miR-34 a通过激活AMPK/mTOR通路增强鼻咽癌细胞顺铂敏感性

目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-34a对鼻咽癌细胞顺铂敏感性的影响及其机制.方法:采用实时荧光定量PCR法检测鼻咽癌顺铂耐药HNE1/DDP细胞和亲本HNE1细胞中miR-34a的表达水平.将HNE1/DDP细胞分为未转染组(正常培养)、miR-NC组(转染阴性对照)和miR-34a组(转染miR-3...     

PI3K/AKT/mTOR通路及其抑制剂在乳腺癌中的应用现状

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号转导通路在多种肿瘤中异常激活,参与肿瘤细胞增殖、分化和凋亡等生命过程的调控,是抗肿瘤药物研发的重要靶点。对目前已应用于乳腺癌临床或处于临床试验阶段的PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂进行归纳,并综述该通路抑制剂的联合用药策略,以期为不同亚型乳腺癌提供个体化靶向治疗方案。     

GOLM1调控PI3K/AKT/mTOR信号转导通路促进肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

背景与目的：高尔基体膜蛋白1(Golgi membrane protein 1,GOLM1)在肺腺癌中发挥促癌作用,但对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制尚不明确。探究GOLM1对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法：选取2019年4月—2021年4月在克拉玛依市中心医院行手术切除的肺腺癌患者的癌组织及相应癌旁组织标本各90例,采用免疫组织化学法检测肺腺癌组织和癌旁组织中GOLM1的表达,并分析肺腺癌组织中GOLM1表达与临床病理学特征的关系。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测人肺上皮细胞系BEAS-2B及人肺腺癌H460、A549、PG49、H1299细胞系中GOLM1的表达。取对数生长期的肺腺癌A549细胞,随机分为空白组（细胞未转染）、GOLM1小干扰RNA阴性对照（small interfering RNA negative control,si-NC）组（细胞转染si-NC）、GOLM1小干扰RNA(GOLM1 small interferingRNA,si-GOLM1)组（细胞转染si-GOLM1）、胰岛素样生长因子-1(insulin...     

PI3K/AKT/mTOR通路调控乳腺癌细胞FASN过表达的分子机制

目的:研究PI3K/AKT/mTOR通路在乳腺癌细胞FASN过表达中的作用,研究抑制该通路能否协同FASN抑制剂发挥靶向抗肿瘤作用。方法:荧光素酶检测法检测mTOR抑制剂rapamycin对乳腺癌细胞FASN转录活性的影响。Western blotting检测PI3K抑制剂LY294002及rapamycin对乳腺癌细胞AKT、pAKT、mTOR通路成员以及FASN的表达影响。分别给予乳腺癌细胞FASN抑制剂cerulenin、rapamycin及两者联合给药,MTT法检测不同干预法对细胞存活的影响。结果:Rapamycin可明显降低乳腺癌细胞FASN启动子活性,其中在FASN过表达的SKBR3细胞中最明显。LY294002作用后pAKT、pmTOR、FASN的表达均明显降低。Ra-pamycin作用后mTOR、pmTOR、p4EBP-1、pp70S6K及FASN的表达均明显下调。Cerulenin可对乳腺癌细胞产生细胞毒作用,在SKBR3中更显著。Rapamycin对乳腺癌细胞的细胞毒作用与FASN的表达无关。Rapam-ycin能够协同cerulenin对乳腺癌细胞产生细胞毒作用,且在SKBR3细胞中更明显,小剂量rapamycin联合小剂量cerulenin即达到较大细胞毒作用。结论:PI3K/AKT/mTOR通路参与调控乳腺癌细胞FASN的过表达,mTOR通路抑制剂联合FASN抑制剂有望成为高侵袭性乳腺癌新的治疗方法。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂治疗乳腺癌临床应用专家共识

