实验性关节炎大鼠滑膜组织核因子-κB基质金属蛋白酶-9表达相关性分析

目的观察核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)-9在实验性关节炎(CIA)和对照组大鼠滑膜组织中不同时间点的表达差异及其血浆中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的含量变化,探讨这些细胞因子在CIA发病中的作用机制,为类风湿关节炎(RA)今后的治疗提供理论依椐。方法将42只雄性Wistar大鼠随机分为模型组和对照组,通过免疫组织化学的方法检测各组大鼠不同时期滑膜组织NF-κB、MMP-9的表达水平,用放射免疫法(RIA)测定TNF-α、IL-1β的血浆含量,同时观察其发病时间与关节炎指数(AI)积分、病理评分及上述细胞因子之间的关系。结果随着CIA大鼠发病时间延长,AI和病理评分逐渐增加,NF-κB、MMP-9表达水平和TNF-α、IL-1β血浆含量也随之增加。CIA大鼠这些细胞因子的测定值都显著高于对照组(P<0.01),AI、病理评分与NF-κB、MMP-9呈正相关关系(P<0.05);CIA大鼠滑膜组织NF-κB、MMP-9表达水平之间呈正相关(P<0.05),而且它们的表达水平与IL-1β、TNF-α血浆含量之间亦呈正相关(P<0.05)。结论通过与TNF-α和IL-1β相互作用,滑膜组织中NF-κB、MMP-9的表达之间可能互相影响、互相促进,形成正反馈式的损坏机制,在CIA大鼠病情进展中起着重要作用,可能是RA发生发展以及骨质侵蚀的关键因子。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎小鼠肿瘤坏死因子-α、白介素-17及核因子-κB的影响

目的 观察青藤碱(SIN)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠关节炎指数(AI)评分、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)及滑膜核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响.方法 将30只DBA/1小鼠用随机数字表法分为正常组、CIA组、SIN组3组,每组各10只,诱导CIA组与SIN组小鼠建立CIA模型,予青藤碱(SIN)药物干预SIN组,对三组分别进行AI评分,测定血清TNF-α、IL-17的水平及滑膜NF-κB蛋白的表达.结果 SIN组和CIA组TNF-α、IL-17的水平及滑膜NF-κB蛋白的表达均较正常组升高,且SIN组小鼠的AI评分较CIA组明显降低,血清TNF-α[(170.73±11.05)pg·mL-1比(347.97±13.45)pg·mL-1,F=1021.67,P<0.01]、IL-17[(470.30±122.02)pg·mL-1比(621.78±48.96)pg·mL-1,F=184.42,P<0.01]水平明显减少,滑膜NF-κB[(0.53±0.04)pg·mL-1比(0.84±0.04)pg·mL-1,F=804.05,P<0.01]蛋白的表达下调.结论 SIN能改善CIA小鼠关节肿胀,降低血清TNF-α、IL-17的分泌,这可能与其下调了滑膜NF-κB的表达有关.     

生松素对AngⅡ诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质合成的影响及其机制研究

目的 探讨生松素（Pb）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质（ECM）合成的影响及其机制。方法 以大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将实验分为以下5组：正常对照（NC）组、1×10-6mol/L AngⅡ（Ng）组、1×10-6 mol/L AngⅡ+1‰ DMSO（Ng-D）组、 1×10-6 mol/L AngⅡ+30 μmol/L Pb（Ng-Pb）组、1×10-6 mol/L AngⅡ+10 μmol/L缬沙坦（Ng-Val）组。分别在干预12、24、48 h搜集细胞和上清液,采用Western blot检测Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）、转化生长因子-β（ 1 TGF-β1 ）、Smad3、磷酸化Smad3（p-Smad3）、核因子κB（NF-κB）、磷酸化NF-κB（pNF-κB）的蛋白水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平,实时荧光定量PCR（qPCR）检测细胞中ColⅣ、FN、TGF-β1、TNF-α、IL-6的mRNA水平。结果 （1）Pb对 AngⅡ诱导的系膜细胞合成ECM的影响：与NC组相比,Ng组细胞内ColⅣ和FN的蛋白质和mRNA 水平升高（P＜0.05）,而Ng-Pb组和Ng-Val组细胞内ColⅣ和FN的蛋白质和mRNA水平均较Ng组降低（P＜0.05）。（2）Pb对TGF-β1/Smad3通路的 影响：与NC组相比,Ng组细胞内TGF-β1的蛋白质和mRNA水平增加,p-Smad3/Smad3水平增加（ P＜0.05）,而Ng-Pb组和Ng-Val组细胞内TGF-β1的蛋白质和mRNA水平以及p-Smad3/Smad3水平均较Ng组降低（P＜0.05）。（3）Pb对NF-κb介导的促炎症因子产生的影响：与NC组相比,Ng组 p-NF-κb/NF-κb水平增加,IL-6和TNF-α的蛋白质和mRNA水平增加（P＜0.05）,而Ng-Pb组和 Ng-Val组p-NF-κb/NF-κb水平以及IL-6和TNF- α的蛋白质和mRNA水平均较Ng组降低（P＜0.05）。结论 Pb可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路和NF-κb介导的促炎症因子的产生, 从而抑制AngⅡ诱导的大鼠系膜细胞合成ECM。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

