紫杉醇对肺腺癌细胞侵袭能力抑制作用的研究

目的 :探讨纤连蛋白 (fibronectin ,FN )对非小细胞肺癌的粘附和迁移能力的影响及紫杉醇的干预效果。方法 :以肺腺癌细胞系A5 49为研究对象 ,先观察FN对癌细胞增殖活性的影响及不同浓度紫杉醇的抑制作用。其次 ,在FN包被的培养板和FN滤膜的Boyden浸润小室等体外侵袭模型中 ,检测紫杉醇预处理细胞与FN粘附及迁移能力的变化。设立牛血清清蛋白作为对照组。结果 :FN明显提高肺癌细胞活性 ,紫杉醇 6nmol·L- 112nmol·L- 1和 2 4nmol·L- 1均能有效抑制这种活性的升高。此外 ,肺癌细胞在FN培养板粘附数及小室中穿膜数远高于对照组 ,而各浓度紫杉醇预处理细胞的粘附及迁移能力明显下降。结论 :FN能促进肺腺癌细胞的增殖活性、粘附和迁移能力。这些作用可被紫杉醇 6～ 2 4nmol·L- 1有效阻断。     

川楝素通过调控CDCA5表达对肺腺癌细胞体内外生长的抑制作用

目的 研究川楝素通过调控细胞分裂与周期相关蛋白5(CDCA5)的表达对肺腺癌细胞体内外生长的抑制作用。方法 用TCGA数据库分析CDCA5在不同肺组织中的表达情况;用蛋白质印迹法检测BEAS-2B细胞和A549细胞中CDCA5表达水平;用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测不同浓度川楝素对A549细胞的存活率的影响。将A549细胞随机分为4组,对照组为正常细胞正常培养;川楝素组为正常细胞加入40μmol·L^-1川楝素培养;川楝素+pcDNA组和川楝素+CDCA5组分别在转染pcDNA空载体和CDCA5过表达载体后,加入40μmol·L^-1川楝素培养。培养48 h后,用CCK-8和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况,以蛋白质印迹法检测各组细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。将BALB/c裸鼠随机分组并构建sh-NC和sh-CDCA5稳转细胞株与裸鼠移植瘤模型,每日分别腹腔注射0.9%NaCl和40μmol·L^-1的川楝素溶液,观察并记录肿瘤组织体积、体质量变化。结果 CCK-8结果显示：A549细胞经10、20、30、4...     

β-arrestin2基因转染对人肺腺癌细胞 A549的增殖影响

目的：观察外源性β-arrestin2基因对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3 c．1-β-arrestin2质粒和空载体pcDNA3．1质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,RT-PCR和Western blotting检测β-arrestin2基因表达的影响。采用MTT（四甲基偶氮唑盐）法分析转染细胞的增殖情况。结果经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达β-arrestin2基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较,转染β-arrestin2基因的细胞生长速度明显减慢（ P ＜0．05）。结论β-arrestin2基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。     

E盒结合锌指蛋白 2促进肺腺癌细胞 A549迁移的作用研究

目的 研究转录因子E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-bindingprotein,ZEB2)在肺癌组织中的表达及促进结肺癌细胞A549迁移的作用.方法 研究起止时间为2018年3月至2019年5月.采用免疫组化法检测肺癌组织及癌旁组织中ZEB2蛋白的表达情况;Transwell法检测干扰或过表达ZEB2对A549细胞迁移作用的影响;RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ZEB1对A549细胞中转移相关分子-E钙黏素(E-cadherin)表达的影响.结果 与对照组相比,干扰ZEB2表达可抑制A549细胞的迁移能力,对照组穿过Transwell小室的细胞数量为(37.6±8.1)个,干扰ZEB2组为(12.3±3.2)个;相反,过表达ZEB2可促进A549细胞的迁移能力,对照组为(48.3±4.2)个,过表达ZEB2组为(129.6±12.1)个;干扰ZEB2可促进E-cadherin基因和蛋白的表达,过表达ZEB2则可抑制E-cadherin基因和蛋白的表达;ZEB2在肺癌组织中的表达明显高于在癌旁组织中的表达.结论 ZEB2在肺癌组织中高表达并可促进肺腺癌细胞迁移能力.     

肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1(TPT1-AS1)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和作用机制。方法收集于 2017年1月至 2018年12月在信阳市中心医院心胸外科行手术治疗的 46例肺癌组织和对应的癌旁组织,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测组织中 TPT1-AS1和微小 RNA-671-5p(miR-671-5p)表达, Pearson相关性分析肺癌组织中 TPT1-AS1和miR671-5p表达的相关性。同时,于2019年5月至 2020年4月期间,通过体外培养肺癌细胞 A549,双荧光素酶报告基因实验验证了细胞中 TPT1-AS1和 miR-671-5p调控关系。另将 A549细胞分为对照组、小干扰 RNA阴性序列(si-NC)组、 TPT1-AS1小干扰 RNA(si-TPT1AS1)组、 si-TPT1-AS1+抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)组和 si-TPT1-AS1+miR-671-5p抑制剂(anti-miR-671-5p)组,甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹实验检测细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)基质金属蛋白酶(MMP)-2和 MMP-9蛋白表达。结果肺癌组织中 TPT1-AS1表达量较癌旁组织显著升高［(1.88±0.12)(1.01±0.08)、P<0.05］,miR-671-5p表达量较癌旁组织显著降低［(0.45±0.04)(1.01±0.06)P<0.05］。Pearson相关性分析显示,肺癌组比织中TPT1-A,S1和 miR-671-5p呈负相(r= 0.63,P<0.05)。TPT1-AS1在A5比49细胞中负调,控 miR-671-5p表达。 si-TPT1-AS1组 A549细胞存活率、迁移数和侵袭数分别为(关53.24±2.81)%、(63.11±6.51)个和( 33.78±3.23)个,均低于 si-NC组［分别为( 98.78±2.57)%、(147.44±11.08)个和(101.67±9.95)个,均P<0.05］。CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白在 si-TPT1-AS1组的表达量分别为(0.43±0.05)(0.21±0.03)(0.43±0.04),较si-NC组均降低［分别为(0.86±0.04)(0.55±0.05)(0.48±0.07)均P<0.05］。si-TPT1-AS1+anti-miR-671-、5p组A549细、胞存活率、迁移数和侵袭数及 CyclinD1、MMP-2和M、MP-9蛋白表、达分别为(8,5.43±2.94)%、(125.78±10.59)个、(88.78±7.19)个、(0.75±0.03)、(0.48±0.03)、(0.43±0.04),较 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组均升高［分别为(54.36±2.95)%、(63.78±6.48)个、(33.56±3.54)个、(0.41±0.03)、(0.22±0.03)、(0.21±0.04),均P<0.05］。对照组与 si-NC组、 si-TPT1-AS1组与 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组各检测指标比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中 TPT1-AS1表达升高, miR-671-5p表达降低,且两者呈负相关。 TPT1-AS1可能通过靶向下调 miR-671-5p的表达促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA BCYRN1对肺腺癌细胞生物学行为的影响

