下调microRNA-1对H2O2诱导的心肌细胞损伤的保护作用

【摘要】目的? ?研究下调microRNA-1在H2O2诱导的心肌细胞损伤中的保护作用及其机制。方法? ?将大鼠H9c2心肌细胞株分为4组,Blank组、NC组、H2O2组和H2O2+AS-miR-1组。Blank组为不做任何处理的空白对照组,NC组细胞转染随机合成的miRNA阴性对照片;H2O2组和H2O2+AS-miR-1组分别为不转染或转染miR-1 inhibitor（AS-miR-1）的H2O2细胞损伤组。采用定量PCR方法检测各组miR-1表达水平,MTT和流式细胞术检测细胞存活率和凋亡情况,利用生物信息学预测miR-1的靶基因,荧光定量PCR和Western Blot的方法检测靶基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。结果? ?Blank组和NC组相比较,各个指标均没有统计学差异。H2O2组细胞的miR-1mRNA表达水平显著升高,存活率降低,凋亡增加,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。转染AS-miR-1,可以降低H2O2诱导的心肌细胞损伤,提高细胞存活率、降低细胞凋亡,上升Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。 结论? ?下调miR-1表达可以通过升高凋亡抑制因子Bcl-2的表达水平降低H2O2诱导的心肌细胞凋亡,发挥心肌细胞保护作用。      

下调miR-106a-5p对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及JAK1/STAT3通路的影响

目的 探讨下调miR-106a-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞损伤及Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的影响。方法 不同浓度梯度H₂O₂(0、50、100、200、400μmol/L)处理大鼠心肌细胞H9c2。H9c2细胞分为对照组、H₂O₂组(100μmol/L H₂O₂)、miR-106a-5p NC组(100μmol/L H₂O₂+转染miR-106a-5p NC)和miR-106a-5p siRNA组(100μmol/L H₂O₂+转染miR-106a-5p siRNA)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-106a-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及...     

番石榴叶总黄酮对糖尿病大鼠肾脏Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的 探讨番石榴叶总黄酮（TFPGL）对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及机制探讨。方法 雄性SD大 鼠24只,按随机数字表法分成对照组、糖尿病组、TFPGL治疗组,每组8只,后2组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素 （55 mg/kg）诱导糖尿病模型,TFPGL治疗组加用200 mg/kg TFPGL灌胃。12周后收集血、尿及肾组织,检测血糖（BS）、 血尿素氮（BUN）、尿蛋白/尿肌酐比值（ACR）及血清肌酐（SCr）的变化,HE染色检测肾脏病理改变,免疫荧光、免疫组 织化学染色及Western blot检测肾脏核因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）表达。结果 与对照 组相比,糖尿病组BS、BUN、ACR及SCr明显升高,Nrf2表达增加,HO-1表达下降（均P＜0.05）;而给予TFPGL治疗 后,BS、BUN、ACR及SCr较糖尿病组明显降低,Nrf2、HO-1表达明显增加（均P＜0.05）。结论 TFPGL对糖尿病大鼠 肾脏病变具有一定的治疗效果,其机制可能与降低血糖和激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

