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1.
目的:检测HER-2阳性的早期乳腺癌患者应用曲妥珠单抗治疗前后外周血循环肿瘤细胞(CTCs)的变化,探讨HER-2基因及曲妥珠单抗对CTCs的影响。方法:应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测15例HER-2阳性乳腺癌及18例HER-2阴性乳腺癌患者术前及化疗后外周血CK19的表达水平,其中10例HER-2阳性乳腺癌患者在化疗结束后,继续应用曲妥珠单抗治疗,3月后再次抽取外周血,qRT-PCR检测CK-19的表达水平。结果:手术前,HER-2阳性乳腺癌患者外周血CK19表达均为阳性,而HER-2阴性患者6例CK19表达阳性(33.3%),二者差异显著。化疗后,14例HER-2阳性乳腺癌患者CK19表达阳性(93.3%),而HER-2阴性患者仅2例表达阳性,二者差异显著。10例HER-2阳性乳腺癌患者化疗后继续应用曲妥珠单抗治疗3月后,外周血CK19的表达明显下降(81.66±68.65 vs 23.35±19.27,P=0.025)。结论:HER-2基因的表达与早期乳腺癌患者外周血CTCs密切相关,而曲妥珠单抗可以降低CTCs的数量,提示CTCs可以作为曲妥珠单抗治疗疗效的早期预测指标。 相似文献
2.
目的:探讨细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)和人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)在检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)中的临床价值。方法:应用实时荧光定量PCR法联合2种生物标志物CK19和hMAM检测乳腺癌循环肿瘤细胞的阳性率,并分析它们与患者临床病理特征的相关性。结果:乳腺癌患者CK19、hMAM及二者联合检测的阳性率分别为45.5%(20/44)、38.6%(17/44)和56.8%(25/44)。CK19联合hMAM检测的阳性率与患者的淋巴结转移状态相关(P=0.031)。治疗前乳腺癌患者CK19、hMAM及二者联合检测的阳性率均显著高于健康对照组(P=0.000 3、P=0.000 1和P=0.000 1);两个化疗周期后,联合检测结果由阳性转为阴性的患者在TNMⅢ期和Ⅳ期中分别为5例和4例,转阴率差异有统计学意义(P=0.025 3和P=0.045 5);但在TNMⅠ和Ⅱ期患者中,CK19、hMAM或二者联合检测的阳性患者经化疗后其数量均下降,且联合检测的阳性患者数量仍高于单检测的阳性患者数量,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:CK19联合hMAM可作为诊断乳腺癌患者循环肿瘤细胞的生物标志物,对于指导乳腺癌患者的早期微转移、治疗和预后判断具有重要意义。 相似文献
3.
目的 检测转移性乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)不同亚型相关基因的表达,探讨其对化疗疗效的预测意义。方法 应用免疫磁性分选(MACS)技术联合逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)法检测58例转移性乳腺癌患者和10例健康人外周血中CTCs上皮型标志物上皮角蛋白(CK18、CK19)和间质型标志物(波形蛋白、纤连蛋白)mRNA的表达。分析上皮型标志物及间质型标志物表达与不同亚型乳腺癌之间的关系,并分别评估具有不同表型CTCs患者之间疗效的差异。结果 在10例健康志愿者的血液样本中,未检测出CK18、CK19、波形蛋白和纤连蛋白mRNA的表达。在58例转移性乳腺癌患者的血液样本中,检测出36例(62.1%)上皮角蛋白表达,19例(32.8%)间质型标志物表达。Luminal A组和HER-2阳性组的上皮型标志物阳性表达率高于三阴性乳腺癌组(P=0.008),而间质型标志物阳性表达率则低于三阴性乳腺癌组(P<0.001)。根据不同标志物的表达情况,将患者分为CKs+/EMT-组、CKs-/EMT-组、CKs+/EMT+组和CKs-/EMT+组,4组有效率依次为76.7%、55.6%、33.3%和15.4%,差异有统计学意义(P=0.002)。间质型标志物阴性者的化疗有效率高于间质型标志物阳性者(71.8% vs. 15.8%,P=0.000)。结论 转移性乳腺癌患者中部分CTCs将发生上皮间质转化而丢失上皮型细胞的表型,获得间质型细胞表型。间质型CTCs因具有更强的抵抗化疗药物的能力而存活,这可能是三阴性乳腺癌疗效不佳的原因之一。 相似文献
4.
