藏红花素对视网膜缺血再灌注损伤小鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制研究

目的　研究藏红花素对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）小鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及其机制。方法　将144只C57BL/6小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、藏红花素治疗组。模型组和藏红花素治疗组小鼠建立RIRI模型,藏红花素治疗组小鼠造模前30 min腹腔注射50 mg·kg^-1藏红花素。RIRI后14 d,视网膜铺片染色比较各组小鼠RGC密度差异。RIRI后24 h,HE染色比较各组小鼠视网膜内层厚度差异。于RIRI后不同时间点（0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h）取各组小鼠视网膜组织,通过多重基因定量分析系统检测NLRP3、ASC、Caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA的表达变化。RIRI后6 h和12 h取各组小鼠视网膜组织,Western blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达,ELISA检测IL-1β蛋白的含量,并对比分析。结果　小鼠RIRI后14 d,视网膜铺片染色结果显示,藏红花素治疗组较模型组小鼠RGC密度增加约18.5%（P<0.05）。RIRI后24 h,HE染色结果显示,藏红花素治疗组小鼠视网膜内层厚度较模型组显著降低（P<0.01）。多重定量分析系统检测结果显示,RIRI后6 h、9 h及12 h,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中Caspase-1以及IL-1β mRNA表达较模型组均显著降低（均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中Caspase-1以及IL-1β蛋白表达较模型组均显著降低（均为P<0.05)。RIRI后6 h、12 h,模型组小鼠视网膜组织中NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达与假手术组相比无显著变化（均为P>0.05)。ELISA检测结果进一步证实,RIRI后6 h和12 h,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中IL-1β蛋白含量较模型组均显著降低（均为P<0.05)。结论　藏红花素通过抑制Caspase-1和IL-1β表达保护RIRI小鼠RGC。     

过表达TBK1通过调控RIPK1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨TANK结合激酶1（TBK1）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的作用机制。方法　按60 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素制备糖尿病模型。模型制备完成后,随机分成三组:糖尿病(DM)组、TBK1过表达(TBK1-OE)组 (大鼠玻璃体内单次注射TBK1过表达慢病毒载体5 μL,病毒滴度为 1.0×10⁹ IU·mL^-1)、TBK1空载体(TBK1-NC)组(玻璃体内注射等剂量病毒包装的阴性对照液),另取正常大鼠作为对照(CON)组,每组15只。12周后,免疫荧光染色检测大鼠视网膜TBK1蛋白表达定位,Hoechst 33342染色检测大鼠视网膜RGC凋亡,ELISA检测大鼠视网膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,Western blot检测大鼠视网膜TBK1、受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、Caspase-3蛋白相对表达量。结果　TBK1在大鼠RGC中特异表达。与CON组相比,DM组、TBK1-NC组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,TBK1蛋白相对表达量均明显降低(均为P<0.01);TBK1-OE组各指标均增加（均为P<0.01);而与DM组相比,TBK1-OE 组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,TBK1蛋白相对表达量明显增加(均为P<0.01)。而DM组与TBK1-NC组大鼠之间RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,TBK1、RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论　过表达TBK1对糖尿病大鼠RGC凋亡具有抑制作用,其机制与阻断RIPK1信号通路激活有关。     