丹皮酚对TNF-α诱导真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA及细胞因子表达的影响

目的通过研究丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA及细胞因子表达的影响,探讨丹皮酚抗皮肤炎症的可能机制。方法采用RT-PCR法考察正常人真皮成纤维细胞中MMP-9 mRNA表达情况以及丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA表达的影响。采用ELISA法测定丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞表达IL-1β、IL-6及IL-8的影响。结果MMP-9在正常真皮成纤维细胞上表达极弱,TNF-α可以诱导MMP-9 mRNA的表达,丹皮酚可以抑制TNF-α诱导引起的MMP-9 mRNA表达的上调。成纤维细胞可分泌少量的IL-1β、IL-6及IL-8,TNF-α可以明显增加成纤维细胞IL-1β和IL-8的分泌量,丹皮酚可以抑制TNF-α诱导的IL-1β和IL-8的产生,但对IL-6的分泌无影响。结论丹皮酚可以抑制TNF-α诱导真皮成纤维细胞引起的MMP-9 mRNA及炎症因子IL-1β和IL-8表达水平的上调。     

甲氨蝶呤对炎性细胞因子及丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的：探讨甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）对类风湿关节炎（RA）发病起重要作用的炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的作用及其可能的机制.方法：用Ⅱ型胶原建立类风湿关节炎（CIA）动物模型,以MTX（0.2 mg/kg/W）进行处理,6周后处死大鼠,取血清进行IL-1β和TNF-α检测;分离大鼠膝关节取关节滑膜细胞（FLS）进行培养、鉴定,检测脂多糖（LPS）诱导的FLS培养上清中IL-1β和TNF-α的含量,并观察MTX对FLS分泌IL-1β和TNF-α的影响;在FLS的培养中加入不同剂量的MTX,用Westen Blot方法检测FLS中ERK蛋白及磷酸化蛋白的表达.结果：关节炎指数评分、关节肿胀度测定及关节病理显示造模成功,分离关节滑膜细胞经流式细胞仪检测FLS的血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达为85.5％.造模后,CIA大鼠血清IL-1β和TNF-α明显增加,与空白对照组比较有统计学差异（P＜0.05）,MTX能有效减少CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量（P＜0.05）,但未能恢复至正常水平.MTX能抑制LPS诱导的CIA大鼠关节FLS分泌IL-1β和TNF-α.Western Blot检测显示,不同浓度的MTX对CIA大鼠FLS中ERK蛋白的表达与模型对照组相比无统计学差异（P＞0.05）.CIA大鼠FLS中p-ERK蛋白的表达明显高于空白对照组（P＜0.01）,MTX干预后,低剂量组对p-ERK蛋白表达无明显影响,而中、高剂量组可降低p-ERK蛋白的表达（P＜0.05）.结论：MTX既有免疫抑制作用,同时还通过抑制炎性细胞因子IL-1β和TNF-α而具有抗炎作用,其机制可能部分与其抑制MAPK信号通路中的ERK蛋白磷酸化有关.     

姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应

目的 研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法 100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞不同时间（1、3、6、12、24 h）,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA表达变化。100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞12 h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10 μmol/L姜黄素处理,对照组（不添加CoCl₂）和模型组给予等体积DMSO;qRTPCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位。结果 CoCl₂上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12 h达到高峰。与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10 μmol/L浓度组差异显著（P<0.05）;显著下调p65的磷酸化水平（P<0.05）;导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加（P<0.05）。结论 姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应。     

白藜芦醇抑制人牙龈成纤维细胞炎症和氧化应激的机制研究

目的 探讨白藜芦醇（RSV）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）诱导的人牙龈成纤维细胞（HGF）的炎症和氧 化应激的调节作用。方法 原代培养HGF,将细胞分为实验1和实验2：实验1细胞分为对照组、LPS组、RSV 20 μmol/L 组、RSV 40 μmol/L组、RSV 80 μmol/L组、LPS+RSV 20 μmol/L组、LPS+RSV 40 μmol/L组和LPS+RSV 80 μmol/L组;实 验2细胞分为对照组、LPS组、LPS+RSV 40 μmol/L 组、LPS+RSV 40 μmol/L+E5564组和LPS+E5564组。通过CCK-8 法评估细胞活力。利用酶联免疫吸附试验测定白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子（TNF）-α、超氧化物歧 化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。通过Western blot分析测量蛋白的表达水平。结 果 20、40和80 μmol/L RSV对HGF均没有明显的细胞毒性作用。在LPS诱导的HGF细胞中,40和80 μmol/L RSV 通过下调IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的表达减弱炎症反应,降低了MDA的含量,并显著提高了SOD的水平,80 μmol/L RSV显著提高了GSH-Px水平（P＜0.05）。此外,20、40和80 μmol/L RSV可诱导Toll样受体4（TLR4）/MyD88/NF-κB 信号通路的失活,其均可降低TLR4、MyD88和p-p65蛋白的表达水平（P＜0.05）。TLR4抑制剂（E5564）通过下调IL- 1β、IL-6、IL-8和TNF-α的产生以及上调GSH-Px水平进一步增强了RSV对炎症和氧化应激损伤的缓解作用（P＜ 0.05）。结论 RSV可通过诱导TLR4/MyD88/NF-κB信号通路失活,减轻LPS导致的HGF炎症和氧化应激损伤。     

丹皮酚通过雌激素受体α调控巨噬细胞表型转换

目的基于雌激素受体α(ERα)研究丹皮酚对巨噬细胞表型转换的影响。方法利用100μg·L^-1脂多糖(LPS)和20μg·L^-1γ-干扰素(IFN-γ)联用复制巨噬细胞M1极化模型。ELISA实验观察丹皮酚对白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。进一步用Western blot检测巨噬细胞M1表型标志物一氧化氮合酶iNOS、CD86和M2表型标志物精氨酸酶-1(Arg-1)、CD163的表达,并利用阻断剂和shRNA干扰的方法验证丹皮酚的效应是否通过ERα实现。结果ELISA结果表明丹皮酚可降低模型组TNF-α、IL-1β和MDA的含量,升高IL-10和SOD的含量。Westernblot结果显示,丹皮酚可降低模型组iNOS、CD86的蛋白表达,升高Arg-1、CD163的蛋白表达。ERα选择性阻断剂MPP和ERαshRNA均能降低丹皮酚的药效,ERβ选择性阻断剂PHTPP对丹皮酚的效应没有明显改变。结论丹皮酚可通过ERα诱导巨噬细胞向M2型转化,改善动脉粥样硬化。     

