ERK介导姜黄素抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭性

目的 探讨姜黄素对人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的影响及ERK/MAPK信号通路在此过程中的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为对照组和药物组,对照组以含10％小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16 μmol·L^-1姜黄素（本实验先前的研究结果显示,姜黄素作用于U251细胞48 h的半数抑制剂量为16 μmol·L^-1）处理。 Transwell侵袭小室模型法检测细胞侵袭性的变化;免疫细胞化学法检测基质金属蛋白酶－9（MMP-9）蛋白表达变化;免疫印迹（Western blot）法检测细胞外调节蛋白激酶（ERK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK）表达变化。结果 Transwell侵袭小室模型法显示,在每个高倍镜视野下,对照组穿过微孔膜的细胞数平均值为160个,药物组为42个。免疫细胞化学法显示姜黄素作用后MMP-9蛋白阳性细胞百分率由76％降低至40％。Western blot法显示,16 μmol·L-1姜黄素分别作用于U251细胞0、24、48和96 h,ERK蛋白水平无明显改变,pERK水平与ERK水平比值(pERK/ERK) 分别为0.48、0.42、0.35和0.22。结论 姜黄素在体外可有效抑制胶质瘤U251细胞的侵袭性,其机制可能是通过抑制异常激活的ERK信号通路来实现的。     

ERK介导姜黄素抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭性

目的 探讨姜黄素对人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的影响及ERK/MAPK信号通路在此过程中的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为对照组和药物组,对照组以含10％小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16 μmol·L-1姜黄素（本实验先前的研究结果显示,姜黄素作用于U251细胞48 h的半数抑制剂量为16 μmol·L-1）处理。 Transwell侵袭小室模型法检测细胞侵袭性的变化;免疫细胞化学法检测基质金属蛋白酶－9（MMP-9）蛋白表达变化;免疫印迹（Western blot）法检测细胞外调节蛋白激酶（ERK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK）表达变化。结果 Transwell侵袭小室模型法显示,在每个高倍镜视野下,对照组穿过微孔膜的细胞数平均值为160个,药物组为42个。免疫细胞化学法显示姜黄素作用后MMP-9蛋白阳性细胞百分率由76％降低至40％。Western blot法显示,16 μmol·L-1姜黄素分别作用于U251细胞0、24、48和96 h,ERK蛋白水平无明显改变,pERK水平与ERK水平比值(pERK/ERK) 分别为0.48、0.42、0.35和0.22。结论 姜黄素在体外可有效抑制胶质瘤U251细胞的侵袭性,其机制可能是通过抑制异常激活的ERK信号通路来实现的。     

姜黄素抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖的机制

目的 探讨姜黄素对人神经胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及其相关机制.方法 应用0、10、20、40、60、80 μmol/L的姜黄素处理人神经胶质瘤U251细胞,检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及葡萄糖转运蛋白-3(GLUT-3)表达情况.结果 10、20、40、60、80 μmol/L姜黄素作用于U251细胞吸光度(OD)值低于0μmol/L组(P＜0.05).姜黄素组作用72 h时人神经胶质瘤U251细胞G1期细胞比例少于对照组,G2/M期细胞比例多于对照组(P＜0.05).两组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.05).姜黄素组GLUT-3表达水平低于对照组(P＜0.05).结论 姜黄素可以抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖,其作用可能是通过下调GLUT-3的表达水平来实现的.     

替莫唑胺对胶质瘤细胞U251凋亡的影响

目的探究替莫唑胺对胶质瘤细胞U251凋亡的影响及其作用机制。方法 40、80、120μmol/L替莫唑胺培养U251细胞系48 h,观察形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测caspase 3表达,用caspase3试剂盒检测caspase 3的活性,蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测热休克蛋白90(HSP90)、p-HSP90、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)和p-AKT表达。结果替莫唑胺80、120μmol/L组细胞数目减少,细胞核体积明显缩小,染色质固缩。替莫唑胺80、120μmol/L组细胞凋亡率、caspase 3的表达水平和活性明显高于对照组,p-HSP90、p-AKT的表达水平明显低于对照组(P0.05),呈剂量相关性。结论替莫唑胺能够促进胶质瘤细胞U251凋亡,可能是通过抑制HSP90和AKT表达来实现的。     

