不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响

目的:探讨不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响。方法:选取处于对数生长期的SiHa细胞,将其分为5组,分别应用不同浓度叶酸（0.1 μg/ml、1.0 μg/ml、10 μg/ml、100 μg/ml、1 000 μg/ml）干预72 h,记录干预后各组SiHa细胞自噬小体数量;采用qRT-PCR法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3及p62 mRNA表达情况;采用Western blot法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3和p62蛋白表达情况。结果:不同浓度叶酸干预后自噬小体数量比较,1 000 μg/ml组明显高于其他组（P<0.05）,其中0.1 μg/ml组数量最低,1.0 μg/ml组与10 μg/ml组比较差异无统计学意义（P>0.05）。qRT-PCR法测定结果显示,随干预叶酸浓度升高,宫颈癌SiHa细胞中自噬蛋白Beclin1、LC3的mRNA明显升高（P<0.05）;p62 mRNA表达水平随叶酸浓度升高而降低（P<0.05）。Western blot法测定结果显示,自噬蛋白Beclin1、LC3的蛋白表达水平随叶酸浓度增高而增高（P<0.05）,p62蛋白表达水平随叶酸浓度升高而下降（P<0.05）。结论:不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的抑制效果不同,剂量越低抑制效果越强,高剂量叶酸还有刺激宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的作用。     

TGF-β1通过诱导自噬促进胃癌SGC7901细胞侵袭

目的:探讨转化生长因子(TGF-β1)诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬的作用及其对细胞侵袭能力的影响.方法:将体外培养的人胃癌SGC7901细胞用不同浓度TGF-β1处理24 h,采用Western blot 法检测细胞中自噬标记蛋白LC3和Beclin1的表达水平.Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化.结果:TGF-β1可显著诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬,且随着浓度增加自噬表达水平逐渐升高.自噬抑制剂3-MA能够阻断TGF-β1诱导的自噬.此外,TGF-β1可显著增强人胃癌SGC7901细胞的迁移和侵袭能力,而自噬抑制剂3-MA能够逆转这一过程.结论:TGF-β1通过诱导自噬发生从而促进人胃癌SGC7901细胞的侵袭.     

干扰Bmi-1表达对宫颈癌Hela细胞TGF-β/Smads通路基因表达的影响

[目的]干扰Bmi-1对siRNA转染宫颈癌细胞系Hela中TGF-β、Hey1、Hes1、Bmp7、Smad3、Casp3和Casp6基因的表达影响,为寻找宫颈癌中Bmi-1的靶基因奠定基础.[方法]将Bmi-1 siRNA转染Hela细胞,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后Hela细胞中TGF-β、Hey1、Hes1、Bmp7、Smad3、Casp3和Casp6基因的表达变化,对有明显变化的基因用Western Blot在蛋白水平进一步验证.[结果] Hela细胞中Bmi-1基因RNA干扰后,TGF-β表达上调,Smad3、Casp3和Casp6基因表达下调.[结论]沉默Bmi-1的表达可使宫颈癌细胞系Hela中TGF-β、Smad3、Casp3和Casp6的表达量均有不同程度的改变,Bmi-1基因在宫颈癌发生发展中可能与TGF-β/Smads信号通路有关.     

蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬作用的机理研究

目的:探讨蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬的作用。方法:不同浓度梯度的蟾蜍灵处理人宫颈癌C33A细胞,选用CCK－8法检测蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的杀伤作用。透射电镜观察给药后C33A细胞的自噬现象。流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,蛋白免疫印迹法检测自噬LC3蛋白表达及相关信号通路JNK、p-JNK蛋白表达。结果:蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的生长抑制作用呈时间-剂量依赖性。蟾蜍灵给药后可诱导C33A细胞发生自噬,蛋白印迹实验结果表明LC3蛋白表达随药物浓度升高而增加。蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬发生与其促ROS水平升高激活了JNK信号通路有关。结论:蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬的机制可能与通过ROS/JNK通路促进细胞自噬有关,以此发挥其抗肿瘤的作用。     

