协同氟康唑抗耐药白念珠菌化合物的设计合成及活性研究

目的 基于前期研究的胡椒乙胺和咖啡酸类化合物分别具有协同氟康唑(FCZ)抗耐药真菌的作用,将两类化合物结构片段通过适当的连接子连接,设计合成新型化合物,研究其体外抗耐药真菌活性。方法 以胡椒乙胺为起始原料,与叔丁氧羰基保护的氨基酸缩合,随后脱保护基,再与咖啡酸缩合,形成目标化合物。对4个中间体和9个目标化合物进行体外协同FCZ抗耐药白念珠菌作用评价。结果 9个目标化合物均具有协同FCZ(8.0μg/ml)抗耐药白念珠菌活性,MIC₈₀为0.5~2.0μg/ml;其中, 3b、3f、3g、3i等化合物的MIC₈₀均为0.5μg/ml,与对照化合物7b和5相当。结论 将胡椒乙胺和咖啡酸通过4-哌啶甲酸(3b)、缬氨酸(3g)、亮氨酸(3f)、异亮氨酸(3i)连接,可以获得协同FCZ抗耐药真菌的高活性化合物。     

马尾松叶低极性部位的GC-MS分析及协同氟康唑抗耐药白念珠菌活性研究

目的 研究马尾松叶低极性部位的主要化学成分,以及其与氟康唑联用对氟康唑耐药白念珠菌的抗真菌活性.方法 马尾松叶经80％乙醇热提取后,用石油醚萃取得到低极性部位,运用GC-MS法检测其化学成分,所测结果与标准谱库进行比对分析,用峰面积归一法计算各个成分的相对含量.采用棋盘式微量稀释法测试低极性部位协同氟康唑对耐药白念珠菌...     

盐酸小檗碱与氟康唑协同抗耐药白念珠菌的动物实验

目的观察盐酸小檗碱不同剂量与氟康唑协同抗耐药白念珠菌的疗效。方法将90只ICR小鼠随机分为6组,每组15只,分别为真菌感染模型组(简称:空白对照组)、单用盐酸小檗碱(9 mg/kg)治疗组(简称小檗碱组)、氟康唑(0.5 mg/kg)单用治疗组(简称氟康唑组)、盐酸小檗碱(1 mg/kg)+氟康唑(0.5 mg/kg)治疗组(简称合用1组)、盐酸小檗碱(3 mg/kg)+氟康唑(0.5 mg/kg)治疗组(简称合用2组)、盐酸小檗碱(9 mg/kg)+氟康唑(0.5 mg/kg)治疗组(简称合用3组)。在小鼠系统性真菌感染模型建立2 h后各治疗组分别腹腔注射给药0.2 ml/10 g,1次/d,连续给药7 d,肾脏的活菌数检测换算为log10CFU/值。结果单纯小檗碱组平均存活时间3.5 d,肾脏的活菌数为log10CFU/值6.566,与空白对照组3.4 d、活菌数6.462无显著性差异(P>0.05);氟康唑组平均存活时间9.9 d、活菌数为6.566,与小檗碱组有显著性差异(P<0.05);合用1组平均存活时间12.7 d、活菌数为5.723;合用2组平均存活时间16.1 d、活菌数5.645;合用3组平均存活时间18.7 d、活菌数为4.967。两药合用组的存活时间明显延长及活菌数明显低于各单用治疗组(P<0.05或0.01),其中,合用2组和3组与氟康唑单纯治疗组相比有非常显著性差异(P<0.01)。结论盐酸小檗碱与氟康唑合用有协同抗耐药白念珠菌作用,中剂量以上小檗碱合用氟康唑能显著提高耐药白念珠菌的疗效。     

rmuGM-CSF增强巨噬细胞抗白念珠菌活性研究

目的： 研究重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmuGM CSF)对巨噬细胞抗白念珠菌活性的调节作用。方法：分别将浓度为100，200，300，400 U·mL 1的rmuGM CSF与小鼠腹腔巨噬细胞共同培养2～5 d，然后测定巨噬细胞的抗白念珠菌活性。结果： rmuGM CSF可增强巨噬细胞的抗白念珠菌活性，作用呈剂量依赖性，且随着与巨噬细胞共培养时间的延长，增强效应不降低。结论： rmuGM CSF能增强巨噬细胞的抗白念珠菌活性，增强效应强而持久。     