吡格列酮对高糖高脂诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的 影响及其机制探讨

目的 探讨吡格列酮对高糖高脂诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 体外培养H9C2心肌 细胞,通过 CCK-8 法进行细胞毒性试验分别确定高糖（HG）和棕榈酸（PA）最佳干预浓度,选取 0.1 mmol/L PA 和 50 mmol/L HG共同培养细胞建立高糖高脂损伤模型,不同浓度吡格列酮（PGZ）干预高糖高脂损伤细胞12、24及48 h 后通过CCK-8试验选取有效的干预浓度和干预时间。随后细胞分为：对照组（25 mmol/L葡萄糖）、溶剂组（棕榈酸溶 剂+二甲基亚砜）、HGPA 组（50 mmol/L 葡萄糖+0.1 mmol/L PA）、H-PGZ 组（10 μmol/L PGZ+HGPA）和 L-PGZ 组 （5 μmol/L PGZ+HGPA）,采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;DCFH-DA法检测活性氧簇（ROS）水平;微 板法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）水平;Western blot法检测蛋白激酶B（T-AKT）、磷酸化蛋白激 酶B（P-AKT）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3（Caspase3）、剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3（C-Caspase3）、B-淋巴 细胞瘤基因-2（BCL-2）、BCL-2相关X蛋白（BAX）的蛋白表达。NAC（1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸）+HGPA组和HGPA 组干预24 h后检测上述AKT通路及凋亡相关蛋白表达。结果 48 h内0、0.05、0.1、0.2、0.4 mmol/L PA组H9C2细胞活力 依次降低;12 h时,与25 mmol/L葡萄糖组比较,50、75以及100 mmol/L葡萄糖组细胞活力增加,24 h、48 h时25、35、50、 75、100 mmol/L葡萄糖组细胞活力依次增加;与对照组比较,48 h内HGPA组细胞活力降低（P＜0.05）;与HGPA组比 较,12 h时80 μmol/L组细胞活力降低（P＜0.05）,24 h时10 μmol/L PGZ组细胞活力增加,40、80 μmol/L PGZ组细胞活 力降低（P＜0.05）,48 h时5、10和20 μmol/L PGZ组细胞活力增加,40、80 μmol/L PGZ组细胞活力降低（P＜0.05）;与 对照组比较,HGPA组凋亡率、ROS、MDA、C-Caspase3、BAX表达明显升高,SOD、P-AKT、BCL-2表达降低（P＜0.05）; HGPA组、L-PGZ组、H-PGZ组的凋亡率、ROS、MDA、C-Caspase3、BAX依次降低,SOD、P-AKT、BCL-2表达依次升高 （P＜0.05）。与 HGPA 组比较,NAC+HGPA 组 C-Caspase3 表达降低,P-AKT、Caspase3 表达升高（P＜0.05）。结论 PGZ对ROS有抑制作用,可以促进AKT通路的活化,减轻高糖棕榈酸诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

芹菜素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　研究芹菜素对子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期的HEC-1-B细胞,加入0、20、40和80 μmol/L的芹菜素,采用CCK-8法检测培养24、48和72 h后细胞的光密度,计算增殖抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达水平。结果　20~80 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞的增殖明显受到抑制,细胞凋亡率升高,同时促凋亡蛋白Bax表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。0、5、10和20 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,40 μmol/L芹菜素能够下调PI3K/AKT通路蛋白p-PI3K和p-AKT的表达。结论　芹菜素能够抑制HEC-1-B细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的 观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制。方法 用不同浓度槲皮素（空白对照、20、40、80 μmol/L）,顺铂（空白对照、5、10、15、20 μg/mL）以及两者联合（槲皮素40 μmol/L+顺铂 10 μg/mL）分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝（MTT法）检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92±3.953）%（20 μmol/L组）、（66.54±3.932）%（40 μmol/L组）和 （52.21±2.970）%（80 μmol/L组）,均低于空白对照组的（98.35±1.230）% ;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为（65.19±7.071）%（20 μmol/L组）、（47.04±8.881）%（40 μmol/L组）和 （29.71±6.505）%（80 μmol/L组）,均低于空白对照组的（96.97±1.788）%。;此外,槲皮素40 μmol/L+顺铂 10 μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为（31.12±2.835）%; 48 h后,细胞活力下降为（17.86±3.182）%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,（31.12±2.835）%; 48 h后,细胞活力下降为（17.86±3.182）%（P<0.05）。细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G₀/G₁期数量,减少S期数量。Western blot结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结论 槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡。     

