应用磁纳米捕获-PCR技术检测痰液结核分枝杆菌的研究

目的采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,以提高PCR检测的灵敏度,快速诊断结核病。方法以普通PCR为对照,采用磁纳米捕获技术富集187份结核和非结核呼吸系统疾病患者痰标本中的结核分枝杆菌,进行PCR检测。结果 152份肺结核患者痰标本41份(27.0%)涂片抗酸染色阳性,72份(47.4%)普通PCR检测阳性,126份(82.9%)磁纳米捕获-PCR检测阳性。35份非结核呼吸系统疾病患者,痰标本中抗酸染色均为阴性,1份普通PCR和磁纳米捕获-PCR检测均阳性,该患者临床诊断肺部感染合并陈旧性肺结核。结论采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,可显著提高PCR检测的灵敏度。     

Bact／Alert3D系统与常用检测方法的比较

目的评价Bact／Alert3D系统与常用检测方法优略的比较。方法收集2006年5月～2007年4月期间确诊肺结核病人痰标本305份,每份标本同时做抗酸杆菌涂片（直接涂片、萋一尼氏染色）、分枝杆菌分离培养和Bact／Alert3D系统培养,对结果进行分析,总结3种方法对确诊肺结核患者的阳性检出率。结果305份确诊肺结核病人痰标本中,抗酸杆菌涂片、分枝杆菌分离培养、Bact／Alert3D系统培养的阳性检出率分别为24．3％、29．2％、42．9％。结论Bact／Alert3D系统以其较高的检出率、较快的检出时间,更有助于提高传染性肺结核的发现率。     

BACTEC MGIT 960和BACT/ALERT 3D系统快速培养和鉴定痰中抗酸杆菌

目的对抗酸染色阳性痰行分枝杆菌培养和鉴定。方法采用萋一尼氏抗酸染色法对临床诊断肺结核患者的晨痰涂片直接镜检,抗酸染色阳性痰经BACTEC960和BACT/ALERT3D系统进行分枝杆菌培养,分别经对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩-2-羧基肼（TCH）培养基生长试验行分枝杆菌菌群和结核分枝杆菌复合群菌种鉴定。结果抗酸染色阳性痰标本的分枝杆菌培养阳性率100％,大多数为结核分枝杆菌（9／10）,少数为非结核分枝杆菌（1／10）,最快6天即可报告分枝杆菌阳性培养。结论BACTEC 960和BACT／ALERT3D系统具有快速培养分枝杆菌作用,抗酸染色阳性痰有必要行分枝杆菌培养和鉴定,有利于肺结核与非结核分枝杆菌病的鉴别诊断、结核分枝杆菌菌种鉴定和抗结核药物敏感性试验。     

肺结核患者痰抗酸杆菌检出阳性率的影响因素

目的探讨肺结核患者痰涂片抗酸杆菌阳性检出率的影响因素。方法 79803份痰标本、3750份纤支镜灌洗液标本分别采用直接涂片镜检法和液基集菌法检出的阳性率进行分析。结果采用液基集菌法涂片后痰液的抗酸杆菌阳性检出率提高2.94%,纤支镜灌洗液的抗酸杆菌阳性检出率提高8.22%。同样方法获取的标本使用液基集菌法对纤支镜灌洗液涂片中抗酸杆菌阳性检出率的提高明显大于痰标本。结论痰涂片阳性检出率的提高,除与标本检测方法有关外,合格的痰液标本是提高抗酸杆菌阳性检出率的重要影响因素。     

