NICU耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药及多位点序列分析

目的分析NICU耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药及同源性,为临床防控CRKP提供实验依据。方法收集2016年1-12月某教学医院NICU首次分离的CRKP,使用PCR方法检测常见ESBLs基因(SHV、TEM、CTX-M1、CTX-M2、CTX-M8、CTX-M9)、AmpC酶基因(HAD、CMY)、碳青霉烯酶基因(KPC、NDM、SME、GES、VIM、IMP、OXA-48)和多粘菌素耐药基因MCR-1等,并采用多位点序列分析(MLST)方法分析同源性。结果共收集44株CRKP,KPC-2基因携带率为100%,DHA-1携带率为70.5%,CTX-M基因携带率为68.2%,MLST共有4类分型,ST11型35株,ST48型6株,ST134型1株,未分型4株。结论 NICU病区分离CRKP均为多重耐药,NICU以携带KPC-2基因的ST11型菌株流行为主,应规范抗菌药物使用,加强消毒隔离措施,控制流行传播。     

携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌的流行克隆研究

目的揭示我国携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌的流行克隆特征,并与国外菌株进行比较。方法对2012-2017年全国40个城市的61家医院分离的100株携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌进行多位点序列分型(MLST);通过检索文献获取国外携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌MLST数据;使用BioNumerics构建最小生成树。结果 100株携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌被分为14个ST型。优势型别为ST11型,包含分离自38个城市的77株菌;其次为ST15型,包含分离自6个城市的7株菌;其余12个型别为ST147、ST1、ST65、ST23、ST25、ST37、ST258、ST395、ST412、ST449、ST502、ST685型,分别包含菌株1-3株。检索文献显示,欧美分离株的优势型别是ST258。结论自2007年我国第一次报道ST11型携带bla_(KPC-2)型耐药基因肺炎克雷伯菌以来,ST11型菌株持续作为优势克隆群,并已扩散至全国大部分地区。应加强该类菌株的分子分型实验室监测,获得系统全面的数据揭示其流行规律,制定针对性防控措施控制其传播。     

血液透析患者血流感染CRKP耐药性及耐药基因型

目的 分析血液透析患者血流感染碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药情况及耐药基因型。方法 收集2017年11月-2020年5月于湖州市中心医院血液净化中心治疗的血液透析患者血液标本分离的200株肺炎克雷伯菌,对分离的CRKP菌株进行药敏试验,采用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因、血清荚膜分型以及毒力基因,并采用多位点序列分型(MLST)分析CRKP分型。结果 200株血流感染肺炎克雷伯菌中CRKP菌株为53株(26.50%),53株CRKP对几乎所有碳青霉烯类和其他β-内酰胺类抗菌药物耐药,对氨基糖苷类抗菌药物耐药率>45.00%; 53株CRKP共检出48株携带KPC-2、NDM-1、CTM-M9基因菌株,未检出携带碳青霉烯酶基因菌株5株;53株CRKP仅检测到4株K1型菌株,共有58.49%(31/53)CRKP携带毒力基因,rmpA2、iutA为两种主要的毒力基因;53株CRKP中50株为ST11型,ST550、ST1517、ST2230各1株。结论 血液透析患者血流感染CRKP耐药现象较为严峻,其主要耐药机制是携带耐药基因KPC-2,主要毒力基因为rmpA2、iu...     

血流感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力因子研究

目的对临床血流感染分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的耐药机制及毒力特点进行分析。方法连续收集2013年1月-2016年12月衢州市人民医院临床血流感染分离的CRKP 28株,采用Micro Scan Walk Away-96对菌株进行鉴定和药敏试验,改良Hodge试验和EDTA协同试验分别检测碳青霉烯酶和金属酶,PCR方法检测耐药基因、荚膜血清型及毒力基因,多位点序列分析(MLST)进行细菌同源性分析。结果 28株血流感染的CRKP对大多数抗生素保持较高的耐药率。未发现膜孔蛋白编码基因Omp K35和Omp K36缺失株,检出KPC-2型27株(96.4%),为ST11。检出荚膜血清K5型1株,为ST1049,该菌未检测到常见的耐药基因。CRKP菌株普遍携带fim H、mrk D、ent B和ybt S毒力基因,其他毒力基因的阳性率较低。结论本院临床血流感染分离的CRKP主要耐药机制是携带KPC-2基因,序列型ST11是全国范围主要的流行序列型。CRKP个别菌株携带多种毒力因子,应引起临床重视。     