木犀草素对K562细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的　探讨木犀草素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期K562细胞分别加入0、10、25、50、100 μmol/L木犀草素培养24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;K562细胞分别加入0、25、50 μmol/L木犀草素培养48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;K562细胞分别加入0、10、50、100 μmol/L木犀草素培养48 h,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Cleaved-PARP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、断裂点簇集区蛋白（BCR）、c-abl癌基因1（c-ABL）BCR-ABL蛋白表达。结果　CCK-8检测结果显示,随木犀草素浓度增加及作用时间的延长,K562细胞增殖抑制率均呈增长趋势（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果显示,木犀草素0、25、50 μmol/L组K562细胞的凋亡率依次升高（分别为8.21%±0.55%、23.43%±1.50%和40.47%±2.97%）。Western blot结果显示,Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3表达水平随木犀草素浓度的增加而升高（P＜0.05）。木犀草素0、10、50 μmol/L组PARP蛋白表达水平依次升高（P＜0.05）,100 μmol/L组与50 μmol/L组差异无统计学意义。100 μmol/L组Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平均低于其余组（P＜0.05）。50、100 μmol/L组p-AKT蛋白表达水平低于0、10 μmol/L组,100 μmol/L组低于50 μmol/L组。50 μmol/L组BCR-ABL融合蛋白表达水平高于0 μmol/L组,100 μmol/L组低于0、50 μmol/L组（P＜0.05）。结论　木犀草素可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控BCR-ABL蛋白表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

当归多糖(ASP)对脑神经胶质瘤细胞U251的体外抗增殖及促凋亡作用影响

目的考察当归多糖(ASP)对脑神经胶质瘤细胞U251的促凋亡作用,并通过MTT法检测细胞增殖抑制率、Transwell实验检测细胞侵袭、流式细胞仪检测细胞凋亡率和Western Blot检测蛋白质表达量变化深入研究其促凋亡作用机制。方法取对数生长期的细胞,运用MTT法检测不同浓度ASP作用于U251细胞不同时间后,U251细胞的体外增殖率;应用Transwell细胞侵袭实验检测ASP作用于U251细胞后,对U251细胞体外侵袭能力的抑制性;应用流式细胞仪检测不同浓度ASP作用于U251后,U251细胞的凋亡率;应用Western Blot方法检测ASP作用于U251细胞后,U251细胞的PI3K,p-PI3K,AKT和p-AKT蛋白的表达。结果 MTT法检测细胞抑制率结果表明,ASP作用于U251细胞后,与空白对照组相比,200.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞的抑制率升高(P<0.05);400.0 mg·L~(-1)和800.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞的抑制率显著升高(P<0.001);Transwell细胞侵袭实验结果表明,与空白对照组相比,400.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞侵袭的抑制率升高(P<0.05);800.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞侵袭的抑制率显著升高(P<0.001);流式细胞仪检测结果表明,与空白对照组相比,两个药物组(400.0 mg·L~(-1)和800.0 mg·L~(-1))ASP处理U251后,U251细胞的凋亡率均升高;Western Blot检测结果表明,与空白对照组相比,两个药物组(400.0 mg·L~(-1)和800.0 mg·L~(-1))ASP能下调凋亡相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白的表达,其中800.0 mg·L~(-1)ASP能显著下调p-AKT蛋白质表达,具有显著性差异(P<0.05)。结论 ASP能够显著抑制U251细胞的体外增殖、侵袭能力,且能够诱导细胞凋亡,可能的机制是通过调节PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达来实现的。     

重楼皂苷 Ⅶ通过 p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的观察重楼皂苷 Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法于 2021年 6月至 2022年 6月,对数期人肝癌 HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷 Ⅶ组(重楼皂苷 Ⅶ 0.8 μmol/L)、SB203580［p38丝裂原活化蛋白激取酶( p38 MAPK)信号通路抑制剂］组( SB203580 10 μmol/L)、联合组(重楼皂苷 Ⅶ 0.8 μmol/L、SB203580 10 μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白 Ⅴ(Annexin Ⅴ)/碘化丙啶( PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞 p38 MAPK、磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶( p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶( p-ERK1/2)蛋白表达。结果与对照组 24、48、72 h吸光度值,迁移率( 74.33±9.37)%,凋亡率( 3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数( 364.92±47.99)个比较,重楼皂苷 Ⅶ组 24、48、 72 h吸光度值,迁移率( 11.21±3.35)%降低,凋亡率( 39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数( 54.84±7.41)个减少( P<0.05); SB203580组 24、48、72 h吸光度值,迁移率( 89.30±14.56)%升高,凋亡率( 1.05±0.15)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数( 617.04±75.34)个增加( P<0.05)。与重楼皂苷 Ⅶ组比较,联合组 24、48、 72 h吸光度值,迁移率( 40.52±8.18)%升高,凋亡率( 11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数( 141.36±16.75)个增加( P<0.05);与 SB203580组比较,联合组 24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、 p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少( P<0.05)。结论重楼皂苷 Ⅶ可抑制肝癌 HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活 p38 MAPK信号通路相关。     

