PRL-3对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的:构建肝再生磷酸酶-3（phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3）基因过表达的重组慢病毒载体,研究其对结直肠癌细胞系HCT116迁移、侵袭能力的影响。方法:PCR扩增PRL-3基因并克隆至pcDH载体,构建成pcDH-PRL-3过表达载体,再将其与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装成Lenti-PRL-3重组慢病毒载体,并感染结直肠癌细胞系HCT116。利用qPCR、Western分别从mRNA、蛋白水平检测PRL-3表达情况;通过划痕实验、Transwell实验研究过表达PRL-3对结直肠癌细胞系HCT116侵袭能力的影响。结果:成功构建Lenti-PRL-3重组慢病毒载体,并在结直肠癌细胞系HCT116过表达。划痕实验、Transwell实验结果表明过表达PRL-3能够促进HCT116细胞的迁移、侵袭。结论:构建Lenti-PRL-3重组慢病毒载体,在结直肠癌细胞系HCT116过表达PRL-3后能增加细胞的迁移、侵袭能力。     

siRNA敲减NEK2表达可提高结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性

目的：探讨敲减中心体相关激酶2（never in mitosis A-related kinase 2,NEK2）对结直肠癌细胞5-FU化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法：采用 qPCR 和 Western blotting 检测结直肠癌细胞中 NEK2 mRNA 及蛋白的表达水平。构建针对NEK2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染至结直肠癌细胞HCT116及SW620,实验分为阳性干扰组1（转染NEK2 siRNA1）、阳性干扰组2（转染NEK2 siRNA2）和阴性对照组（转染si-NC）,均用5-FU处理。采用CCK-8实验、V-FICT/PI Annexin双染色流式细胞术实验观察敲减NEK2基因对5-FU作用下结肠癌细胞的增殖、周期分布及凋亡的影响,采用Western blotting检测敲减NEK2基因对5-FU作用下结直肠癌细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果：NEK2蛋白及mRNA在结直肠癌细胞HCT116、SW620中均呈高表达（P<0.05或P<0.01）,转染NEK2 siRNA可高效抑制HCT116、SW620细胞中NEK2蛋白及mRNA表达（均P<0.01）。经不同浓度5-FU作用后,阳性干扰组1和阳性干扰组2的细胞存活率和IC50均显著低于阴性对照组（均P<0.01）,细胞发生G0/G1期阻滞且凋亡率显著升高（均 P<0.01）,胞核 β-catenin、c-myc 和 cyclin D1 表达水平显著下降而胞质β-catenin表达水平升高（均P<0.01）。结论：敲减NEK2基因可有效提高人结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性,该作用可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达来实现的。     

FOXJ1调控AKT信号通路对结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的 探讨叉头框转录因子J1(FOXJ1)对人结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响及机制.方法 应用Western Blot方法检测人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480及人正常肠上皮细胞FHC中FOXJ1的表达水平.细胞中转染pEGFP-N1-FOXJ1和pEGFP-N1,Western Blot检测细胞中FOXJ1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell小室检测细胞的侵袭能力.结果 人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480中FOXJ1的表达水平均明显低于人正常肠上皮细胞FHC(P﹤0.01).人结直肠癌细胞HCT116中FOXJ1的表达水平下降最多,后续选用HCT116细胞继续研究.转染pEGFP-N1后的细胞凋亡率、侵袭细胞数目及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3、MMP-2、AKT、p-AKT的表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).转染pEGFP-N1-FOXJ1后的细胞凋亡率及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3的表达水平明显高于对照组(P﹤0.01);转染pEGFP-N1-FOXJ1后的侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、p-AKT的表达水平明显低于对照组(P﹤0.01).结论 FOXJ1在人结直肠癌细胞中过表达.FOXJ1能够促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞侵袭,其作用机制可能与AKT信号通路有关.     

