香青兰总黄酮通过介导自噬改善帕金森病模型小鼠的神经损伤的作用

目的:研究中药香青兰总黄酮(TFD)改善帕金森病模型小鼠神经损伤的作用机制。方法:120只小鼠被随机分为正常对照组20只和观察组100只,观察组小鼠腹腔注射30 mg/(kg·d)MPTP以制备PD小鼠模型,对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,连续7 d后再将观察组小鼠随机分为5组,分别为模型组和TFD治疗组[25、50、75、100 mg/(kg·d)]。治疗组按照小鼠的体重灌胃给药,正常对照组和模型组小鼠给予等容量的生理盐水,连续1个月。通过行为学实验评价小鼠运动功能,通过免疫荧光组织化学技术检测小鼠中脑黑质区组织细胞酪氨酸羟化酶(TH)和选择性自噬接头蛋白(P62)阳性染色的细胞数,采用荧光定量PCR和Western-blot技术检测小鼠黑质区组织的微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、P62、自噬效应蛋白(Beclin1)和TH mRNA和蛋白表达水平。结果:TFD治疗显著增加PD模型小鼠的悬挂运动评分、运动距离和下落潜伏期(P<0.05);TFD治疗增加PD模型小鼠黑质区组织表达P62和TH的阳性染色细胞数,TFD治疗增加PD模型小鼠黑质区组织表达PINK1、Parkin、...     

蒙药香青兰总黄酮对帕金森病模型小鼠的神经保护作用

目的 探讨蒙药香青兰总黄酮化合物(total flavones of Dracocephalummoldavica L.,TFDM)对MPTP诱导帕金森(Parkinson's disease,PD)模型小鼠的神经保护作用.方法 建立MPTP诱导帕金森病模型,通过转棒实验、爬杆实验评价TFDM对PD小鼠运动功能的影响;...     

转染VMAT2基因的CHO细胞抵抗多巴胺毒性作用的研究

目的：探讨囊泡单胺转运体（vesicular monamine transporter-2,VMAT2）对多巴胺（dopamine,DA）毒性的抵抗作用。方法：采用细胞免疫荧光染色法测定VMAT2基因在转染的CHO细胞（VMAT2-CHO）中的表达;MTT比色法检测不同浓度DA作用下的野生型CHO（WT－CHO）和VMAT2-CHO细胞存活率;应用ELISA法DA检测试剂盒测定细胞内DA的水平;采用活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧的水平。结果：VMAT2-CHO细胞内有较强的特异性荧光表达,主要定位在核周区域,胞浆中也有散在的荧光; 0.25～0.4mmol/L DA作用72h, VMAT2-CHO细胞存活率显著高于WT-CHO细胞（P<0.05）;0.4mmol/L DA作用于WT-CHO和VMAT2-CHO细胞24?h,VMAT2-CHO细胞内DA为（199.33±15.155）ng/ml,显著高于WT-CHO细胞（141.4±8.784）ng/ml（P<0.01）;而细胞内活性氧（ROS）水平则由（144.490±5.295 ）U/106cells增加至WT CHO细胞的（217.895±15.885）U/106cells（P<0.01）。结论：转染VMAT2的CHO细胞对DA引起的毒性有显著的抵抗作用。     

枸橼酸铁铵和铁蛋白对原代培养腹侧中脑神经元VMAT-2和DAT表达影响

目的 探究枸橼酸铁铵(FAC)、含铁铁蛋白(Ferritin)和去铁铁蛋白(Apoferritin)对原代培养的腹侧中脑神经元中单胺囊泡转运蛋白-2(VMAT-2)和多巴胺转运蛋白(DAT)表达的影响.方法 以FAC、Ferritin和Apoferritin处理原代培养的腹侧中脑神经元24 h后,应用蛋白质免疫印迹(W...     