氟康唑抑制白念珠菌粘附的研究

本文观察氟康唑（ｆｌｕｃｏｎａｚｌｏｅ）对口腔粘膜上皮细胞（ＢＥＣ）上白念珠菌（白念）的体外粘附作用及对ＢＥＣ表面蛋白质的影响，结果发现氟康唑系统性治疗能显著地抑制白念菌对ＢＥＣ的粘附，这一现象可能与被治疗者的ＢＥＣ胞膜表面蛋白缺失有关。     

蜂胶成分分析及其体外抗白念珠菌活性研究

目的 分析国产蜂胶中的黄酮类化合物成分,并检测其体外抗白念珠菌活性.方法 萃取蜂胶,对其进行分离、纯化,并通过分析设备鉴定结构,最后利用微量液基稀释法检测,得到黄酮类化合物对白念珠菌的体外抗真菌活性.结果 从国产蜂胶中共分离出11种有机成分,其中4种为黄酮类化合物,分别为短叶松素、杨芽黄素、白杨素及3-乙酰短叶松素,占...     

白念珠菌氟康唑耐药的分子生物学进展

随着白念珠菌临床感染的不断增加，以及以氟康畦为主的畦类抗真菌药物的广泛应用，畦类耐药现象亦随之增多，并成为困扰临床念珠菌感染治疗的难题之一。出现耐药可能的原因包括：①编码药物靶酶羊毛甾醇14α去甲基酶的ERG11基因的过度表达和点突变导致真菌细胞膜上的麦角固醇的生物合成发生异常；②药物外流泵相关的基因有ATP结合盒转运子基因—CDR1、CDR2和主要易化子超家族基因的过度表达导致药物在真菌细胞内有效浓度的减少，氟康畦耐药的发生可能同时出现不同的机制。     

体外诱导白念珠菌对氟康唑耐药性的研究

目的:建立白念珠菌耐氟康唑模型,研究白念珠菌耐药前后相关生物学特性变化。方法:体外用氟康唑诱导敏感白念珠菌SC5314和y01.09成为耐药子代SC5314R和y01.09R,利用微量液基稀释法和小鼠体内实验确定耐药表型,通过生长动力学、菌丝和生物膜形成实验观察生物学特性变化。结果:氟康唑对耐药子代SC5314R和y01.09R的MIC80分别为>128μg/mL,64μg/mL。无药培养35代后,MIC80分别为>128μg/mL,16μg/mL。有/无氟康唑环境下,敏感母本和耐药子代倍增时间无显著差异。氟康唑作用下,SC5314和y01.09菌丝形成受到抑制,SC5314R和y01.09R仍有菌丝形成;SC5314R和y01.09R可以形成牢固生物膜,SC5314和y01.09形成松散生物膜。结论:本实验成功诱导对氟康唑产生高度耐药的白念珠菌菌株,其耐药性通过体内外实验获得证实。     

没食子酸联合氟康唑抗耐药非白念珠菌作用的体外试验

目的：研究没食子酸与氟康唑联用对耐药光滑念珠菌和克柔念珠菌的体外抗真菌活性。方法：采用棋盘微量稀释法测定没食子酸与氟康唑单用及联用对耐药光滑念珠菌和克柔念珠菌的抗真菌作用,以部分抑菌浓度指数（FICI）评价其联用效果;并以CG2、CK8为目标菌株,采用时间-杀菌曲线进行验证;通过测定没食子酸对耐药株生物膜形成早期黏附性的影响,初步探讨药物联合抗真菌耐药的作用。结果：联用时8~16 μg·mL^-1没食子酸能将氟康唑的MIC值降为单用时的1/4~1/8,FICI值为0.375,呈现较好的协同作用,且量效关系呈正相关。时间-杀菌曲线表明,与氟康唑单用相比,没食子酸与氟康唑联用24 h时,CG2、CK8菌株CFU的lg值分别下降了2.1个单位和2.25个单位,均表现为协同作用。另外,研究发现没食子酸对生物膜形成的早期黏附有明显的抑制作用。结论：没食子酸与氟康唑联用对耐药光滑念珠菌和克柔念珠菌的浮游菌表现出体外协同抗真菌作用,且没食子酸能够明显抑制非白色念珠菌生物膜形成的早期黏附。     

Possible mechanisms of the antifungal activity of fluconazole in combination with terbinafine against Candida albicans

Context: Candidiasis is a term describing infections by yeasts from the genus Candida, the majority Candida albicans. Treatment of such infections often requires antifungals such as the azoles, but increased use of these drugs has led to selection of yeasts with increased resistance to these drugs.