抗酸杆菌自动荧光染色和显微镜扫描技术在结核病诊断中的临床评价

目的 观察自动荧光染色和显微镜扫描技术检测结核分枝杆菌的临床价值。 方法 2016年9—12月,在临沂市人民医院门诊连续纳入了748例疑似肺结核患者,收集2243份痰标本。每份痰标本制作2张涂片,一张采用传统荧光染色法,并用传统荧光显微镜(fluorescence microscopy, FM)人工阅片。另一张用自动荧光染色和显微镜扫描技术(AFSS)进行染色和扫描。所有样品经4% NaOH消化处理,然后接种到罗氏培养基中进行分离培养。与培养结果相比,分析AFSS的效能。所有AFSS和传统FM检测结果有差异的涂片采用萋-尼染色显微镜检查方法进行复核。 结果 AFSS检测的阳性率为32.1%(720/2243),常规FM检测的阳性率为31.92%(716/2243),两者比较差异无统计学意义(χ ²=0.016,P>0.05)。与罗氏培养相比,AFSS检测分枝杆菌的敏感度和特异度分别为83.4%(657/788)和95.9%(1386/1446)。阳性预测值和阴性预测值分别为91.6%(657/717)和91.4%(1386/1517)。 结论 AFSS检测分枝杆菌的敏感度和特异度较高,自动化程度高,值得推广应用该技术。     

支气管肺泡灌洗液GeneXpert-MTB/RIF检测在活动性肺结核诊断中的效能

目的探讨支气管肺泡灌洗液Xpert-MTB/RIF检测对肺结核早期诊断的价值。方法选择2017年9月～2018年9月在苏州大学附属传染病医院肺科住院,临床诊断肺结核患者共158例,分别对其支气管肺泡灌洗液及痰标本行GeneXpert-MTB/RIF法(简称"Xpert法")检测,同时对其支气管肺泡灌洗液行涂片抗酸染色镜检、MGIT 960培养、荧光定量PCR,并对Xpert法检测法结果进行分析。结果 Xpert法检测支气管肺泡灌洗液阳性率明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液培养阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05);支气管肺泡灌洗液PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性率也明显高于涂片找抗酸杆菌,差异有统计学意义(P0.05)。Xpert法检测阳性率明显高于PCR检测结核分枝杆菌DNA,差异有统计学意义(P0.05);上述四项联合检测阳性率明显高于Xpert法、结核培养等,差异有统计学意义(P0.05)。而Xpert法检测阳性率与痰培养阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。以支气管肺泡灌洗液结核培养为金标准,Xpert法检测敏感度78.75%,特异度为65.38%。支气管镜BALF Xpert法检测阳性率57.0%,痰Xpert法检测阳性率32.3%,支气管肺泡灌洗液Xpert法检测阳性率明显高于痰标本,差异有统计学意义(P0.05)。结论支气管肺泡灌洗液Xpert法检测相比痰检及其他传统检测方法快捷、安全、高敏感性,能很大程度提高结核病及耐药结核的早期诊断率,有极大的临床应用前景。     

SAT技术与荧光定量PCR在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究

目的通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(SAT-TB)与荧光定量PCR(FQ-PCR)两种不同类型的方法检测痰涂片阴性肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)标本,探讨两种检测方法的临床价值。方法采集2015年3月-2017年3月本院收治的疑似肺结核,且至少3次痰涂片结果为阴性的患者共1050例,其中531例肺结核为观察组,519例其他肺部疾病患者为对照组。以临床诊断为金标准,计算SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养、抗酸杆菌染色等检测方式的各类评价指标,并进行比较。结果菌阴肺结核肺泡灌洗液抗酸杆菌染色、结核分枝杆菌快速培养、SAT-TB、FQ-PCR单独检测与SAT-TB联合FQ-PCR检测单阳、双阳的准确性分别为12. 99%、21. 28%、56. 69%、54. 24%、62. 52%、42. 37%,SAT-TB、FQ-PCR与SAT-TB联合FQ-PCR检测的诊断价值均具有统计学意义(P 0. 05);对痰涂片阴性的肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)诊断有价值,单阳 SAT-TB FQ-PCR双阳结核分枝杆菌快速培养抗酸杆菌染色。结论与细菌学检测方法比较,SAT-TB、FQ-PCR检测具有快速、敏感等优势,能显著缩短确诊时间,提高诊断的准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供了有效的诊断手段和依据,值得临床推广应用。     