环孢素A调控自噬诱导肿瘤相关巨噬细胞极化干预子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究环孢素A（CsA）对肿瘤相关巨噬细胞极化的调控作用及其与子宫内膜癌（EC）细胞恶性生物学行为之间的联系,并初步探讨相关机制。方法:采用佛波酯（PMA）和白细胞介素-4（IL-4）诱导THP-1细胞向具有肿瘤相关巨噬细胞极化分型特点的M2样巨噬细胞分化,分别以50、100、150、200 ng/mL CsA处理诱导后的细胞24 h,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测CD86和CD206表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测诱导型一氧化氮合酶 （iNOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β)、重组人精氨酸酶1（Arg-1)的mRNA相对表达量。将人子宫内膜癌Ishikawa细胞随机分为4组并进行相应处理:对照组,Ishikawa细胞加入细胞培养液培养24 h;CsA组,200 ng/mL CsA干预Ishikawa细胞24 h;肿瘤相关巨噬细胞（TAM）组,肿瘤相关巨噬细胞培养液上清干预Ishikawa细胞24 h;CsA+TAM组,经200 ng/mL CsA处理肿瘤相关巨噬细胞的培养液上清干预Ishikawa细胞24 h。处理结束后,CCK-8法检测细胞活性,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blotting检测自噬相关蛋白表达,免疫荧光染色检测自噬标记物LC3表达,透射电子显微镜观察自噬体形成。结果:经过不同浓度CsA处理肿瘤相关巨噬细胞后,细胞存活率未发生变化（P＞0.05）,而细胞中CD86表达增加、CD206表达下降,iNOS、TNF-α的mRNA相对表达量升高,TGF-β、Arg-1的mRNA相对表达量降低（P＜0.01）;与对照组比较,CsA组Ishikawa细胞存活率下降,迁移数目与侵袭数目减少,细胞凋亡率增加,Beclin-1蛋白表达下降、p62蛋白表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调,LC3荧光表达减弱,细胞内未见自噬体,而TAM组细胞迁移数目与侵袭数目增加,细胞凋亡率减少,Beclin-1蛋白表达增加、p62蛋白表达下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,LC3荧光表达增强,细胞内自噬体数目较多（P＜0.01）;与TAM组比较,CsA+TAM组细胞存活率下降,迁移数目与侵袭数目减少,细胞凋亡率增加,Beclin-1蛋白表达下降、p62蛋白表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调,同时,LC3荧光表达减弱,细胞内自噬体减少（P＜0.01）。结论:CsA通过调控肿瘤相关巨噬细胞的极化,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移与侵袭能力,其机制可能与细胞自噬水平相关。     

自噬对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的 观察自噬对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响,并探讨其可能机制。方法 采用不同浓度雷帕霉素诱导人宫颈癌HeLa细胞,吖啶橙染色观察自噬小体的形成,Western blot检测自噬相关基因LC3B以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。应用自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)阻断宫颈癌细胞自噬后,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。构建带有绿色荧光蛋白的LC3B质粒,转入HeLa细胞,通过G418药物筛选转染阳性细胞,荧光显微镜观察LC3B的细胞定位,Western blot检测LC3B表达。RTCA仪器实时检测野生型和LC3B过表达HeLa细胞的增殖能力,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达。结果 雷帕霉素诱导后,宫颈癌HeLa细胞自噬水平增高,增殖和迁移能力有所下降;PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达改变(P＜0.05)。自噬抑制剂3-MA诱导HeLa细胞增殖和迁移水平下降(P＜0.05)。荧光显微镜和Western blot结果显示构建的LC3质粒成功转入Hela细胞中并且能够抑制宫颈癌细胞的增殖(P＜0.05)。结论 在一定范围内,随着自噬水平的升高,HeLa细胞增殖和迁移能力降低,可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用。通过基因靶向扰乱自噬关键基因(如LC3等)而改变宫颈癌细胞自噬水平可能为宫颈癌的治疗带来新策略。     