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路(PAM信号通路)在乳腺癌发生发展中发挥重要作用, 与晚期乳腺癌内分泌治疗耐药密切相关, 以PAM信号通路中的关键分子为靶点的抗癌治疗成为了近几年的研究热点。靶向PAM信号通路抑制剂为晚期乳腺癌患者尤其是激素受体阳性人表皮生长因子受体2阴性患者带来明显临床获益。目前, 美国食品和药物管理局批准上市的PAM信号通路抑制剂包括PI3K抑制剂Alpelisib和mTOR抑制剂依维莫司, 同时, 依维莫司也在国内获得批准用于乳腺癌新适应证, Alpelisib有望不久在中国上市。鉴于此, 专家制定了PAM信号通路抑制剂治疗晚期乳腺癌的临床应用专家共识, 系统地介绍了PAM信号通路的机制、PAM信号通路抑制剂的疗效、临床应用、不良事件管理及PIK3CA基因检测建议, 旨在提高中国临床肿瘤医师对PAM信号通路抑制剂的认知, 推进临床决策的精准性, 达到延长患者生存时间的目标。     

微小RNA-1269a靶向调控PTEN对肝癌细胞迁移、侵袭和PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨微小RNA-1269a(miR-1269a)对肝癌细胞侵袭、迁移和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响及可能机制.方法 采用Ualcan数据库分析肝癌组织中miR-1269a的水平;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞(Huh-7、HCCLM...     

微小RNA-766对肝细胞癌细胞生物学行为和PI3K/AKT/FOXO1通路的影响

目的 探讨微小RNA-766(miR-766)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号/叉头盒O1(PI3K/AKT/FOXO1)通路的影响。方法 实时定量PCR(qPCR)检测HCC细胞的miR-766表达;向SMMC-7721细胞转染miR-766抑制剂来下调其表达,随后采用MTT和流式细胞术检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响,划痕和Transwell小室实验检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响,qPCR或Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(CC3)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)的表达,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-766和FOXO1的靶向关系。结果 MiR-766在HCC细胞中的表达异常增高(P<0.05),下调miR-766明显抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力且促进细胞凋亡(P<0.05)。MiR-766直接靶向调控FOXO1表达,下调miR-766表达能够增加FOXO1和CC3表达,...     

PI3K/Akt/mdm2信号通路活化对胃癌细胞阿霉素敏感性的影响

目的 研究PI3K/Akt/mdm2信号通路活化对胃癌细胞阿霉素(DOX)敏感性的影响.方法 分别用DOX和PI3K特异性抑制剂wortmannin处理胃癌细胞株SGC7901,采用流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡,免疫沉淀法检测PI3K活性,Western blot法检测PI3K-p85、phospho-Akt(S473)、phospho-mdm2(S166)、Akt和p53的表达.结果 DOX能诱导胃癌细胞SGC7901凋亡,且凋亡率与作用时间密切相关,联合应用wortmannin后,可促进胃癌细胞凋亡.DOX作用SGC7901细胞3、6、12和24 h后, PI3K活性逐渐增强,分别为(8.4±1.7)%、(12.7±2.1)%、(17.4±3.2)%和(16.8±2.4)%;同时,还促进Akt、mdm2磷酸化和p53表达.wortmannin可以抑制mdm2磷酸化,进一步增强p53的表达.结论 DOX可以诱导PI3K/Akt通路异常激活,并通过促进mdm2磷酸化降低胃癌细胞化疗敏感性.     