香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠Th1/Th2免疫失衡的调节作用

 目的观察香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠辅助T淋巴细胞1（Th1）/辅助T淋巴细胞2（Th2）细胞因子失衡的调节作用。方法采用卵白蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型,给予香青兰总黄酮进行干预后,ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌流液中白介素4（IL-4）、干扰素γ（IFN-γ）及嗜酸粒细胞趋化蛋白1（Eotaxin-1）的水平。结果香青兰总黄酮可剂量依赖性的降低哮喘大鼠支气管肺泡灌流液中IL-4和Eotaxin-1含量,升高IFN-γ含量,减小IL-4/IFN-γ比值（P<0.05或0.01）。结论香青兰总黄酮对支气管哮喘Th1/Th2免疫失衡有一定调节作用。     

囊泡单胺转运蛋白2的研究进展

囊泡单胺转运蛋白2（VMAT2）是囊泡单胺转运蛋白家族（VMATs）成员之一,主要参与单胺类神经递质的转运。VMAT2既可转运突触前释放的神经递质至囊泡中,又可将胞质内有害的单胺隔离到囊泡中。VMAT2功能丧失会导致单胺类囊泡隔离减少,胞浆中单胺聚集。VMAT2缺失会引起亨廷顿病、迟发型运动障碍、帕金森病等中枢神经系统疾病。     

抑郁小鼠大脑GABA 及谷氨酸囊泡转运蛋白表达变化

目的：研究抑郁症发病中GABA及谷氨酸囊泡转运蛋白表达的变化。方法小鼠随机分为对照组和造模组,使用社会失败模型对对照组小鼠造模,之后将其分为对抑郁症敏感组及对抑郁症不敏感组。将3组小鼠分别提取突触蛋白,并使用Western blot检测VGAT及VGLUT1表达丰度。结果对抑郁症敏感组小鼠与对照组小鼠相比,在接触区域的停留时间显著降低,且在角落区域的停留时间显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）;在前额叶皮层、海马中和对照组与对抑郁症不敏感组比较,对抑郁症敏感组VGLUT1及VGAT的表达水平显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）。对抑郁症不敏感组与对照组相比其VGAT及VGLUT1水平的表达差异均无统计学意义（P＞0．05）。在纹状体,虽然对抑郁症敏感组的小鼠VGAT及VGLUT1的表达水平均有增加（P＜0．05）,但是对抑郁症不敏感的小鼠这些蛋白表达也显著增加。结论在抑郁症发病中前额叶皮层及海马兴奋性与抑制性囊泡转运异常,这可能与抑郁症神经递质紊乱有关。     

Genistein对帕金森病模型大鼠黑质铁含量及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 研究染料木素（genistein）对6-OHDA制备的帕金森病（PD）模型去卵巢（OVX）大鼠黑质（SN）多巴胺能神经元、铁含量及Bcl-2蛋白表达的影响.方法 应用6-OHDA制备的OVX PD模型大鼠,侧脑室给予genistein或（17-β-estradiol）17-β雌二醇.免疫组织化学染色酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元和Bcl-2蛋白.Perls铁染色检测SN铁含量.结果 Genistein和17-β-estradiol可明显减少6-OHDA制备的PD模型大鼠单侧旋转行为（P＜0.01）.在损毁侧SN,genistein和17-β-estradiol能促进TH阳性神经元数量显著增多（P＜0.01）,Bcl-2蛋白表达明显增加（P＜0.01）,铁染色阳性细胞数量明显减少（P＜0.01）.结论 genistein具有类雌激素样作用,通过降低SN铁含量及增加Bcl-2蛋白的表达,发挥其对6-OHDA所致PD模型大鼠SN多巴胺神经元的保护作用.     