大麻素受体2激动剂AM1241对TGF-β1诱导的HSC-T6增殖、活化及凋亡的影响

目的 探究大麻素受体2激动剂AM1241对转化生长因子（TGF）-β1诱导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增 殖、活化与凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养HSC-T6,采用CCK-8法检测AM1241对空白对照组（空白培 养基）、阴性对照组（未加药品）、TGF-β1 组（5 μg/L TGF-β1）及 20、40、80、160 μmol/L AM1241 组（5 μg/L TGF-β1+ 20、40、80、160 μmol/L AM1241）HSC-T6增殖的影响,计算半数抑制浓度（IC50）。采用流式细胞术检测阴性对照组、 TGF-β1组、30 μmol/L AM1241组、60 μmol/L AM1241组HSC-T6凋亡情况;采用Western blot检测阴性对照组、TGF- β1 组、27 μmol/L AM1241 组 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、凋亡相关蛋白 Bax、 cleaved caspase-3、JNK及磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达水平。结果 与TGF-β1组比较,AM1241可 抑制HSC-T6增殖能力,且呈剂量依赖性（P＜0.05）。AM1241的IC50为27 μmol/L。30、60 μmol/L AM1241组HSC-T6 凋亡率较TGF-β1组明显上升,且60 μmol/L AM1241组高于30 μmol/L AM1241组（P＜0.05）。27 μmol/L AM1241组 α-SMA 和 bFGF 蛋白表达水平较 TGF-β1 组降低,Bax、cleaved caspase-3、p-JNK 蛋白表达水平较 TGF-β1 组升高 （P＜0.05）。结论 大麻素受体2激动剂AM1241能抑制TGF-β1诱导的HSC-T6的增殖与活化,并促进其凋亡,其作 用机制可能与JNK通路有关。     

人参皂苷Rg1对脂多糖诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1(简称Rg1)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及机制。方法常规培养PC12细胞后分为六组:A组作为对照,B组细胞采用LPS 5μg/mL处理,C组细胞采用Rg1 10μmol/L+LPS 5μg/mL处理,D组细胞采用Rg1 20μmol/L+LPS 5μg/mL处理,E组细胞采用Rg1 30μmol/L+LPS 5μg/mL处理,F组细胞采用佛波酯(PMA)20 ng/mL预孵育1 h后再用Rg1 10μmol/L+LPS 5μg/mL处理。采用CCK-8法检测细胞生存率,ELISA检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平,二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶(LDH)水平,荧光法检测活性氧(ROS)水平,Western blot检测核因子抑制蛋白(IκBα)和p65蛋白表达水平。结果与A组比较,B组细胞生存率和IκBα蛋白水平降低,IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、LDH、ROS和p65蛋白水平升高(P<0.05)。与B组相比,Rg1能够呈浓度依赖性地提高PC12细胞生存率和IκBα蛋白...     

柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应

目的 探讨柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路对脂多糖（LPS）致HaCaT细胞炎症损伤的抑制作用。方法 LPS（0、0.1、1.0、10.0、20.0 μg/mL）孵育24 h刺激人永生化角质细胞HaCaT,模拟银屑病模型,MTT法观察细胞存活率变化,Western bloting法检测白介素（IL）-6和NF-κB蛋白表达;MTT法观察柚皮苷（0、5、10、20、40、80、160、320μmol/L）作用24 h对HaCaT存活率的影响;选择LPS、柚皮苷最佳作用浓度。柚皮苷（20和40 μmol/L）作用银屑病模型HaCaT细胞24 h,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测IL-6、IL-1β、IL-17和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达水平变化;Western blotting法检测细胞核内转录因子NF-κB p65、P38 MAPK磷酸化蛋白水平以及炎症因子IL-6蛋白水平。结果 LPS增加HaCaT细胞存活率,并上调NF-κB p65和IL-6蛋白表达,呈剂量相关性,炎症反应在20 μg/mL达到高峰;5~160 μmol/L柚皮苷对HaCaT细胞无明显毒性作用。与模型组比较,柚皮苷能够显著抑制炎症因子IL-6、IL-1β、IL-17和TNF-α的转录水平（P<0.05）;同时能够显著抑制LPS诱导的NF-κB p65和P38 MAPK磷酸化蛋白水平、抑制IL-6蛋白的表达（P<0.05）。结论 柚皮苷抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应,发挥改善银屑病的作用,机制可能与抑制P38 MAPK/NF-κB信号通路有关。     

