酸性培养对人舌鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响及其机制研究

目的 探究酸性培养条件对人舌鳞癌细胞SCC15和CAL27增殖、凋亡、迁移能力的影响及潜在的分子机制.方法 在pH6.2的酸性培养液中分别培养一定时间,噻唑兰(MTT)法检测舌鳞癌细胞SCC15和CAL27增殖能力;流式细胞分析法检测SCC15和CAL27细胞凋亡水平的改变;划痕愈合实验检测SCC15和CAL27迁移能...     

青蒿琥酯对人舌鳞癌CAL27细胞的体外抑制作用

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人舌鳞癌CAL27细胞的抑制作用及可能的机制.方法:用不同剂量的ART预处理CAL27细胞,然后使用CCK-8和集落形成法进行细胞活力分析,流式细胞仪检测细胞凋亡,并通过划痕实验和Transwell小室测定细胞迁移和侵袭能力.通过qRT-PCR测定基质金属蛋白酶9(m...     

干扰素诱导蛋白10对舌鳞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的: 探讨干扰素诱导蛋白10（IP-10）对舌鳞癌细胞CAL-27增殖、凋亡的影响以及与CXCR3A、CXCR3B基因表达的关系。方法: 将CAL-27 细胞分为 3 个实验组和 1 个对照组,3 个实验组分别采用10、20、40 ng/mL 的IP-10刺激,对照组不予刺激。刺激12、24、48、72 h时,利用CCK-8法检测 4 组细胞的增殖活性;24 h 时,利用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用Q-PCR检测10 ng/mL IP-10作用下,CAL-27细胞在12、24、48、72 h时CXCR3A、CXCR3B mRNA的表达情况。采用SPSS16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果: 12 h和24 h 时,3种浓度的IP-10 均能促进 CAL-27 细胞增殖（P<0.05）;在 48 h 时,只有40 ng/mL的 IP-10 能够促进 CAL-27 细胞增殖（P<0.01）; 而在72 h时,3种浓度的 IP-10对 CAL-27 细胞的增殖均无促进作用（P>0.05）。24 h后,3个实验组与对照组相比,CAL-27细胞的增殖率降低。24 h 时,3种实验组细胞凋亡率分别为（3.377±0.575）%、（6.867±2.848）%和（5.317±2.794）%,与对照组相比具有显著差异（P<0.05）,但各实验组间无显著差异（P>0.05)。12、24、48、72 h时,CXCR3A mRNA的表达量分别为0.0130±0.0007、0.0274±0.0005 、0.0204±0.0011和0.0174±0.0006,组间差异显著（P<0.05）;CXCR3B mRNA的表达量分别为0.0124±0.0015、0.0209±0.0016、0.0297±0.0013和0.0386±0.0010,组间差异显著（P<0.05）。结论: IP-10既能促进舌鳞癌细胞CAL-27增殖又能够诱导其凋亡,随着作用时间的推移,细胞增殖率降低;CXCR3A mRNA的表达先升高后降低,而CXCR3B mRNA的表达逐渐升高。CXCR3A、CXCR3B可能参与调控IP-10诱导下的舌鳞癌细胞的增殖和凋亡。     

塞莱昔布对舌鳞癌细胞Cal-27增殖的抑制作用

目的 探讨塞莱昔布(celecoxib,CELE)对舌鳞癌细胞Cal-27增殖的抑制作用及其机制.方法 CCK-8检测不同浓度(10、20、40、60、80、100μmol/L)CELE作用24 h、48 h后对舌鳞癌细胞Cal-27的细胞毒性,依据CELE的浓度,分为对照组(0μmol/L)与实验组(10、20、40...     