利血平对转染VMAT_2基因的CHO细胞抵抗鱼藤酮及多巴胺毒性作用的研究

目的研究单胺囊泡转运蛋白 2（VMAT2）抑制剂利血平（RE）作用于转染VMAT2基因的中国仓鼠卵巢细胞（VMAT2 CHO）时,VMAT2 CHO对鱼藤酮（Rotenone）、多巴胺（DA）的毒性抵抗作用。方法采用MTT比色法检测RE与不同浓度Rotenone及DA共同作用下的VMAT2 CHO细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果Rotenone对VMAT2 CHO细胞有毒性作用,随浓度增大,细胞存活率下降;Rotenone和DA对细胞有协同毒性作用。随DA浓度增大,VMAT2 CHO细胞产生的ROS增加;VMAT2抑制剂利血平增加DA的毒性,使同样浓度的DA诱发VMAT2 CHO细胞产生的ROS增加,存活率下降。结论RE使VMAT2功能抑制时DA在胞浆内聚集,触发DA内源性毒性,通过氧化应激系统而发挥毒性作用。DA内源性毒性可协同环境毒物Rotenone增加对细胞的毒性作用。     

帕金森病SD大鼠模型的99Tcm-TRODAT-1放射自显影实验研究

目的：研究多巴胺转运蛋白（DAT）显像剂^99Tc^m -2β-[N，N’-双（2-巯乙基）乙撑二胺基]甲基3-β-（4-氯苯基）托烷（^99Tc^m -TRODAT-1）用于帕金森病（PD）早期诊断的价值。方法：将SD大鼠分成三组：①正常组；②单侧帕金森病（PD）模型组（颅内单侧纹状体毁损）；③多发性腔隙性脑梗死（简称多发性腔梗）模型组（颈动脉注射自体血栓术）。观察正常大鼠纹状体内^99Tc^m-TRODAT-1分布情况。比较各组纹状体^99Tc^m-TRODAT-1的摄取情况。结果：正常大鼠纹状体明显摄取^99Tc^m-TRODAT-1，单侧PD模型鼠毁损侧纹状体^99Tc^m-TRODAT-1摄取较健侧明显减少，多发性腔梗模型鼠的结果与正常组相似。结论：^99Tc^m-TRODAT-1显像剂被纹状体特异性摄取。能为PD病早期诊断提供有利依据。     

偏侧帕金森病猴模型的评价

目的通过测定行为、纹状体多巴胺转蛋白、多巴胺及黑质纹状体多巴胺能神经元评价应用ＭＰＴＰ制备的偏侧帕金森病猴模型。方法经右侧颈总动脉注射ＭＰＴＰ制备偏侧帕金森病猴模型,应用９９ｍＴｃ－ＴＲＯＤＡＴ－１ＳＰＥＣＴ显像观察纹状体多巴胺转运蛋白功能;采用微透析结合高效液相一电化学法检测纹状体细胞外液多巴胺（ＤＡ）及其代谢产物（ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ）含量;免疫组化法观察黑质纹状体酪氨酸羟化酶（ＴＨ）阳性神经元及纤维。结果ＭＰＴＰ注射侧多巴胺转运蛋白密度低于未注射侧,左右侧纹状体感兴趣区的比值为１．１０～１．１８。与未注射侧相比,ＭＰＴＰ注射侧纹状体细胞外液ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ分别降低７０％、３４％和３８％,黑质和纹状体ＴＨ阳性细胞及纤维为对侧的１０％～１５％。结论应用ＭＰＴＰ制备的偏侧帕金森病猴模型与人类早期帕金森病有一定的相似性。微透析和ＳＰＥＣＴ在体检测多巴胺转运蛋白和多巴胺是研究帕金森病的有效手段。     

PD小鼠模型的多巴胺转运蛋白mRNA转录

目的 分析帕金森病（PD）小鼠模型中脑黑质多巴胺转运蛋白（DAT）基因转录状况。方法 用1－甲基－4－苯基－1,2,3,6－四氯吡啶（MPTP）腹腔注射C57BL小鼠,制作PD鼠模型,分10、18d两种;用相同体积生理盐水腹腔注射作为正常对照。以Dot-Blot方法检测小鼠中脑黑质部位DAT基因转录。结果 与正常对照相比,MPTP组小鼠行为异常,中脑黑质部位TH（＋）细胞减少,DATmRNA转录降低（P＜0．05）。正常对照组中小脑部位DATmRNA转录低于黑质部位（P＜0．05）。结论 多巴胺能神经元及其DAT mRNA转录量随PD的发生而减少或降低。DATmRNA转录量可反映残存多巴胺神经元量或功能状况,反映PD的状况,高DATmRNA转录的细胞对MPTP毒物敏感性增强。     