金雀异黄酮对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨金雀异黄酮（GEN）对大鼠视网膜缺血-再灌注（I/R）损伤的保护作用。方法　选取30只健康SPF级大鼠，按照随机数字表法将其分为假手术组、I/R组和I/R+GEN组，每组各10只。I/R组和I/R+GEN组大鼠采用前房灌注生理盐水升高眼压法制备视网膜I/R损伤大鼠模型，I/R组大鼠术后每天给予注射生理盐水（1 mL·kg^-1·d^-1）；I/R+GEN组大鼠术后每天给予注射GEN （40 mL·kg^-1·d^-1）；假手术组大鼠行相应假手术后每天予以注射生理盐水（1 mL·kg^-1·d^-1），连续7 d后，颈椎脱臼法处死各组大鼠，取眼部组织。HE染色观察各组大鼠视网膜的形态以及内丛状层（IPL）、内核层（INL）和神经节细胞层（GCL）厚度；免疫荧光分析观察各组大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的存活率；TUNEL染色检测各组大鼠视网膜细胞凋亡水平；检测各组大鼠视网膜组织中过氧化氢酶（CAT）、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平以反映视网膜氧化应激状态；Western blot分析三组大鼠视网膜中NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达。结果　I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜总厚度分别为(114.37±7.32）μm、（155.31±6.83）μm和（178.98±13.65）μm（t=14.284，P<0.01），I/R组低于假手术组和I/R+GEN组，差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（18.95±5.06）μm、（17.62±4.69）μm和（19.03±4.74）μm，I/R+GEN组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（20.69±8.13）μm、（25.74±6.78）μm和（26.71±7.85）μm，假手术组大鼠视网膜IPL、INL和GCL厚度分别为（11.73±3.15）μm、（11.97±3.56）μm和（12.59±3.24）μm（均为P<0.05），I/R组与假手术组和I/R+GEN组三个指标比较差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜中RGC相对存活率分别为（26.87±3.12）%、（73.46±7.80）% 和（100.00±5.64）%（t=16.825，P<0.01），I/R组RGC相对存活率低于假手术组和I/R+GEN组，差异均有统计学意义（均为P<0.01）。I/R组、I/R+GEN组和假手术组大鼠视网膜中CAT、MDA、SOD含量总体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01），I/R组与I/R+GEN组和假手术组三个指标比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示，三组大鼠视网膜中NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白表达总体比较差异均有统计学意义（均为P<0.01），组间两两比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　GEN可通过提高视网膜细胞抗炎和抗氧化能力抑制视网膜细胞凋亡，从而起到对大鼠视网膜I/R损伤的保护作用。     

GPR120通过抑制核因子-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　探讨GPR120对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响及可能机制。方法　健康雄性SD大鼠按55 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。模型诱导成功后,将大鼠随机分成三组:糖尿病组、鱼油预处理组(鱼油1 g·kg^-1每天1次灌胃;鱼油的主要成分为omega-3,omega-3为GPR120通路激活剂)、安慰剂组(玉米油1 g·kg^-1每天1次灌胃),每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组（对照组和糖尿病组大鼠每天1次灌胃等剂量PBS缓冲液）。12周后,气相色谱法检测各组大鼠视网膜组织中二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）含量,HE染色检测RGC密度,免疫荧光染色检测视网膜GPR120蛋白表达,Western blot检测视网膜GPR120、核因子-κB（NF-κB）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白相对表达量。结果　与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显减少（均为P<0.01);与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显增加（均为P<0.01)。GPR120主要分布于RGC层。对照组大鼠RGC密度为(437.06±4.72) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(35.65±0.89)%、(12.42±0.58)%、(13.76±0.08)%;糖尿病组大鼠RGC密度为 (329.75±3.51) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3 蛋白相对表达量分别为(24.14±0.46)%、(38.94±0.45)%、(25.14±0.45)%;鱼油预处理组大鼠RGC密度为(412.44±3.62) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(31.59±0.77)%、(18.11±0.58)%、(20.14±0.61)%。与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显降低;与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01)。糖尿病组与安慰剂组相比,各指标差异均无统计学意义(均为P＞0.05)。结论　GPR120激活对糖尿病大鼠RGC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。     

葡萄籽原花青素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidin extract，GSPE）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）的保护作用及其机制。方法　将120只大鼠分为假手术组（Sham组，灌胃生理盐水）、模型组（RIRI组，眼内灌注加压法制备，灌胃生理盐水）及GSPE低、中、高剂量组（GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组，灌胃0.13 g·kg^-1 GSPE、0.25 g·kg^-1 GSPE、0.50 g·kg^-1 GSPE）、阳性对照组（α-LA组,灌胃100 mg·kg^-1 α-硫酸锌）。采用苏木精-伊红（HE）染色观察各组大鼠视网膜组织形态学变化情况；ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、iNOS、白细胞介素-6（IL-6）水平，氮蓝四唑显色法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性；双抗体夹心法检测血清丙二醛（MDA）水平，铁离子还原法检测活性氧（ROS）水平；TUNEL法检测各组大鼠视网膜组织神经细胞凋亡；免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜组织中核因子E2-相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、Caspase-3表达情况；Western blot法检测各组大鼠视网膜组织中细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、p-ERK1/2表达情况。结果　GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组、RIRI组和Sham组视网膜厚度分别为（139.31±11.43）μm、（127.05±12.73）μm、（113.16±13.25）μm、（110.58±13.47）μm、（161.48±10.26）μm、（92.35±16.54）μm,Nrf2蛋白阳性表达率分别为（29.93±4.21）%、（34.06±5.17）%、（43.12±7.23）%、（45.35±7.46）%、（11.86±3.19）%、（52.27±8.36）%，ERK1/2蛋白磷酸化水平分别为0.41±0.05、0.62±0.07、0.89±0.09、0.92±0.05、0.23±0.04、1.16±0.25，RIRI组与Sham组比较，差异均有统计学意义（均为P<0.05）， GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组与RIRI组比较，差异均有统计学意义（均为P<0.05），且GSPE表现出剂量依赖性。与Sham组相比，RIRI组神经细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、TNF-α、IL-6、iNOS、MDA、ROS水平显著升高，HO-1阳性表达率、SOD水平显著降低（均为P<0.05）；与RIRI组相比，GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组神经细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、TNF-α、IL-6、iNOS、MDA、ROS水平显著降低，HO-1阳性表达率、SOD水平显著升高，且GSPE表现出剂量依赖性剂量依赖性（均为P<0.05）。结论　GSPE能够抑制视网膜组织神经细胞凋亡，保护视网膜组织，其作用机制可能与ERK/Nrf2/HO-1通路活化有关。     