石蒜碱通过TGF-β/Smad 信号通路调控自噬抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8（CCK-8）法分析细胞增殖抑制率,MDC染色法检测自噬泡,Western blot法分析LC3II/LC3I、Beclin-1、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、p-Smad2/Smad2水平,观察3-MA对石蒜碱调控自噬和凋亡的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2、4、8、16、32、64 μmol/L的石蒜碱抑制ECA109细胞增殖（F=22.412,P＜0.05）,IC50值为（15.56±2.16）μmol/L。4、8、16 μmol/L石蒜碱促进自噬泡的产生,增加LC3II/LC3I、Beclin-1水平,降低TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）;3-MA可以逆转石蒜碱对自噬、凋亡及TGF-β/Smad信号通路和Bcl-2/Bax信号通路的影响;体内实验显示,100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调p-Smad2/Smad2水平,上调LC3II/LC3I水平（P＜0.05）。3-MA可以逆转石蒜碱对瘤体体积、瘤体质量及LC3II/LC3I、p-Smad2/Smad2水平的影响。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,促进细胞凋亡,对体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控TGF-β/Smad信号通路激活自噬有关。     

扶正抑癌方含药血清对结肠癌Lovo细胞TGF-β/Smad信号转导通路的影响及意义

目的 通过观察扶正抑癌方含药血清对结肠癌Lovo细胞TGF-β/smad信号转导通路中TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响,明确扶正抑癌方抑制结肠癌细胞间质化转变的作用机制.方法 Lovo细胞体外培养,制备大鼠不同浓度含药血清后,MTT法测定不同浓度含药血清对细胞增殖的影响,以5 Fu作为阳性对照;通过Western blot检测TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白的表达.结果 大剂量含药血清组24 h对Lovo细胞抑制率较中剂量、小剂量组作用更加明显,差异具有统计学意义(P＜0.01).Western blot检测结果表明扶正抑癌方含药血清可以下调Lovo细胞TGF-β1、Smad3和p-Smad3的蛋白表达,与正常组和空白组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 扶正抑癌方含药血清可能通过下调TGF-β/smad信号转导通路中TGF-β1、Smad3和p-Smad3的蛋白表达,抑制Lovo细胞间质化转变.     

苦参碱对宫颈癌SiHa细胞增殖的抑制作用及JAK-STAT信号通路的 影响

目的:观察苦参碱对宫颈癌SiHa细胞JAK-STAT信号通路的影响。方法:苦参碱作用于宫颈癌SiHa细胞。用MTT法检测不同浓度苦参碱对SiHa细胞增殖的抑制作用。Western blot法检测不同浓度苦参碱对宫颈癌细胞JAK1、JAK2和STAT3蛋白表达的影响。结果:苦参碱能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性。苦参碱能降低JAK1、JAK2和STAT3蛋白表达量（P<0.01）,有剂量依赖性。结论:苦参碱对宫颈癌SiHa细胞有抑制作用。其作用机制可能为下调宫颈癌细胞JAK1、JAK2、STAT3蛋白表达水平,阻断细胞信号转导通路,从而抑制宫颈癌细胞增殖。     

肉苁蓉苯乙醇总苷对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的：探讨肉苁蓉苯乙醇总苷（CPhGs）对转化生长因子β1（TGF-β1）介导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖活化作用及对TGF-β1/Smad信号通路表达的影响。方法：试验分为正常对照组、5 ng/mL TGF-β1刺激的HSC-T6模型组、5 ng/mL TGF-β1+不同终浓度（25、50、75和100 μg/mL）CPhGs给药组,另设只加DMEM培养液的空白组。体外培养HSC-T6细胞,通过四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞的增殖;LDH比色法测定CPhGs的细胞毒性;采用荧光定量PCR（qPCR）检测Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达;采用Western blot法检测Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,TGF-β1模型组显著促进了HSC-T6细胞的增殖,而50~100 μg/mL的CPhGs可以抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖（P<0.05）,且25~100 μg/mL的CPhGs对HSC-T6无明显细胞毒性作用;25~100 μg/mL CPhGs均可抑制Smad2和Smad3 mRNA和蛋白水平的表达,且明显抑制Smad2和Smad3蛋白的磷酸化水平,促进Smad7 mRNA和蛋白的表达,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：CPhGs的抗肝纤维化作用可能与其阻断TGF-β1/Smad通路进而阻断HSC-T6细胞的活化和增殖有关。     