DNAJB6b通过激活AKT通路增强结直肠癌细胞的侵袭迁移能力

目的: 探讨DnaJ热休克家族成员B6异构体b(DNAJB6b)过表达对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响及相关分子机制。方法: 使用GEO数据库中的数据统计并分析结直肠癌组织中DNAJB6a和DNAJB6b mRNA表达水平的改变;体外培养结直肠癌细胞系DLD-1和HCT116,分别使用小干扰RNA(siRNA)和短发卡RNA(shRNA)敲降DNAJB6b的表达,以转染阴性对照siRNA和shRNA的细胞作为对照,使用Western blot检测敲降组与对照组细胞中相关蛋白表达水平的变化;使用PI3K/mTOR双重抑制剂BEZ235处理DLD-1和HCT116细胞,以溶剂处理细胞作为对照,进行Transwell侵袭和迁移实验,统计穿膜细胞数目;在稳定敲降DNAJB6b的DLD-1和HCT116细胞中,瞬时转染组成型活化的AKT(myr-AKT)表达载体,进行挽救实验,以转染相应空载体的细胞作为对照,使用Western blot检测相关蛋白的表达水平,同时进行Transwell实验评估细胞侵袭迁移能力的变化。结果: 与癌旁正常组织相比,结直肠癌组织中DNAJB6b mRNA的表达水平显著上调(P<0.05),而DNAJB6a mRNA的表达水平无显著变化。与对照组相比,在结直肠癌细胞系DLD-1和HCT116中敲降DNAJB6b的表达,可明显降低p-AKT(Ser473)的蛋白水平;BEZ235处理组细胞穿膜数目显著减少,仅为对照组的20%左右(P<0.01)。挽救实验结果显示,在稳定敲降DNAJB6b的DLD-1和HCT116细胞中过表达外源myr-AKT,与对照组相比,p-AKT(Ser473)表达水平升高并可显著逆转由于敲降DNAJB6b表达导致的细胞穿膜数目降低(P<0.01)。结论: DNAJB6b在结直肠癌组织中表达上调,其过表达可通过激活AKT通路增强结直肠癌细胞的侵袭迁移能力,提示其异常表达在结直肠癌发生进展过程中发挥促癌作用。     

SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路影响结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨SET和MYND域包含蛋白质2（SET and MYND domaincontaining protein 2,SMYD2）调控结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞迁移和侵袭的机制。方法:从徐州医科大学附属医院收集2019年08月至2020年03月的24对结直肠癌及癌旁组织,进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析SMYD2的表达量。构建SMYD2和腺瘤性息肉病蛋白2（adenomatous polyposis coli 2,APC2）的小干扰RNA,使用Transwell和蛋白免疫印迹实验检测转染后结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。结果:癌组织中SMYD2的mRNA和蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.001,P＜0.05）,且结直肠癌细胞系SW480和HCT116中SMYD2的表达量显著高于正常结直肠细胞系FHC（P＜0.001）。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后细胞的迁移和侵袭能力减弱（P＜0.01）,同时E-cadherin的表达量升高（P＜0.001）,而N-cadherin和Vimentin的表达量降低（P＜0.01）。生物信息学分析显示,SMYD2与APC2的表达呈负相关（P＜0.001）,且APC2可以抑制WNT/β-catenin通路。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后APC2的表达量增高（P＜0.001）,而WNT/β-catenin通路中的β-catenin、c-MYC和CyclinD1表达降低（P＜0.01）。敲低APC2可以恢复SMYD2敲低引起的SW480和HCT116细胞的迁移和侵袭降低（P＜0.001）,E-cadherin升高（P＜0.001）和N-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-MYC、CyclinD1降低（P＜0.01）。结论:在结直肠癌细胞中,SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路促进结直肠癌细胞的上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,从而影响细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-145-5p靶向TAGLN2调控结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的机制探讨

目的:探究微小RNA-145-5p（miR-145-5p）在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其靶向调控肌动蛋白凝胶蛋白2（TAGLN2）对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术对48例结直肠癌患者癌组织、配对癌旁组织、结直肠癌细胞株（HCT8、SW620、HCT116、HT-29）及结直肠黏膜细胞FHC中的miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达进行定量分析。将SW620细胞设为空白对照组、miR-145-5p mimics组、mimics-NC组、pcDNA3.1-TAGLN2组、pcDNA3.1-Vector组和miR-145-5p mimics+pcDNA3.1-TAGLN2组,采用qPCR检测miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达,采用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力,采用免疫印迹法（Western blot）检测TAGLN2蛋白及EMT相关蛋白表达,采用双荧光素酶报告实验检测miR-145-5p和TAGLN2间的靶向关系。结果:miR-145-5p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,并与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）;TAGLN2在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,并与miR-145-5p表达呈负相关（P<0.05）;miR-145-5p和TAGLN2在结直肠癌HCT8、SW620、HCT116和HT-29细胞中的表达水平显著低于或高于FHC细胞（均P<0.05）。miR-145-5p过表达可降低SW620细胞的侵袭和迁移能力。miR-145-5p靶向调控TAGLN2表达,单独转染TAGLN2阳性质粒可增加SW620细胞的侵袭和迁移能力,与miR-145-5p mimics同时转染后,TAGLN2蛋白、波形蛋白（Vimentin）和神经钙黏素（N-cadherin）表达降低,上皮钙黏素（E-cadherin）表达升高,TAGLN2对SW620细胞侵袭和迁移能力的增强作用被显著抑制。结论:miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达状态,其表达水平与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,miR-145-5p靶向调控TAGLN2抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移能力。     

