DNA氧化损伤修复基因ERCC6对过氧化氢诱导的氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨DNA氧化损伤修复基因ERCC6对过氧化氢（H₂O₂）诱导的氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法　采用不同浓度H₂O₂处理SRA01/04细胞,构建氧化损伤模型。取氧化损伤的SRA01/04细胞分为H₂O₂组、H₂O₂+空白质粒转染组和H₂O₂+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组进行转染处理。采用实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测转染后氧化损伤的SRA01/04细胞中ERCC6 mRNA和科凯恩综合征互补B蛋白（CSB）的表达变化。采用免疫印迹实验和EdU染色实验分别检测转染后各组SRA01/04细胞凋亡相关蛋白表达变化和细胞增殖能力。结果　当H₂O₂处理浓度为200 μmol·L^-1时, SRA01/04细胞ERCC6 mRNA和CSB蛋白的相对表达量最低,后续转染实验H₂O₂处理浓度均采用200 μmol·L^-1。与H₂O₂组和H₂O₂+空白质粒转染组相比,H₂O₂+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组SRA01/04细胞ERCC6 mRNA和蛋白表达水平均显著增高（均为P<0.05）。进一步实验发现,与另外两组相比,H₂O₂+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组SRA01/04细胞中的促凋亡蛋白Bax表达均明显降低,而抑制凋亡的蛋白Bcl-2表达则均明显增加（均为P<0.05）。EdU染色实验检测结果显示,与H₂O₂+空白质粒转染组相比,H₂O₂+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组SRA01/04细胞内绿色荧光亮度增高,阳性细胞数量增加,表明SRA01/04细胞的增殖能力增强。结论　ERCC6基因可能通过减弱DNA的核苷酸切除修复作用抑制氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖、促进其凋亡从而导致老年性白内障的发生。     

POLH对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的　探究DNA聚合酶η（POLH）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的防御机制。方法　以年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织和H₂O₂处理的晶状体上皮细胞系SRA01/04为研究对象,分别通过RT-PCR和免疫印迹实验验证POLH的表达并筛选H₂O₂最佳作用浓度用于后续实验,将培养的SRA01/04细胞分为H₂O₂组、H₂O₂+HA组和H₂O₂+OV-POLH组,采用RT-PCR和免疫印迹实验检测POLH mRNA和蛋白表达情况,免疫荧光法检测DNA氧化损伤标志物以及TUNEL实验检测细胞凋亡变化,免疫印迹实验检测细胞中BAX、BCL-2、Nrf2和Keap1蛋白表达。结果　RT-PCR结果显示,与透明晶状体前囊膜（1.00±0.22）相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织中POLH mRNA相对表达量明显下降（0.38±0.62）（P<0.000 1）。RT-PCR和免疫印迹实验均显示,200 μmol·L^-1 H₂O₂处理的SRA01/04细胞中POLH表达量最低;TUNEL实验检测结果显示, 200 μmol·L^-1 H₂O₂处理后细胞的凋亡明显增加。RT-PCR和免疫印迹实验结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组SRA01/04细胞中POLH表达量显著升高（P<0.000 1）。免疫荧光染色结果显示,与H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞的γH2A染色明显下降。免疫印迹实验检测结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞促凋亡蛋白BAX表达量明显下降,而抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显升高（均为P<0.01）;与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞Keap1蛋白水平明显下降,而转录调控蛋白Nrf2表达明显升高（均为P<0.01）。结论　过表达POLH可通过增强DNA损伤修复功能抑制H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞凋亡,其抑制氧化应激机制可能与Nrf2-Keap1-ARE通路有关。     

miR-181a靶向沉默信息调节因子相关酶1在过氧化氢诱导的人小梁网细胞氧化应激中的调节作用

目的　探讨miR-181a对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人小梁网细胞（HTMCs)氧化应激的调节作用及其机制。方法　HTMCs随机分为空白组（0 μmol·L^-1 H₂O₂）、200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组,分别使用相应浓度H₂O₂处理HTMCs,24 h后MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-181a mRNA表达,Western blot检测各组细胞中沉默信息调节因子相关酶1（SIRT1）蛋白表达。根据转染物的不同分为miR-181a inhibitor组、miR-181a NC组、miR-181a mimics组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组和miR-181a inhibitor+si-NC组,使用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针检测各组细胞内活性氧（ROS）含量,使用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）ELISA试剂盒检测各组细胞SOD和MDA活性,使用Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中SIRT1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证。结果　与空白组比较,200 μmol·L^-1 H₂O₂组、400 μmol·L^-1 H₂O₂组、600 μmol·L^-1 H₂O₂组细胞存活率均降低（均为P<0.05）。细胞miR-181a mRNA的表达随着H₂O₂浓度的增加而增加,SIRT1蛋白的表达随着H₂O₂浓度的增加而降低（均为P<0.05）。与miR-181a NC组比较,miR-181a mimics组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均降低,miR-181a inhibitor组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均降低,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均升高（均为P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-181a靶向抑制SIRT1蛋白的表达。与miR-181a inhibitor+si-NC组比较,miR-181a inhibitor+si-SIRT1组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,SOD活性降低（均为P<0.05）。结论　miR-181a可能通过靶向SIRT1调节H₂O₂诱导的HTMCs氧化应激作用。     