液基细胞学技术在肺结核诊断中的应用价值

目的 探讨液基细胞学技术(thinprep cytologic test,TCT)在肺结核诊断中的应用价值。方法 按照患者纳入标准搜集2017年11月至2019年2月河北省张家口市传染病医院诊治的248例初诊为疑似肺结核的患者,最终临床综合诊断确诊为肺结核患者181例,非肺结核患者67例。由结核科医生根据相应临床表现及体征按照每例患者选用1种类型临床标本的原则共采集248份临床标本,包括101份晨痰标本、67份胸腔积液标本、80份支气管肺泡灌洗液标本。248份标本均行TCT、萋-尼抗酸染色涂片镜检(Ziehl-Neelsen 染色涂片法镜检,简称“Z-N涂片法”)、BACTEC^TM MGIT 960液体培养法(简称“MGIT 960法”)检测分枝杆菌。采用SPSS 19.0软件进行数据的统计学分析,计数资料间的比较采用χ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 TCT检测248份标本、痰液标本、胸腔积液标本、支气管肺泡灌洗液标本的阳性率[分别为53.63%(133/248)、67.33%(68/101)、17.91%(12/67)、66.25%(53/80)]均明显高于Z-N涂片法 [分别为25.81%(64/248)、36.63%(37/101)、7.46%(5/67)、27.50%(22/80)](χ²值分别为46.788、19.736、9.449、20.833,P值分别为0.000、0.000、0.002、0.000);但TCT检测痰标本的阳性率明显低于MGIT 960法[81.19%(82/101)](χ ²=5.076,P=0.024),而检测胸腔积液及支气管灌洗液标本的阳性率与MGIT 960法[分别为25.37%(17/67)、70.00%(56/80)]差异均无统计学意义(χ ²=1.100,P=0.294;χ ²=0.377,P=0.539)。以临床诊断为参考标准,TCT、Z-N染色法、MGIT 960法检测所有临床标本的敏感度分别为72.93%(132/181)、30.39%(55/181)、85.64%(155/181),一致率分别为79.84%(198/248)、48.79%(121/248)、89.52%(222/248),特异度分别为98.51%(66/67)、98.51%(66/67)、100.00%(67/67)。 结论 TCT检测痰液、胸腔积液及支气管肺泡灌洗液标本中分枝杆菌的阳性率、敏感度均高于Z-N涂片法,对诊断肺结核具有重要临床应用价值。     

2946份痰标本抗酸杆菌检查结果与咳痰时间的关系

目的　探讨痰标本的咳痰时间对抗酸杆菌检查结果的影响。方法 采用痰直接厚涂片萋-尼氏抗酸染色显微镜(物镜100×)检查,统计不同咳痰时间的痰标本阳性检出率和全部阳性痰标本按咳痰时间的分布。结果 2946份痰标本中,清晨痰、夜间痰、即时痰阳性检出率有显著性差异。462份阳性痰标本中,按清晨痰、夜间痰、即时痰统计分布有非常显著意义。结论 咳痰时间对痰标本抗酸杆菌检出有很大影响,要强调清晨痰的送检。     

荧光染色发光二极管显微镜检测结核分枝杆菌的效果分析

目的： 探讨荧光染色发光二极管（LED）显微镜镜检对结核分枝杆菌的检出效果。方法： 收集232例可疑结核病患者的痰标本,每位患者收集3份痰（即时痰、清晨痰和夜间痰）,共696份痰标本。分为萋-尼染色(Z-N)法镜检组（简称Z-N组）,荧光染色发光二极管显微镜镜检组（简称LED组）。对每份痰标本同时采用上述两种镜检法进行检测。比较两者的检查结果,分析两种方法检查结核分枝杆菌的阳性率差异情况。结果： LED组检出率为37.9%（88/232）,Z-N组检出率为26.7%（62/232）,经检验, χ²=6.66,P＜0.01,差异有统计学意义。结论： LED显微镜镜检具有阳性检出率高等优点。     

Fluorescein Diacetate Vital staining for detecting viability of acid-fast bacilli in sputum of pulmonary tuberculosis patients