基于JAK2/STAT3通路分析姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响

目的　探讨姜黄素（CUR）对视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,并通过JAK2/STAT3通路探讨其机制,以期为CUR的临床应用提供理论依据。方法　健康雄性成年Sprague Dawley大鼠36只,随机分为假手术（Sham）组、RIRI组与CUR组,每组各12只。RIRI组和CUR组大鼠右眼采用高眼压法建立RIRI模型,Sham组仅将针头刺入大鼠右眼前房,不升高眼压。CUR组大鼠于建模前30 min腹腔注射CUR（100 mg·kg^-1）,RIRI组和Sham组大鼠腹腔注射等剂量生理盐水。造模后24 h,采用HE染色及免疫组织化学染色法观察各组大鼠视网膜形态及视网膜神经节细胞（RGC）数变化,Iba-1/CD16、Iba-1/Arg1免疫荧光双标法检测CUR对RIRI大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,免疫组织化学结合Western blot检测观察CUR对RIRI大鼠RGC及JAK2/STAT3通路信号分子表达的影响。结果　HE染色及免疫组织化学染色结果显示,Sham组大鼠视网膜细胞排列整齐,神经节细胞层见大量Brn-3a⁺细胞（即RGC）;与Sham组相比,造模后24 h,RIRI组大鼠内层视网膜厚度显著增加、RGC数显著减少,而CUR组大鼠内层视网膜厚度较RIRI组显著变薄,RGC数显著多于RIRI组（均为P<0.05）。免疫荧光双标染色结果显示,RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞（M1型小胶质细胞）数较Sham组显著增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞数显著少于RIRI组,但仍多于Sham组（均为P<0.05）;RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞（M2型胶质细胞）数较Sham组增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞数显著高于RIRI组（均为P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示,与Sham组相比,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均较Sham组增多,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均显著少于RIRI组（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,Sham组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平较低;造模后24 h,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3 蛋白表达显著升高,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量均较RIRI组显著下降,但仍高于Sham组（均为P<0.05）。结论　CUR可调控小胶质细胞由M1型向M2型极化,从而减轻大鼠RIRI,具有神经保护作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路激活有关。     