褪黑素对帕金森病大鼠Nrf2/HO-1通路及小胶质细胞活化的影响

目的 探讨褪黑素对帕金森病大鼠转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）的调控作用及其对小胶质细胞活化的影响。方法 取SD大鼠72只,按照随机数字表法分为对照组、模型组、褪黑素（5 mg/kg）组、Nrf2抑制剂全反式维甲酸（ATRA,7 mg/kg）组、Nrf2抑制剂阴性对照（Nrf2-NC）（植物油,10 mL/kg）组、褪黑素＋ATRA（5 mg/kg＋7 mg/kg）组,每组12只。除对照组外,其余各组大鼠通过脑黑质区内注射6-羟多巴胺（6-OHDA）建立帕金森病模型。造模成功后各组开始给药,模型组和对照组ip等量生理盐水,各组连续给药8周,2次/d。末次给药后对大鼠进行行为学评分;免疫组化法检测黑质部多巴胺能神经元及小胶质细胞活化阳性染色细胞数目;免疫荧光共定位检测Nrf2、活化小胶质细胞（IBA1标记）重合表达的细胞数目;酶联免疫吸附法（ELISA）检测黑质部代谢产物α-突触核蛋白（α-Syn）和β淀粉样蛋白（Aβ）。采用Western blotting检测黑质部Nrf2、HO-1、肿瘤坏死因子（TNF-α）、环氧化酶2（COX-2）、小胶质细胞活化特异性标记物（OX-42）蛋白相对表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现单侧或双侧后肢部分瘫痪及行走、进食困难现象,行为学评分显著升高（P<0.05）。与模型组相比,褪黑素组大鼠出现行走时转圈,很少有瘫痪及行走困难症状,且行为评分降低（P<0.05）。ATRA组大鼠单侧或双侧后肢部分瘫痪大鼠例数增多,行为学评分最高（P<0.05）。与对照组相比,模型组大鼠黑质区Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、小胶质细胞活化数目、α-Syn和Aβ水平及HO-1、OX-42、TNF-α、COX-2水平和细胞核中Nrf2表达水平升高（P<0.05）,多巴胺能神经元数目减少。与模型组相比,褪黑素组大鼠黑质Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、多巴胺能神经元阳性染色数目、HO-1及细胞核中Nrf2表达升高（P<0.05）,小胶质细胞活化数目、α-Syn及Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表达降低（P<0.05）;ATRA组黑质区Nrf2与IBA1重合表达细胞数目、多巴胺能神经元数目、HO-1水平及细胞核中Nrf2水平降低（P<0.05）,小胶质细胞活化数目、α-Syn和Aβ水平、TNF-α、COX-2、OX-42表达水平进一步升高（P<0.05）。褪黑素＋ATRA组大鼠上述指标变化与褪黑素组相反（P<0.05）。褪黑素＋ATRA组及Nrf2-NC组上述指标与模型组相比差异无统计学意义。结论 褪黑素可能通过激活Nrf2/HO-1通路,抑制炎症反应及小胶质细胞活化,减少帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元丢失。     

木香乙醇提取物对高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制

目的 观察木香乙醇提取物(ESL)对高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及相关机制。方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为空白组、模型组(25 mmol·L^-1葡萄糖)、不同浓度ESL组(25、50、100、200μg·m L-1 ESL)。ESL预处理2 h后,模型组与ESL组均经葡萄糖诱导24 h,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β及细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管细胞黏附分子(VCAM)-1、E选择素(E-selectin)含量。通过单核细胞黏附实验观察HUVEC与人髓系白血病单核细胞(THP-1)黏附情况。采用小干扰RNA(siRNA)转染技术沉默细胞中的血红素加氧酶(HO)-1基因后观察ESL抗炎作用的变化。Western blot法检测细胞中HO-1、NF-E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达。结果 与空白组相比,模型组细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1和E-selectin含量均显著升高(P <0.05)。与模型组相比,不同浓度ESL组TNF-α、IL-6、IL-...     

褪黑素激活Nrf2和HO-1对锰诱导纹状体氧化应激的影响

目的探讨Nrf2和HO-1在锰所致纹状体氧化应激中的作用及褪黑素(MT)对其的影响。方法小鼠82只,均分为6组,分别为对照组、低MnCl2组、中MnCl2组、高MnCl2组、MT对照组和MT+高MnCl2组。第5、6组提前皮下注射(sc)给予5 mg/kg MT,2 h后,第2、3、4和6组分别腹腔注射给予12.5、25、50和50 mg/kg MnCl2,连续2周。用流式细胞仪测定细胞内ROS,比色法检测GSH和MDA含量,免疫组化法检测Nrf2和HO-1表达,Western blotting检测Nrf2和HO-1的蛋白水平。结果与对照组相比,在各MnCl2组中ROS含量、MDA含量、Nrf2和HO-1的阳性表达及其蛋白水平均增加,GSH含量下降。而MT对照组中仅Nrf2和HO-1表达及蛋白水平均明显增加。与高MnCl2组相比,在MT+高MnCl2组ROS和MDA含量均明显下降,GSH含量、Nrf2和HO-1阳性表达及蛋白水平明显增加。结论褪黑素可拮抗锰所致的小鼠纹状体氧化应激,其机制可能与Nrf2和HO-1有关。     