十字孢碱对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨十字孢碱(staurosporine,ST)对人口腔鳞状细胞癌细胞株CAL27增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的ST对CAL27细胞增殖的抑制作用,DAPI荧光染色法观察不同浓度的ST对CAL27细胞凋亡的改变,流式细胞术检测不同浓度ST对CAL27细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度ST对CAL27细胞周期蛋白cyclin D1、Cdk4、Cdk6、p21表达的影响。结果 ST对CAL27细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),抑制作用具有药物浓度依赖性。通过DAPT染色,ST能明显诱导细胞凋亡及凋亡形态改变。CAL27细胞出现Annexin V-FITC/PI流式细胞术观察发现与对照组相比,ST可诱导CAL27细胞凋亡率明显增加(P<0.05),并引起细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,经ST处理细胞后,cyclin D1、Cdk4和Cdk6蛋白表达明显降低,p21蛋白表达升高(P<0.05)。结论 ST可显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖并诱导其凋亡,其机制考虑是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡。     

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的 检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法 体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9表达的影响。结果 三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组（P〈0.05）,细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论 低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。     

Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tea83增殖和凋亡的影响

目的 观察Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83的增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT方法和Annexin V-FITC/PI 染色法观察Zyflamend对Tca83的增殖和凋亡的影响.结果 0.1、0.5、1μl/ml Zyflamend对Tca83细胞增殖有明显的抑制作用,随着Zyflamend浓度增大,抑制作用逐渐增强,呈一定浓度依赖关系.24h和48h时,0.1μl/ml Zyflamend诱导Tca83细胞凋亡率未见明显增加(P>0.05);0.25μl/ml Zyflamend诱导Tca83细胞凋亡率显著增加(P<0.01).结论 Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83有抑制增殖的作用,0.1μl/ml Zyflamend能够诱导Tca83细胞凋亡.     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

VM方案术前诱导化疗对口腔鳞癌细胞凋亡和增殖的影响

本研究采用原位末端标记法 (ｉｎｓｕｉｔｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ ,ＩＳＥＬ)和免疫组织化学技术 ,检测 2 4例口腔鳞癌 (ｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ＯＳＣＣ)经ＶＭ(长春新碱、甲氨蝶呤二药 )方案化疗前后的细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ,ＡＰＯ )和细胞核增殖抗原(ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＣＮＡ)的变化 ,并结合疗效分析化疗抗癌机制。1 材料和方法 :(1)标本收集 :2 4例病理确诊未经治疗的ＯＳＣＣ ,经ＶＭ方案诱导化疗再手术切除 ,手术切取癌组织为化疗后标本 ,…     

HSP27在舌鳞癌中的表达及意义

目的探讨HSP27在舌鳞癌中的表达及意义。方法对19例正常舌黏膜、79例舌鳞癌用免疫组化检测HSP27的表达。对其表达水平进行统计学分析。结果在正常舌粘膜上皮中,HSP27主要位于棘层细胞胞浆,呈棕黄色或黄色颗粒。在舌鳞癌组织中HSP27主要分布于上皮全层,其表达显著高于正常舌黏膜（P〈0.05）,不同分化程度舌鳞癌患者中HSP27的平均表达水平有显著性差异（P〈0.001）,高分化表达水平最高,低分化表达水平最低;不同临床分期以及是否淋巴结转移HSP27的表达无显著差异。结论 HSP27表达的改变可能与舌鳞癌的发生发展有关。     