LINC00473调控miR-210/TET2分子轴对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞生物学特性的影响

目的　探讨LINC00473调控miR-210/10-11易位酶2（TET2）分子轴对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞生物学特性的影响。方法　人晶状体上皮细胞SRA01/04传代培养后,采用100 μmol·L^-1 H₂O₂处理24 h。将SRA01/04细胞分为Con组、H₂O₂组、H₂O₂+pcDNA3.1组、H₂O₂+pcDNA3.1-LINC00473组、H₂O₂+pcDNA3.1-LINC00473+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00473+miR-210组、H₂O₂+pcDNA3.1-LINC00473+si-NC组、H₂O₂+ pcDNA3.1-LINC00473+si-TET2组。细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷光甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。双荧光素酶报告基因实验检测LINC00473与miR-210、miR-210与TET2的靶向结合关系。结果　Con组与H₂O₂组、H₂O₂+pcDNA3.1组与H₂O₂+pcDNA3.1-LINC00473组、H₂O₂+pcDNA3.1-LINC00473+miR-NC组与pcDNA3.1-LINC00473+miR-210组、H₂O₂+pcDNA3.1-LINC00473+si-NC组与H₂O₂+ pcDNA3.1-LINC00473+si-TET2组相比,细胞存活率、细胞凋亡率、克隆形成数、MDA含量、SOD和GSH-Px活性差异均有统计学意义（均为P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC和WT-LINC00473共转染组SRA01/04细胞荧光素酶活性（0.36±0.03）较miR-210 mimics和WT-LINC00473共转染组（0.96±0.10）显著降低（P<0.05）;miR-NC和WT-TET2共转染组SRA01/04细胞的荧光素酶活性（0.33±0.03）较miR-210 mimics和WT-TET2共转染组（0.94±0.09）显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）;LINC00473靶向作用miR-210并下调其表达水平,miR-210可负调控TET2的表达水平。结论　LINC00473通过下调miR-210/TET2分子轴减轻对H₂O₂对人晶状体上皮细胞增殖、凋亡和氧化损伤的影响。     

miR-29a抑制H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤

目的　探究miR-29a在H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤中的作用和机制。方法　使用不同浓度（0 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、300 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1）的H₂O₂处理人晶状体上皮细胞HLE-B3,以确定后续实验中H₂O₂使用的浓度。将HLE-B3细胞随机分成4组:对照组、H₂O₂组、H₂O₂+模拟物对照组和H₂O₂+miR-29a模拟物组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量,Real-time PCR检测miR-29a和Bcl2修饰因子（Bcl2 modifying factor,BMF）、Bcl2拮抗/杀伤因子1（Bcl2-antagonist/killer 1,BAK1） mRNA表达,Western blotting检测BMF和BAK1蛋白表达。结果　HLE-B3细胞活力随着H₂O₂浓度的增加而降低,呈现剂量依赖性,后续实验H₂O₂浓度选择200 μmol·L^-1。与对照组相比,H₂O₂组中miR-29a的表达（0.56±0.12）下调,细胞活力［（59.67±10.09）%］和SOD含量［（52.97±6.64）U·mL^-1］降低,细胞凋亡率［（40.30±4.76）%］和ROS水平［（299.52±43.95)%］增加,BMF和BAK1 mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与H₂O₂组相比,H₂O₂+miR-29a模拟物组中miR-29a的表达（4.49±0.55）上调,细胞活力［（92.83±8.09）%］和SOD含量［（84.03±6.31）U·mL^-1］增加,细胞凋亡率［（18.74±2.48）%］和ROS水平［（143.13±21.32）%］降低,BMF和BAK1 mRNA和蛋白表达均下调,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;与H₂O₂组相比,H₂O₂+模拟物对照组上述指标变化均不大,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　上调miR-29a可促进H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞的细胞增殖、抑制细胞凋亡、减少氧化损伤,这些作用可能与BMF和BAK1的表达下调相关。     