分泌型丛生蛋白通过抑制线粒体自噬缓解H2O2诱导的心肌细胞损伤 #br#

目的 探讨分泌型丛生蛋白（sCLU）对心肌细胞氧化损伤的影响及其机制。方法 采用大鼠心肌细胞 H9C2。实验1分为Control组（仅更换培养基）和H2O2组（100 µmol/L H2O2处理）。实验2分为Control组、pcDNA3.1组 （转染 pcDNA3.1 对照空质粒）、pcDNA3.1-sCLU 组（转染 pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒）、H2O2组（100 µmol/L H2O2处 理）、H2O2+pcDNA3.1 组（pcDNA3.1 对照空质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组 （pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）。实验 3 分为 DMSO 组（加入 1% 体积分数 的 DMSO）、Mdivi-1 组（10 µmol/L 的 Mdivi-1 处理）、H2O2+DMSO 组（加入 1% 体积分数的 DMSO 处理 30 min 后加入 100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+Mdivi-1组（10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min后加入100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+ pcDNA3.1-sCLU 组（pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1组（pcDNA3.1-sCLU过表达质粒转染48 h后加入10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min,再加入100 µmol/L H2O2 处理）。采用MTT法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二 醛（MDA）水平。DFCH-DA荧光探针测定细胞活性氧（ROS）水平。实时定量聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验 检测细胞中sCLU表达,Western blot法检测CLU、PINK1、Parkin和LC3蛋白表达水平。结果 （1）实验1。与Control 组比较,H2O2组细胞中sCLU mRNA、细胞培养上清中sCLU蛋白及细胞中CLU蛋白相对表达水平均降低（P＜0.01）。 （2）实验2。与Control组比较,H2O2组细胞活力、SOD水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均降低,细胞凋亡率、ROS水平、MDA 水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均升高（P＜0.05）;与H2O2组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU组细胞活力、SOD水平、 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均升高,细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均降低（P＜0.05）。（3） 实验3。与DMSO组比较,Mdivi-1组细胞活力与细胞凋亡率差异无统计学意义;H2O2+DMSO组细胞活力下降,细胞 凋亡率升高（P＜0.05）。与H2O2+DMSO组比较,H2O2+Mdivi-1组、H2O2+pcDNA3.1-sCLU组和H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1 组细胞活力均升高,细胞凋亡率均下降（P＜0.05）。与 H2O2+Mdivi-1 组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组和 H 2O2+pcDNA3.1-sCLU+Mdivi-1组细胞活力差异无统计学意义,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。结论 sCLU对氧化应 激条下的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与线粒体自噬的抑制有关。     

柴胡皂苷d对H2O2诱导的肝细胞损伤的保护作用及其机制

目的 探讨柴胡皂苷d(SSd)对H2O2诱导L02细胞保护作用及机制.方法 ①L02细胞分别用SSd 0.5,1和2μmol·L-1预处理6 h,加H2O2800μmol·L-1处理24 h,同时设细胞对照和H2O2800μmol·L-1(模型)组;MTT法检测细胞存活率,生化检测法检测细胞上清液中谷草转氨酶(GOT)...     

α-硫辛酸对帕金森病大鼠脑内黑质多巴胺能神经元保护机制研究

目的 探讨α-硫辛酸(LA)对帕金森病(PD)大鼠模型脑内黑质多巴胺能神经元的保护机制.方法 60只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、实验组和药物干预组,每组20只.对照组大鼠给予背部皮下注射葵花油,实验组和药物干预组背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型,药物干预组大鼠同时给予LA腹腔注射;采用Western blot检测大鼠中脑多巴胺能神经元中酪氨酸羟化酶(TH)、转录因子NF-E2相关因子-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)和血红素氧合酶1(HO-1)的表达变化;采用分光光度法检测大鼠脑内纹状体中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化.结果 实验组大鼠中脑TH蛋白表达比对照组明显降低(P<0.05);药物干预组中脑TH蛋白在黑质比鱼藤酮组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显减少(P<0.05).实验组大鼠Nrf2和HO-1蛋白表达比对照组明显降低(P<0.05);药物干预组Nrf2和HO-1蛋白表达比实验组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显降低(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠纹状体组织中脂质代谢产物MDA含量明显增加(P<0.01),药物干预后纹状体中MDA含量明显减少(P<0.05),但较对照组仍明显增高(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠GSH的含量明显减少(P<0.01),药物干预后GSH明显增加(P<0.05),但较对照组仍显著降低(P<0.05).结论 LA能激活Nrf2-ARE信号通路对PD大鼠模型中脑多巴胺能神经元起到有效的神经保护作用,改善PD样症状.     