尼古丁对舌鳞状细胞癌Cal27细胞的生物学影响

目的 探讨吸烟对舌鳞癌患者Cal27细胞系的影响。方法 将舌鳞癌Cal27细胞传代培养,将对数生长期细胞分为空白对照组、尼古丁组及 7型烟碱乙酰胆碱受体（ 7nAChR）抑制组。空白对照组不作任何处理,尼古丁组用尼古丁连续处理细胞1周, 7nAChR抑制组给予尼古丁及 7nAChR抑制剂α-银环蛇毒素（ -BTX）处理细胞1周。采用电子显微镜观察空白对照组及尼古丁组细胞形态;采用CCK-8试剂盒检测空白对照组及尼古丁组细胞增殖力;细胞划痕实验检测空白对照组及尼古丁组细胞迁移能力;Transwell小室检测空白对照组及尼古丁组细胞侵袭能力;免疫印迹实验测定尼古丁组、空白对照组及 7nAChR抑制组细胞Wnt信号通路蛋白相对表达水平。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果 Cal27细胞形态为不规则多角形,体积较大,周围可见伪足伸展,在细胞培养基上呈铺路石样排列。空白对照组、尼古丁组及 7nAChR抑制组Cal27细胞形态无显著差异。孵育96 h后,尼古丁组细胞数显著大于空白对照组及 7nAChR抑制组（P<0.05）;相同时间内尼古丁组细胞划痕愈合程度显著大于空白对照组与 7nAChR抑制组（P<0.05）;相同时间内,尼古丁组穿过小室细胞数显著大于空白对照组及 7nAChR抑制组（P<0.05）;尼古丁组细胞β-catenin、c-Myc、p-GSK3β及Ror2等Wnt通路蛋白相对表达水平显著高于空白对照组及 7nAChR抑制组细胞（P<0.05）。结论 尼古丁可通过激活Wnt信号通路,提高舌鳞癌Cal27细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

RAC1对人舌鳞癌CAL27细胞迁移、侵袭的影响

目的: 构建RAC1基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）,探讨RAC1对人舌鳞癌CAL27细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。 方法: 针对人RAC1基因设计并合成3条siRNA,通过脂质体介导转染进3组人舌鳞癌细胞CAL27中,以抑制RAC1的表达;同时设置阴性对照组（转染无关核苷酸序列）和空白对照组（未转染）,采用实时荧光定量PCR检测细胞中RAC1 mRNA的表达, Western 免疫印迹实验检测RAC1、PAK1、LIMK1蛋白的表达,通过划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。 结果: 细胞转染48 h后,与阴性对照组和空白对照组相比,RAC1干扰组细胞RAC1 mRNA和蛋白表达均显著下降（P<0.05）,PAK1、LIMK1蛋白表达显著下降（P<0.05）,细胞迁移和侵袭能力显著降低（P<0.05）。 结论: 沉默RAC1基因可抑制舌鳞癌CAL27细胞的侵袭和转移,其机制可能与细胞内PAK1、LIMK1的表达下调有关。     

舌鳞癌细胞热处理后HSP27的表达变化

目的 观察热疗后舌鳞癌Tscca细胞中热休克蛋白27 (heat shock protein 27,HSP27)的变化及其对凋亡的作用.方法 常规培养的Tscca细胞分6组,对照组不加热,其余5组43℃水浴法热处理40 min后分别常规培养2、4、8、12、24h,应用蛋白组学方法检测HSP27变化.运用空载质粒(pcDNA3)、pcDNA3-HSP27质粒转染Tscca细胞24h,免疫印迹分析靶细胞中的HSP27表达.43℃水浴处理未转染及转染组细胞0 min、40 min,再培养24 h后流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 加热后12 h内细胞内HSP27持续升高.HSP27质粒转染细胞中HSP27蛋白表达增强.0 min热处理,未转染组、pcDNA3转染组及HSP27质粒转染组细胞凋亡率无差异;40min热处理,未转染组与pcDNA3转染组凋亡率无差异,HSP27质粒转染组分别与未转染组及空载质粒转染组比较,均有差异(P＜0.05).结论 热处理后舌鳞癌Tscca细胞中HSP27含量升高.HSP27的变化与Tscca细胞凋亡的变化有关.     

热疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的 探讨热疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞多药耐药蛋白表达和耐药性的影响.方法 应用免疫组化SP法检测热疔对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance associate protein 1,MRP1)和谷胱甘肽硫-转移酶π(glutathione S-tranferaseπ,GST-π)表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响.结果 Tca 8113/CBDEA细胞在热疗后4 h和24hMDR1、MRP1、GST-π耐药蛋白表达量明显下降(P＜0.01),Tca 8113细胞的耐药基因表达在4 h和24 h时亦有明显下降.热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升.结论 热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,,热疗可能是逆转其耐药提高化疗效果的一种有效手段.     