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

目的　探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞（LECs）氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法　收集单纯年龄相关性白内障（ARC）患眼的晶状体前囊膜组织（ARC组）和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织（对照组）各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）含量。结果　ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关（r=-0.935,-0.951,均为P<0.05）。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。应用H₂O₂刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H₂O₂ HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低（均为P<0.05）;而circZNF292 siRNA组+H₂O₂细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H₂O₂均进一步升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低（均为P<0.05）。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转（均为P<0.05）。结论　circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。     

杞黄颗粒对H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞炎症损伤的保护作用

目的　探讨杞黄颗粒（QHG）对H₂O₂诱导的人视网膜色素上皮（RPE）细胞系ARPE-19炎症损伤的保护作用。方法　常规培养ARPE-19细胞,随机分为对照组、H₂O₂损伤组(200 μmol?L^-1 H₂O₂处理细胞）、QHG低剂量组（1 g?L^-1 QHG作用24 h后再加入H₂O₂处理细胞）和QHG高剂量组（2 g?L^-1QHG作用24 h后再加入H₂O₂处理细胞）。使用相差显微镜观察各组ARPE-19细胞形态;流式细胞仪检测各组ARPE-19细胞凋亡率,Real-time PCR检测各组ARPE-19细胞β淀粉样蛋白（Aβ)mRNA表达,ELISA检测各组ARPE-19细胞Aβ以及攻膜复合物（MAC）的蛋白表达水平。结果　相差显微镜下可见,QHG低剂量组、QHG高剂量组ARPE-19细胞形态改变均较H₂O₂损伤组轻。对照组、H₂O₂损伤组、QHG低剂量组、QHG高剂量组ARPE-19细胞凋亡率分别为（6.85±0.14）%、（43.60±1.80）%、（23.23±1.43）%、（17.90±0.78）%,H₂O₂损伤组细胞凋亡率较对照组明显增加,QHG低剂量组及QHG高剂量组细胞凋亡率均较H₂O₂损伤组明显降低,且QHG高剂量组较QHG低剂量组降低更明显,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与对照组相比,H₂O₂损伤组ARPE-19细胞Aβ mRNA及Aβ、MAC蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。与H₂O₂损伤组相比,QHG低剂量组及QHG高剂量组均可明显降低ARPE-19细胞Aβ mRNA 相对表达量及Aβ、MAC蛋白的表达水平,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。结论　QHG能有效抑制H₂O₂诱导的人RPE细胞凋亡,减少细胞Aβ及MAC表达,从而起到保护人RPE细胞的作用。     

褪黑素联合锌对H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨褪黑素（MT）联合锌（Zn）对H₂O₂诱导的人视网膜色素上皮（ARPE）细胞氧化损伤的保护作用。方法　常规培养ARPE细胞株（ARPE-19）,利用不同浓度H₂O₂处理ARPE-19细胞,将细胞存活率接近50%的H₂O₂浓度作为氧化损伤浓度。将ARPE-19细胞分为:不同浓度MT（10^-5 mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-7mol·L^-1）+ZnCl₂（15 μmol·L^-1）组,ZnCl₂组（采用15 μmol·L^-1 ZnCl₂培养细胞）,H₂O₂组（不添加MT和ZnCl₂培养细胞）,空白对照组（细胞不做任何处理）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用试剂盒测量各组细胞内活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）的含量。ELISA检测各组细胞内白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达量。结果　当H₂O₂浓度为300 μmol·L^-1时,细胞存活率为(54.31±1.91)%,此时细胞存活率接近50%,后续实验中均选择该浓度作为氧化损伤浓度。ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞凋亡率分别为3.05%、1.17%、1.50%、1.71%,与空白对照组（0）相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.76倍、1.59倍、1.41倍,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.13倍和1.25倍,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组细胞内MDA的含量较空白对照组显著提高 （P<0.05）;ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内MDA的含量均较空白对照组稍增加,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1MT+ZnCl₂组和10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均略高于空白对照组,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　MT联合Zn能有效降低H₂O₂损伤所致ARPE-19细胞内ROS的含量,随之减少细胞内MDA的含量,同时也能抑制IL-6和TNF-α的表达量,从而起到保护RPE细胞的作用。     