抑制circRNA ABCB10的表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨circABCB10在结直肠癌组织和细胞中的表达及其对细胞生物学行为、放射敏感性和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法收集2018年1月至2018年12月于河南省人民医院治疗的结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁正常组织。采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测结直肠癌组织、癌旁正常组织和结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29中circABCB10和miR-217的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡情况, Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力, 克隆形成实验检测放射敏感性, Circular RNA Interactome预测circABCB10下游miRNAs的表达, 双荧光素酶报告基因实验进一步验证, 裸鼠皮下移植瘤实验检测circABCB10对移植瘤生长的影响。结果结直肠癌组织中circABCB10 mRNA的表达水平(3.97±2.12)高于癌旁组织(1.13±0.64, P<0.05)。正常结肠上皮细胞FHC中circABCB10 mRNA的表达水平(1.00±0.09)低于结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29(分别...     

Linc00704对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨Linc00704（long non-coding RNA 00704）对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 RT-qPCR检测配对结直肠癌及癌旁正常组织、结直肠癌细胞和正常永生化人结肠上皮细胞系FHC中Linc00704 mRNA的表达。反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASO）转染结直肠癌细胞构建Linc00704低表达细胞模型,慢病毒感染结直肠癌细胞构建Linc00704过表达细胞模型,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果 相比癌旁组织,Linc00704在结直肠癌组织中表达降低（t=4.103,P<0.001）。8种结直肠癌细胞系中有6种细胞系（RKO、HCT15、NCI-H716、SW480、SW1463、SW48）Linc00704的表达较FHC细胞低（F=44.750,P<0.001）。沉默 Linc00704表达可促进Caco-2、DLD-1细胞迁移和侵袭能力（均P<0.01）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。过表达Linc00704可抑制RKO、HCT15细胞迁移和侵袭能力（均P＜0.001）,但对增殖无明显影响（均P>0.05）。结论 Linc00704在结直肠癌组织中呈低表达,过表达Linc00704可抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。     

lncRNA LINC00460在结直肠癌组织中的表达及其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00460在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:GEPIA在线数据库和实时荧光定量PCR(qPCR)分析检测lncRNA LINC00460在结直肠癌组织、结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、SW620)及结直肠黏膜上皮细胞NCM460中的表达,进一步分析LINC00460表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。将LINC00460过表达质粒及阴性对照(pcDNA3.1-LINC00460和pcDNA3.1-NC)转染HCT-8细胞,将LINC00460小干扰RNA及阴性对照(si-LINC00460和si-NC)转染SW620细胞,分别采用CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖能力和侵袭迁移能力,采用Western blot实验检测cyclin D1、p21、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:与癌旁组织和NCM460细胞相比较,LINC00460在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、S...     

PHF1在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:探讨PHF1在结直肠癌(CRC)中的表达以及对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:将SW480和HCT 116细胞分别分为阴性对照组(si-PHF1-NC组,转染si-PHF1-NC)和实验组(si-PHF1组,转染si-PHF1),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测CRC组织和细胞中PHF1的mRNA水平;免疫组化法检测CRC组织中PHF1蛋白表达;MTT法检测CRC细胞增殖活性;克隆形成实验检测CRC细胞克隆数量;流式细胞术检测CRC细胞凋亡;Transwell小室法检测CRC细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测CRC细胞EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的表达。结果:与癌旁组织相比,CRC组织中PHF1的mRNA水平和阳性细胞数均显著升高(P<0.05);与正常细胞NCM460相比,CRC细胞SW480和HCT 116中PHF1的mRNA水平也显著升高(P<0.05);与si-PHF1-NC组相比,si-PHF1组SW480和HCT 116细胞存活率、迁移...     