KCNE2对胃癌细胞上皮间质转化和PI3K/AKT信号通路的影响

目的 探讨钾离子通道蛋白家族成员2(KCNE2)在胃癌细胞增殖、迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用及其对磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法 采用GEPIA和UALCAN分析KCNE2在胃癌组织中的表达。收集胃癌肿瘤组织和胃癌细胞系(MKN-1、MKN-28、SGC-7901、MKN-45和MGC-803)用于检测KCNE2表达;采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行生存分析。将MKN-45和MGC-803细胞分为pcDNA3.1组(阴性对照)和pcDNA3.1-KCNE2组(KCNE2过表达),CCK-8、伤口愈合实验和Transwell小室实验评估细胞的增殖、迁移和侵袭情况,qPCR和Western blot检测波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)的表达。结果 KCNE2在胃癌组织中表达下调,与胃癌分期、分级和淋巴结转移有关(P<0.05)。与GES-1细胞相比,KCNE2在胃癌细胞中低表达(P<0.05)。与pcDNA3...     

miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 观察miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞(GSCs)生物学行为的影响,并研究其作用机制.方法 成功从胶质瘤患者病灶组织中分离出GSCs并予以培养、传代及鉴定,分为空白对照组(生理盐水溶液)、miR-182 mimics组(细胞转染miR-182 mimics)及阴性对照组(细...     

lncRNA CASC11通过EZH2调控PI3K/AKT通路促进食管鳞癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的:探讨lncRNA CASC11对EZH2及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号轴的调控作用,及对食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法:取ESCC组织（76例）及癌旁组织（76例）,并体外培养正常食管黏膜上皮细胞（HET-1a）及ESCC细胞系（TE-1、Eca109、KYSE150、KYSE450和KYSE510）,qRT-PCR法检测lncRNA CASC11表达。逐步增加DDP浓度构建DDP耐药ESCC细胞（TE-1/DDP）,并随机分成si-NC组、si-lncRNA-CASC11组、si-lncRNA CASC11+IGF-1组、si-lncRNA CASC11+si-PTEN组,另取正常培养的TE-1细胞为Control组。克隆形成实验、CCK-8、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、耐药性、凋亡、迁移;qRT-PCR及Western Blot法检测lncRNA CASC11及EZH2、PI3K/AKT途径抑制物PTEN、PI3K/AKT通路蛋白、EMT标记蛋白（E-cadherin、N-cadherin）表达;RNA免疫沉淀（RIP）法检测PTEN对EZH2的调控关系;染色质免疫沉淀（ChIP）检测EZH2、PTEN、lncRNA CASC11三者间调控关系。将lncRNA CASC11敲低TE-1/DDP细胞接种于裸鼠皮下并进行DDP干预,检测瘤体体积及瘤体重量,免疫组化分析Ki67活性。结果:lncRNA CASC11在ESCC癌组织、细胞系和TE-1/DDP细胞中的表达均显著升高（P＜0.05）。敲低lncRNA CASC11可抑制TE-1/DDP细胞增殖、迁移及EMT进程,触发细胞凋亡,并抑制细胞耐药及EZH2-PI3K/AKT生存途径的活化（P＜0.05）。裸鼠荷瘤实验证实敲低lncRNA CASC11可增加TE-1细胞对DDP的敏感性（P＜0.05）。EZH2可结合PTEN启动子并降低PTEN表达,而敲低lncRNA CASC11可减少EZH2与PTEN启动子区域的结合。PTEN敲低或给予IGF-1干预,均可部分逆转lncRNA CASC11敲低发挥的抗癌及抗DDP耐药性产生的作用（P＜0.05）。结论:lncRNA CASC11可通过与EZH2相互作用来沉默PTEN,激活PI3K/AKT介导的细胞存活途径,提高ESCC对DDP的耐药性,而敲低lncRNA CASC11可降低癌细胞对DDP的耐药性,增强ESCC对DDP的化疗敏感性。     

MiR-497 decreases cisplatin resistance in ovarian cancer cells by targeting mTOR/P70S6K1

