miR-623在膀胱癌中的表达及靶向Fascin1抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-623在膀胱癌中的表达及通过靶向Fascin1对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测正常膀胱上皮组织、膀胱癌组织、正常永生化膀胱上皮细胞系(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中miR-623的表达量;采用脂质体瞬时转染miR-623 mimics,划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-623过表达后膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的改变;生物信息学预测miR-623的作用靶蛋白。miR-623过表达后Western blot及双荧光素酶报告基因检测其靶点的表达及结合情况;使用Fascin1特异性siRNA观察膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,并同时转染miR-623 inhibitor进行恢复实验。结果:miR-623在膀胱癌中的表达水平显著低于在正常膀胱组织中的表达（P＜0.05）,在膀胱癌细胞系（T24、UMUC3）中的表达水平显著低于正常膀胱细胞系(SV-HUC-1)（P＜0.05）;miR-623过表达显著抑制T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力。生物信息学预测Fascin1为miR-623的靶基因,在T24和UMUC3细胞中过表达miR-623,能够显著降低Fascin1的蛋白水平;荧光素酶报告基因分析结果证实miR-623作用于Fascin1的3'-UTR。下调Fascin1表达能够抑制膀胱癌T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力,同时抑制miR-623的表达能够提高细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-623在膀胱癌中表达水平降低,是一个抑癌因子;并可能通过靶向Fascin1调节膀胱癌的侵袭和转移能力。     

miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭行为及其作用机制。方法:qPCR检测miR-149-3p的过表达情况;CCK-8细胞增殖实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞的增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-149-3p与S100A4的相互作用;Transwell侵袭实验检测S100A4的异位表达逆转miR-149-3p的抗肿瘤作用。结果:miR-149-3p过表达显著抑制培养的膀胱癌细胞48小时的生长能力;过表达miR-149-3p后在膀胱癌细胞中具有抗迁移和侵袭作用;miR-149-3p能与S100A4的3' UTR特异性结合,调控S100A4的表达活性;S100A4的过表达可以逆转由miR-149-3p引起的细胞迁移和侵袭能力的抑制。结论:miR-149-3p在膀胱癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调节S100A4的表达影响膀胱癌细胞的增殖和迁移。     

Prucalopride通过促进自噬抑制胶质瘤细胞U251增殖

目的:研究Prucalopride对胶质瘤U251细胞增殖、自噬、凋亡的影响,并探讨其相关信号通路。方法:通过CCK8检测细胞增殖的变化;Transwell检测迁移和侵袭的变化;细胞流式实验、Western blot检测细胞凋亡的变化;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p62的表达;AKT/mTOR通路相关蛋白的变化。结果:CCK8显示Prucalopride显著抑制U251细胞的增殖（P＜0.05）;Transwell侵袭实验显示Prucalopride可以抑制脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭（P＜0.05）;细胞流式实验显示Prucalopride促进U251细胞的凋亡（P＜0.05）,Prucalopride处理后细胞凋亡相关蛋白Bax、Active Caspase3水平升高,Bcl-2表达降低;自噬相关蛋LC3、Beclin1表达上调,p62表达下调;p-AKT蛋白和p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:Prucalopride通过抑制AKT/mTOR信号通路激活自噬抑制U251细胞增殖和迁移,促进其凋亡。     

TSHZ3在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞生物学功能的影响

目的:采用生物信息学分析TSHZ3基因在膀胱癌组织中的表达水平,并通过体外实验探讨TSHZ3基因对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及对上皮-间质转化相关蛋白的调控作用。方法:运用Oncomine和GEPIA数据库分析TSHZ3基因在膀胱癌组织中的表达水平,利用HPA数据库分析TSHZ3蛋白在正常膀胱和膀胱癌组织中的表达情况,并收集膀胱癌标本验证TSHZ3蛋白的表达。在膀胱癌T24细胞中转染TSHZ3质粒,CCK8法和克隆形成实验检测过表达TSHZ3基因对T24细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达TSHZ3基因对T24细胞迁移和侵袭的影响,Western blot检测过表达TSHZ3对上皮-间质转化相关蛋白的影响。结果:Oncomine和GEPIA数据库显示TSHZ3基因在膀胱癌组织中的表达水平降低。HPA数据库表明TSHZ3蛋白在正常膀胱尿路上皮组织中呈中等强度染色,而在膀胱尿路上皮癌组织中呈弱-中等强度染色。免疫组化结果显示TSHZ3在癌旁组织中呈现高表达,在膀胱癌组织中呈现低表达。过表达TSHZ3显著抑制T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力。过表达TSHZ3增加E-cadherin蛋白的表达,降低N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结论:TSHZ3基因在膀胱癌中低表达,可作为抑癌基因抑制膀胱癌的发展。     