TGF-β1上调LSD1表达激活ERK/NF-κB p65通路促进胃癌增殖的实验研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)上调赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)表达激活下游细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)/核因子κBp65(NF-κB p65)信号通路促进胃癌细胞增殖的作用机制。方法利用外源性人重组TGF-β1作用于人胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901、AGS和正常胃黏膜细胞系GES-1。MTT法检测各组细胞增殖活性。Western blotting法检测LSD1蛋白表达。将MGC-803细胞分为5组:空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+TCP(LDS1抑制剂)组、TGF-β1+SIS3(SMAD3抑制剂)组、TGF-β1+SCH772984(ERK1/2抑制剂)组。Western blotting法检测p-SMAD2、p-SMAD3、p-ERK1/2、p-p65蛋白和核p65蛋白表达。采用免疫荧光染色法检测p65在细胞核中的定位。结果TGF-β1可促进MGC-803、SGC-7901、AGS细胞的增殖活性,且上调LSD1蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。与TGF-β1组比较,TGF-β1+TCP组MGC-803细胞LSD1蛋白表达下调,增殖抑制率降低(P<0.05)。与空白对照组比较,TGF-β1组MGC-803细胞LSD1、p-SMAD2、p-SMAD3、p-ERK1/2、p-p65和核蛋白p65蛋白表达量升高(P<0.05)。与TGF-β1组比较,TGF-β1+SIS3组LSD1蛋白表达无差异(P>0.05),TGF-β1+SCH772984组LSD1蛋白表达明显降低(P<0.05),p65蛋白核定位量也减少。结论LSD1在TGF-β1促进胃癌细胞增殖中发挥着重要作用,可能与TGF-β1上调LSD1表达与激活下游ERK/NF-κB p65信号通路,促进p65核转移有关。     

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节

背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制.Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一.本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因.方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性.同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异.结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显.而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞.结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一.     

全反式维甲酸诱导下NB4细胞TGF-β1信号转导途径基因表达的变化

目的:探讨全反式维甲酸(all transretinoic acid ,ATRA)诱导分化急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)过程中转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号转导途径基因表达的变化.方法:应用荧光实时定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)的方法检测ATRA作用于人APL细胞株NB4不同时间后TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad 2、Smad 3、Smad 4和Smad 7 mRNA表达的变化.利用共聚焦显微镜观察NB4细胞中间接免疫荧光法标记的PML RARα融合蛋白和Smad 3蛋白定位.结果:在ATRA诱导NB4细胞分化过程中, TGF β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad 2、Smad 3、Smad 4和Smad 7的表达量逐渐上升,48或72 h时表达量达到最高,然后逐渐下降,而无水乙醇对照组则无明显变化;在NB4细胞中PML-RARα融合蛋白和Smad 3蛋白有共定位现象.结论:TGF-β1信号转导途径与NB4细胞的分化密切相关,ATRA可以上调该信号转导途径中基因的表达.PML-RARα融合蛋白可以和Smad3蛋白结合.     

双氢青蒿素通过诱导自噬抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的 探讨双氢青蒿素（DHA）对人口腔鳞癌细胞增殖能力的影响及其作用机制。方法 用不同浓度的双氢青蒿素干预CAL27细胞,采用CCK-8法检测其细胞增殖活力,集落形成实验检测细胞克隆形成能力;基于网络药理学和生物信息学筛选DHA抑制口腔癌生物学行为的潜在靶点;不同浓度的DHA干预CAL27细胞后,Western blot检测增殖相关蛋白PCNA和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的表达;联合自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤和自噬诱导剂雷帕霉素与双氢青蒿素共处理细胞后,检测细胞增殖活力、克隆形成能力和增殖及自噬相关蛋白的表达。结果 双氢青蒿素显著降低了CAL27细胞的增殖活力及克隆形成能力,且呈现浓度依赖性,PCNA的表达量也显著下降。网络药理学结合生物信息学发现DHA抑制口腔癌的靶点涉及自噬相关通路。DHA干预可升高细胞内自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的表达,DHA联合自噬阻断剂共处理CAL27后,细胞的增殖活力及克隆形成能力降低,PCNA的表达升高、Beclin-1、LC3的表达降低。结论 双氢青蒿素可在体外抑制口腔鳞癌细胞的增殖能力,其作用机制可能与诱导细胞自噬相关。     

三七皂苷R1调控PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人下咽鳞状细胞癌FaDu细胞凋亡和自噬北大核心