氧化苦参碱下调ZNF580以抑制LTC-14细胞分泌细胞外基质的分子机制研究

目的 探讨氧化苦参碱（OM）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的大鼠胰腺星状细胞 LTC-14中细胞外 基质（ECM）分泌的影响及其分子机制。方法 取生长良好的 LTC-14细胞株,分为对照组（正常培养的 LTC-14细 胞）,TGF-β1组（10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）,TGF-β1+OM组（1 g/L OM预处理 30 min,再加入 10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）,TGF-β1 + SiZNF850组（LTC-14细胞中瞬时转染 ShRNA-ZNF580质粒,24 h后加入 10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）。实时定量 PCR、Western blot 检测细胞内 Smad2、Smad3、ZNF580、α-肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）的mRNA和蛋白表达情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ECM中 胶原蛋白-Ⅰ（Col-Ⅰ）、Col-Ⅲ、纤维连接蛋白（FN）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的分泌情 况。结果 TGF-β1诱导的 LTC-14细胞中 Smad2、Smad3、ZNF580和 α-SMA的 mRNA和蛋白表达水平均升高（P＜ 0.05）,MMP-2/TIMP1比值下降（P＜0.05）,且 Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α和 IL-1β的分泌水平升高（P＜0.05）;而用 OM预处理或沉默 ZNF580基因后,LTC-14细胞中 TGF-β1/Smads通路 Smad2、Smad3、α-SMA和 ZNF580的 mRNA和 蛋白表达水平均下调（P＜0.05）,MMP-2/TIMP1表达比值升高（P＜0.05）,细胞外基质 Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α和 IL-1β分泌水平均降低（P＜0.05）。结论 OM通过抑制胰腺星状细胞LTC-14中TGF-β1/Smads通路激活,下调ZNF580, 阻滞胰腺星状细胞的活化,使ECM分泌减少、降解增多,减轻胰腺纤维化。ZNF580可能是OM作用的分子靶点。     

[10]-姜酚对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

目的：研究[10]-姜酚对缺氧/复氧诱导原代乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法：提取原代乳大鼠心肌细胞,分为空白对照组、模型组、[10]-姜酚不同剂量组（1、3、10 μmol?L-1）。细胞缺氧4 h,复氧2h制备缺氧/复氧损伤模型;CCK-8法测定心肌细胞存活率;测定细胞上清液中生化指标,如乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）;测定上清液中炎症因子,如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）含量;Western blot 测定心肌细胞RhoA、ROCK1、p-NF-κB蛋白表达。结果：与模型组相比,[10]-姜酚增加乳鼠心肌细胞存活率,显著降低细胞上清液中LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6、IL-1β含量。[10]-姜酚能降低心肌细胞中RhoA、ROCK1、p-NF-κB蛋白表达。结论：[10]-姜酚对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制RhoA/ROCK1/NF-κB信号通路、减轻炎症反应相关。     

非诺贝特改善脂多糖诱导的急性肺损伤及其机制研究

摘要：目的　探究非诺贝特（Fen）对急性肺损伤（ALI）的作用及机制。方法　（1）体内实验。30只C57BL/6雄性小鼠采用随机数字表法分成6组：正常组,模型组（LPS组）,阳性药地塞米松（DXMS）组,Fen低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组。分组给药12 h后,收集肺泡灌洗液（BALF）,处死小鼠,获取肺组织,记录肺组织湿/干质量比;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-1β含量;BCA比色法和瑞氏-吉姆萨染色检测BALF中总蛋白含量和免疫细胞数目;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病变并进行病理评分。Western blot检测肺组织B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）表达。（2）体外实验。实验设Control、LPS（10 mg/L）、LPS+Fen（5 μmol/L）、LPS+Fen（10 μmol/L）、LPS+Fen（20 μmol/L）组。A549细胞经LPS（10 mg/L）处理后分别加入5、10、20 μmol/L的Fen处理12 h,分别用DCFH-DA、Annexin V-FITC/PI法和Western blot检测Fen对A549细胞ROS、凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及p-JNK影响。另选取LPS（10 mg/L）+Fen（20 μmol/L）处理后添加H2O2（100 μmol/L）,观察细胞ROS、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达变化。此外,选取LPS（10 mg/L）+Fen（20 μmol/L）处理后添加JNK激动剂Anisomycin（3 μmol/L）,观察Bcl-2、Bax表达变化。结果　（1）与正常组相比,模型组小鼠肺组织湿/干质量比,肺组织损伤评分,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,肺泡灌洗液总蛋白含量,免疫细胞数目,p-JNK和Bax表达均出现显著升高,Bcl-2表达显著降低。与模型组相比,Fen低、中、高剂量组上述指标变化均被逆转。（2）Fen能显著减少LPS诱导的A549细胞ROS含量,降低凋亡率,抑制p-JNK和Bax表达并促进Bcl-2表达。H2O2可逆转Fen引起的上述效应。Anisomycin也能抑制Fen引起的Bcl-2上调和Bax蛋白下调。结论　Fen可通过ROS/JNK信号抑制细胞凋亡,从而减轻ALI。     