Objective: Combination therapy would be one of the best strategies for the treatment of candidiasis due to increased resistance to azoles.

Materials and methods: The antifungal activities of fluconazole and terbinafine were evaluated in vitro alone and in combination using broth microdilution test and time kill study. Eventually the expression level of selected genes involved in ergosterol biosynthesis of Candida was evaluated using semi-quantitative RT-PCR.

Results: The obtained results showed the significant MICs ranging from 0.25 to 8?µg/mL followed by FICs ranged from 0.37 to 1 in combination with fluconazole/terbinafine. Our findings have demonstrated that the combination of fluconazole and terbinafine could also significantly reduce the expression of ERG1, 3, and 11 in the cell membrane of Candida in all concentrations tested ranging from 1.73- to 6.99-fold.

Discussion and conclusion: This study was undertaken with the ultimate goal of finding the probable targets of fluconazole/terbinafine in C. albicans by looking at its effects on cell membrane synthesis.     

氟康唑与硝苯地平/贝尼地平联合抗真菌作用研究

目的：通过联合用药的方式,寻找新的对抗真菌耐药方法。方法：通过微量稀释法和时间-杀菌曲线法分别从静态和动态方面评价硝苯地平和贝尼地平与氟康唑联用抗白色念珠菌的作用。结果：硝苯地平和贝尼地平单用本身无抗真菌作用,当分别与氟康唑联用对抗耐药白色念珠菌时,可将氟康唑的单用浓度从512 μg·mL^-1降低到1 μg·mL^-1,FICI分别为0.019和0.035,表现为强协同作用;而两类药物联用对敏感白色念珠菌表现出无关作用,时间杀菌曲线法进一步证实了结果。结论：硝苯地平和贝尼地平都能消除氟康唑的耐药性,增加氟康唑的抗耐药白色念珠菌作用。     

特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用

目的探讨特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑体外联合抗白念珠菌的作用。方法采用微量液体稀释法测定特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑对生殖器部位分离的36株白念珠菌药敏试验，应用棋盘微量稀释法测定特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑对36株白念珠菌的联合药敏试验。结果白念珠菌菌株对氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬耐药株分别为3株（8．33％）、4株（11．11％）、6株（16．67％）。特比萘芬和氟康唑联用MIC几何平均数较其单独应用均显著降低（t=3．590，P〈0．05；t=3．252，P〈0．05），15株有协同作用（42％），18株有相加作用（50％），3株无关作用（8％）；特比萘芬和伊曲康唑联用后的MIC几何平均数较其单独应用均显著降低（t=3．849，P〈0．001；t=2．409，P〈0．05），表现为协同作用有14株（39％），相加作用的有17株（47％），无关作用的有5株（14％）；均未发现拮抗作用。结论特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用对大部分白念珠菌能产生协同作用和相加作用，提示特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合应用能增强抗白念珠菌的作用。     

In vitro analysis of flufenamic acid activity against Candida albicans biofilms

In a recent high-throughput screen against specific Candida albicans drug targets, several compounds that exhibited non-specific antifungal activity were identified, including the non-steroidal anti-inflammatory drug flufenamic acid (FFA). This study sought to determine the effect of different doses of FFA, alone or in combination with fixed concentrations of the standard antifungal agents amphotericin B (AmB), caspofungin (CAS) or fluconazole (FLU), for the prevention and treatment of C. albicans biofilms. Biofilms were formed in a 96-well microplate followed by evaluation of antifungal activity using the XTT assay. FFA concentrations of ≥512 mg/L demonstrated >80% prevention of biofilm formation. FFA concentrations of 1024 mg/L demonstrated >85% reduction of mature biofilms. When FFA (≥8 mg/L) was used in combination with FLU (32 mg/L), antifungal activity increased to 99% for the prevention of biofilm formation. Similarly, when a FFA concentration of ≥8 mg/L was used in combination with either AmB (0.25 mg/L) or CAS (0.125 mg/L), antifungal activity also increased up to 99% for the prevention of biofilm formation. The inhibitory effect of FFA on C. albicans biofilms has not been reported previously, therefore these findings suggest that FFA in combination with traditional antifungals might be useful for the treatment and prevention of C. albicans biofilms.     