下调PRDX6对食管癌EC9706细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响

目的:探讨PRDX6表达水平对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响。方法:应用GEPIA数据库分析食管癌组织PRDX6表达情况;将抑制基因PRDX6表达的“PRDX6-shRNA”质粒转染到EC9706细胞(sh-PRDX6组)。qRT-PCR和Western Blot检测转染效果。CCK8法检测增殖活力。划痕实验检测迁移能力。Transwell实验检测侵袭能力。克隆形成实验检测克隆形成能力。Western Blot检测AKT、p-AKT的蛋白表达量。结果:食管癌组织中PRDX6表达水平明显高于癌旁组织。qRT-PCR和Western Blot证实“PRDX6-shRNA”质粒有效抑制PRDX6基因表达。与对照组相比,sh-PRDX6组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著下降,放射敏感性增强。sh-PRDX6组细胞中AKT的表达水平无明显变化,而p-AKT表达水平明显下降。结论:PRDX6促进食管癌细胞EC9706的增殖、迁移、侵袭及放射抵抗。     

二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响

目的:研究二甲双胍（Met）对体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移的影响并探讨其机制。方法:Ishikawa细胞经Met 作用后,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞法检测细胞凋亡及周期分布;划痕法和Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测胰岛素生长因子-1（IGF-1）的表达水平。结果:经Met处理后,Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制,凋亡率显著增高;随着Met浓度地升高,IGF-1蛋白表达水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01）。结论:Met可通过下调IGF-1蛋白的表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞产生抑制增殖、诱导凋亡和降低迁移及侵袭等作用。     

AMPKα过表达对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭和EMT的抑制作用及其机制

[摘要] 目的：探讨AMP依赖的蛋白激酶α（AMP-activated protein kinase α,AMPKα）过表达对膀胱癌T24 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的作用及其机制。方法：建立AMPKα 过表达的膀胱癌T24 细胞株,依据转染质粒的不同分为T24 空白组、pc-DNA空载组和pc-AMPKα 组。用Wb检测T24 细胞AMPKα、EMT相关蛋白及EMT通路相关分子的表达水平,用Hoechst 染色法检测转染后T24 细胞的凋亡,CCK-8 法检测T24 细胞的增殖,细胞划痕愈合实验检测T24 细胞的迁移,Transwell 实验检测细胞的侵袭。结果：成功构建AMPKα 过表达的膀胱癌T24 细胞株。与T24 空白组和pc-DNA空载组比较,pc-AMPKα 组T24 细胞上皮钙黏蛋白水平显著升高（P<0.01）、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平显著降低（均P<0.01）,EMT通路相关信号分子P38、STAT3 活性受到显著抑制（均P<0.01）,细胞发生明显凋亡、增殖能力显著减弱（均P<0.01）;T24 细胞迁移和侵袭能力显著降低（均P<0.01）。结论：AMPKα 过表达可使EMT通路相关分子活性受到抑制,使得膀胱癌T24 细胞发生明显凋亡、增殖受限并使其侵袭和迁移能力降低及伴随EMT的逆转。     

AKT抑制剂DC885对鼻咽癌细胞迁移侵袭能力的抑制及其机制

目的：探讨2-嘧啶-5-酰胺基噻唑类AKT抑制剂DC885对鼻咽癌细胞迁移侵袭能力的抑制及其机制.方法：AKT激酶活性实验检测DC885在体外对AKT激酶活性的影响;MTT法检测DC885对细胞增殖的影响;细胞划痕实验测定细胞迁移能力;Transwell小室实验测定细胞迁移力和侵袭力;蛋白质印迹检测细胞AKT及其下游底物磷酸化水平、MMP2、MMP9、EMT相关指标的表达.结果：DC885在体外抑制AKT激酶活性,并下调AKT下游底物的磷酸化水平.当使用较低浓度（1.25、2.5、5μmol/L）的DC885作用细胞24h,对鼻咽癌细胞增殖的影响并不显著.与对照组相比,实验组细胞的迁移和侵袭能力受到抑制,差异具有统计学意义（划痕实验（H=15.025,P＜0.01）、Transwell细胞迁移实验（H=14.608,P＜0.01）、Transwell细胞侵袭实验（H=14.980,P＜0.01）.不同浓度DC885抑制MMP2、MMP9的蛋白表达水平并呈浓度依赖性.DC885上调E-cadherin、α-Catenin表达水平,下调Vimentin、Fibronectin表达水平,均呈浓度依赖性.结论：DC885对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力有显著抑制作用,其机制可能与抑制MMP2、MMP9的表达水平、逆转EMT现象有关.     