目的:检测HER-2阳性的早期乳腺癌患者应用曲妥珠单抗(Trastuzumab)治疗前后骨髓微转移的改变,探讨HER-2基因及Herceptin对骨髓微转移的影响。方法:应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测15例HER-2阳性乳腺癌及18例HER-2阴性乳腺癌患者术前及化疗后骨髓CK19的表达水平,其中10例HER-2阳性乳腺癌患者在化疗结束后,继续应用Herceptin治疗,3月后再次抽取骨髓标本,qRT-PCR检测CK19的表达水平。结果:手术前,14例HER-2阳性乳腺癌患者骨髓CK19表达阳性(93.3%),而HER-2阴性患者8例CK19表达阳性(44.4%),二者差异显著(P=0.000)。化疗后,12例HER-2阳性乳腺癌患者CK19表达阳性(80.0%),而HER-2阴性患者3例表达阳性(16.7%),二者差异显著(P=0.000)。10例HER-2阳性乳腺癌患者化疗后继续应用Herceptin治疗3月后,骨髓CK19的表达明显下降(102.78±98.24 vs 66.92±49.18,P=0.036)。结论:HER-2基因的表达与早期乳腺癌患者骨髓微转移密切相关,而Herceptin可以降低骨髓微转移病灶,提示骨髓微转移情况可以作为Herceptin治疗疗效的早期预测指标。 相似文献
5.
目的探讨可手术乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)的阳性率及其与原发肿瘤临床病理特征的关系。方法以2010年9月至2011年5月期间南京医科大学第一附属医院收治的94例可手术乳腺癌患者为实验组,20例健康志愿者及20例乳腺良性疾病患者为对照组,抽取实验组及对照组患者的外周静脉血10ml,用密度梯度离心法富集分离单个核细胞,以多标志物(CK19、人乳腺珠蛋白、小黏蛋白)联合的实时荧光定量PCR法检测CTCs。采用皮尔逊x。检验分析可手术乳腺癌组与对照组外周血CTCs阳性率的差异,以及CTCs与原发肿瘤临床病理特征的关系。结果可手术乳腺癌组外周血CTCs阳性率显著高于对照组[56%(53/94)比5%(2/40),X^2=30.62,P=0.00]。可手术乳腺癌患者外周血CTCs阳性率在不同的年龄、绝经状态、肿块大小、淋巴结转移、TNM分期、病理分级、病理类型、激素受体状态、HER-2表达、是否为三阴性乳腺癌、分子分型、P53表达、Ki67表达以及增殖细胞核抗原(PCNA)表达分组问差异无统计学意义(P值均〉0.05)。结论可手术乳腺癌患者外周血CTCs的阳性率较高,但其与原发肿瘤临床病理学特征无关系。 相似文献
6.
无假基因干扰的CK19 RT-PCR方法检测乳腺癌外周血微转移 总被引:3,自引:2,他引:3
目的:以CK19为基因标志检测乳腺癌患者外周血中播散的肿瘤细胞,并对其临床意义进行评价。方法:采用优化的无假基因干扰的RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血有核细胞的CK19mRNA表达。结果:1)方法可靠性验证:检测30例正常人外周血CK19mRNA表达,结果无假阳性;将乳腺癌细胞系MCF-7以1∶107与正常外周血有核细胞混合,检测CK19mRNA表达,结果无假阴性。2)检测乳腺癌41例,外周血肿瘤细胞阳性检出率26.8%(11/41);乳腺癌患者外周血肿瘤细胞阳性率在患者不同年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、ER和PR状态的各组间差异无显著性(P>0.05);淋巴结转移阳性病例外周血肿瘤细胞检出率(38.1%)明显高于淋巴结转移阴性组(15.0%),虽然统计学差异不具有显著性(P=0.10),但提示淋巴结转移阳性的患者肿瘤细胞血行播散的危险性有增加的趋势。结论:以CK19为基因标志采用RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞可能是乳腺癌有意义的预后指标,可以为治疗方案的选择、治疗疗效的评价及外周血干细胞移植联合大剂量化疗适应证筛选提供重要依据。 相似文献
7.