柴胡皂苷D对糖尿病视网膜病变大鼠的治疗作用

目的　探究柴胡皂苷D（SSD）对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠视网膜的保护作用及其机制。方法　40只SD大鼠随机分为正常对照（Con）组、DR组、低剂量SSD组和高剂量SSD组,每组各10只。DR组、低剂量SSD组和高剂量SSD组通过高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）构建糖尿病大鼠模型,然后对糖尿病大鼠持续喂养高脂高糖饮食12周构建DR大鼠模型,其中低剂量SSD组、高剂量SSD组大鼠在持续高脂高糖喂养期间分别给予口服1 mg·kg^-1·d^-1和5 mg·kg^-1·d^-1 SSD。Con组大鼠全程采用标准饲料喂养,且不给予STZ注射。在喂养方案结束时,异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-Dextran）染色评估视网膜微血管的渗透性;过碘酸雪夫（PAS）染色观察视网膜微血管病变程度;ELISA检测视网膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β的表达水平;Western blot检测视网膜组织中咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白5（Claudin-5）、闭锁小带蛋白1（ZO-1）、血管内皮生长因子α（VEGF-α）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和血管内皮细胞黏附分子1（VCAM-1）的蛋白表达水平。结果　与Con组比较,DR组大鼠视网膜微血管的渗透性增加,视网膜毛细血管网中无细胞毛细血管（AC）和周细胞丢失（PL）的相对比例均增加,视网膜组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、VEGF-α、GFAP和VCAM-1的表达水平均升高,而Occludin、Claudin-5和ZO-1的表达水平均降低（均为P<0.05）。与DR组比较,低剂量SSD组、高剂量SSD组大鼠视网膜微血管的渗透性均降低,视网膜毛细血管网中AC和PL的相对比例均降低,视网膜组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、VEGF-α、GFAP和VCAM-1的表达水平均降低,而Occludin、Claudin-5和ZO-1表达水平均升高（均为P<0.05）;其中,高剂量SSD组大鼠上述指标均较低剂量SSD组大鼠变化更明显（均为P<0.05）。结论　SSD可能通过减轻视网膜微血管渗透性和炎症反应而发挥对DR大鼠视网膜的治疗作用。     

肝X受体激动剂TO901317对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜的保护作用

目的　探讨肝X受体激动剂TO901317对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠视网膜的保护作用。 方法　取24只健康SPF级SD大鼠,随机分为正常组、模型组、TO901317组,每组各8只。正常组大鼠不做任何处理;模型组、TO901317组大鼠在禁食24 h后测量空腹血糖浓度,腹腔内注射链脲佐菌素60 mg·kg^-1,1周后采尾静脉血检测空腹血糖浓度。此后每月检测空腹血糖浓度1次,以空腹血糖浓度持续24周高于16.7 mmol·L^-1作为造模成功的标准; TO901317组大鼠在第25周时一次性双眼玻璃体内注射5 μL TO901317（3.125 g·L^-1）,正常组、模型组大鼠此阶段不做任何处理。造模成功后取各组大鼠视网膜组织行HE染色,观察各组大鼠视网膜形态结构和微血管变化情况,测量各组大鼠视网膜厚度。ELISA法检测大鼠视网膜白细胞介素（IL）-1β、IL-6含量,实时荧光定量PCR检测大鼠视网膜ABCA1、IL-1β、IL-6、VEGF的mRNA相对表达量,Western blot检测大鼠视网膜ABCA1、VEGF、IL-1β、IL-6蛋白表达水平。 结果　正常组大鼠视网膜各层组织间连接紧密,细胞排列整齐,各细胞形态及微血管结构正常。模型组和TO901317组大鼠视网膜可见内界膜肿胀断裂严重,部分内皮细胞突出内界膜;两组大鼠视网膜厚度均较正常组明显增加,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;TO901317组大鼠视网膜各层结构改变介于正常组与模型组之间,视网膜厚度较模型组明显减小,差异有统计学意义（P<0.05）。与正常组相比,模型组大鼠视网膜IL-1β和IL-6含量均明显升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;TO901317组大鼠视网膜IL-1β和IL-6含量较模型组均明显下降,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。模型组大鼠视网膜ABCA1 mRNA相对表达量较正常组和TO901317组均显著降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;模型组大鼠视网膜IL-1β、IL-6、VEGF的mRNA相对表达量较正常组和TO901317组均显著升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。模型组大鼠视网膜ABCA1蛋白相对表达量较正常组和TO901317组均显著降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;模型组大鼠视网膜IL-1β、IL-6和VEGF蛋白相对表达量较正常组和TO901317组均显著升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　肝X受体激动剂TO901317可以上调ABCA1表达,下调IL-1β、IL-6和VEGF表达,抑制DR大鼠视网膜炎症反应和新生血管形成,对DR大鼠视网膜有一定的保护作用。     

Caspase-1对氧诱导视网膜病变中小胶质细胞参与视网膜新生血管生成的促进作用及其机制

目的：探讨Caspase-1对小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)中小胶质细胞参与视网膜新生血管生成的作用及其机制。