Medicarpin suppresses proliferation and triggeres apoptosis by upregulation of BID,BAX, CASP3, CASP8, and CYCS in glioblastoma

Glioblastoma (GBM) is the most malignant brain tumor and incurable. Medicarpin (MED), a flavonoid compound from the legume family, has multiple targets and anticancer properties. However, the role of MED in GBM remains unclear. The objective of this study was to explore the effects of MED on the apoptosis of GBM and to explain the potential molecular mechanisms. We found that the IC₅₀ values of U251 and U-87 MG cells treated with MED for 24 h were 271 μg/mL and 175 μg/mL, and the IC₅₀ values for 48 h were 154 μg/mL and 161 μg/mL, respectively. Additionally, the cell cycle of U251 and U-87 MG cells were arrested at the G2/M phase. Furthermore, the apoptosis rate of U251 and U-87 MG cells increased from 6.26% to 18.36% and 12.46% to 31.33% for 48 h, respectively. The migration rate of U251 and U-87 MG decreased from 20% to 5% and 25% to 15% for 12 h and these of U251 and U-87 MG decreased from 50% to 28% and 60% to 25% for 24 h. MED suppressed GBM tumorigenesis, and improved survival rate of tumor-bearing mice. Taken together, MED triggered GBM apoptosis through upregulation of pro-apoptotic proteins (BID, BAX, CASP3, CASP8, and CYCS), showed strong inhibitory effects on cell proliferation and cell migration, and displayed anti-tumor activity in nude mice.     

地塞米松拮抗替莫唑胺抑制胶质瘤细胞生长的体外试验

目的:探讨替莫唑胺(TMZ)联合地塞米松(DXM)对体外培养的人胶质瘤细胞系U251细胞的增殖影响。方法:U251细胞分为TMZ组(分别加入10、25、50、100、200、400μmol·L~(-1)浓度的TMZ)、TMZ+DXM组(在各浓度TMZ的基础上加入40μmol·L~(-1)的DXM)和对照组(不加任何药物)。各组细胞加入相应药物72 h后,观察细胞形态学改变,检测细胞增殖抑制率及细胞周期和凋亡率。结果:TMZ浓度大于100μmol·L~(-1)时,TMZ组抑制率大于TMZ+DXM组(P<0.01)。与TMZ组比较, TMZ+DXM组细胞G_(0-1)期比例增加、G_2～M期比例减少,细胞的凋亡率进一步降低。结论:DXM可能通过改变细胞周期分布而减弱TMZ抑制胶质瘤细胞生长作用,2药联用具有负协调作用。     

H2S促进神经胶质瘤细胞增殖作用的机制探讨

目的为了明确硫化氢(H2S)是否能够促进人胶质瘤U251细胞的增长,探讨Survivin和Sirt1在U251细胞中是否有表达及H2S促进U251细胞增长机制。方法 CCK8(Cell Counting Kit-8)法测细胞活力,Western Blot检测U251细胞内Survivin和Sirt1表达。结果 100-400μmol/L的H2S呈浓度依赖性地促进了U251细胞的增长;100-400μmol/L的H2S处理U251细胞24 h后,细胞内Survivin和Sirt1呈H2S浓度依赖性地增加,与空白对照比较,差异有统计学意义(P<0.01);用100μmol/L Sirt1抑制剂,Sirtinol预处理U251细胞0.5 h后,在继续用200μmol/L H2S继续培养细胞4 h后,预处理组和单独的硫化氢组相比,细胞的活力显著下降,差异有统计学意义(P<0.001),但是单独Sirtinol组对细胞活力影响不大,说明H2S促进细胞增殖功能可能是通过促进Sirt1的表达来实现的。结论 H2S促进了U251细胞的增长,H2S促进了U251细胞内Survivin和Sirt1表达,Sirt1抑制剂抑制了H2S对细胞的促进增长作用。     