老年性白内障患者circKMT2E表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的　探讨circKMT2E在老年性白内障（ARC）患者中的表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响。方法　取10例在我院接受白内障手术的ARC患者晶状体前囊膜,另选取4例健康捐献者透明晶状体前囊膜作为对照。使用Trizol试剂从人晶状体前囊膜组织中提取总RNA。依次使用cutadapt软件、DCC软件(v0.4.4)、STAR软件 (v2.51 b)、CircBase数据库和circ2Trait数据库对所测得的环状RNA（circRNA）进行注释,筛选circRNA差异表达。将体外培养的SRA01-04细胞随机分组,其中,空白对照组:用正常培养液培养,不作特殊处理;miR-control组:转染miR-control无序序列;miR-34a组:转染miR-34a-5p mimics序列;miR-34a+control组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-control空载体;miR-34a+HMGB1组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-HMGB1质粒。采用实时荧光定量PCR与双荧光素酶报告基因检测基因表达情况。 通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达。结果　经生物信息学分析显示,circKMT2E在ARC患者晶状体前囊膜组织中表达上调最为显著。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-34a-5p后circKMT2E-WT报告基因的荧光素酶活性由1.000±0.023降低至0.502±0.057（P<0.05）;而circKMT2E-MUT报告基因的荧光素酶活性由1.005±0.018降低至0.989±0.053（P>0.05）。miR-34a组SRA01-04细胞凋亡率（23.59%±3.47%）较miR-control组（3.82%±0.41%）增高（P<0.05）,而miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞凋亡率（8.97%±1.20%）较miR-34a-control组（24.59%±4.33 %）降低（P<0.05）。miR-34a组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白、Bax蛋白相对表达量较miR-control组均升高,同时Bcl-2蛋白相对表达量则降低（均为P<0.05）;miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白和Bax蛋白相对表达量较miR-34a-control组均降低,同时Bcl-2蛋白相对表达量较miR-34a-control组增加（均为P<0.05）。结论　circKMT2E可通过海绵吸附miR-34a-5p减弱其对下游靶点HMGB1的抑制作用,进而有效地阻止SRA01-04细胞凋亡,在一定程度起到延缓ARC发展的作用。     

丹酚酸A（Sal A）对H2O2诱导的氧化应激损伤人晶状体上皮细胞增殖、凋亡、超微结构及炎症反应的作用

目的　探讨丹酚酸A（salvianolic acid A,Sal A）对H₂O₂诱导的氧化应激损伤人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLEC）增殖、凋亡、超微结构及炎症反应的作用。方法　将HLEC SRA01/04细胞传代培养后,用不同浓度（50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1、800 μmol·L^-1）H₂O₂处理培养24 h,通过MTT法检测细胞存活率,筛选H₂O₂最佳作用浓度,作为细胞模型组使用浓度。对照组细胞用正常完全培养液培养。Sal A干预组将细胞先在含50 μmol·L^-1 Sal A培养液中预孵育24 h,后加入最佳作用浓度H₂O₂继续培养24 h。而后采用MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构,Western blot检测各组细胞炎症相关蛋白IL-1β、IL-18、TNF-α的表达情况。结果　MTT法检测结果显示不同浓度H₂O₂（50 μmol·L^-1、100 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1、800 μmol·L^-1）处理组细胞存活率分别为61.26%±3.35%、47.81%±2.63%、29.53%±2.54%、21.47%±2.26%、14.97%±1.82%,各浓度处理组细胞存活率和对照组相比,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。其中,100 μmol·L^-1 H₂O₂处理组细胞存活率最接近半数致死量,故选择100 μmol·L^-1 H₂O₂作为氧化应激损伤模型浓度用于后续实验。Sal A干预组细胞存活率为82.54%±3.07%,比100 μmol·L^-1 H₂O₂模型组明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,对照组细胞凋亡率为4.06%±0.41%,H₂O₂模型组细胞凋亡率为20.52%±3.29%,Sal A干预组细胞凋亡率为12.35%±1.48%,H₂O₂模型组和Sal A干预组细胞凋亡率差异有统计学意义（P<0.05）。电镜观察结果显示H₂O₂诱导产生了明显的细胞超微结构损伤,线粒体、内质网数目减少,分泌颗粒减少,胞核体积缩小,可见少数细胞核内异染色质增多甚至聚集成块状。Sal A预处理后,细胞损伤的超微结构出现一定程度改善,如细胞形态较规则,细胞器线粒体、内质网数目增多,空泡数量减少,染色质分布基本均匀。Western blot检测结果显示,H₂O₂引起的氧化损伤会显著提高IL-1β、IL-18、TNF-α表达,Sal A可以在一定程度上降低IL-1β、IL-18、TNF-α的表达。结论　Sal A可以有效增加H₂O₂诱导的氧化应激损伤HLEC的增殖,抑制细胞凋亡,减小细胞超微结构损伤性改变,降低IL-1β、IL-18、TNF-α表达。     

阿克替苷通过激活血红素加氧酶-1抑制H_(2)O_(2)诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤北大核心