ObjectiveTo compare the performance of the Fluorescein diacetate (FDA) vital staining method with Ziehl-Neelsen staining method in detecting the viability of acid-fast bacilli using MGIT culture as “reference standard”.MethodsThis was a single centre prospective observational study conducted from October 2015 to November 2016. Microbiologically confirmed ZN-Smear positive (3+) sputum specimens were obtained from 30 pulmonary tuberculosis patients taking anti-tuberculosis treatment at DOTS centre of NITRD, New Delhi. Patients were made available to collect the first baseline sputum sample before commencing treatment, and an early morning sputum sample was collected as per RNTCP guidelines. After starting treatment, sputum specimens were collected weekly in the first month and thereafter twice-weekly until 18th week. All sputum specimens from patients receiving anti-tuberculosis treatment were examined using Ziehl-Neelsen (ZN) smear microscopy, FDA vital staining, and MGIT culture.ResultOut of 360 follow up sputum specimens collected from 30 adult microbiologically confirmed ZN- Smear (3+) pulmonary tuberculosis patients, 146 were ZN-positive and 130 FDA-positive. Of 130 FDA-positive sputum samples, mycobacteria tuberculosis (MTB) growth was found in 116 sputum samples, of which 116 sputum specimens were positive for FDA. Additionally, 14 culture-negative specimens were FDA positive. No FDA-negative sputum samples were positive for MGIT culture. Among ZN positive specimens, FDA had 100% sensitivity and 85.3% specificity with an accuracy of 96.58% for the detection of viable mycobacteria. Among ZN negative sputum specimens, FDA had comparatively high specificity (95.7%). Using positive MGIT culture as a reference for viability, negative predictive value (NPV) and positive predictive value (PPV) from FDA vital staining method were found to be 100 and 89% respectively.ConclusionFDA staining is a simple and rapid tool for identifying viable MTB bacilli. Because of its excellent NPV and encouraging specificity, FDA staining is useful to identify patients with non-viable bacilli (FDA negative) among retreatment cases at diagnosis and patients on anti-tuberculosis treatment for both drug-sensitive and drug-resistant tuberculosis for follow up for the response of treatment.     

Detection of Mycobacterium tuberculosis in bronchoalveolar lavage from patients with sputum smear-negative pulmonary tuberculosis using a polymerase chain reaction assay

Abstract The objective of this study was to evaluate the utility of a polymerase chain reaction (PCR) assay in detecting Mycobacterium tuberculosis in bronchoalveolar lavage (BAL) specimens of patients suspected of having active pulmonary tuberculosis (TB) but who were sputum smear-negative. Patients undergoing investigation for suspected pulmonary TB at the University Hospital, Kuala Lumpur, and who were sputum smear-negative underwent fibreoptic bronchoscopy and BAL. One portion of each lavage specimen was submitted for smear examination for acid-fast bacilli and mycobacterial culture and the other portion assayed by PCR for the presence of a 562-base pair DNA segment belonging to the insertion sequence IS986, unique to the M. tuberculosis complex. As controls, lavage specimens from patients with other lung lesions were also similarly tested. The PCR assay gave a positivity rate of 80.9% (55 of 68) compared with 8.8% of smear examination and 7.4% of culture for detecting M. tuberculosis in BAL specimens. The assay was positive in two of 45 BAL specimens from 35 control subjects. The PCR assay was more sensitive than smear and culture in detecting M. tuberculosis in BAL specimens of patients with sputum smear-negative pulmonary TB.     

灌洗液Xpert MTB/RIF检测在涂片阴性及无痰疑似肺结核患者中的应用分析

目的 探讨灌洗液Xpert MTB/RIF检测在涂片阴性及无痰疑似肺结核患者中的诊断效能.方法 选取河南省胸科医院结核科2020年1月1日至2020年6月30日期间收治的疑似肺结核患者98例为研究对象,留取气管镜灌洗液行抗酸染色、Xpert MTB/RIF检测、分枝杆菌液体培养,以灌洗液分枝杆菌液体培养结果、病理诊断结...     

液基夹层杯技术检测抗酸杆菌应用性研究

目的评价液基夹层杯技术检测抗酸杆菌的应用价值。方法收集1 190例肺结核可疑症状者的642份晨痰标本和1 140份即时痰标本,每份痰标本均采用液基夹层杯技术、直接涂片查找抗酸杆菌技术和罗氏结核分枝杆菌培养技术进行检测,比较直涂法、液基法与培养法对痰标本的阳性检出率,并在以培养法为金标准的前提下考察液基法、直涂法的灵敏度和特异度,同时评价晨痰和即时痰、1次痰和2次痰对肺结核涂阳病人发现的差异。结果液基法、直涂法和培养法对642份晨痰标本的阳性检出率分别为23.5%、12.7%和26.6%,对1 140份即时痰的阳性检出率分别为18.1%、9.6%和23.3%。以培养法作为金标准,液基法的灵敏度和特异度分别为68.9%和95.8%,并与直涂法相对应的指标差异有统计学意义(P0.05)。液基法检测表明:642份晨痰阳性检出率显著高于1 140份即时痰阳性检出率(P0.05)。结论液基法能够提高痰标本的灵敏度,特异度较高,操作标准化,且所需设备简单,便于基层开展,是一种可能具有推广价值的检测方法。     

