荷瘤小鼠脾脏过度增大的机制

目的研究H22荷瘤小鼠生长过程中脾脏过度增大的机制。方法通对小鼠脾指数与脾脏细胞总数进行相关性分析、检测脾细胞生长周期以及T、B淋巴细胞比例。结果小鼠脾指数与脾脏细胞总数呈显著正相关性(r=1.000,P<0.01);H22荷瘤小鼠与对照组小鼠脾脏细胞的细胞周期无明显差异;H22荷瘤小鼠与对照组小鼠相比脾脏总T淋巴细胞、CD8+T与CD4+T细胞比例增大(P<0.05),B细胞比例基本不变,CD4+ /CD8+ 减小。结论H22荷瘤小鼠脾脏增大与各类免疫细胞转移至脾脏后滞留有直接的关系,其中CD8+T细胞的积累最显著,脾脏的免疫抑制作用与CD8+T细胞有密切的关系。     

癸酸能够活化CD8+ T细胞并提高其抗肿瘤免疫反应能力

目的：探究中链脂肪酸癸酸对CD8+ T细胞活化的影响,及其对CD8+ T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的作用和机制。方法：建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16F10 皮下荷瘤模型,随机分为癸酸组（10 mg/kg 癸酸灌胃）和对照组（等量溶剂灌胃）,观察癸酸对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响,采用流式细胞术检测肿瘤微环境中浸润CD8+ T细胞的活化水平。建立B16F10-OVA和OT-I T细胞共培养体系,采用流式细胞术检测癸酸对CD8+ T细胞的肿瘤细胞杀伤能力的影响。采用α-CD8抗体清除B16F10 荷瘤小鼠体内CD8+ T细胞,观察对小鼠肿瘤体积的影响。小鼠原代CD8+ T细胞经癸酸处理后,采用WB、ELISA及qPCR、流式细胞术检测T细胞受体（TCR）活化、效应细胞因子产生以及增殖和代谢水平。在B16F10荷瘤小鼠模型中,观察α-PD-1抗体联合癸酸给药对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响。结果：在小鼠黑色素瘤荷瘤模型中,与对照组相比,癸酸组小鼠移植瘤体积显著降低且生存率显著提高（均P<0.05）,肿瘤浸润CD8+ T细胞IFN-γ和TNF-α的表达水平显著升高（P<0.01）。经癸酸处理的OT-I T细胞对B16F10-OVA细胞的杀伤水平显著升高（P<0.01）。在荷瘤小鼠模型中用α-CD8 抗体清除CD8+ T 细胞后,癸酸对移植瘤的抑制作用显著降低（P<0.000 1）。小鼠原代CD8+ T细胞经癸酸处理后,TCR活化水平显著升高、细胞因子IL-2和IFN-γ的产生增多、线粒体代谢水平显著上调（均P<0.05）。在黑色素瘤荷瘤小鼠模型中,癸酸与α-PD-1抗体联用,能够显著抑制小鼠移植瘤生长并提高其生存率（均P<0.05）。结论：癸酸能够促进CD8+ T细胞活化、增强其抗肿瘤免疫反应能力。     

口腔鳞癌患者外周血及癌组织中IL-17和Foxp3的表达及意义

目的 探讨口腔鳞癌患者外周血及癌组织中IL-17和Foxp3的表达及意义。方法 选取40例原发初诊经病理证实的口腔鳞状细胞癌患者为实验对象,术前流式细胞术测定外周血中IL-17与Foxp3所占比例及CD3、CD4、CD8、CD56的表达。组织标本为术中立即取材,SP法测定IL-17及Foxp3表达。选取20例良性肿瘤患者瘤旁正常口腔黏膜作组织对照。实验分为A（Ⅰ、Ⅱ期鳞癌患者）、B（Ⅲ、Ⅳ期鳞癌患者）、C（健康者）三组进行组间比较。 结果 A、B组外周血CD4+IL-17+ 细胞、CD4+Foxp3+细胞所占比例均显著高于C组, IL-17+、Foxp3+的表达水平呈正相关（r=0.772,P<0.05）,其中B组CD4+IL-17+、CD4+Foxp3+细胞所占比例高于A组（P<0.05）。与C组相比,A、B组外周血中CD3+和CD4+细胞的百分率、CD4+/CD8+的比值降低,CD8+细胞的百分率升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。 IL-17、Foxp3在A、B组中阳性率均明显高于C组,在A组中阳性表达率低于B组,差异均有统计学意义（P<0.05）,且A、B组癌组织中IL-17与Foxp3的表达水平呈正相关（r=0.386,P<0.05）。结论 IL-17及Foxp3在口腔鳞癌的发生发展中起着一定的促进作用,这种作用可能与机体免疫状态有关。     