粪菌移植对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠Keap1-Nrf2/ARE信号通路的影响

目的　探索Keap1-Nrf2/ARE信号通路在粪菌移植（FMT）干预内毒素诱导的大鼠急性肺损伤（ALI）中的作用。方法　将15只健康成年雄性SD大鼠根据随机数字表法分为对照组（NS组）、模型组（LPS组）、干预组（FMT组）,每组5只。LPS组和FMT组通过腹腔注射脂多糖（LPS,5 mg/kg）制备大鼠ALI模型,NS组注射等体积生理盐水,ALI模型完成24 h后,FMT组给予自制粪菌液灌胃（10 mL/kg,2次/d,连续2 d）,NS组和LPS组灌胃等体积生理盐水。FMT干预结束24 h后收集各组腹主动脉血、肺组织及新鲜粪便标本,检测动脉血氧分压［p（O）2］、肺湿/干质量比（W/D）,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、蛋白质羰基（PCO）水平,粪便进行肠道菌群测序,HE染色观察肺组织形态学变化并进行肺损伤病理学评分,免疫组化检测肺组织中核因子E2相关因子（Nrf2）的表达,蛋白免疫印迹法检测血红素氧合酶-1（HO-1）和Nrf2蛋白表达。结果　LPS组大鼠肺W/D、肺损伤病理评分高于NS组,而p（O）2低于NS组;LPS组血清中SOD含量低于NS组,血清中MDA、PCO含量及肺组织中Nrf2、HO-1蛋白表达均高于NS组（均P＜0.05）。与LPS组相比,FMT组大鼠肺W/D、病理学评分降低,p（O）2升高;血清中SOD水平增高,MDA、PCO水平降低;Nrf2、HO-1蛋白在肺组织中的表达均进一步增加（均P＜0.05）。LPS组肠道菌群Beta多样性与NS组及FMT组相比显示出差异性,其乳酸杆菌科和消化链球菌科减少,紫单胞菌科明显增多。FMT组肠道菌群Alpha多样性及Beta多样性均与NS组相似。结论　FMT可能通过调节肠道菌群影响Keap1-Nrf2/ARE信号通路,增强抗氧化应激反应,减少氧化损伤相关产物的产生,从而改善LPS诱导的大鼠ALI。     

黄芪多糖保护去卵巢大鼠成骨细胞功能活性的机制研究

目的　探讨黄芪多糖对去卵巢大鼠成骨细胞功能活性和核因子E2相关因子（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）/醌氧化还原酶1（NQO1）通路的影响。方法　双侧卵巢切除法构建骨质疏松大鼠模型并分为模型组、雌二醇（0.1 mg/kg）组、黄芪多糖组（20 mg/kg）、黄芪多糖（20 mg/kg）+全反式维甲酸（ARTA,7 mg/kg）组,另选健康大鼠作为假手术组（生理盐水灌胃）,每组15只,干预8周。采用X线小动物骨密度仪检测大鼠胫骨骨密度、骨矿量,三点弯曲法测定生物力学性质;分离各组大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）并诱导成骨细胞分化,MTT法检测成骨细胞活性,Bradford法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,邻甲酚酞络合酮法测定钙沉积量,酶联免疫吸附试验检测骨成型蛋白2（BMP2）、骨钙素（BGP）、骨保护素（OPG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平,Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1表达。结果　与假手术组相比,模型组骨密度、骨矿量、最大载量、断裂能、成骨细胞活性、ALP活性、钙沉积量和BMP2、BGP、OPG、SOD、Nrf2、HO-1、NQO1水平降低,MDA水平升高（P＜0.05）;与模型组比较,雌二醇组、黄芪多糖组大鼠骨密度、骨矿量、最大载量、断裂能、成骨细胞活性、ALP活性、钙沉积量及BMP2、BGP、OPG、SOD、Nrf2、HO-1、NQO1水平均升高,MDA水平降低（P＜0.05）,而与黄芪多糖组比较,黄芪多糖+ARTA组大鼠上述指标变化趋势相反（P＜0.05）。结论　黄芪多糖可改善去卵巢大鼠成骨细胞功能,机制可能与激活Nrf2/HO-1/NQO1通路有关。     