The mechanism of cisplatin resistance in ovarian cancer is not clearly understood. In the present investigation, we found that the expression levels of miR-497 were reduced in chemotherapy-resistant ovarian cancer cells and tumor tissues due to hypermethylation of miR-497 promoter. Low miR-497 expression levels were associated with chemo-resistant phonotype of ovarian cancer. By analyzing the expression levels of miR-497, mTOR and p70S6K1 in a clinical gene-expression array dataset, we found that mTOR and p70S6K1, two proteins correlated to chemotherapy-resistance in multiple types of human cancers, were inversely correlated with miR-497 levels in ovarian cancer tissues. By using an orthotopic ovarian tumor model and a Tet-On inducible miR-497 expression system, our results demonstrated that overexpression of miR-497 sensitizes the resistant ovarian tumor to cisplatin treatment. Therefore, we suggest that miR-497 might be used as a therapeutic supplement to increase ovarian cancer treatment response to cisplatin.     

miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药

目的:探讨miR-429 靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1 细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制。方法：建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting 实验检测miR-429 和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8 法和Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测敲降miR-429 对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP 细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429 与PTEN 的靶向关系,Western blotting 实验进一步检测miR-429 对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用。结果：miR-429 在胰腺癌PANC-1 细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）（P<0.05 或P<0.01）,敲降miR-429 可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.05 或P<0.01）;敲降miR-429 可通过靶向上调PTEN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429 可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性。     

Targeting the PI3K/AKT/mTOR pathway in estrogen receptor-positive breast cancer

Approximately 70−75% of breast cancers express the estrogen receptor (ER), indicating a level of dependence on estrogen for growth. Endocrine therapy is an important class of target-directed therapy that blocks the growth-promoting effects of estrogen via ER. Although endocrine therapy continues to be the cornerstone of effective treatment of ER-positive (ER+) breast cancer, many patients with advanced ER+ breast cancer encounter de novo or acquired resistance and require more aggressive treatment such as chemotherapy. Novel approaches are needed to augment the benefit of existing endocrine therapies by prolonging time to disease progression, preventing or overcoming resistance, and delaying the use of chemotherapy.     

PI3K/AKT/mTOR信号通路介导索拉非尼治疗原发性肝癌耐药机制的研究进展

索拉非尼（sorafenib）作为原发性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）靶向治疗的一线药物已广泛应用于临床,然而部分HCC患者对索拉非尼治疗耐药导致临床疗效欠佳,联合其他靶向药物的临床实验仍未取得突破,故深入研究索拉非尼耐药机制,逆转索拉非尼耐药对于改善肝癌治疗的预后具有重要意义。最新研究发现,PI3K/AKT/mTOR信号通路在索拉非尼耐药机制中起重要作用,本文将从PI3K/AKT/mTOR信号通路促进肿瘤血管生成、参与细胞自噬、抑制肿瘤细胞凋亡并促进其增殖、与RAS/RAF/ERK/MEK信号通路交联及其促进上皮-间质转化等几个方面,概述其在索拉非尼治疗原发性肝癌时产生耐药的机制,为进一步开发治疗原发性肝癌的新型药物提供研究方向。     

过表达miR-141-3p通过靶向下调PTEN并激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌A2780 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-141-3p 通过靶向PTEN并调控PI3K/Akt 通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年4 月至2017 年10 月河南省人民医院妇产科收治的资料完整的28 例卵巢癌患者肿瘤组织和相应的癌旁组织,采用qPCR检测卵巢癌组织和细胞系中miR-141-3p 的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p 和PTEN的靶向关系;过表达或敲降miR-141 及PTEN基因后,采用CCK-8、Transwell 和Annexin V-FITC/PI 双染流式术检测卵巢癌A2780 细胞增殖、侵袭和凋亡水平,WB实验进一步检测miR-141-3p 对PTEN-PI3K/Akt 信号通路的调控作用。结果：miR-141-3p 在卵巢癌组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-141-3p 靶向作用于PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。与对照组相比,敲降miR-141-3p 后A2780 细胞的增殖受到显著抑制（48 h 时,0.36±0.04 vs 0.82±0.06,P<0.05）、侵袭能力明显降低[穿膜细胞数（45.14±7.88）vs（215.32±16.04）个,P<0.01]、细胞凋亡率显著升高[ （9.29±0.65）% vs（1.85±0.26）%,P<0.01]。过表达PTEN显著抑制了A2780 细胞中p-Akt 的表达（均P<0.01）、抑制细胞增殖和侵袭能力（均P<0.01）而明显促进细胞凋亡（均P<0.01）,在过表达PTEN的同时过表达miR-141-3p 或添加IGF-1 后可逆转上述的变化。结论：miR-141-3p 能够促进A2780 细胞增殖、侵袭和诱导凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN并激活PI3K/Akt通路有关。     