CD4+/CD8+ T淋巴细胞在肝细胞癌组织中的浸润及与预后的相关性研究

目的 检测CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的浸润程度,并分析其与预后的相关性。方法 收集行肝切除术的HCC患者215例,采用免疫组化技术检测CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞在HCC癌组织中的浸润程度,根据浸润情况比较患者肝切除术后无瘤生存率和总生存率。结果 CD4⁺ T淋巴细胞高浸润和低浸润比例分别为60.9%和39.1%。CD4⁺ T淋巴细胞高浸润组患者总生存率和无瘤生存率均显著高于低浸润组（P=0.015,P=0.038）。CD8⁺ T淋巴细胞高浸润和低浸润比例分别为34.9%和65.1%。CD8⁺ T淋巴细胞高浸润组患者的总生存率和无瘤生存率亦显著高于低浸润组患者（P=0.033,P=0.047）。结论 CD4⁺或CD8⁺ T淋巴细胞低浸润可能与HCC患者术后不良预后相关。     

左旋棉酚对小鼠宫颈癌移植瘤细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨左旋棉酚［(-)-gossypol,LGP］对顺铂诱导小鼠宫颈癌移植瘤凋亡的影响及可能的作用机制。方法建立小鼠宫颈癌U14细胞皮下移植瘤模型,将60只小鼠按随机原则分为左旋棉酚组、顺铂(Cisplatin,DDP)组、左旋棉酚+顺铂(LGP+DDP)组及模型对照（Model Control）组4组,用药干预8天后采用电子天平称量瘤重并计算抑瘤率;采用TUNEL法检测各组瘤组织的凋亡情况;采用免疫组织化学法检测各组肿瘤组织中Bcl-2、Bax和P-gp蛋白的表达水平。结果各干预组小鼠移植瘤瘤重均低于Model组,其中LGP+DDP组瘤重最低,其次为DDP组(P＜0.01);各组移植瘤组织内AI均高于Model组（P＜0.05）,且LGP+DDP组最高（P＜0.01）;含LGP组移植瘤组织内P-gp、Bcl-2蛋白的表达降低（P＜0.05）, Bax蛋白的表达升高（P＜0.05）,Bax/Bcl-2比值升高,LGP+DDP组的上述作用明显优于单药组（P＜0.01）;相关性分析表明P-gp蛋白的表达量与Bcl-2的表达量呈正相关,与Bax的表达量呈负相关（P＜0.01）。结论 LGP能抑制小鼠宫颈癌移植瘤的生长,且与DDP联合后抑制作用更显著;其可能的机制:LGP可能是通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白诱导小鼠宫颈癌细胞凋亡,降低P-gp蛋白的表达,增加肿瘤组织对DDP的化疗敏感度。     

基于质谱流式细胞技术揭示TP53突变型乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌的免疫微环境特征

目的 探讨TP53突变型乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相关性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的肿瘤免疫微环境特征。方法 收集2018—2019年广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科手术切除的38例HCC患者活体组织标本及其配对癌旁组织标本，提取组织DNA，并进行基因突变分析。采用质谱流式细胞术（CyTOF）比较TP53突变组和TP53未突变组中癌组织与癌旁组织以及两组癌组织之间的免疫微环境特点。结果 采用CyTOF鉴定TP53突变组和TP53未突变组所有免疫细胞，结果鉴定为22个细胞亚群，包括CD4⁺T细胞亚群、CD8⁺T细胞亚群、B细胞亚群、树突细胞亚群、自然杀伤（natural killer cell，NK）细胞亚群、NKT细胞亚群、粒细胞亚群和2个未知细胞亚群。其中，TP53突变组癌组织中CD8⁺T细胞和CD4⁺T细胞的表达比例均较未突变组癌组织高（2.26% vs 0.47%，P=0.028；7.53% vs 3.55%，P=0.046）。结论 TP53突变型HBV相关性HCC的肿瘤免疫微环境具有免疫异质性。     

硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术患者认知功能及细胞免疫功能的影响

目的 探讨硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术患者认知功能及细胞免疫功能的影响。方法 采用查随机数字表法将40例老年肺癌根治术患者随机分为观察组和对照组,每组20例。观察组采用硬膜外阻滞联合全身麻醉,对照组采用静脉全身麻醉。用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法测定CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺细胞和NK细胞水平,简易智力状态检查表（MMES）评估认知功能,VAS评分法及Ramsay镇静评分法评估疼痛和镇静状况,并观察两组患者手术时间、术后恢复自主呼吸时间、苏醒时间以及拔管时间。结果 观察组患者手术时间、术后恢复自主呼吸时间、苏醒时间以及拔管时间均优于对照组（P＜0.05）,但两组患者术后6 h、12 h VAS疼痛评分和Ramsay镇静评分差异均无统计学意义（P＞0.05）。两组患者术后1 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均低于术前（P＜0.05）;CD8⁺细胞水平高于术前（P＜0.05）;观察组患者术后1 d 和7 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平均显著高于对照组（P＜0.05）,但CD8⁺细胞水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。术后7 d两组患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平明显高于术后1 d（P＜0.05）,CD8⁺细胞水平明显低于术后1 d（P＜0.05）;观察组术后7 d CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞水平明显高于对照组（P＜0.05）,CD8⁺细胞水平明显低于对照组（P＜0.05）。两组患者MMES评分均显著低于术前（P＜0.05）,但观察组评分高于对照组;术后认知功能障碍发生率亦低于对照组（P＜0.05）。结论 硬膜外阻滞联合全身麻醉对老年肺癌根治术后认知功能影响较小,同时可促进细胞免疫功能恢复。     

虫草素抑制JAK2/STAT3通路减轻肺癌大鼠放射性免疫功能损伤

目的 探讨虫草素通过JAK2/STAT3信号通路对肺癌大鼠放射性治疗免疫功能损伤的抑制作用。方法 50只大鼠建立荷瘤模型,另设正常组（10只）。建模成功大鼠随机分为模型组、放疗组、虫草素组、激动剂组和激动剂+虫草素组,每组10只。比较各组大鼠瘤重、肿瘤体积、抑瘤率、IL-6、TNF-α、脾指数、胸腺指数、T淋巴细胞亚群数量、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3升高,脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+降低（P<0.05）;与模型组比较,放疗组瘤重、肿瘤体积、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+降低,IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2和p-STAT3升高（P<0.05）;与放疗组比较,虫草素组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3降低,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+升高,激动剂组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3升高,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8 +降低（P<0.05）;与激动剂+虫草素组比较,虫草素组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3降低,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+升高,激动剂组瘤重、肿瘤体积、IL-6、TNF-α、CD8+、p-JAK2、p-STAT3升高,抑瘤率、脾指数、胸腺指数、CD4+、CD4+/CD8+降低（P<0.05）。结论 虫草素可有效抑制肺癌大鼠放射性治疗免疫功能损伤,其机制可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路蛋白表达发挥调控作用。     

肝癌小鼠脾脏免疫细胞的变化及其意义

目的:观察小鼠H22细胞原位种植性肝癌模型中,脾脏正性免疫细胞和负性免疫细胞比例的变化,并且观察脾脏切除后外周血和肿瘤组织免疫细胞比例的变化以及对肿瘤生长的影响。方法:建立小鼠H22细胞原位种植性肝癌模型,在荷瘤的不同时期,用流式细胞术检测脾脏中负性免疫细胞（MDSC、Treg）和正性免疫细胞（总CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞）比例的变化。荷瘤1 w后切除脾脏,用流式细胞术检测外周血及肿瘤组织中免疫细胞比例的变化,并比较切脾前后肿瘤重量、腹水量、荷瘤小鼠生存期的变化。 结果:荷瘤小鼠脾脏MDSC细胞的比例一直高于正常组;Treg细胞在荷瘤2 w时显著升高;总CD3+T细胞和CD4+T细胞在荷瘤1 w时显著升高,2 w时显著下降;CD8+T细胞在荷瘤2 w时明显下降;NK细胞在荷瘤3 w时明显下降;NKT细胞无显著变化。脾脏切除后外周血和肿瘤组织MDSC的比例下降,CD8+T细胞的比例升高;肿瘤重量和荷瘤小鼠生存期无显著变化,腹水量在荷瘤2 w时显著减少,腹水发生率明显降低。 结论:小鼠肝脏种植H22细胞株后,脾脏中正性免疫细胞的比例下降,负性免疫细胞的比例升高,脾脏的负性免疫状态逐渐占主导地位,从而促进了肝癌的发展。     