摘要：目的　探究长链非编码RNA（lncRNA）脑胞质RNA1（BCYRN1）在肺腺癌细胞中的表达及对细胞周期、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。分析BCYRN1表达与肺腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法　分别培养正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺腺癌细胞A549、H1299,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测BCYRN1在正常细胞和肺腺癌细胞中的表达水平;分别将BCYRN1敲低及对照质粒转染入H1299肺腺癌细胞,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化;通过划痕实验、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结合癌症基因组图谱（TCGA）数据库,分析BCYRN1表达与肺腺癌患者临床病理特征的相关性。利用癌症阵列的lncRNA（lnCAR）数据库中lncRNAs表达数据,采用Cox回归分析BCYRN1表达与患者预后的关系。结果　BCYRN1在肺腺癌细胞中的表达水平显著高于肺正常上皮细胞（P＜0.05）;流式细胞分析提示BCYRN1敲低组的细胞出现S期阻滞,细胞凋亡率增加;划痕实验和Transwell实验显示BCYRN1敲低组H1299细胞侵袭和迁移能力减弱。生物信息学分析显示BCYRN1的表达与患者的N分期和肿瘤分期相关（P＜0.05）,BCYRN1高表达患者总生存期显著缩短。结论　LncRNA BCYRN1在肺腺癌细胞中高表达,下调BCYRN1可抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移能力,并使细胞周期发生阻滞。其高表达与肺腺癌患者N分期和肿瘤分期相关,BCYRN1高表达患者预后较差。     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对老年肺源性心脏病患者血浆白细胞介素-6、肿瘤坏死因子α的影响

目的 探究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对老年肺源性心脏病患者血浆白细胞介素6、肿瘤坏死因子α的影响。 方法 选取我院于2013年1月至2015年1月收治的88例老年肺源性心脏病患者作为此次的研究对象,按照随机数表法随机分为观察组和对照组,再选择同期的健康者40名组成正常组。对照组接受常规治疗,观察组在对照组基础上给予丹参酮ⅡA磺酸钠注射液,治疗12周后观察并记录两组临床疗效、心肺功能、血浆白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）等指标的变化及相关反应情况。 结果 观察组治疗前、对照组及正常组血浆IL-6[(108.23±30.34)ng/L、（106.63±30.12）ng/L、（74.21±31.02）ng/L];TNF-α浓度[（19.23±10.79）ng/L、（18.24±11.56）ng/L、（14.82±4.35）ng/L]及PAP[（58.23±8.79）mmHg、（56.06±8.46）mmHg、（15.77±7.00）mmHg]比较均有统计学差异（F值分别为66.24、15.53、88.74,P均为0.000）,且观察组、对照组均高于正常组（P<0.01）;观察组在治疗12周后血浆IL-6[（74.23±27.12）ng/L与（103±28.02）ng/L]、TNF-α浓度[（14.87±5.29）ng/L与（17.22±7.26）ng/L]及PAP[（45.91±5.67）mmHg与（54.11±9.28）mmHg]较对照组治疗12周后明显下降（P值分别为0.025、0.044、0.032）。 结论 丹参酮ⅡA磺酸钠注射液降低老年肺源性心脏病患者血浆IL-6、TNF-α浓度及PAP,能够改善患者心肺功能。     

COPD患者m6A甲基化酶水平观察及FTO对PM2. 5刺激后MH-S细胞极化和NF-κB信号活化的影响

目的 观察COPD患者体内N6-甲基腺苷(m6A)甲基化酶水平,并探讨肥胖相关蛋白(FTO)对细颗粒物2. 5(PM2. 5)刺激后小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)的极化及核因子κB(NF-κB)信号活化的影响.方法 收集COPD患者的支气管肺泡灌洗液标本.使用m6A dot blot检测两组mRNA的 m6A变化.体外培...     