方法：随机将12只7日龄(P7)C57BL/6J小鼠分为正常组、OIR组和OIR+VX-765组,正常组在正常氧环境中饲养,其余两组构建OIR模型; P12～P16,OIR+VX-765组和OIR组分别每天腹腔注射Caspase-1抑制剂VX-765(4mg/kg)和等量0.4%聚乙二醇(VX-765溶剂); 于P17制作视网膜铺片行Lectin染色,比较三组间视网膜无血管区和新生血管区面积的大小; 采用免疫荧光染色法观察视网膜组织中Caspase-1的表达和活化小胶质细胞的分布。培养小胶质细胞BV-2细胞分为对照组、缺氧组及抑制剂组,抑制剂组和缺氧组分别经VX-765和0.4%聚乙二醇预处理3h后,缺氧条件下培养24h; 对照组常规培养相同时间。通过Western blot检测Caspase-1、p20(Caspase-1活化形式)、IL-1β和VEGF的蛋白表达变化; 用各组BV-2细胞培养上清液作为条件培养基,刺激培养血管内皮细胞RF/6A,进行管腔形成和细胞迁移实验,并比较各组间的差异。

结果：P17正常组小鼠视网膜血管化完全,未见明显无血管区及视网膜新生血管; OIR组视网膜无血管区和新生血管面积百分比分别为16.58%±1.14%、4.00%±0.41%; OIR+VX-765组两者明显减少,分别为12.23%±1.02%和2.16%±0.52%(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,Caspase-1在正常小鼠视网膜组织中表达较弱,在OIR小鼠中主要在神经节细胞层和内丛状层有明显的阳性表达,并与活化的小胶质细胞有明确的共定位。Western blot检测结果显示,缺氧处理的培养小胶质细胞BV-2中Caspase-1、p20、IL-1β和VEGF蛋白表达明显提高,而Caspase-1抑制剂则可明显下调p20、IL-1β和VEGF的蛋白表达水平(P<0.05)。管腔形成和细胞迁移实验结果显示,RF/6A细胞经缺氧组BV-2培养上清液处理后,管腔形成长度和细胞迁移数目分别为271±12和347±34个,而加入抑制剂后,二者明显减少,分别为171±22和212±27个(P<0.05)。

结论：在小鼠OIR中,Caspase-1能够调节小胶质细胞促进视网膜新生血管的生成,其作用机制可能与Caspase-1活化小胶质细胞中其下游炎性效应分子IL-1β,并释放VEGF相关。     

miR-22-3p对蓝光暴露下大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

目的　探讨miR-22-3p对蓝光暴露下的大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及机制。方法　取36只清洁级SD大鼠, 将12只SD大鼠随机分为2组:对照组与蓝光暴露组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养;蓝光暴露组大鼠先进行暗适应24 h,随后采用复方托吡卡胺散瞳,将大鼠暴露在蓝光（光照强度1500 lux）下2 h;另取24只大鼠随机分为4组:对照组、蓝光暴露组、AAV-miR22组、AAV-miR22&PTEN组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养,其余3组均接受蓝光暴露处理,AAV-miR22组注射1 μL含 2.5×10⁹ vg(基因组拷贝数)的AAV-7m8-miR-22-3p,AAV-miR22&PTEN组注射1 μL含2.5×10⁹ vg的AAV-7m8-miR-22-3p&PTEN,对照组与蓝光暴露组向大鼠玻璃体内注射1 μL生理盐水,注射结束使用氧氟沙星眼膏预防感染。取大鼠眼球组织行HE染色,在光学显微镜下观察检测神经节细胞层（GCL）、GCL至外核层 (ONL)的厚度,其中包含有内丛状层（IPL）、内核层(INL)、外丛状层（OPL）;采用NeuN免疫荧光组织化学染色标记RGC,计数视网膜上NeuN标记的阳性细胞数;TUNEL染色检测细胞凋亡;采用Lipofectamine 2000转染试剂盒转染阴性对照、miR-22-3p mimic、miR-22-3p inhibitor至RGC-5细胞,转染48 h后测定miR-22-3p表达量,转染成功即可采用Western blot检测PTEN蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR检测miR-22-3p表达,Western blot检测PTEN、p-Akt、Akt与Nrf2蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验在酶标仪上测定荧光素酶活性。结果　HE染色结果证实:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织萎缩,视网膜GCL、GCL至ONL厚度变薄（P<0.05）。另外,NeuN免疫荧光组织化学染色发现:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织RGC数减少（P<0.05）。实时荧光定量PCR实验结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内miR-22-3p相对表达量降低（P<0.05）。Western blot检测结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内PTEN蛋白的表达水平升高,Nrf2蛋白的表达水平和p-Akt/Akt蛋白表达比值均降低（均为P<0.05）;miR-22-3p能够负向调控PTEN蛋白在RGC内的表达水平（P<0.05）。HE染色结果显示:过表达miR-22-3p能够缓解蓝光诱导的大鼠视网膜萎缩,并且能够提高大鼠视网膜GCL、GCL至ONL厚度。NeuN免疫荧光组织化学染色结果证实:过表达miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN表达提高蓝光暴露大鼠视网膜上RGC数。TUNEL实验结果证实:miR-22-3p能够通过抑制PTEN表达缓解蓝光诱导的大鼠视网膜RGC凋亡。结论　miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN的表达,激活PI3K/Akt/Nrf2通路,缓解蓝光诱导的大鼠RGC凋亡。     