综合重症监护病房分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性和同源性分析

目的 对综合重症监护病房分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）耐药性和同源性进行分析,为临床抗菌治疗和监测提供参考。方法 收集2019年3月至2021年3月2家医院综合重症监护病房分离得到的260株CRKP菌（其中马鞍山某医院156株,苏州某医院104株）,并对CRKP菌株进行常规药敏试验、PCR扩增和测序检测耐药基因携带情况,利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术和多位点序列分型技术（MLST）对CRKP菌株进行同源性分析。结果 260株CRKP菌株对17种临床常用抗菌药物高度耐药,多重耐药率100%。马鞍山某医院的CRKP菌株主要携带碳青霉烯酶及超广谱β内酰胺酶（ESBLs）基因共5种耐药基因,bla_KPC-2型、bla_NDM-1型、bla_SHV型、bla_TEM型和bla_CTX-M-1型的携带率分别为84.62%、3.21%、70.51%、71.79%和80.77%。苏州某医院的CRKP菌株共携带bla_KPC-2型、bla_NDM-1型、bla_SHV型、bla_TEM型和bla_CTX-M-9型共5种耐药基因,携带率分别为74.04%、23.08%、80.77%、76.92%和27.88%。PFGE分型结果显示2家医院CRKP菌株均以A型和C型为主,但亚型和数量有差异。MLST分型分出ST11、ST76、ST16、ST437、ST379、ST751、ST395和ST307共8种序列型,马鞍山某医院主要为ST11型,占83.97%,而苏州某医院以ST11型（65.38%）和ST76型（27.88%）为主。结论 2家医院综合重症监护病房的CRKP菌株存在一定差别,但均以携带KPC-2碳青霉烯酶基因的ST11型为主,针对性加强重症监护病房清洁和院感监测,有利于控制多重耐药菌的传播和流行。     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌致泌尿系统医院感染的特点及耐药机制研究

目的分析医院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenemase resistant K. pneumoniae,CRKP)尿路感染的分子流行病学特点,为临床科学防控提供实验室依据。方法选择2016年1-12月医院引起医院尿路感染的非重复CRKP菌株18株,采用多位点序列分析(MLST)方法进行分型,并使用PCR方法检测常见碳青霉烯酶基因(DNM、KPC、SME、VIM、GES、IMP、OXA-48)和多黏菌素耐药基因MCR-1等。结果 18株医院尿路感染CRKP菌株,KPC-2基因携带率为94.44%(17/18),其中一株同时携带KPC和MCR-1基因,MLST分型以ST11型为主(88.89%,16/18)。结论 CRKP引起的尿路感染患者,多年龄偏大,有保留导尿和高级别抗菌药物使用史,应该规范抗菌药物使用与加强消毒隔离措施,控制流行传播。     

合肥某院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力因子分析

目的探讨合肥地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制及毒力因子的特点。方法收集2015年1月-2017年1月合肥市第一人民医院南区分离的38株CRKP,采用全自动微生物系统、改良Hodge试验和EDTA协同试验、基因测序、膜蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),对其药敏、耐药表型、耐药基因、毒力位点、膜蛋白突变进行检验。结果 38株CRKP仅替加环素、阿米卡星、左氧氟沙星和环丙沙星仍保持>60.0%的敏感性,其余均高度耐药。检出32株(84.21%)菌株携带了碳青霉烯酶耐药基因,其中肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶Ⅱ型(KPC-2)26株(68.4%),新德里β-内酰胺酶Ⅰ型(NDM-1)12株(31.58%);同时携带KPC-2和NDM-1 6株(15.8%);31株(81.58%)携带超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因;25株(65.79%)存在膜孔蛋白基因缺失;选取2株膜孔蛋白缺失和2株膜孔蛋白不缺失的菌株进行菌株膜蛋白SDS-PAGE验证与基因检测结果一致。共检出荚膜K1型5株,K57型1株,其他32株属于尚未分型。黏液表型调控基因(rmpA)阳性16株,气杆菌属编码基因(aerobaction)阳性12株,其中10株两者均阳性。所有菌株Ⅰ型菌毛黏附蛋白编码基因(FimH-1)均阳性。结论本次分离的合肥地区CRKP以KPC和NDM型为主,同时检出了携带KPC的K1荚膜型高毒力菌株,应引起重视。     

耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌耐药性与分子特征分析

目的了解对碳青霉烯类抗菌药物不敏感的肠杆菌科细菌的发生及耐药情况,探讨耐药与产酶的关系。方法选取2011-2012年医院亚胺培南或美罗培南不敏感的肠杆菌科细菌15株,用琼脂稀释法测定最小抑菌浓度(MIC),改良Hodge试验和EDTA纸片协同试验筛选产碳青霉烯酶表型;PCR检测碳青霉烯酶基因及其他β-内酰胺酶基因,多位点序列分型(MLST)进行分子分型及同源分析。结果共收集碳青霉烯类抗菌药物不敏感肠杆菌科细菌15株;多黏菌素B和替加环素敏感性较高,均>90.00%;肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和黏质沙雷菌均检出产KPC酶菌株,占73.33%;11株产KPC酶菌中10株为KPC-2+ESBLs,1株为KPC-2+AmpC,其中3株为KPC-2+ESBLs+AmpC,4株非产KPC酶菌株中有2株ESBLs+AmpC,各有1株仅检测到ESBLs或AmpC酶,未检测到产金属酶及OXA酶菌株;MLST分型以ST11为主,共4株。结论医院产KPC-2酶细菌以肺炎克雷伯菌最多,产KPC菌株同时携带多种耐药基因与高度耐药相关;ST11型为医院优势流行型别。     

MLST和PFGE在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌医院感染监测中的应用

 目的 探讨某院重症监护病房(ICU)患者、医院环境中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)菌株的同源性,为医院感染防控提供理论依据。方法 收集2017年9—12月某三甲医院ICU患者、环境中连续分离的CRKP菌株,进行耐药表型、碳青霉烯酶基因检测,采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性分析。结果 共收集10株CRKP菌株,其中9株分离自5例患者的临床感染标本,1株分离自气压治疗仪面板。10株菌均携带产KPC酶基因;MLST分型均为ST11型;共有5种PFGE带型,其中5株带型完全一致,为流行菌株,1株菌株与流行菌株带型仅相差1条条带,其余4株菌带型相近,但与流行株带型差异较大。气压治疗仪面板分离的1株CRKP菌株与患者来源的4株CRKP菌株耐药表型、PFGE型别及ST型别完全一致,考虑为仪器共用造成的医院感染。分离自同一重症胰腺炎患者腹腔引流液、血标本的CRKP菌株PFGE带型完全一致,推测CRKP可能通过腹腔感染入血。结论 PFGE和MLST对明确医院感染细菌传播路径,个体细菌感染路径以及遗传变异有重要意义,有助于从切断感染途径方面入手指导控制多重耐药菌的传播。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌产酶耐药机制及同源性分析

目的探讨肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要产酶机制及同源性。方法收集长沙市第一医院2016年12月-2017年12月临床分离的非重复碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,聚合酶链反应(PCR)法检测常见耐药编码基因。脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析同源性。结果共收集到57株CRKP,mCIM试验阳性率为91.23%(52/57)。PCR共检出6种耐药基因,包括blaSHV、blaCTX-M-9群、blaKPC-2、blaTEM、blaCTX-M-1群和blaNDM-1,检出率分别为94.74%、68.42%、68.42%、56.14%、3.51%和1.75%,其中2株携带blaCTX-M-1群的菌株经测序证实为blaCTX-M-80和blaCTX-M-123,blaCTX-M-9群中1株为blaCTX-M-27,2株为blaCTX-M-14,其余均为blaCTX-M-65。PFGE结果显示,57株CRKP可分为A~H共8种不同的型别,以A型为主,占76.79%,其中A6亚型占32.56%。MLST结果显示,共检出ST11和ST29两种型别,以ST11为主,占75.00%。结论该院临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要机制为产KPC-2型碳青霉烯酶,且同时携带多种超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。PFGE和MLST结果表明:该院临床分离的CRKP存在克隆传播,需加强流行病学监控。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的药敏结果及耐药基因