广西眼镜蛇毒蛋白Natrin对H_2O_2所致大鼠心肌细胞钙超载的影响

目的观察广西眼镜蛇毒蛋白Natrin对H2O2诱导的原代培养大鼠乳鼠心肌细胞内钙超载的拮抗作用。方法采取SD大鼠乳鼠心肌细胞原代培养,将心肌细胞分正常对照组:不加任何处理;钙超载模型组:检测时加入终浓度为0.3 mmol.L-1的H2O2;药物处理组:预先分别给以不同剂量的Natrin孵育24 h,检测时加入终浓度为0.3 mmol.L-1的H2O2。以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,动态检测细胞内[Ca2+]i变化。结果动态监测15 min发现,与正常对照组比较,模型组细胞内平均荧光峰值增加49.37%,高于正常对照组(P<0.01)。而高、中、低药物浓度组平均峰荧光值比正常对照组分别增加27.52%、12.71%、5.15%。与模型组比较,药物组细胞内平均峰荧光强度值均降低(P<0.01)。结论广西眼镜蛇毒蛋白Natrin对心肌细胞钙离子通道有较好的阻断作用,能减轻H2O2诱导的心肌细胞内[Ca2+]i超载,且药物组随着药物浓度的逐渐升高,细胞内钙荧光强度逐渐下降,并呈现剂量依赖性。     

巴曲酶对缺血性眩晕大鼠及其脑组织Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的 探讨巴曲酶对缺血性眩晕大鼠眩晕症状、抗氧化指标、炎症因子、血液流变学指标及脑组织NF-E2-相关因子2/血红素氧合酶1(Nrf2/HO-1)信号通路的影响.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、巴曲酶组(尾iv 1 BU/kg)、NRF2抑制剂(ML385)组(ip 30 mg/kg)、巴曲酶+ML385...     

血红素氧合酶-1对脂多糖诱导的急性心肌细胞损伤细胞内钙离子浓度的影响

目的研究HO-1对脂多糖刺激的心肌细胞内钙离子含量的影响。方法差速贴壁法培养乳鼠心肌细胞,分为对照组（C）,脂多糖LPS组（L）,LPS＋Hemin组（L＋H）,LPS＋ZnPP组（L＋Zn）,分别诱导或阻断HO-1的合成,并检测心肌细胞内钙离子含量。结果 LPS诱导心肌细胞钙离子含量升高,Hemin增加HO-1水平,降低细胞内钙离子水平,ZnPP降低HO-1水平,细胞内钙离子浓度进一步增加。结论 LPS刺激使心肌细胞内钙离子含量明显升高,HO-1可降低细胞内钙超载。     

血红素加氧酶-1在脑缺血/再灌注损伤中的作用研究

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)表达和活性变化在脑缺血/再灌注(I/R)致脑损伤中的作用。方法♂小鼠随机分为4组,每组30只。以40g.L-1水合氯醛400mg.kg-1ip麻醉,从颈总静脉抽取并回输约40%总血量加双侧颈总动脉夹闭20min,建立脑I/R损伤模型。3组小鼠于建模前16h分别予以脑室内注射150μmol.L-1氯化正铁血红素(Hemin)、150μmol.L-1锌原卟啉Ⅸ(ZnPPIX)或人工脑脊液(ACSF)3μl/只。假手术组仅麻醉并分离暴露双侧颈总动脉和右侧颈总静脉20min。采用Westernblot法检测海马HO-1蛋白表达;分光光度计法检测海马HO活性和脑黄嘌呤氧化酶(XO)活性及丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;TUNEL法检测海马细胞凋亡。结果Hemin组海马HO-1表达明显增强,HO活性升高,脑XO活性、MDA和ROS含量降低,海马神经元凋亡减少(vsACSF,P<0.05);ZnPPIX组海马HO-1表达无变化(vsACSF,P>0.05),HO活性降低,脑XO活性升高伴脑MDA、ROS含量增加及海马神经元凋亡增多(vsACSF,P<0.05)。结论HO-1表达升高对脑I/R致脑损伤具有保护作用,其作用机制与抗脂质过氧化和清除自由基有关。