KLF7对TLR4/NLRP3炎症小体激活的抑制作用及其对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨Krüppel样因子7(KLF7)通过抑制Toll样受体4/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 (TLR4/NLRP3)炎症小体的激活对视网膜缺血-再灌注(RIR)损伤大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响。方法 将60只大鼠随机分为对照组、RIR组和KLF7组,每组20只。RIR组和KLF7组建立RIR模型,KLF7组大鼠腹腔注射2μL AAV2-KLF7腺病毒,对照组和RIR组大鼠注射100μL PBS。HE染色观察大鼠视网膜形态变化,显微镜下测量神经节细胞层(GCL)厚度和GCL中RGC数量,Western blot检测大鼠视网膜组织中KLF7、TLR4、髓样分化因子初次应答基因88(MYD88)、NLRP3、肿瘤坏死因子受体相关分子6(TRAF6)蛋白表达水平,TUNEL检测RGC凋亡,ELISA法检测大鼠视网膜组织中白细胞介素(IL)-18和IL-1β表达水平。结果 对照组大鼠的视网膜内界膜平滑完整。RIR组大鼠内核层、外核层细胞排列明显疏松、紊乱,RGC数量减少。KLF7组大鼠RGC数量较RIR组减少,视网膜较前变薄,但视网膜损伤程度较RIR组明显减轻。与对照组...     

高良姜素对青光眼大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 研究高良姜素对青光眼大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法 取48只SD大鼠随机分为对照组、对照+高良姜素组、高眼压组和高眼压+高良姜素组,每组12只(12眼)。对照+高良姜素组和高眼压+高良姜素组大鼠接受高良姜素滴眼液治疗,对照组和高眼压组大鼠则接受相同剂量二甲基亚砜溶剂滴眼。于造模后第0～28天监测大鼠眼压,并于造模后第28天处死大鼠,收集各组大鼠右眼球,并采用HE染色观察大鼠视网膜形态变化,采用免疫组织化学染色分析各组大鼠视网膜中GFAP、Toll样受体4(TLR4)和NOD样受体3(NLRP3)表达。从4只4 d龄大鼠视网膜中分离RGC,分为空白组、光气组和CoCl₂+高良姜素组。光气组和光气+高良姜素组RGC与200μmol·L^-1 CoCl₂一起孵育48 h,光气+高良姜素组RGC中加入20μmol·L^-1高良姜素干预48 h。收集各组细胞,采用流式细胞术和Western blot检测RGC的凋亡率及相关蛋白的相对表达情况,并采用ELISA检测空白组、光气组和光气+高良姜素...     

薯蓣皂苷对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨薯蓣皂苷(Dio)对高糖(HG)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的保护作用,并分析其机制.方法 用细胞计数试剂8(CCK-8)法筛选葡萄糖浓度和无细胞毒性的Dio剂量范围.将ARPE-19细胞分为对照组(5 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)、模型组(50 mmol·L-1葡萄糖处理48 h)和低、中...     

地黄多糖对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨地黄多糖对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)氧化损伤的保护作用及机制。方法 取对数生长期的B-3细胞(HLEC)作为研究对象。筛选H₂O₂和地黄多糖最佳作用浓度。依据筛选的地黄多糖抑制H₂O₂致B-3细胞损伤的最佳作用浓度处理细胞,将B-3细胞分为：空白组、H₂O₂组和地黄多糖组。空白组：用10 g·L^-1羧甲基纤维素钠预处理细胞24 h后,换为EMEM培养基培养24 h; H₂O₂组：用10 g·L^-1羧甲基纤维素钠预处理细胞24 h后,换为含100 mol·L^-1 H₂O₂的EMEM培养基培养24 h;地黄多糖组：用含40 mg·L^-1地黄多糖的培养基预处理细胞24 h后,换为含100 mol·L^...     