NK4基因联合奥沙利铂对人结肠癌细胞株HCT116凋亡和侵袭的影响

目的 探讨NK4基因联合奥沙利铂（oxaliplatin, L-OHP）在人结肠癌细胞HCT116凋亡和侵袭中的作用。方法 构建NK4质粒表达载体,将NK4基因转染至HCT116细胞,采用流式细胞术分析NK4基因联合奥沙利铂对HCT116细胞凋亡的影响,Transwell小室法检测NK4基因联合奥沙利铂对该细胞侵袭的影响。采用金正均Q值法判断NK4基因联合奥沙利铂是否有协同作用;Western blot法检测不同药物作用下相关机制蛋白p-Akt的变化情况。结果 在HCT116细胞中成功构建NK4质粒表达载体,NK4组 mRNA表达水平高于阴性对照组（NC组）和空白组,差异有统计学意义（P<0.01）。与NC组相比,NK4基因联合奥沙利铂促细胞凋亡作用最显著（16.55% vs 46.86%,P<0.05）;抑制细胞侵袭能力最强（0.9% vs 77.4%,P<0.05）;金正均Q值法结果显示NK4基因联合奥沙利铂具有协同相加作用（0.85≤Q<1.15）,且细胞凋亡和侵袭相关蛋白p-Akt的表达在联合用药组中显著下调,亦显示协同作用（P<0.01）。结论 NK4基因协同奥沙利铂可能通过Akt相关信号通路诱导HCT116结肠癌细胞凋亡并抑制该细胞侵袭。     

miR-16对大肠癌细胞增殖能力的影响

目的研究miR-16在大肠癌组织中的表达及其在大肠癌细胞株HCT116和LoVo细胞增殖中的作用。方法运用Realtime PCR法检测miR-16在33对配对肠癌及癌旁正常组织中的表达。HCT116和LoVo细胞转染miR-16 抑制剂、阴性对照剂和模拟剂;CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪进行细胞周期检测;Western blot法检测细胞中cyclinD1、CDK6和GAPDH蛋白表达。结果（1）Realtime PCR结果显示miR-16在大肠癌组织中低表达（P=0.047）。（2）miR-16过表达可抑制HCT116和LoVo细胞增殖,诱导细胞G₀/G₁期阻滞,降低cyclinD1和CDK6蛋白表达。结论miR-16过表达可以抑制大肠癌细胞的增殖能力。     

茯苓酸通过调控AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为

目的：探究茯苓酸（PA）是否通过AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为。方法：常规培养HCT116细胞,并将其分为对照组、MK-2206(AKT抑制剂)组、PA低浓度（PA-L）组、PA高浓度（PA-H）组、PA-H+SC79(AKT激活剂)组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术、Transwell、qPCR法和WB法实验分别检测各组HCT116细胞的增殖活力,克隆形成能力,细胞凋亡,迁移、侵袭能力,E-cadherin、N-cadherin和vimentin mRNA表达以及AKT/MDM2/p53通路相关蛋白的表达。结果：PA可明显抑制HCT116细胞的增殖活力（P<0.05）、克隆形成能力（P<0.05）、迁移和侵袭能力（P<0.05）,诱导其凋亡（P<0.05）,抑制N-cadherin、vimentin mRNA的表达（P<0.05）,促进E-cadherin mRNA的表达（P<0.05）,抑制AKT、MDM2的磷酸化水平（P<0.05）,促进p53蛋白的表达（P<0.05）;AKT抑...     

SP600125对人宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨SP600125对人宫颈癌HeLa细胞的增殖周期、凋亡以及侵袭的影响.方法 采用CCK-8法检测不同时间点不同浓度的SP600125作用后HeLa细胞的增殖状态.确定20μmol/L的SP600125用于后续实验.利用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,DAPI染色观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,...     

敲低DCLK1抑制神经胶质瘤细胞增殖、 迁移与侵袭CSCD

目的探讨双肾上腺皮质激素样激酶 1(DCLK1)对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 RT-qPCR、免疫组织化学染色和Western blot检测胶质瘤组织和细胞(U87和A172)中DCLK1 mRNA和蛋白的表达情况;sh-DCLK1和阴性对照(sh-Con)转染U87和A172细胞;MTT和Transwell法分析敲低DCLK1对神经胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;蛋白印迹法检测敲低DCLK1对神经胶质瘤细胞中TGF-β/Smads信号通路相关蛋白TGF-β1、p-Smad2、p-Smad7表达的影响;将已转染sh-DCLK1或sh-Con的U87细胞注射到BALB/c裸鼠颈部皮下,定期测量瘤体体积,收集瘤体并称重。结果胶质瘤组织和细胞中DCLK1 mRNA和蛋白表达较癌旁正常组织和正常神经胶质细胞均显著升高(P<0.001)。与sh-Con组比,sh-DCLK1组的胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力及细胞中TGF-β1、p-Smad2和p-Smad7表达显著降低(P<0.01;P<0.001);sh-DCLK1组裸鼠体内的瘤体体积和瘤体质量明显降低(P<0.001)。结论敲低DCLK1能抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制TGF-β/Smads信号活性有关。     