金龙胶囊联合放化疗治疗肝转移瘤的疗效与安全性Meta分析

目的 系统评价金龙胶囊联合放化疗治疗肝转移瘤的疗效及安全性。方法 根据Cochrane指南,通过计算机检索PubMed、CNKI、维普、万方和CBM数据库中有关金龙胶囊治疗肝转移瘤的随机对照研究的文献,由2名评价员按统一标准提取资料并独立评价。采用RevMan5.3软件进行分析。结果 最终纳入8项研究,共504例患者。金龙胶囊有效率（P=0.0006）及免疫功能的改善作用（CD3:P=0.0003、CD4: P<0.00001、CD4/CD8: P<0.00001）均显著优于对照组,但对CD8的影响与对照组比较差异无统计学意义（P=0.73）,消化系统不良反应恶心呕吐（P=0.01）、腹痛（P=0.05）等的发生率均显著低于对照组。结论 金龙胶囊可以提高患者免疫功能,减少不良反应,提高生活质量,对肝转移瘤具有明显的辅助治疗作用。     

rhG-CSF与rhGM-CSF动员人外周血单核细胞后DC疫苗数量及功能变化的比较

目的 探讨利用人外周血单核细胞制备树突状细胞（dendritic cell, DC）疫苗过程中,使用重组人粒细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF）和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, rhGM-CSF）进行动员的临床应用可行性,并比较两者作为动员试剂的优劣。方法 对2011年8月至2013年12月中国人民解放军第81医院肿瘤生物治疗科进行DC疫苗治疗的恶性肿瘤患者134例进行随机分组,其中rhG-CSF动员者69例,rhGM-CSF动员者65例。rhG-CSF动员组在血细胞分离机采集前1天行rhG-CSF皮下注射3 μg/(kg·d),rhGM-CSF动员组在血细胞分离机采集前1天行rhGMCSF皮下注射3 μg/(kg·d)。比较两组动员前后血常规变化的差异;分析两组采集终产品中单个核细胞（mononuclear cell, MC）数量及表型,检测体外培养所得DC的数量、表型及细胞因子的表达。结果 动员后rhGM-CSF动员组单核细胞增高值高于rhG-CSF动员组（P≤0.001）,但中性粒细胞计数增高值低于rhG-CSF动员组（P≤0.001）,其余血常规项目两者差异无统计学意义。rhGMCSF动员组采集终产品中单个核细胞数量高于rhG-CSF动员组（P=0.046）,而CD14+单核细胞的比例两组差异无统计学意义。rhGM-CSF动员组最终诱导所得DC数量高于rhGCSF动员组（P=0.011）,且DC细胞表面分子HLA-DR的表达高于rhG-CSF动员组（P=0.001）,其余CD80、CD86,CD83、CD11C、CD54表达两组差异无统计学意义。两组DC细胞Th1型和Th2型细胞因子的表达差异都无统计学意义。结论 在用人外周血单核细胞制备DC疫苗的过程中,使用rhGM-CSF动员比rhG-CSF更有优势。     

榄香烯同步放化疗治疗鼻咽癌疗效及对患者免疫功能的影响

目的 探讨榄香烯同步放化疗治疗鼻咽癌疗效及对患者免疫功能的影响。方法 采用随机数字法将92例鼻咽癌患者分为对照组（调强放疗+氟尿嘧啶+顺铂）和观察组（调强放疗+氟尿嘧啶+顺铂+静脉滴注榄香烯注射液500 mg/d）。评价两组患者近期疗效,外周血淋巴T细胞亚群水平变化,并记录评估不良反应发生情况。结果 92例患者均顺利完成了所有治疗。对照组总有效率（71.74%）与观察组（82.61%）相比,差异有统计学意义（P<0.05）;外周血淋巴细胞亚群CD8+水平观察组（34.37±1.97）与对照组（31.35±2.39）相比明显升高（P<0.05）,CD4+/CD8+比例观察组（0.98±0.18）与对照组（1.37±0.03）相比显著下调（P<0.05）。观察组患者生存质量（60.3±5.3）与对照组（57.2±7.4）相比差异有统计学意义（P<0.05）;观察组在血液学毒性、皮肤反应Ⅲ~Ⅳ级发生率方面均较对照组有所降低,在消化道反应Ⅲ~Ⅳ级发生率显著低于对照组（P<0.05）。结论 榄香烯同步放化疗可提高鼻咽癌患者的生存质量,降低不良反应发生率,同时能获得较好的预后。     