冰岛刺参岩藻聚糖硫酸酯对胰岛素抵抗小鼠炎症改善作用的研究

目的 研究冰岛刺参岩藻聚糖硫酸酯（fucoidan from the sea cucumber Cucumaria frondosa, Cf-FUC）对胰岛素抵抗小鼠炎症反应的改善作用。方法 以高脂高糖饲料饲喂法建立胰岛素抵抗小鼠模型。雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、Cf-FUC组。正常对照组饲喂标准饲料,其它组饲喂高脂饲料。阳性对照组、Cf-FUC组分别在饲料中添加罗格列酮（rosiglitazone, RSG, 1 mg?kg?1?d?1）、Cf-FUC (80 mg?kg?1?d?1）。各组小鼠自由摄食摄水19周。实验结束后,检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、MIP-1、IL-1β、IL-6和IL-10表达水平,荧光定量PCR方法检测小鼠脂肪组织炎症细胞因子基因mRNA表达水平,Western方法检测JNK1、IKKβ磷酸化蛋白水平及细胞核和细胞质中NFκB蛋白表达量。结果Cf-FUC可显著降低胰岛素抵抗小鼠血清TNF-α、MIP-1、IL-1β和IL-6浓度,增加IL-10浓度;抑制小鼠脂肪组织TNF-α、MIP-1、IL-1β和IL-6基因mRNA表达,促进IL-10基因mRNA表达;抑制JNK1和IKKβ的磷酸化,增加细胞质中NFκB蛋白表达量,减少细胞核中NFκB蛋白表达量。结论Cf-FUC能通过抑制JNK和IKKβ/NFκB信号通路抑制促炎症因子分泌,增加抑炎症因子分泌,改善胰岛素抵抗小鼠的炎症反应。     

大黄素通过调控TLR4/NF-κB通路对脂多糖诱导血管内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

目的 研究大黄素对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）氧化损伤的保护作用及机制。方法 运用CCK-8细胞活力检测法筛选LPS体外诱导HUVEC细胞氧化损伤模型浓度及大黄素给药浓度。取HUVEC细胞,分为对照组、模型组（1 μg/L LPS）、吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（PDTC,阳性药,10 μmol/L）组和大黄素低、高剂量（40、80 μmol/L）组,置于37℃、5% CO₂培养箱中培养24 h。ELISA法测定各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;采用Western Blotting法检测各组细胞中Toll样受体（TLR4）、核因子κB（NF-κB p65）、TNF-α蛋白的表达。结果 LPS浓度为1 μg/L,作用24、48 h,HUVEC细胞存活率分别为64.8%、51.2%; 40、80 μmol/L大黄素作用24、48 h对HUVEC细胞存活率无显著影响,选择1 μg/L作为LPS造模浓度,40、80 μmol/L作用24 h作为大黄素给药条件。与对照组比较,模型组HUVEC细胞增殖活力显著下降,NO、MDA、ROS、TNF-α含量显著升高,TLR4、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达升高（P<0.01）;与模型组比较,40、80 μmol/L大黄素给药后HUVEC细胞生存率显著升高,NO、MDA、ROS、TNF-α含量显著降低,TLR4、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达显著降低（P<0.05、0.01）。结论 大黄素对LPS诱导的HUVEC细胞氧化损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、抑制炎症有关。     