维生素B2在胃癌中的作用及机制研究

摘要：目的　探讨维生素B2（Vit B2）在胃癌中的表达及其生物学意义。方法　选择39例胃癌患者（胃癌组）和40例健康体检者（对照组）,检测2组血清Vit B2水平,分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。培养人胃癌MGC-803细胞,并取对数生长期细胞分别给予0、10、25、50、100 μmol/L Vit B2处理,检测细胞氧化磷酸化（葡萄糖、乳酸和琥珀酸脱氢酶）水平。实时荧光定量PCR（qPCR）检测己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）、丙酮酸激酶M2（PKM2）和葡萄糖转运体1（GLUT1）mRNA水平。CCK-8法检测胃癌MGC-803细胞的增殖活性。流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况。结果　胃癌患者血清Vit B2水平低于对照组［（207.85±39.71）μg/L vs. （246.07±45.43）μg/L］,且血清Vit B2水平与胃癌患者的TNM分期和分化程度有关;与0 μmol/L Vit B2组相比,25、50、100 μmol/L Vit B2组细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量均降低,琥珀酸脱氢酶含量均升高,HKⅡ、PKM2和GLUT1 mRNA水平均降低（均P＜0.05）;且50 μmol/L Vit B2组变化最明显。对照组、Vit B2组、阿帕替尼组和联合用药组胃癌细胞增殖活性依次降低,细胞凋亡率依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论　胃癌患者血清Vit B2水平降低,Vit B2和阿帕替尼联合用药可提高其对胃癌的抗肿瘤效果。     

miR-124靶向趋化素样因子超家族成员6对胶质瘤细胞的影响

目的　探究微小RNA（miR）-124靶向调控趋化素样因子超家族成员6（CMTM6）对胶质瘤细胞的侵袭、迁移的影响。方法　实时荧光定量PCR（qPCR）法检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹实验检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中CMTM6蛋白表达水平。miRTarBase预测miR-124与CMTM6的结合位点,实验设mimic NC组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组、miR-124 mimic+CMTM6组,分别转染miR-124 mimic NC、miR-124 mimic、pcDNA、pcDNA+CMTM6于各组细胞中。qPCR法检测各组细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭、迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白免疫印迹实验检测细胞中CMTM6、细胞表面程序性死亡蛋白配体1（PD-L1）蛋白表达水平。结果　与OLN93相比,SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124表达水平降低（P＜0.05）,CMTM6 mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）,选择U251细胞进行后续实验。miRTarBase预测发现miR-124与CMTM6存在结合位点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与mimic NC组和miR-124 mimic+CMTM6组相比,miR-124 mimic组和miR-124 mimic+pcDNA组细胞中miR-124表达水平升高（P＜0.05）,CMTM6 mRNA表达水平降低。培养24、48、72、96 h时细胞OD450降低,侵袭、迁移细胞数量减少,CMTM6、PD-L1蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论　上调miR-124表达可靶向下调CMTM6的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭、迁移。     

TRAIL基因修饰间充质干细胞对神经胶质瘤细胞杀伤作用研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡配体（TRAIL）基因修饰间充质干细胞（TRAIL-MSCs）对神经胶质瘤细胞的杀伤作用。方法 复苏冻存的脐带间充质干细胞（UC-MSCs）种子库细胞,通过慢病毒转染的方法制备TRAIL-MSCs。ELISA法检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs细胞上清中TRAIL的含量;采用CCK-8试剂盒法检测重组TRAIL蛋白（rTRAIL,0、25、50、100、200、400 ng/mL）对U87MG、U251细胞的增殖抑制情况;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测U87MG、U251细胞中死亡受体DR4、DR5 mRNA表达水平,比较2种细胞对TRAIL的敏感性;将U87MG、U251细胞分别分为对照组、UC-MSCs培养上清（阴性对照）组、TRAIL-MSCs培养上清（含TRAIL约100 ng/mL）组和rTRAIL（100 ng/mL）组,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测DR4、DR5 mRNA表达水平。结果 TRAIL-MSCs培养上清中TRAIL表达量显著高于UC-MSCs（P<0.01）;rTRAIL对U87MG细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为162 ng/mL,而对U251细胞的IC₅₀大于800 ng/mL,U87MG对TRAIL的敏感性更高,差异显著（P<0.01）;U87MG细胞DR4、DR5 mRNA相对表达量均显著高于U251细胞（P<0.01）;与对照组比较,TRAIL-MSCs培养上清、rTRAIL对U87MG、U251细胞均有显著增殖抑制及促进凋亡的作用（P<0.05、0.01） ,TRAIL-MSCs培养上清作用效果显著优于rTRAIL（P<0.01）;与U251相比,U87MG对TRAIL-MSCs培养上清的敏感性更强;TRAIL-MSCs培养上清处理的U87MG细胞DR4、DR5 mRNA表达量显著降低（P<0.01）。结论 TRAIL-MSCs对神经胶质瘤细胞有显著增殖抑制和杀伤作用,其功能可能与其受体DR4及DR5有关。     