目的:探讨三七皂苷R1(notoginsenoside R1,NGR1)对人下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)FaDu细胞凋亡以及自噬的影响,并对其涉及的信号通路进行研究。方法:75μmol/L、150μmol/L、300μmol/L NGR1作用于FaDu细胞24 h后,采用MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;自噬双标腺病毒检测自噬流;Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ以及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果:NGR1能够抑制FaDu细胞的增殖并促进细胞凋亡;NGR1可诱导FaDu细胞自噬,并呈一定浓度依赖性;Western blot结果显示,NGR1作用于Fa Du细胞24 h后,LC3Ⅱ表达明显增加,而p-PI3K、p-AKT、p-m TOR表达相较于Control组明显下降。结论:NGR1可抑制Fa Du细胞增殖,诱导细胞凋亡与自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路有关。     

葛根素通过TGF-β/Smads信号通路促进前列腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨葛根素（puerarin）通过TGF-β/Smads信号通路促进前列腺癌细胞凋亡的机制。方法:将不同浓度葛根素（0、25、50、75和100 μmol/L）分别孵育前列腺癌PC3细胞,并采用台盼蓝染色(trypan blue）检测细胞增殖情况;流式细胞术方法检测不同剂量葛根素对细胞凋亡率的影响;使用RT-PCR和Western blot检测葛根素对TGF-β1和Smad3的影响;采用TGF-β1抑制剂P144抑制TGF-β1活性,使用Western blot验证P144对TGF-β1表达含量的影响并检测其对细胞凋亡蛋白Casepase3、Bcl-2表达水平的影响。结果:葛根素以时间和剂量依赖的方式抑制PC3细胞的生长（P<0.05）;25、50、75和100 μmol/L葛根素对细胞存活的抑制率分别为25.7%、28.9%、32.5%和56.3%;流式细胞术检测结果指出25、50、75和100 μmol/L葛根素对PC3细胞的凋亡率分别为(4.36±2.62)%、(9.86±3.64)%、(15.95±5.22)%、(19.65±7.34)%,随着剂量的增长,PC3细胞凋亡率逐渐上升（P<0.05）;RT-PCR和Western blot检测提示随着葛根素浓度的升高,TGF-β1、Smad3和Caspase3在mRNA和蛋白水平表达含量显著升高,而Bcl-2则显著降低（P<0.05）;与葛根素单独处理组相比,葛根素+P144共处理组细胞,TGF-β1、Smad3和Caspase3蛋白表达水平显著下降,Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。随后的流式细胞术检测结果指出,与葛根素单独处理组比,使用葛根素+P144共处理组细胞凋亡水平显著下降（P<0.05）。结论:葛根素可能通过激活TGF-β/Smad受体信号通路诱导Bcl-2下调和促进Caspase3的上调,从而诱导前列腺癌PC3细胞凋亡。     

表观遗传修饰介导抑制SOSTDC1表达促进宫颈癌细胞的恶性生物学行为

目的：探究含硬化蛋白域蛋白1（SOSTDC1）对宫颈癌细胞恶性生物学行为的调控及其分子机制。方法：收集2020年8 月至2022 年5 月间在福建省肿瘤医院活检或手术切除的53 例宫颈癌组织和相应的癌旁组织标本,免疫组化法检测SOSTDC1 蛋白在宫颈癌组织及相应癌旁组织中的表达,qPCR 法检测正常宫颈细胞、宫颈癌细胞中SOSTDC1 mRNA 表达;将SOSTDC1 过表达慢病毒（OE-sostdc1）和对照空病毒（NC）感染宫颈癌细胞SiHa 及CaSki,将其分为SiHa-OE-sostdc1、SiHa-NC、CaSki-OE-sostdc1、CaSki-NC 组,采用WST-1法、细胞集落形成实验、Transwell 实验和WB法检测转染各组SiHa 及CaSki 细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力和BMP、Wnt/β-catenin 信号途径相关蛋白及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂2''-脱氧胞苷（5''-Aza-CdR）处理宫颈癌细胞后采用qPCR和WB法检测SOSTDC1 mRNA及蛋白的表达变化,用甲基化特异性PCR（MSP）检测5 例配对宫颈癌组织与癌旁组织中SOSTDC1 基因启动子区甲基化水平,同时qPCR 检测其SOSTDC1 mRNA水平。结果：与癌旁组织比较,SOSTDC1蛋白在宫颈癌组织中呈低表达（P<0.01）,且与淋巴结转移与FIGO分期有关联（均P<0.05）;与正常宫颈HUCEC细胞比较,SOSTDC1 mRNA 在宫颈癌C33A、HeLa、SiHa、CaSki 细胞中均呈低表达（均P<0.01）。过表达SOSTDC1显著抑制SiHa 及CaSki 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。WB法结果检测显示,过表达SOSTDC1 显著抑制 SiHa 及 CaSki 细胞中磷酸化 Smad、Dvl2/3、β -catenin、VIM、N-cadherin、Snail 蛋白的表达（均P<0.05）,5''-Aza-CdR 处理后的SiHa 及CaSki 细胞中SOSTDC1 mRNA和蛋白水平均显著增加（均P<0.05）,MSP检测结果显示,相较于癌旁组织,宫颈癌组织中SOSTDC1基因启动子区呈高度甲基化,且SOSTDC1 mRNA水平降低（P<0.01）。结论：SOSTDC1在宫颈癌组织中呈低表达且与肿瘤的恶性进展关联,其表达下调与其基因启动子区高度甲基化有关,过表达SOSTDC1 可能通过阻断BMP及Wnt/β-catenin信号通路从而抑制SiHa、CaSki细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