[目的]探讨采用免疫细胞化学(ICC)和RT-PCR方法同时检测腋淋巴结阴性乳腺癌(axillary lvmph nodes negative breast cancer,ALNNBC)患者骨髓微小转移的意义.[方法]对常规HE染色腋淋巴结阴性的62例乳腺癌患者采用免疫细胞化学(ICC)和RT-PCR方法检测骨髓细胞角蛋白CK19的表达情况.[结果]ICC法检出CK19阳性表达率为14.52%(9/62),而RT-PCR方法检测则CK19阳性表达率为24.20%(15/62),两者差异有统计学意义(χ^2=4.1667,P=0.0412).[结论]常规病理检查腋淋巴结阴性的乳腺癌患者,用ICC法和RT-PCR法对其骨髓血作进一步检测,可以发现微小转移的存在,RT-PCR方法比ICC更敏感. 相似文献
8.
目的:建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测细胞角蛋白19(CK19)和细胞周期蛋白D1(Ccnd1)基因表达水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法:建立FQ-PCR 法,并以β 2- 微球蛋白为内对照测定15例健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中CK19和Ccnd1 的表达量。结果:正常对照组、良性乳腺疾病和乳腺癌组CK19表达水平分别为(1.42± 0.12,1.46± 0.11,3.29± 2.12)× 10-3,Ccnd1 表达水平分别(1.44± 0.11,1.46± 0.10,3.76± 0.39)× 10-3,两种基因表达水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间无显著性差异(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),β 2- 微球蛋白在三组间差异无显著性意义(P>0.05)。 81例乳腺癌患者中CK19和Ccnd1 的阳性数分别为44例和41例,阳性率分别为54.3% 和40.7% ,良性乳腺疾病组阳性数为0。CK19和Ccnd1 联合检测的阳性数49例,阳性率为60.5% ,两者联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论:FQ-PCR 技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测CK19和Ccnd1 方法,两者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的灵敏度。 相似文献
9.
目的:利用抗体标记和流式细胞仪联合方法检测鼻咽癌外周血中的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)数量,分析评价CTCs与患者临床特征和预后之间的相关性.方法:针对福建省肿瘤医院2012年7月至2014年5月收治的67例鼻咽癌首诊患者以及10例健康志愿者,抽取外周血10ml,提取其中的单个核细胞.依次应用抗Epcam、抗CD45以及抗CK单克隆抗体对上述提取的单个核细胞进行抗体标记,将Epcam阳性、CD45阴性以及CK阳性的细胞作为鼻咽癌患者的CTCs,应用流式细胞仪检测其在外周血中的存在情况,分析其与患者临床特征及预后之间的关系.结果:鼻咽癌组外周血中的CTCs明显高于健康志愿者组,差异具有统计学意义(P<0.05).单因素分析结果表明,鼻咽癌患者外周血CTCs水平与进展情况(P=0.04)、N分期(P=0.001)以及临床分期(P=0.035)均显著相关.Logistic多因素回归分析结果则显示,仅患者的N分期与CTCs水平具有相关性(P=0.003),CTCs阳性患者的N分期更晚.Kaplan-Meier生存分析显示,CTCs阳性患者的无进展生存期(progression free survival,PFS)要显著短于CTCs阴性患者(P=0.029).结论:鼻咽癌患者外周血中CTCs阳性与患者N分期相关,且提示预后不良,可能成为鼻咽癌患者预后评估的一个辅助指标. 相似文献
10.
目的:检测早期乳腺癌患者血清中VEGF及骨髓标本中CK19的表达水平,探讨二者的相互关系及临床意义。方法:应用ELISA法分别检测6例乳腺纤维腺瘤及64例乳腺癌患者血清中VEGF的水平,同时抽取相应的骨髓血标本,应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测标本中CK-19的表达水平,并进行相关性分析。结果:VEGF在乳腺癌患者血清中的表达水平明显高于乳腺纤维腺瘤患者,二者差异显著(P=0.012);在HER2阳性患者中,血清VEGF水平明显高于HER2阴性患者(P=0.016)。CK19在乳腺纤维腺瘤患者骨髓标本中未见表达,在乳腺癌患者骨髓血中,阳性表达24例(37.5%),而骨髓中CK19阳性的乳腺癌患者血清VEGF水平显著高于CK19阴性的患者(110.46±90.65 vs 70.88±77.13,P=0.038),且二者的表达呈正相关。结论:早期乳腺癌患者血清VEGF水平与骨髓微转移密切相关,提示VEGF可能参与了肿瘤细胞的侵袭和播散,可作为早期乳腺癌微转移的血清学指标。 相似文献
11.