姜黄素增强γδT细胞对神经胶质瘤细胞U251杀伤作用的机理

目的 探讨姜黄素提高γδT细胞对神经胶质瘤细胞U251杀伤作用的机理.方法 用10名健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外经多种细胞因子培养γδT细胞;收集培养至第7天的γδT细胞,与不同浓度(0,1.25,2.5,5,10,20 μmol/L)的姜黄素共培养,同时设无水乙醇组.用FACS法测γδT细胞表型、穿孔素、颗...     

不同浓度米诺环素对人胶质瘤细胞增殖、自噬、凋亡的影响及其机制

摘要：目的 探讨不同浓度米诺环素对人类胶质瘤 U87 和 LN229 细胞增殖及凋亡的影响和作用机制。方法 （1）U87和LN229细胞设对照组（DMSO处理），5 μmol/L米诺环素组和10 μmol/L米诺环素组，分组处理72 h 后采用 MTT法检测细胞增殖水平，免疫荧光标记检测细胞自噬蛋白微管相关蛋白l轻链3B亚基（LC3B）表达水平，Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达变化。（2）构建沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）-shRNA载体，观察 敲低SIRT1表达后，不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞自噬的影响。结果 （1）与对照组相比，5 μmol/L和10 μmol/L米诺环素组细胞增殖能力下降，免疫荧光标记显示胞浆内自噬标记蛋白LC3B的表达增多，Western blot结果 显示哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）水平显著降低，自噬基因相关蛋白5（Atg5）、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α亚 基（p-AMPKα）、SIRT1水平显著增加（P＜0.05）。与对照组相比，10 μmol/L米诺环素组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷 酸化 p70 核糖体蛋白 S6 激酶（p-p70s6k）水平显著降低，活化形式的 Caspase-3（Cleaved caspase-3）水平显著增加 （P＜0.05），而5 μmol/L米诺环素组除Cleaved Caspase-3表达水平下降外其他凋亡相关蛋白水平未见显著变化（P＞ 0.05）。（2）敲低SIRT1表达后，shSIRT1组mTOR和LC3B表达水平较对照组明显下降；而经过米诺环素处理后，mTOR 的表达出现明显升高，而LC3B表达水平仅部分恢复。结论 5、10 μmol/L的米诺环素均能有效抑制人类胶质瘤U87 和LN229细胞的生长，其机制可能与AMPK/SIRT1通路诱导细胞自噬和p70s6k/Bcl-2通路诱导细胞凋亡有关。     

姜黄素对胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨姜黄素对胶质瘤细胞系U87细胞增殖及迁移能力的影响。方法应用CCK-8比色法检测经正常培养液及含不同浓度（25、50、100μmol/L）姜黄素的培养液培养24、48、72 h后的U87细胞的存活率;应用细胞划痕实验检测100μmol/L姜黄素对U87细胞迁移能力的影响;将20只SD大鼠制备成胶质瘤模型,随机分成对照组及实验1、2、3组,每组5只,模型制备后第7天对照组给予生理盐水灌胃,实验1、2、3组分别给予姜黄素100、200、300 mg/kg灌胃,1/d,连续14 d,第15天用microPET-CT对载瘤大鼠肿瘤体积进行测定。结果 U87细胞存活率随着培养液中姜黄素浓度的升高和培养时间的延长而降低（ P〈0．05）;给予100μmol/L姜黄素的培养液培养24和48 h后U87细胞迁移度均低于空白对照组（P〈0．05）;实验2、3组肿瘤体积均小于实验1组和对照组（P〈0．05）。结论姜黄素可抑制胶质瘤U87细胞的增殖及迁移。