黄芪多糖对小鼠慢性肾功能衰竭保护作用的机制研究

目的　探讨黄芪多糖（APS）对慢性肾功能衰竭小鼠的保护作用及其潜在分子机制。方法　雄性Balb/c小鼠采用5/6肾切除建立慢性肾功能衰竭模型,随机分为模型组和黄芪多糖干预组（APS组）,另设假手术组,每组10只。术后正常喂养7周,APS组给予黄芪多糖100 mg/（kg·d）灌胃,余组均给予等体积生理盐水。4周后收集粪便、尿、血液、肾脏与结肠组织样本,测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量;组织固定包埋切片后予以HE、天狼星红染色进行病理分析;Western blot、免疫组织化学染色检测紧密连接蛋白-1家族（Claudin-1、Occludin-1、ZO-1）及p-NF-κB表达水平;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度;实时荧光定量PCR检测长链非编RNA（lncRNA）Arid2-IR及IL-1β、IL-6、TNF-α的表达变化以及各组小鼠粪便的菌群变化。结果　APS组小鼠血Scr、BUN、24 h尿蛋白较模型组下降;HE染色显示APS组肾脏、结肠组织病理损伤均较模型组改善;天狼星红染色可见APS组纤维化程度明显改善;Western blot、免疫组织化学染色结果可见APS组结肠组织紧密连接蛋白-1家族表达量升高及肾组织p-NF-κB蛋白表达量较模型组明显下降;ELISA结果显示APS组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平较模型组明显下降;实时荧光定量PCR结果可见APS组肾组织中lncRNA Arid2-IR、IL-1β、IL-6和TNF-α的相对表达水平较模型组明显下降,同时APS组乳酸杆菌、双歧杆菌的表达量较模型组增高,而大肠杆菌的表达量较其下降。结论　黄芪多糖可能通过调控lncRNA Arid2-IR/NF-κB信号轴调节小鼠肠道菌群,从而修复肠道屏障损伤,维持正常肠道生理环境,改善慢性肾功能衰竭。     

醒脑静注射液活性成分麝香酮对LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的影响

目的 筛选醒脑静注射液8种单体（吉马酮、莪术二酮、β-榄香烯、樟脑、莪术烯醇、麝香酮、天然冰片、龙脑）中抑制BV-2细胞炎症反应的活性成分,研究其对炎症因子释放的影响。方法 CCK-8法检测8种单体（10 μmol/L）对小胶质细胞活力的影响;10 μmol/L的8种单体孵育BV-2细胞0.5 h,用0.1 μg/mL脂多糖（LPS）进行刺激,培养24 h后收集上清,Greiss法检测NO浓度;Elisa检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的浓度。不同浓度的麝香酮孵育BV-2细胞0.5 h,用0.1 μg/mL LPS刺激,培养24 h后收集上清,Greiss法检测NO浓度;Elisa法检测TNF-α、IL-6、白介素1受体α（IL-1Rα）的浓度。结果 与对照组比较,醒脑静注射液各个单体成分对正常培养的BV-2细胞无毒性作用。LPS刺激BV-2细胞后,模型组与对照组比较,产生的NO、TNF-α、IL-6、IL-1Rα显著增多（P<0.01）;与模型组比较,麝香酮5.0、7.5、10.0 μmol/L浓度可显著抑制NO、IL-6的产生,10 μmol/L麝香酮可显著抑制TNF-α的产生,差异均有统计学意义（P<0.01）;其他7种单体成分均无显著影响;2.5、5.0 μmol/L麝香酮组IL-1Ra的释放量有升高趋势,但无统计学意义。结论 麝香酮可以显著抑制LPS诱导的BV-2细胞炎性因子的产生。     

芍药苷对脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究芍药苷对小鼠急性炎症肝损伤的保护作用。方法小鼠分为对照组（生理盐水）、模型组(脂多糖,5 mg·kg^-1)、单用芍药苷组(30 mg·kg^-1)、脂多糖(5 mg·kg^-1)+小剂量芍药苷组(10 mg·kg^-1)、脂多糖(5 mg·kg^-1)+大剂量芍药苷组(30 mg·kg^-1),给药体积为0.2 m L/10 g。腹腔注射给药7 d后建立急性脂多糖炎症模型。酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素1-β（IL-1β）水平;比色法检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、还原型谷胱甘肽（GSH）、一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（i NOS）水平;蛋白质印迹法检测转录因子（NF-κB）蛋白表达水平。结果芍药苷使小鼠TNF-α、IL-1β、ALT、AST、MDA、NO水平和i NOS活力下降,SOD、CAT、GSH-Px活性和GSH水平升高;IκB磷酸化蛋白表达减少,NF-κB p65的核转移显著抑制。结论芍药苷对小鼠急性炎症肝损伤具有一定的保护作用。