目的:探讨联合应用抗细胞角蛋白抗体(cytokeratin,CK)及抗上皮特异性黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)免疫磁珠富集循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的方法,用于提高食管癌患者外周血循环肿瘤细胞检测率。方法:将不同数量的食管癌细胞系(KYSE-170、KYSE-180、EC0156)分别与健康志愿者外周血混合后,比较单独使用抗体磁珠及联合使用双抗免疫磁珠时肿瘤细胞的检出率;并应用优化的方法对20例食管癌患者外周血中的CTCs进行富集鉴定。结果:联合应用抗CK和EpCAM抗体用于富集外周血中CTCs的方法能够提高肿瘤细胞的检出率,其差异具有统计学意义(P<0.05);应用优化的方法富集食管癌外周血中的CTCs检出率为75%。结论:联合应用抗CK和EpCAM抗体的免疫磁珠检测体系能够用于检测食管癌外周血中的CTCs,对指导患者的个体化治疗有较高的临床意义。 相似文献
12.
13.
目的:探讨卵巢癌患者检测循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的意义,及其检测结果与临床特征之间的关系。方法:选取30例卵巢癌患者、15例卵巢良性疾病患者和健康受试者,用免疫磁珠阴性富集联合荧光原位杂交的方法(imFISH)检测循环肿瘤细胞并计数,分析其与年龄、TNM分期、腹水、肿瘤标志物、肿瘤疗效评价之间的关系。结果:卵巢癌患者CTCs数目高于卵巢良性疾病及健康受试者(P<0.05)。外周血CTCs检出的阳性率与肿瘤大小、分化程度、临床T分期、临床M分期之间差异有统计学意义(P<0.05),与年龄、病理类型、肿瘤位置、性质、总分期、腹水、N分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。CTCs阳性率与肿瘤标志物HE4表达水平之间具有相关性。分期越高,CTCs的数值变化范围越大,检出阳性率越高。CTCs与肿瘤疗效评价之间具有相关性。结论:卵巢癌患者外周血中CTCs阳性率与临床特征相关,CTCs检测可以做为临床诊断的辅助方法和检测指标,进一步指导分期、治疗和评估预后。 相似文献
14.
目的:探讨外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)在结直肠癌患者检测中的临床意义。方法:收集陕西省人民医院结直肠癌患者外周血标本57例,良性病变和健康受试者外周血标本29例。应用CyttelTM-CTC平台检测技术(即阴性富集技术结合免疫荧光原位杂交法)检测受试者外周血CTCs,搜集结直肠癌患者临床病理特征,采用统计学方法分析与其外周血CTCs之间的关系。结果:在Cut-off值≥2的结直肠癌患者中CTCs检出率为78.9%(45/57),远高于良性病变及健康受试者中CTCs检出率的6.9%(2/29)(P<0.05)。在Cut-off值≥3的结直肠癌患者中,发生淋巴转移的患者CTCs检出率为62.1%(18/29),高于未发生淋巴转移患者CTCs检出率的32.1%(9/28)(P=0.024)。在Cut-off值≥4的结直肠癌患者中,周围组织侵犯患者CTCs检出率为53.8%(7/13),高于周围组织未侵犯患者CTCs检出率的25.0%(11/44)(P=0.049)。在不同的病理分期中,与癌胚抗原(CEA)检测比较,CTCs检出率均高于CEA检出率。结论:CTC平台检测技术可有效检测结直肠癌患者外周血CTCs,CTCs计数分布与结直肠癌患者的病理分期显著相关,该技术敏感性高,准确性好,对于结直肠癌患者的临床诊断具有重要指导意义。 相似文献
15.