单宁酸联合氟康唑抑制金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜的作用及机制研究

摘要：目的 分析单宁酸联合氟康唑降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜的作用及其机制。方法 收集2019年临床 分离的3株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),分别命名为SA1,SA2和SA3;利用分光光度法检测单宁酸单独或联合氟康唑对 金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185混合菌群生长能力的影响,进一步采用结晶紫染色法测定对混合生物膜形成能力的影响; 扫描电子显微镜观察单宁酸联合氟康唑对混合生物膜结构影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测白念珠菌DAY185生物膜形成 相关基因(ALS1、ALS3和RBT1)和SA1生物膜形成相关基因(icaA、sarA和cidA)的表达量变化。结果 单宁酸可以降低金黄色葡萄 球菌与白念珠菌混合菌群的生长能力和混合生物膜形成能力,当联合氟康唑时抑制作用更加明显;扫描电子显微镜显示单宁酸 联合氟康唑可以明显减少金黄色葡萄球菌在白念珠菌菌丝上的黏附;qRT-PCR结果表明：单宁酸联合氟康唑主要可以降低混合 生物膜中白念珠菌ALS3基因(P＜0.05)和金黄色葡萄球菌icaA和sarA基因(P＜0.05)的表达量。结论 单宁酸联合氟康唑可以降低 金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜的形成,其机制主要通过降低白念珠菌菌丝形成相关基因ALS3和金黄色葡萄球菌黏附相 关基因icaA和sarA的表达水平。     

Antifungal activity of ribavirin used alone or in combination with fluconazole against Candida albicans is mediated by reduced virulence

The incidence of fungal infections has increased continuously in recent years, and drug resistance, especially resistance to fluconazole (FLC), has emerged. To overcome this challenge, research on the antifungal activities of non-antifungal agents has gained more attention. In this study, we determined the anti-Candida activity of ribavirin (RBV), an antiviral drug commonly used in the clinic, and found that RBV displayed potent antifungal activity when used alone or in combination with FLC in vitro and in vivo. In vitro, the MIC₈₀ values of RBV were 2–4 µg/mL for FLC-susceptible Candida albicans and 8 µg/mL for FLC-resistant C. albicans. When RBV at a dose of 1 µg/mL was combined with FLC, significant synergistic effects were exhibited against FLC-resistant C. albicans, and the MICs of FLC decreased from >512 µg/mL to 0.25–1 µg/mL. Synergism was also exhibited against C. albicans biofilms. In vivo, RBV plus FLC significantly improved the survival of infected Galleria mellonella larvae compared with the FLC-treated group over a 4-day period and attenuated the damage of FLC-resistant C. albicans to G. mellonella larvae tissue. Furthermore, mechanistic studies indicated that the antifungal effects of RBV used alone or in combination with FLC might be associated with inhibition of biofilm formation, reduced extracellular phospholipase activity and inhibition of hyphal growth, but is not related to promotion of FLC uptake and inhibition of FLC efflux. These results provide a promising direction for overcoming drug resistance and for expanding the clinical application of existing drugs.     

氨基丁酸联合卡泊芬净的体外抗白色假丝酵母菌协同作用研究

目的探讨氨基丁酸联合卡泊芬净体外抗白色假丝酵母菌的协同作用。方法采用CLSI公布的M27-A方案微量棋盘液基稀释法测定氨基丁酸单用以及联合卡泊芬净对白色假丝酵母菌标准株SC5314的MIC80值和FICI值。采用抗真菌试管敏感性实验,考察给药24h后,卡泊芬净单用以及氨基丁酸联合卡泊芬净对白色假丝酵母菌SC5314生长的影响。采用生长曲线实验,测定氨基丁酸联合卡泊芬净抗白色假丝酵母菌SC5314的生长曲线。结果氨基丁酸单用对白色假丝酵母菌SC5314的MIC80>20μmol·L-1,说明氨基丁酸单用对SC5314没有抑菌作用;但1.25μmol·L-1氨基丁酸与卡泊芬净合用的FICI<0.5,说明氨基丁酸与卡泊芬净合用表现出协同关系。另外,在抗真菌试管敏感性实验中,1.25μmol·L-1的氨基丁酸联合0.012 5μg·mL-1的卡泊芬净与0.012 5μg·mL-1的卡泊芬净单用组相比,可以直观地观察到试管内浑浊程度明显减弱,SC5314的生长受到抑制。在生长曲线实验中,1.25μmol·L-1氨基丁酸联合0.012 5μg·mL-1卡泊芬净的生长曲线显著低于同浓度下两药单用的生长曲线(P<0.05)。结论氨基丁酸本身对白色假丝酵母菌标准株SC5314没有抑菌作用,但氨基丁酸能显著增强卡泊芬净对白色假丝酵母菌SC5314的杀菌作用。