目的分析某院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的药物敏感性及耐药基因携带情况。方法收集2017年1月—2018年6月该院临床分离的CRKP,对菌株进行药物敏感性分析,应用聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因携带情况。结果共收集57株CRKP,主要来源于呼吸道标本,其中痰34株,肺泡灌洗液11株;来源科室主要为神经内科(20株,35.09%)、呼吸内科(15株,26.32%)、重症医学科(9株,15.79%)。CRKP对大部分抗菌药物耐药,部分抗菌药物耐药率相对较低,其中复方磺胺甲口恶唑耐药率最低(15.79%),其次为替加环素(50.88%)、阿米卡星(57.89%)。共检出2种碳青霉烯酶基因(KPC-2、NDM-1),4种超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因(SHV、CTX-M-9、TEM、CTX-M-1)。57株CRKP均检出ESBLs基因,其中39株(68.42%)检出KPC-2基因,仅有1株检出NDM-1基因。结论临床分离的CRKP耐药形势严峻,并且携带多种耐药基因,其中最常见的产碳青霉烯酶为KPC。     

CRKP碳青霉烯酶基因检测及同源性分析

目的 了解某院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）碳青霉烯酶基因携带状况,以及菌株间的同源性,为预防和控制CRKP的克隆传播提供实验室依据。方法 收集2017年1-12月该院分离自临床各科室的CRKP 22株（K1~K22）,用药敏纸片扩散法和微量肉汤稀释法对药敏结果进行复核,采用改良Hodge试验和Carba NP试验检测菌株是否产碳青霉烯酶,应用PCR技术扩增产酶菌株常见的碳青霉烯酶基因并测序,运用多位点序列分型（MLST）和肠杆菌科基因间一致重复序列PCR（ERIC-PCR）进行同源性分析。结果 22株CRKP对厄他培南、亚胺培南、美罗培南的耐药率均为100%,对临床其他常见抗菌药物也高度耐药;13株改良Hodge试验阳性,14株Carba NP试验阳性。14株产酶菌株均携带KPC-2基因,K12菌株同时携带NDM-1基因。按MLST法可分为ST11（14株）、ST875（6株）、ST1964和ST571（各1株）,按ERIC-PCR法分型可分为A型（15株）、B型（6株）及C型（1株）。分型结果相同的菌株中K1~K6同属ICU,K7~K10同属脑血管外科,K15~K21同属新生儿科,对应患者有共同住院时间,且患者存在转科情况（K2、K8患者均由脑血管外科转入ICU,K13、K14分别从ICU转入血液内科、肾内科）。结论 该院2017年存在ST11型和ST875型CRKP的克隆流行,需加强医院感染预防与控制措施。     

中国西南地区3所综合性医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌流行病学特征及耐药性

目的 检测中国西南地区3所综合性医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的流行病学特征及耐药性,为CRKP感染防控提供依据.方法 收集2019年1—12月中国西南地区3所三级甲等医院检出的159株CRKP,采用微量肉汤稀释法检测CRKP菌株的药物敏感性,利用聚合酶链反应(PCR)进行碳青霉烯酶基因鉴定和多位点序列分型,...     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的研究

目的:研究耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及耐药基因类型,为合理使用抗菌药物及监测院内感染等提供有效的科学指导。方法:对医院收治的肺炎患者分离出的29株CRKP,采用改良碳青霉烯类失活(mCIM)试验法检测肺炎克雷伯菌中的碳青霉烯酶,通过聚合酶链反应(PCR)及测序方法对碳青霉烯酶基因KPC、IMP、NDM型、超广谱β内酰胺酶基因(ESBLs)、TEM、SHV、CTX-M型以及AmpC酶基因DHA进行检测。结果:29株耐药菌株对大部分临床常用抗菌药物高度耐药,对氟喹诺酮类抗菌药物和氨基糖苷类抗菌药物有较高的敏感性。表型确认试验中7株改良Hodge实验阳性,18株mCIM试验阳性。20株(占68.97%)菌检测到碳青霉烯酶基因,其中KPC为17.24%(5/29),IMP为13.79%(4/29),NDM为37.93%(11/29)。25株(占86.20%)菌检测到ESBLs菌株的基因,其中TEM型为62.07%(18/29),SHV型为79.31%(23/29),CTX-M型为62.07%(18/29)。3株菌检测到AmpC酶基因,其中DHA为10.34%(3/29)。29株CRKP中有14株既表达了碳青霉烯酶基因又表达了ESBLs的基因,共同表达率为48.28%。对耐药基因抽取其中部分阳性结果进行测序后均为目标基因,其中KPC为KPC-2、NDM为NDM-1。结论:29株CRKP对多种抗生素耐药率均较高,且对碳青霉类抗菌药物的耐药基因型主要为KPC-2和NDM-1,故加强院内感染预防控制措施,防止此类菌株的播散。     