目的探讨利用自主研发的肺癌细胞富集检测试剂盒检测非小细胞肺癌(NSCLc)患者循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性及临床价值。方法采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测4组标本(A组:Ⅰ期NSCLC组,18例;B组:Ⅱ~Ⅳ期NSCLC组,33例;C组:肺部良性病变组,20例;D组:健康志愿者组,20例)外周血中的肿瘤细胞;同时,采用单纯免疫细胞化学(ICC)法及巢式荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞角蛋白19(CK19 mRNA)、肺特异性X蛋白(LUNX mRNA)的表达作对照。结果采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测,A、B、C、D组患者的CK阳性细胞检出率分别为33.3%、60.6%、0%和0%。采用巢式RT-PCR方法检测,A、B、C、D组患者CK19 mRNA表达的阳性率分别为38.9%、63.6%、20.0%和0%,A、B、C、D组患者LUNX mRNA表达的阳性率分别为44.4%、69.7%、10.0%和0%。采用单纯ICC法检测,4组患者的CTCs检出率均为0%。肺癌细胞富集检测试剂盒与单纯ICC法检测比较,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌细胞富集检测试剂盒与巢式RT-PCR方法检测比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组与B、C、D组患者CK阳性细胞的检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);阳性率与病理类型、细胞分化程度和临床分期有密切关系(P<0.05)。结论开发的肺癌细胞富集检测试剂盒是检测早期NSCLC患者CTCs的敏感方法,有助于发现隐形微转移、重新确定临床分期及指导患者术后的个体化治疗。 相似文献
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目的:建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测细胞角蛋白19(CK19)和myc基因表达水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法:建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和151例乳腺癌患者外周血中CK19和myc的表达量。结果:CK19和myc表达水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无显著性意义(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),β2-微球蛋白在三组间差异无显著性意义(P>0.05)。CK19和myc联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论:FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测CK19和myc方法,两者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的灵敏度。 相似文献
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乳腺癌患者外周血中循环癌细胞的检测及其临床意义 总被引:11,自引:1,他引:10
背景与目的近年来,免疫细胞化学和免疫磁珠富集技术已应用于检测乳腺癌患者外周血中癌细胞。本研究拟探索一种全新的改良免疫磁珠富集联合免疫荧光细胞化学技术,检测乳腺癌患者外周血中循环癌细胞,并探讨其临床应用的意义。方法通过放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本检测方法的敏感度。取52例初治乳腺癌患者和20例健康女性志愿者的外周血,分离其单个核细胞,通过与磁珠共价结合的表皮细胞粘附分子(EpiCAM)抗体富集外周血中表达EpiCAM抗原的肿瘤细胞,并通过改良的免疫荧光细胞化学法检测细胞骨架蛋白CK8/18阳性的肿瘤细胞(呈绿荧光),并用DAPI标记细胞核(呈蓝荧光)进一步排除假阳性。结果该改良方法敏感性较高,可在1×107的外周血单个核细胞中检测到一个肿瘤细胞。在20例健康志愿者的外周血中均未检测到CK8/18阳性细胞,特异性为100%。52例乳腺癌患者的外周血中有28例检测到CK 细胞,阳性率为53.8%。两组有显著性差异(P<0.001)。并初步证明乳腺癌患者外周血中循环癌细胞与临床分期、腋窝淋巴结状态呈正相关(P值分别为0.001和0.005)。而与原发肿瘤大小、绝经前后、不同病理类型、不同的组织学分级、激素受体状况及C-erbB2的表达与否无明显相关性(P值均>0.05)。结论改良免疫磁珠富集及免疫荧光细胞化学方法检测乳腺癌患者外周血中的循环癌细胞,简单方便,耗时较少,敏感性、特异性高,本法检测结果证明乳腺癌患者外周血中循环癌细胞与临床分期、腋窝淋巴结状况密切相关。 相似文献
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Bianca Mostert Jaco Kraan Anieta M. Sieuwerts Petra van der Spoel Joan Bolt-de Vries Wendy J.C. Prager-van der Smissen Marcel Smid Annemieke M. Timmermans John W.M. Martens Jan W. Gratama John A. Foekens Stefan Sleijfer 《Cancer letters》2012
Circulating tumor cells (CTCs) can be enumerated using CellSearch, but not all breast cancer subtypes, specifically those with epithelial-mesenchymal transition (EMT) characteristics, sufficiently express the enrichment (EpCAM) and selection (CK8/18/19) markers used in this method. While CD146 can detect EpCAM-negative CTCs, we here evaluated the value of various cytokeratins and CD49f to detect CK8/18/19-negative CTCs. The tested cytokeratins provided no substantial benefit, but adding CD49f to CK8/18/19 as a selection marker resulted in improved recovery of normal-like cell lines. 相似文献