COX-2对帕金森病小鼠黑质内多巴胺能神经元的毒性作用

目的:观察环氧合酶-2(COX-2)对帕金森病(PD)模型小鼠黑质内多巴胺(DA)能神经元的损害作用.方法:采用Lau法制作PD小鼠模型,通过行为学观察,免疫组织化学和免疫蛋白印记法,观察PD小鼠模型的行为学表现,黑质致密部COX-2免疫反应阳性细胞,DA能神经元数量和腹侧中脑(包括VTA和SN)COX-2,酪氨酸羟化酶(TH)表达水平的变化,并观察给予COX-2抑制剂后对上述变化的影响.结果:与对照组小鼠相比,PD组小鼠出现PD典型的行为学表现,黑质致密部DA能神经元和腹侧中脑TH含量分别下降约63%和77%.同时,黑质致密部COX-2阳性细胞和腹侧中脑COX-2含量有大幅升高.经COX-2抑制剂处理的PD小鼠行为表现较轻,黑质致密部DA能神经元和腹侧中脑TH含量仅下降约37%和41%.与单纯PD小鼠比较,黑质致密部COX-2阳性细胞和腹侧中脑COX-2含量明显下降.结论:COX-2对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有毒性作用.     

香青兰总黄酮对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的 观察香青兰总黄酮对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 采用卵白蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型,给予香青兰总黄酮进行干预后,ELISA法检测大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1和TGF-β1的水平.结果 香青兰总黄酮180、360 mg·kg-1可降低哮喘大鼠肺组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1含量及MMP-9/TIMP-1比值(P＜0.05或P＜0.01).结论 香青兰总黄酮可纠正哮喘大鼠MMP-9/TIMP-1失衡,降低TGF-β1水平,改善哮喘气道重塑.     

慢性间断性缺氧对帕金森病模型小鼠黑质凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨慢性间断性缺氧(CIH)对帕金森病模型小鼠黑质凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 44只雄性6周龄C57BL/6小鼠,随机分为对照组、CIH组、百草枯组和百草枯+CIH组,应用免疫组织化学方法(SP法)检测小鼠中脑黑质Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 对照组、CIH组、百草枯组、百草枯+CIH组中脑黑质Bcl-2阳性细胞计数分别为39.45±1.51、28.64±2.66、21.64±1.85、8.45±1.86,Bcl-2的表达逐渐降低,CIH+PQ组较其它3组明显降低(P＜0.01);中脑黑质Bax的阳性细胞计数分别为11.91±1.70、20.73±1.49、30.09±2.98、52.82±2.86,Bax的表达逐渐升高,CIH+PQ组较其它3组明显升高(P＜0.01).结论 慢性间断性缺氧联合百草枯暴露加重了小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡相关蛋白Bax的上调及Bcl-2表达的下调.     

磷酸化c-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的 研究磷酸化c-Jun(p-c-Jun)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型.通过行为学观察,免疫组织化学SP法,免疫荧光双标记法和免疫蛋白印记法,观察模型小鼠行为学变化,观察PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun免疫组织化学变化以及中脑黑质TH、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化;观察给予JNK通路特异性剂SP-600125对上述变化的影响.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状.黑质区TH阳性神经元下降约65%(P＜0.001),中脑黑质TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞显著增加,中脑黑质COX-2表达水平明显升高;p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,p-c-Jun表达水平显著升高.免疫荧光双标记染色可见,COX-2和p-c-Jun共同表达于TH阳性细胞.抑制剂组,经SP600125处理后,模型小鼠PD症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后七天,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%,与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,中脑黑质COX-2表达水平明显降低,p-c-Jun仅表达于黑质区细胞的胞浆内,中脑黑质p-c-Jun表达水平明显下降.结论 p-c-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型中脑黑质COX-2表达中可能起重要调控作用;抑制p-c-Jun表达对帕金森病小鼠可能具有一定的神经保护作用.     