过继性免疫治疗对非小细胞肺癌患者外周血T细胞亚群的影响

目的 研究细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞治疗对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血T细胞亚群及一般情况的影响。方法 采集非小细胞肺癌患者外周血,常规方法体外扩增CIK细胞,分三次回输患者体内,流式细胞仪检测非小细胞肺癌患者治疗前与治疗3次后T细胞亚群的变化,分析其与健康对照组相比外周血T细胞亚群的差异,并观察CIK细胞治疗前后患者一般情况变化。结果 与对照组相比,NSCLC患者外周血中CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ 比值显著下降（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前,CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值显著升高（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著降低（P<0.05）。CIK细胞治疗后与对照组相比,CD3⁺ T 细胞比例、CD4⁺/CD8⁺T细胞比值显著下降（P<0.05）。CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD3⁺CD8⁺ T细胞比例升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。CIK细胞治疗前Tregs较对照组显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前相比,Tregs比例显著下降（P<0.05）。结论 CIK细胞输注治疗可以增强NSCLC患者的免疫功能,并改善患者的一般情况,提高生活质量,且未见明显不良反应。     

CD8+T淋巴细胞浸润与三阴性乳腺癌新辅助化疗疗效的关系

目的 探讨三阴性乳腺癌组织CD8+T淋巴细胞浸润（CD8+Tils）的特点与患者预后的关系。方法 回顾性分析术前行新辅助化疗的126例三阴性乳腺癌患者的临床病理资料，采用免疫组织化学法分析CD8+Tils与临床病理特征的关系；Kaplan-Meier法绘制生存曲线，Cox风险比例回归模型分析患者无病生存时间（DFS）的预后影响因素。结果 高密度CD8+Tils浸润与年龄<60岁、病理高分级、临床高分期显著相关（P<0.05）。CD8+Tils高密度浸润患者术后pCR率较低密度组高（66.7% vs. 19.8%, P=0.000）。高密度组中位DFS显著长于CD8+Tils低密度组（49 vs. 25月, P<0.05）。多因素分析显示病理高分级、肿瘤直径>2 cm 、淋巴结转移、脉管侵犯、CD8+Tils低密度浸润均为预后不良影响因素（P<0.05），CD8+Tils为独立预后因素。结论 CD8+Tils有可能是三阴性乳腺癌患者独立预后指标，高密度浸润患者术后pCR率高、DFS长、远期疗效更优。     

DC与CIK共培养对骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的 探讨树突状细胞(dendritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)共培养对人骨肉瘤细胞的杀伤效应.方法 从健康志愿者中分离外周血单个核细胞,制备DC和CIK,并以5:1比例混合培养.采用CCK-8法和流式细胞术检测DC-CIK共培养...     

PD1-TCF1+CD8+干细胞样记忆T细胞对肿瘤患者免疫预后及三级淋巴结构的影响

Objective To investigate the impact of PD1-TCF1+CD8+ stem-like memory T cells on immunotherapy prognosis and tertiary lymphoid structure in tumors. Methods Pathological tissue sections were collected from 33 patients treated with immunotherapy, 18 cases of NSCLC and 15 cases of ESCC. The expression of PD1-TCF1+CD8+T cells was detected through quantitative analysis by multiplex immunofluorescence. Survival curves were described by the Kaplan-Meier method. Pearson’s correlation test was used for correlation analysis. Results The high levels of PD1-TCF1+CD8+T cells had a better PFS in NSCLC and ESCC cohorts. In the NSCLC cohort, high levels of PD1-TCF1+CD8+ T cells were significantly and positively correlated with the number (P=0.0151) and size (P=0.0007) of TLSs. Conclusion In patients with NSCLC and ESCCs, high PD1-TCF1+CD8+ stem-like memory T cell expression indicates improved prognosis and immune response and is associated with the formation of TLSs in the tumor microenvironment of NSCLC. © 2023, CHINA RESEARCH ON PREVENTION AND TREATMENT. All rights reserved.