依维莫司负调控mTOR信号通路对膀胱癌BTT739细胞增殖和迁移的抑制作用及机制研究

目的:探索mTOR抑制剂依维莫司(RAD001)对膀胱癌BTT739细胞在体外和小鼠体内增殖和迁移的抑制作用及其作用机制,为依维莫司在临床上治疗膀胱癌提供理论依据。方法:体外培养小鼠膀胱癌BTT739细胞,待其生长至对数期后用梯度浓度的RAD001（0 nmol/L、5 nmol/L、10 nmol/L和20 nmol/L）干预24 h,用MTT法检测细胞增殖的变化;Tranwell实验检测RAD001对BTT739细胞迁移的影响;ELISA试剂盒检测细胞分泌蛋白E-钙黏蛋白表达的变化。Western blot检测Akt、mTOR、4EBP和PTEN蛋白的表达,RT-PCR检测mTOR mRNA的表达。将BTT739细胞接种于昆明鼠皮下,待成瘤后,用依维莫司干预14天,取小鼠肿瘤组织检测E-钙黏蛋白及AKT、mTOR、4EBP和PTEN蛋白表达的情况。结果:体外实验显示RAD001可以抑制BTT739细胞的增殖和迁移并与剂量有关（P＜0.05）。还可以增加E-钙黏蛋白的含量,抑制癌细胞的转移。实验证明RAD001在体外抑制Akt、mTOR、4EBP的表达,促进肿瘤抑制因子PTEN的表达（P＜0.05）。将BTT739细胞接种于小鼠皮下后发现,RAD001在小鼠体内亦可以抑制病变情况,促进PTEN和E-钙黏蛋白的表达,抑制Akt、mTOR和4EBP的表达。结论:mTOR抑制剂依维莫司通过抑制mTOR信号通路抑制膀胱癌细胞BTT739的增殖、迁移和侵袭。     

肝肠-钙黏连蛋白过表达对胃癌细胞BGC-823增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨肝肠-钙黏连蛋白(liver-intestine cadherin,CDH17)过表达对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:采用脂质体转染法建立CDH17基因过表达的BGC-823细胞株;分别采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测转染重组表达载体pcDNA3.1(-)/CDH17后,BGC-823细胞中CDH17mRNA和蛋白的表达水平。MTT法检测CDH17基因过表达对BGC-823细胞增殖的影响;体外侵袭实验及划痕实验检测CDH17基因过表达对BGC-823细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:RFQ-PCR及蛋白质印迹法检测结果显示,转染重组表达载体pcDNA3.1(-)/CDH17的BGC-823细胞中CDH17mRNA及蛋白均过表达;CDH17过表达能明显提高BGC-823细胞的增殖、侵袭及迁移能力(P<0.05)。结论:CDH17基因在BGC-823细胞中过表达能提高胃腺癌的增殖、侵袭及迁移能力,并促进胃腺癌的发生及发展。     

EGFR表达抑制对胃癌AGS细胞生物学行为及化疗敏感性的影响

目的:观察表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）表达抑制对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期及化疗药物敏感性的影响。方法:设计3条EGFR-siRNA,转染胃癌AGS细胞,CCK-8方法测定细胞增殖,Transwell方法检测细胞侵袭和转移能力,流式细胞术测定细胞凋亡与周期,RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达,Western blot方法检测EGFR、ERK、p-ERK、AKT和p-AKT蛋白表达。结果:EGFR干扰能有效抑制胃癌AGS细胞中EGFR的基因和蛋白表达水平（P＜0.05）。与对照组、阴性siRNA转染组相比,EGFR-siRNA转染组AGS细胞增殖抑制显著增加,迁移、侵袭能力显著下降,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性显著增加（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,处于S期的细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,AKT和p-AKT表达下调。结论:抑制EGFR表达可抑制胃癌AGS细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,增加细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性,其机制可能与AKT、p-AKT的表达下降有关。     

lncRNA HEIG对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响及其分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HEIG在宫颈癌组织和细胞中的表达及其生物学功能。方法:采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织和癌旁组织、正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela和C33A中lncRNA HEIG的表达;敲低Hela细胞中HEIG表达,MTT法和流式细胞术分别检测Hela细胞的增殖、凋亡情况;Transwell小室法检测Hela细胞的迁移侵袭能力;Western blot检测AKT信号通路的变化。结果:lncRNA HEIG在宫颈癌组织和细胞中高表达;敲低HEIG可显著抑制宫颈癌细胞Hela的细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,同时抑制AKT信号通路的活化。结论:lncRNA HEIG有可能作用于AKT信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移侵袭。     

Autophagy limits the cytotoxic effects of the AKT inhibitor AZ7328 in human bladder cancer cells