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术诊断艾滋病患者肺结核的临床应用评价

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)技术诊断艾滋病患者肺结核的应用价值。方法:回顾性分析2017年7月至2019年11月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的226例疑似肺结核的艾滋病患者的临床资料。分别进行痰涂片荧光染色显微镜下检查、BACTEC MGIT 960液体培养(或罗氏固体培养)和Xpert MTB/RIF检测,并分析在艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断MTB感染和利福平耐药的灵敏度和特异度。结果:226例疑似肺结核患者中,痰培养阳性94例(41.6%),其中MTB阳性51例(54.3%),非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria,NTM)阳性43例(45.7%)。以痰分枝杆菌培养阳性且结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原阳性为金标准,Xpert MTB/RIF技术诊断MTB的灵敏度为72.6%[95%可信区间(confidence interval,CI)66.7%~78.4%],特异度为97.1%(95%CI 95.0%~99.3%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阳性患者MTB的灵敏度为76.7%(95%CI 67.7%~85.8%),特异度为90.0%(95%CI 83.6%~96.5%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阴性患者MTB的灵敏度为50.0%(95%CI 41.8%~58.2%),特异度为99.3%(95%CI 97.9%~100.0%)。18例患者同时检测利福平表型和基因型耐药,以表型耐药为金标准,Xpert MTB/RIF技术检测利福平基因型耐药的灵敏度为75.0%,特异度为100.0%。结论:艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断肺结核的灵敏度和特异度均较高,且能快速区分MTB和NTM,具有较好的应用价值。     

3479例肺结核病人痰标本抗酸杆菌检查结果分析

目的：探讨肺结核病人痰标本抗酸杆菌检查的影响因素。方法：采用直接厚涂片萋-尼氏法抗酸染色。对临床资料回顾分析。结果：3479例痰标本。抗酸杆菌阳性829例。阳性率23．8％。痰标本的性状、留痰时间对抗酸杆菌检出有很大影响。结论：应提高留痰质量。重视晨痰的留取。     

荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA诊断肺结核的临床价值

目的探讨纤支镜肺泡灌洗液中结核分枝杆菌DNA在肺结核诊断中的价值。方法对187例初治肺结核患者及41例肺炎患者分别应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌DNA、肺泡灌洗液结核菌培养、纤维支气管镜刷片抗酸染色。结果肺结核患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA阳性率为:78.6%、肺泡灌洗液结核菌培养阳性率为28.8%、刷片抗酸染色阳性率为21.9%。肺炎患者肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA、肺泡灌洗液结核菌培养、刷片抗酸染色均阴性。结论荧光定量聚合酶链反应检测肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA,特异性高,用于肺结核诊断可提高肺结核诊断的敏感性和准确性,明显优于纤维支气管镜刷片抗酸染色,亦较肺泡灌洗液结核菌培养诊断灵敏、快速,可作为肺结核诊断较可靠指标。     

分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的初步应用

目的探讨分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的应用价值。方法采集2010年3—7月间在彭州市CDC结核病防治所门诊就诊患者的痰标本382份,其中初诊疑似肺结核患者的痰标本305份,肺结核患者随访痰标本77份,用分子信标荧光定量PCR法和抗酸染色法检测Mtb。结果382份痰标本抗酸染色法、分子信标荧光定量PCR法检测总阳性率分别为12.6%(48/382)、42.4%(162/382),分子信标荧光定量PCR法阳性率显著高于抗酸染色法,差异有统计学意义(χ2=74.5,P<0.001)。结论分子信标荧光定量PCR较抗酸染色法具有更高的灵敏度,不仅提高了肺结核早期诊断的检出率,还能间接反映药物疗效,在肺结核防治工作中具有重要意义。