尼妥珠单抗联合顺铂对人舌鳞状细胞癌细胞株CAL-27的抑制作用

目的 研究尼妥珠单抗(h-R3)联合顺铂(DDP)对人舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)细胞株CAL-27的生长抑制作用.方法 常规培养CAL-27细胞,以5×104/ml的细胞密度种植细胞,实验分为对照组、h-R3组、DDP组及h-R3联合DDP用药组共4组.CCK-8法检测h-R3及h-R3联合DDP组在不同时间对CAL-27细胞的生长抑制情况;分别于24、48及72 h对各组进行摄片并收集细胞培养上清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测h-R3组及h-R3联合DDP组在不同时间对CAL-27细胞分泌表皮生长因子(EGF)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)含量的影响,同时采用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测CAL-27加入不同药物后的凋亡情况.结果 h-R3和DDP单药对CAL-27细胞生长均有抑制作用且呈时间和剂量依赖性,两药单独作用72 h后,对CAL-27细胞的最大抑制率分别为(26.91±7.08)％和(89.18±4.73)％.两药联用对CAL-27细胞增殖的最大抑制率为(93.26±1.03)％,联合用药可提高细胞增殖抑制率,呈相加作用;h-R3及h-R3联合DDP组不同时间凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.01),随着作用时间增加细胞凋亡率亦呈升高趋势;h-R3及h-R3联合DDP组不同时间CAL-27细胞分泌EGF与VEGF含量与对照组比较均显著降低(P＜0.01),而且联合用药与单药比较,EGF和VEGF含量也显著降低(P＜0.05).结论 h-R3在体外与DDP联用可以提高对CAL-27细胞增殖抑制及凋亡作用,同时对CAL-27细胞分泌EGF与VEGF具有抑制作用.     

人骨髓间充质干细胞对舌鳞癌细胞系Cal-27侵袭作用的影响

目的 探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBM-MSCs)对舌鳞癌细胞系Cal-27侵袭的影响及作用机制。方法 分别培养hBM-MSCs和Cal-27,倒置显微镜下观察细胞形态。hBM-MSCs和Cal-27共培养,获得共培养后的Cal-27细胞。划痕实验观察Cal-27的迁移面积;Transwell迁移及侵袭实验观察Cal-27的迁移及侵袭细胞数目,绘制条形图。使用荧光定量PCR技术,观察hBM-MSCs对Cal-27侵袭相关肿瘤标志物E-cadherin、twist、slug、snail、MMP-2、MMP-9基因表达的影响;使用Western 免疫印迹技术,观察hBM-MSCs对Cal-27侵袭相关肿瘤标志物MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果 hBM-MSCs可促进Cal-27的侵袭,伴随E-cadherin下调,twist、slug、snail、MMP-2、MMP-9基因表达上调及MMP-2、MMP-9蛋白表达上调。结论 hBM-MSCs促进Cal-27细胞的侵袭作用,可能与其上调Cal-27细胞侵袭作用相关肿瘤标志物的表达有关。     

舌鳞癌预后与细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨舌鳞癌预后与细胞增殖和凋亡的关系。方法：采用TUNEL法和免疫组织化学法检测52例舌鳞癌细胞中自发性凋亡水平及Bax、Bcl-2、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclea antigen,PCNA)的表达，及其与预后的关系。结果：舌鳞癌中凋亡指数（apoptosis index,AI)、Bcl-2、Bax和PCNA表达的阳性率分别为55．8％、65．4％、73．1％和100．0％。单因素生存分析显示：舌癌患者生存率降低与Bax低表达（P＝0．0020）、PCNA高表达（P＝0．0179）、Bcl-2/Bax比值＞1（P＝0．0072）和高TNM分期（P＝0．0351）有关，但与Bcl-2表达和凋亡指数无关（P＝0．885，P＝0．3536）。结论：Bax、PCNA、Bcl-2/Bax比值和TNM分期一样具有预后价值，综合分析这些指标有助于识别舌癌的生物学特性并准确判断患者的预后。