Background: Mutations that activate the PI3K/AKT/mTOR pathway are relatively common in urothelial (bladder) cancers, but how these pathway mutations affect AKT dependency is not known. We characterized the relationship between AKT pathway mutational status and sensitivity to the effects of the selective AKT kinase inhibitor AZ7328 using a panel of 12 well-characterized human bladder cancer cell lines.Methods: Sequenome DNA sequencing was performed to identify mutations in a panel of 12 urothelial cancer cell lines. Drug-induced proliferative inhibition and apoptosis were quantified using MTT assays and propidium iodide staining with FACS analyses. Protein activation via phosphorylation was measured by immunoblotting. Autophagy was measured by LC3 immunofluorescence and immunoblotting.Results: AZ7328 inhibited proliferation and AKT substrate phosphorylation in a concentration-dependent manner but had minimal effects on apoptosis. Proliferative inhibition correlated loosely with the presence of activating PIK3CA mutations and was strengthened in combination with the mTOR inhibitor rapamycin. AZ7328 induced autophagy in some of the lines, and in the cells exposed to a combination of AZ7328 and chemical autophagy inhibitors apoptosis was induced.Conclusions: The cytostatic effects of AZ7328 correlate with PIK3CA mutations and are greatly enhanced by dual pathway inhibition using an mTOR inhibitor. Furthermore, AZ7328 can interact with autophagy inhibitors to induce apoptosis in some cell lines. Overall, our results support the further evaluation of combinations of PI3K/AKT/mTOR pathway and autophagy inhibitors in pre-clinical in vivo models and ultimately in patients with PIK3CA mutant bladder cancers.     

CD73过表达促进前列腺癌细胞增殖

目的:检测CD73过表达对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以PC3细胞为研究对象,利用CD73过表达慢病毒转染PC3细胞,构建CD73过表达的PC3-CD73细胞模型,利用实时细胞分析系统检测CD73对PC3细胞增殖能力的影响,划痕修复实验检测CD73对PC3细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测CD73对PC3细胞侵袭能力的影响,实时荧光定量PCR检测CD73对肿瘤细胞增殖、迁移相关分子表达水平的影响。结果:CD73过表达对PC3细胞的增殖具有显著的促进作用,然而对PC3细胞的迁移、侵袭无明显影响。实时荧光定量PCR结果显示CD73过表达对PC3细胞中EGFR、ERK、AKT以及EMT相关分子标志的表达水平无显著的影响。结论:CD73过表达通过EGFR/AKT通路以外的途径促进前列腺癌细胞增殖。     

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p（miR-379-5p）通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con（miR-con组）、miR-379-5p mimics（miR-379-5p组）分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA（miR-379-5p+pcDNA组）、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL（miR-379-5p+pcDNA-CTSL组）分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织（P＜0.05）;与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）,而促进Cleaved caspase-3蛋白表达（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

EphB1通过PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡

目的:研究促红细胞生成素产肝细胞受体B1(erythropoietin-producing human hepatocellular receptor B1,EphB1)对食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法分析40对食管鳞状细胞癌手术患者的癌组织及邻近正常组织中EphB1表达情况,并分析其临床特征。在EC-9706细胞中分别转染si-EphB1 RNA和oe-EphB1 RNA及其阴性对照。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测转染效率;CCK-8实验分析EphB1对细胞活力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞学实验检测细胞凋亡;划痕愈合实验及Transwell侵袭实验明确细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测EphB1蛋白、增殖相关蛋白［增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）］、凋亡相关蛋白［Bad、Bcl-2、Caspase 3 及剪切型-Caspase 3（cleaved-Caspase 3）］、侵袭转移相关蛋白［基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、Snail、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、E-cadherin］以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、AKT、p-AKT）的表达水平。结果:EphB1在食管鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达(P均＜0.05),EphB1的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的TNM分期、有无淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P均＜0.05)。与对照组相比,通过细胞转染技术沉默EphB1和过表达EphB1使EC-9706细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低或增强,并诱导或抑制细胞凋亡(P均＜0.05)。在蛋白水平上,si-EphB1和oe-EphB1处理EC-9706细胞48 h后,增殖相关蛋白PCNA蛋白表达水平分别显著降低或增加（P均＜0.05）,并分别增加或降低促凋亡相关蛋白Bad、cleaved-Caspase 3的表达水平（P均＜0.05）,下调或上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase 3的蛋白表达（P均＜0.05）,抑制或促进侵袭转移相关蛋白MMP-9、MMP-2、Snail、Vimentin、N-cadherin的蛋白活性,但却上调或下调 E-cadherin的表达水平（P均＜0.05）。同时,Western blotting实验结果还证实EphB1可诱导食管鳞状细胞癌EC-9706细胞中通路蛋白PI3K、p-AKT的活性增强（P均＜0.05）。结论:EphB1可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞的增殖、迁移及侵袭,并抑制其凋亡。