产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌临床及分子流行病学特征比较

目的 比较产NDM-1和产KPC-2耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的临床及分子流行病学特征。 方法 回顾性分析2017—2020年某儿童医院非重复儿童住院患者临床分离的CRKP, 查阅菌株来源患者的病历资料获得患者的基本临床特征。对CRKP进行药敏试验及多位点序列分型(MLST)分析, 比较产NDM-1和产KPC-2的CRKP临床及分子流行病学特征。 结果 2017—2020年共收集164株CRKP菌株, 其中96株携带bla_NDM-1, 68株携带bla_KPC-2, 产NDM-1的CRKP主要分布在新生儿科室, 产KPC-2的CRKP以非新生儿科室居多, 两组在标本来源、患者年龄、科室分布和预后情况方面比较, 差异均有统计学意义(均P＜0.05);产NDM-1的CRKP菌株以ST 17型和ST 278型为主, 分别为40.63%、18.75%;而产KPC-2的CRKP菌株以ST 11为主, 达73.53%。产KPC-2的CRKP分离株对头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、呋喃妥因和磷霉素的耐药率均高于产NDM-1的CRKP分离株, 差异均有统计学意义(均P＜0.05)。 结论 产NDM-1和产KPC-2的CRKP菌株在临床及分子流行病学方面均存在差异, 产KPC-2的CRKP菌株表现出更严重的耐药性, 感染KPC-2 CRKP的患者预后较差, 应引起临床和感控的重视。     

某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因分析

目的研究某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)在细菌耐药方面的分子流行病学特征,为CRE的防控提供依据。方法收集某院2013—2017年细菌室保存的CRE,对其进行多位点序列分型(MLST)、药敏试验、全基因序列测定,选取部分CRE中携带的碳青霉烯耐药基因进行基因环境分析。结果共收集62株CRE,成功复活51株;其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)30株,耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)9株,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(CRECL)6株,耐碳青霉烯类其他肠杆菌6株。CRKP MLST主要包括3株ST147、2株ST11;CREC MLST主要包括3株ST167;CRECL MLST主要包括3株ST93、2株ST88。51株CRE对氨苄西林、头孢噻肟的耐药率最高,均为100%。耐碳青霉烯类耐药基因分布:1株携带blaKPC-2,14株携带blaIMP-4,18株携带blaNDM-1,22株携带blaNDM-5,2株携带blaNDM-9,10株携带blaOXA-1,10株携带blaOXA-10,2株携带blaOXA-23,2株携带blaOXA-66。分析blaNDM-1、blaNDM-5、blaNDM-9、blaIMP-4不同菌种的基因环境,发现几种耐药基因各自的基因环境都与已报道的基因环境相似,无明显的菌种间差异性。结论耐药基因通过水平传播能稳定存在于不同的CRE菌株中,对医院感染防控造成一定的威胁。     

临床分离CRKP耐药和毒力基因检测及分子进化分析

 目的 了解临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药和毒力基因携带情况,为临床防治提供依据。方法 收集某院2020年3月—2021年3月临床标本分离的CRKP 36株,对菌株进行药敏鉴定,采用聚合酶链反应(PCR)扩增检测耐药基因、荚膜血清型基因、毒力基因,采用多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行序列分型(ST分型),基于wzi测序结果进行血清型分型和分子进化分析。结果 36株CRKP均检出bla_KPC基因,未检出bla_IMP、bla_VIM、bla_OXA-48基因。黏液丝试验均为阴性,未检出K1、K2、K5、K20、K57五种常见荚膜血清型,36株CRKP rmpA2、wcaG、ybtS、aerobactin、iutA、iroN、ycf、mrkD、mrkA、silS、uge、Plvpk、fimH、wzi基因检出率为100%;TerW为86.11%;fimA、magA均为阴性。MLST结果分析显示,36株均为ST11型。仅32株成功测序wzi基因,wzi分型结果为K14.K64 96.88%(31/32),K24 3.12%(1/32)。基于测序结果构建分子进化树,结果显示32株菌中31株100%同源,1株与浙江菌株KP18069 99%同源。结论 该院CRKP对碳青霉烯类耐药的主要机制是携带bla_KPC基因,优势ST分型为ST11,wzi分型以K14.K64为主,且携带了大量的毒力基因。分子进化树提示存在同源性感染,怀疑有输入性传播,应及时采取防控措施,防止耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌医院传播。