than IFN-gamma alone. Our data demonstrate that SF CD4+/OX40+ T cells express a Th2/Th0 cytokine profile, which suggests that they are involved in inflammatory responses in RA joints.