那可丁对人结肠癌5-Fu耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu耐药性的影响

目的 探讨那可丁（Nos）对人结肠癌5-氟尿嘧啶（5-Fu）耐药株耐药性的影响及其机制。方法 构建人结肠癌耐药株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu，MTT法筛选出Nos对各组细胞的半数抑制浓度（IC50），观察细胞形态变化，利用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平；RT-qPCR及Western blot检测细胞P38表达和激活水平，以及耐药相关蛋白的表达。结果 成功构建耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu和SW480/5-Fu。与对照组比较，Nos干预后的结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu细胞周期明显阻滞在G₀/G₁期（P<0.01），凋亡率升高，而P38表达及磷酸化受到显著抑制（P<0.01），与耐药相关的多药耐药相关蛋白、肺耐药相关蛋白及P-glycoprotein表达显著降低（P<0.01）。结论 Nos对耐5-Fu的人结肠癌细胞具有一定的毒性作用，降低了耐药细胞耐药性，作用机制可能与抑制P38的表达和磷酸化有关。     

白花丹醌通过E-cadherin增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的 探讨白花丹醌增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制.方法 CCK-8法检测白花丹醌、替莫唑胺、白花丹醌+替莫唑胺组对U251细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测对照组(DMSO)、白花丹醌、替莫唑胺和白花丹醌+替莫唑胺组U251细胞48 h的迁移能力;Transwell实验检测白花丹醌增强替...     

MYEOV对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨骨髓瘤过表达基因MYEOV在人胰腺癌细胞中的表达情况及其下调对胰腺癌SW1990细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建慢病毒载体GV248,转染胰腺癌细胞株SW1990获得SW1990-sh1和SW1990-sh2两个实验组,以空白质粒转染作为阴性对照组,未干预细胞为空白对照组。qPCR和Western blot检测转染前后MYEOV mRNA与蛋白的表达水平;CCK-8法测定细胞增殖能力;划痕实验分析细胞迁移能力。qPCR检测TGF-β/SMAD通路中相关SMADs mRNA表达水平。结果与正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6相比,MYEOV mRNA在6株胰腺癌细胞中表达水平明显增加(P<0.01);但仅在PANC-1和SW1990细胞系中检测到低水平MYEOV蛋白表达。实验组中MYEOV mRNA和蛋白表达均明显下调。与对照组相比,SW1990细胞的增殖和迁移能力明显下降(P<0.001)。下调MYEOV能降低TGF-β通路中SMAD1、SMAD4、SMAD5和SMAD9 mRNA表达(P<0.01),而SMAD2、SMAD3和SMAD7 mRNA仅在SW199...     

环状RNA circUGGT2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circUGGT2在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）中的表达及其对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 收集粤北人民医院胃肠外科2018年9月至2019年3月45例手术切除的CRC组织及相应癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测组织及人正常结肠上皮细胞株NCM460和CRC细胞株HT29、HCT116、SW480、SW620中circUGGT2的表达水平。绘制受试者工作特征（ROC）曲线并计算曲线下面积（AUC）评估circUGGT2的诊断效能。将si-circUGGT2和si-NC分别转染至SW480细胞,采用CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果 与癌旁组织比较,circUGGT2在CRC组织中高表达（P<0.001）,且与患者肿瘤大小、浸润深度和TNM分期有关（均P<0.05）;circUGGT2诊断CRC的AUC为0.702。circUGGT2在4种CRC细胞中的表达水平均高于NCM460细胞（均P<0.001）,尤其在SW480细胞中的表达水平最高。与si-NC组比较,沉默circUGGT2后SW480细胞增殖速率和划痕愈合速率降低（均P<0.05）,克隆形成数目及迁移、侵袭细胞数明显减少（均P<0.05）。结论 circUGGT2在CRC中高表达,沉默circUGGT2可抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭。circUGGT2可能是CRC诊断和治疗的潜在分子靶点。