目的研究阿克替苷对视网膜神经节细胞(RGC-5)的保护作用及其机制。方法将RGC-5细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、阿克替苷+H_(2)O_(2)组(1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)阿克替苷分别预处理细胞2 h),MTT法检测各组细胞活力;后续实验阿克替苷+H_(2)O_(2)组选择阿克替苷30μmol·L^(-1)作为治疗浓度,荧光探针H2DCF-DA检测活性氧(ROS)产生和罗丹明123检测线粒体膜电位,Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bcl-2/Bax、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。机制研究中首先用不同浓度阿克替苷单独处理RGC-5细胞24 h,Western blot检测血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平,进一步锌原卟啉(ZnPP)预处理RGC-5细胞1 h,而后30μmol·L^(-1)阿克替苷单独预处理后与200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)共孵育24 h,通过MTT法测定细胞活力。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)组中细胞活力明显降低(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组相比,阿克替苷+H_(2)O_(2)组中10μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)阿克替苷预处理可显著提高细胞活力(P<0.05、P<0.01)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组RGC-5细胞ROS生成明显增加,线料体膜电位显著降低,同时Bcl-2/Bax比值降低和Caspase-3蛋白相对表达量增加(均为P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,阿克替苷+H_(2)O_(2)组RGC-5细胞ROS生成减少,线粒体膜电位增加,Bcl-2/Bax比值提高,Caspase-3蛋白相对表达量减少(均为P<0.05)。与阿克替苷未处理组相比,阿克替苷剂量依赖性诱导HO-1蛋白的表达,与阿克替苷+H_(2)O_(2)组相比,加入ZnPP后细胞活力降低(P<0.01),说明HO-1抑制剂ZnPP降低了阿克替苷对H_(2)O_(2)损伤的抑制作用。结论阿克替苷能够通过上调HO-1表达抑制H_(2)O_(2)诱导的RGC-5氧化应激损伤。     

白内障氧化应激损伤诱导晶状体上皮细胞铁死亡

目的 本研究拟在白内障细胞模型中验证氧化应激损伤是否可诱导晶状体上皮细胞铁死亡。方法 分别采用H₂O₂和紫外线B(UVB)模拟白内障氧化应激损伤模型并进行体外细胞实验。采用流式细胞术分别对H₂O₂组(0 h、12 h、24 h)和空白对照组、UVB组(UVB照射)进行晶状体上皮细胞死亡的检测，空白对照组不做任何处理。采用荧光探针染色观察和流式细胞术检测不同浓度(0μmol·L^-1、100μmol·L^-1、200μmol·L^-1和300μmol·L^-1)H₂O₂组和空白对照组、UVB组引起的晶状体上皮细胞C11/BODIPY染色阳性细胞率，表征细胞脂质过氧化水平。结果 200μmol·L^-1 H₂O₂处理晶状体上皮细胞后，与0 h时相比，12 h时晶状体上皮细胞死亡率升高，但差异无统计学意义(P>0....     

急性氧化应激初期人晶状体上皮细胞株SRA01/04中衰老标记蛋白30抗氧化作用的研究

目的　初步探讨衰老标记蛋白30（senescence marker protein 30，SMP30）的增加对处于急性氧化应激初期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04的保护作用。方法　将处于对数生长期的SRA01/04接种于96孔板，分别使用含150 μmol·L^-1、200 μmol·L^-1、250 μmol·L^-1、300 μmol·L^-1、350 μmol·L^-1、400 μmol·L^-1、450 μmol·L^-1 H₂O₂的培养基作用2 h，CCK-8法选取最佳H₂O₂浓度；使用慢病毒对SRA01/04进行转染建立SMP30高表达模型，实验分3组:SMP30过表达（over expression，OE）组、SMP30过表达相应空载（negative control over expression，NCOE）组及对照（control，CON）组。通过超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）定量检测试剂盒、氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione,GSSG）/总谷胱甘肽（total glutathione,T-GSH）测定试剂盒测量细胞内SOD活力及GSSG/T-GSH比值的变化。结果　经分析，建立模型的最佳H₂O₂浓度为300 μmol·L^-1。在此浓度下，与CON组（5.783±0.192）U·mg^-1及NCOE组（5.837±0.182）U·mg^-1相比，OE组细胞内SOD活力升高，为（10.251±0.110）U·mg^-1；与CON组（29.943±0.241）及NCOE组（30.037±0.433）相比，OE组细胞内GSSG/T-GSH比值（20.990±0.342）降低；差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　当SRA01/04处于H₂O₂诱导的急性氧化应激初期时，SMP30表达的增加可通过增加SOD活力和降低GSSG/T-GSH比值，加强SRA01/04的抗氧化能力。