地塞米松对脂多糖诱导人视网膜色素上皮细胞炎症损伤及NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的探究地塞米松(Dex)对脂多糖(LPS)诱导人视网膜色素上皮(HRPE)细胞炎症损伤及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响。方法体外培养ARPE-19细胞株,MMT法检测不同浓度Dex处理细胞24 h、48 h、74 h对LPS诱导ARPE-19细胞存活率的影响,确定Dex最佳处理浓度和时间。ARPE细胞随机分为:正常对照组(NC组)、LPS组(5 mg·L^-1 LPS)、Dex组(0.20 mol·L^-1 Dex)、Dex+LPS组(0.20 mol·L^-1 Dex+5 mg·L^-1 LPS),RT-qPCR检测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量,ELISA法测定TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平,Western blot检测NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平。结果同一时间点,与NC组比较,LPS组ARPE-19细...     

姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜IL-1β表达的影响

目的 观察姜黄素(CUR)对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,从Toll样受体4/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(TLR4/Caspase-8)通路探讨其机制,为CUR治疗RIRI的临床应用提供科学的理论依据。方法 SPF级健康无眼疾雄性SD大鼠102只,随机分为Sham组(n=10)、RIRI组(n=35)、RIRI+TLR4抑制剂(TAK-242)组(n=11)、RIRI+CUR组(n=35)及RIRI+CUR+TAK-242组(n=11),其中,Sham组、RIRI组及RIRI+CUR组根据建模后时间不同分为建模后6 h、12 h、24 h、72 h及7 d组。采用前房高眼压灌注法建立RIRI模型为RIRI组,Sham组不做特殊处理,RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组、RIRI+CUR+TAK-242组分别于建模前腹腔注射相应药物。免疫组织化学染色检测建模后各时间点各组大鼠视网膜中IL-1β⁺、TLR4⁺ Caspase-8⁺细胞数;建模后12 h, We...     

ROS信号通路调控NLRP3炎症小体在自身免疫性葡萄膜炎发生中的作用

目的探讨活性氧簇(ROS)信号通路调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体(nucleotide binding and oligomerization domain-like receptor,NLRP3)炎症小体的表达在自身免疫性葡萄膜炎(autoimmune uveitis,AU)发生中的作用。方法健康大鼠共40只,随机分为空白对照组、模型组、空载体转染组(空载体组)和NLRP3-shRNA沉默组(沉默组)各10只;沉默组构建慢病毒载体pLenti6.3-EmGFP-NLRP3-shRNA,空载体转染组注射等量空载体,感染时间72 h。结果 ELISA结果发现,模型组和空载体组造模成功后10 d、13 d、16 d、19 d的NLRP3、IL-1β和IL-18水平显著高于沉默组,沉默组高于空白对照组(P<0.05)。免疫组织化学结果发现,模型组和空载体组12 d和20 d的NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、pro-Caspase-1、IL-1β和IL-18阳性表达率显著高于沉默组,沉默组高于空白对照组(P<0.05)。PCR结果发现,模型组和空载体组造模成功后12 d...     

黄芩苷调节IL-33/ST2信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜新生血管生成的影响

目的 探讨黄芩苷调节白细胞介素(IL)-33/基质裂解素2(ST2)信号通路对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜新生血管生成的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组(正常大鼠,灌胃生理盐水)、DR模型组(大鼠建立DR模型后,灌胃生理盐水)和黄芩苷低、中、高剂量组(大鼠建立DR模型后,分别灌胃75 mg·kg^-1、150 mg·kg^-1、300 mg·kg^-1黄芩苷),所有大鼠均以右眼为实验眼。FFA检查各组大鼠视网膜血管生成情况,ELISA检测各组大鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)、Ang-1、IL-6、IL-33、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot检测各组大鼠视网膜组织中IL-33、ST2蛋白表达水平。结果 与对照组相比,DR模型组大鼠血清VEGF、Ang-1、IL-6、IL-33、TNF-α水平及视网膜组织中IL-33、ST2蛋白表达水平均显著升高(均为P<0.05),右眼眼底新生血管增多,荧光素渗漏明显;与DR模型组相比,黄芩苷低、中、高剂量组大鼠血清VEGF、Ang-1、IL-6、I...