苹果多酚通过激活AMPK/SIRT1信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞自噬反应的影响

目的:探讨苹果多酚通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1（AMP-activated protein kinase/Sirtuin1,AMPK/SIRT1)信号通路对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人肺泡上皮细胞（A549）自噬反应的影响。方法:使用不同浓度的苹果多酚提取物（apple polyphenol extract,APE）预处理A549细胞2 h后,LPS诱导A549细胞培养24 h,MTT法检测增殖活性,筛选APE最佳预处理浓度;将A549细胞分为对照组、LPS组（3 mg/L LPS）、LPS+APE组（3 mg/L LPS+20 μg/mL APE）、APE+Compound C组（3 mg/L LPS+20 μg/mL APE+50 μmol/L Compound C）,免疫荧光染色观察A549细胞自噬;流式细胞术检测A549细胞凋亡;Western blot法检测细胞中自噬相关蛋白及AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,经LPS诱导的A549细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达降低,p62蛋白表达及细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与LPS组比较,LPS+APE组细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平显著升高,p62蛋白表达及细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）;与LPS+APE组比较,APE+Compound C组A549细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平显著降低,p62蛋白表达及细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。结论:苹果多酚通过激活AMPK/SIRT1 信号通路提高LPS诱导的肺上皮细胞自噬,降低细胞凋亡。     

羟喜树碱通过诱导自噬抗宫颈癌的机制研究

目的探讨抗肿瘤药物羟喜树碱(HCPT)对宫颈癌HeLa细胞作用的机制。方法 CCK8检测Hela细胞增殖,Western blot检测自噬和凋亡相关蛋白的表达,GFP-LC3 shRNA转染和Hoechst染色后,荧光显微镜下观察细胞自噬特异小体量的改变以及凋亡形态学的变化。结果 HCPT抑制Hela细胞生长呈浓度依赖性(P<0.05),IC503μmol/L HCPT作用Hela细胞后,自噬相关蛋白Beclin1、p62的表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值发生改变,差异有显著性意义(P均<0.05);凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达也发生明显改变(P均<0.05);荧光显微镜下观察Hela细胞带有GFP-LC3的自噬体增加,凋亡细胞也增多(P均<0.05)。结论 HCPT能够诱导HeLa细胞中自噬相关基因Beclin1、p62以及LC3的表达增强,从而激活细胞自噬发生;且HCPT能够激活宫颈癌HeLa细胞发生自噬,进而诱导细胞凋亡来达到抗肿瘤目的。     

LncRNA MALAT1通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭北大核心

目的:观察LncRNA MALAT1对Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:干扰LncRNA MALAT1在Saos-2细胞中的表达水平,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞凋亡及周期情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭改变,透射电镜观察自噬小体,Western Blot、RT-PCR检测自噬相关因子Beclin1、LC3、p62表达差异及LncRNA MALAT1对Wnt/β-catenin通路的影响。结果:干扰LncRNA MALAT1后,Saos-2细胞自噬水平明显升高,Beclin1、LC3表达水平明显升高(P<0.05),而p62的表达水平显著下降(P<0.05);细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05),Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt3a、β-catenin的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1可以通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移和侵袭。