Ghrelin 对MPTP小鼠帕金森病模型黑质TH、Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨Ghrelin对1-甲基-4苯基-1，2，3，6四氢吡啶（MPTP）造成的黑质（SN）多巴胺能神经元损伤的保护作用及可能机制。方法小鼠随机分为对照组、MPTP组和Ghrelin＋MPTP组。腹腔注射MPTP制备帕金森病小鼠模型；Ghrelin＋MPTP组于MPTP注射前，侧脑室微量注射Ghrelin200ng，共8d；对照组以等量生理盐水取代Ghrelin和MPTP。应用半定量RT—PCR技术检测各组小鼠SN内酪氨酸羟化酶（TH）、Bcl-2和Bax mRNA的表达情况。结果MPTP导致小鼠SN内TH mRNA的表达明显低于对照组（F=34．77，q=11．91，P〈0．01），Ghrelin预处理小鼠SN内TH mRNA表达量较MPTP组明显增加（q=5．05，P〈0．01）。MPTP导致小鼠SN内Bcl-2／Bax由对照组的1．13±0．03减少至0．47±0．06（F=111．59，q=17．58，P〈0．01），Ghrelin预处理小鼠Bcl-2／Bax明显高于MPTP组（q=18．94，P〈0．01），可恢复至正常水平。结论Ghrelin预处理对于MPTP造成的TH基因表达量减少有改善作用，该作用可能通过抗凋亡途径实现。     

6-OHDA所致帕金森病模型大鼠黑质FP1基因表达及启动子甲基化状态变化

目的研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病(PD)模型大鼠黑质膜铁转运蛋白1(FP1)基因表达及其启动子甲基化状态的变化。方法采用6-OHDA单侧损毁大鼠内侧前脑束(MFB),免疫组化方法观察脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元细胞存活情况,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测黑质区FP1mRNA表达的变化,甲基化特异性PCR(MSP)检测FP1基因启动子区甲基化状态的变化。结果 6-OHDA单侧损毁大鼠MFB后,与未损毁侧及对照组相比,损毁侧中脑黑质区TH阳性细胞显著减少(t=20.619、18.404,P0.01),FP1表达下调(t=8.123、7.609,P0.01);与对照组相比,实验组注射侧FP1基因启动子区甲基化阳性率增高,差异有显著性(χ2=20.0,P0.01)。结论 6-OHDA所致PD大鼠模型中黑质FP1基因表达降低,该基因启动子区甲基化可能参与FP1的表达下调。     

大鼠帕金森病模型99mTc-TRODAT-1的脑内分布

目的:研究多巴胺转运蛋白(DAT)显像剂99mTc-2β-[N,N'-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷(99mTc-TRODAT-1)用于评价帕金森病(PD)大鼠模型早期改变的价值.方法:将SD大鼠分为3组:①对照组(n=14)只;②单侧PD模型组(n=14)(颅内单侧纹状体毁损);③多发性腔梗模型组(n=12)(颈动脉注射自体血栓术).观察正常对照大鼠脑内、纹状体内99mTc-TRODAT-1分布情况,比较单侧PD模型组健侧与毁损侧及多发性腔梗模型组双侧纹状体99mTc-TRODAT-1的摄取比值.结果:对照组大鼠脑内和纹状体内分布实验表明,纹状体明显摄取99mTc-TRODAT-1;单侧PD模型组大鼠分布实验表明,毁损侧纹状体99mTc-TRODAT-1摄取较健侧明显减少;多发性腔梗模型组大鼠的结果与对照组相似.结论:99mTc-TRODAT-1显像剂被纹状体特异性摄取,为PD病早期诊断提供了有力依据.     

鱼藤酮和MPTP慢性帕金森病小鼠黑质共同差异蛋白研究

目的 通过比较鱼藤酮和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)两种慢性帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠与对照组小鼠黑质蛋白表达谱,找出两种PD模型小鼠共同的差异蛋白,探索筛选出PD的...