miR-103 靶向PTEN并激活PI3K/AKT通路促进肺癌细胞A549 对达沙替尼耐药

[摘要] 目的：探讨miR-103 靶向PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进肺癌细胞对达沙替尼（dasatinib,DASA）耐药的机制。方法：收集2014 年4 月至2018 年1 月昆明医科大学第一附属医院胸外科收治的资料完整的肺癌DASA耐药组织和不耐药组织各35 例。采用qPCR实验检测miR-103 在肺癌DASA耐药组织和细胞中的表达水平,同时,采用CCK-8、Transwell 和Wb实验检测敲降miR-103 对A549/DASA细胞增殖、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-103 与PTEN的靶向关系。进一步采用CCK-8、Transwell 和Wb实验检测miR-103 通过PTEN-PI3K/AKT信号通路对A549/DASA细胞恶性生物学行为的影响。结果：miR-103 在肺癌DASA 耐药组织和A549/DASA 细胞中均高表达（均P<0.01）。敲降miR-103 可显著抑制A549/DASA细胞的增殖、迁移和EMT（P<0.05 或P<0.01）。此外,双荧光素酶报告基因证实miR-103 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。进一步实验显示,过表达miR-103 通过靶向下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路进而显著促进A549/DASA细胞增殖、迁移和EMT（P<0.05 或P<0.01）,从而上调A549/DASA细胞对DASA的耐药性。结论：miR-103/PTEN/PI3K/AKT信号通路与肺癌DASA耐药性存在调控关系,敲降miR-103 可逆转A549/DASA对DASA耐药。     

骨肉瘤外泌体miR-21通过调控PI3K/AKT通路促进骨肉瘤细胞侵袭及血管生成北大核心

目的:探讨骨肉瘤外泌体miR-21对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响以及对血管生成的作用机制。方法:qRT-PCR法检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS、Saos-2和MG-63中miR-21的表达,并确定表达水平高的作为本研究细胞系。通过差速离心提取细胞外泌体,并采用透射电镜和Western blot鉴定该外泌体;通过免疫荧光染色检测外泌体能否进入人血管内皮细胞(human vascular endothelial cells,HUVEC)发挥作用;利用脂质体2000分别转染Control、miR-21-inhibitor以及miR-21-mimic,通过Transwell实验检测外泌体miR-21对U2OS细胞侵袭能力的影响,并进一步采用Western blot检测miR-21对血管相关蛋白VEGF、HIF-1α以及PI3K/AKT通路蛋白的影响。结果:人骨肉瘤细胞系Saos-2、MG-63和U2OS中miR-21均呈高表达。透射电镜观察到,外泌体呈圆形或椭圆形泡状结构,且其特征蛋白CD9、CD63和CD81蛋白在外泌体中较U2OS细胞中表达高。免疫荧光结果显示,U2OS外泌体能成功进入HUVEC细胞中发挥作用。Transwell实验结果表明,外泌体miR-21可以促进骨肉瘤细胞侵袭。Western blot结果表明,与Control组相比,miR-21-mimic组血管生成蛋白VEGF和HIF-1α表达水平显著上升,PI3K/AKT通路蛋白表达水平亦显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:U2OS外泌体miR-21可以促进骨肉瘤细胞侵袭和血管生成,其作用机制可能与miR-21进入细胞激活PI3K/AKT信号通路有关。