重组人白细胞介素-11对肺腺癌A549 细胞增殖、 迁移和侵袭的影响

摘要:目的 观察重组人白细胞介素-11 （rhIL-11） 对肺腺癌 A549 细胞增殖、 迁移和侵袭的影响, 并初步探讨其影响机制。方法 分别以 0、 10、 20、 50、 100 μg/L 终浓度的 rhIL-11 作用于 A549 细胞, MTT 法测定 A549 细胞增殖程度; 用 0、 10、 40、 80 μg/L 终浓度的 rhIL-11 作用于 A549 细胞, 划痕实验和 Transwell 侵袭实验测定 A549 细胞的迁移和侵袭能力; Western blot 检测基质金属蛋白酶 （MMP） -2 和 MMP-9 蛋白水平的表达。结果 rhIL-11 对 A549 细胞增殖能力无影响; rhIL-11 作用于 A549 细胞后, 细胞的迁移和侵袭能力显著增强; rhIL-11 能显著上调 MMP-2 和 MMP-9 的表达, 且表达随 rhIL-11 浓度的增高而增高 （P < 0.05）。结论 rhIL-11 能够促进 A549 细胞的迁移和侵袭, 促进 MMP-2、 MMP-9 上调为其可能的机制之一。     

虎杖苷对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及机制探讨

目的 探讨虎杖苷对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用,并探讨其机制。方法 以肺癌A549细胞为研究对象,以不同浓度虎杖苷（0、10、20、50、100、200 mg/L）处理24、48和72 h后,四氮唑盐（MTS）实验检测虎杖苷对肺癌A549细胞体外增殖的作用,以确定后续实验浓度;经不同浓度虎杖苷（0、10、20 mg/L）处理48 h后,Transwell实验检测虎杖苷对肺癌A549细胞体外侵袭的作用;Western blot和Real-time PCR检测基质金属蛋白酶2/9（MMP-2/9）、整合素β4（integrin β4）、Toll样受体3（TLR3）和分化抗原44（CD44）的表达以及丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化（p-AKT）水平;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养基中转化生长因子β（TGF-β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;报告基因技术检测核因子（NF）-κB启动子活性。结果 在0、10、20、50、100、200 mg/L浓度范围内,虎杖苷处理肺癌A549细胞后,细胞体外增殖率显著下调（以10 mg/L和20 mg/L处理48 h作为后续实验的药物浓度和时间）。虎杖苷处理48 h后,肿瘤细胞体外侵袭能力显著下降,TGF-β和TNF-α含量显著下调,MMP-2/9、integrin β4、TLR3、CD44、p-AKT蛋白及mRNA水平以及NF-κB启动子活性显著下调（均P＜0.05）。结论 通过调控肿瘤相关基因表达和ART/NF-κB信号通路活性,虎杖苷可显著抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭。     

冬凌草甲素对人肺癌A549 和 PC-9 细胞侵袭的抑制作用和机制研究

摘要： 目的 探讨天然产物衍生物冬凌草甲素对人肺癌细胞体外侵袭的抑制作用及其机制。方法 冬凌草甲素处理人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 后, 应用细胞增殖实验 （MTS） 法检测肿瘤细胞生长, Transwell 试验检测肿瘤侵袭能力, 黏附试验检测肿瘤黏附能力, 流式细胞术检测肿瘤细胞周期, Western blotting 和 Realtime-PCR 检测细胞周期蛋白依赖性激酶 1 （CDK1）、 雷帕霉素靶蛋白 （mTOR）、 p53、 p21、 E-钙黏素 （E-cadherin）、 CD44、 β-catenin、 尿激酶型纤溶酶原激活物 （uPA）、 基质金属蛋白酶 （MMP） -2/9、 p-AKT 和磷酸化酪氨酸激酶 （p-Src） 表达, 报告基因技术考察核因子 （NF） -κB 转录活性。结果 冬凌草甲素显著抑制 A549 和 PC-9 细胞的体外增殖、 黏附和侵袭, 将细胞周期阻滞在 G2/M 期, 冬凌草甲素促进 E-cadherin、 p53 和 p21 的表达, 下调 CDK1、 mTOR、 CD44、 β-catenin、 uPA、 MMP-2/9、 p-AKT 和 p-Src 表达和 NF-κB 转录活性。结论 冬凌草甲素可抑制人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 的体外侵袭能力,可能与其调节酪氨酸激酶活性有关。     

综合分析m6A RNA甲基化调节因子与肺癌免疫浸润及预后的相关性

目的 初步探究N6甲基化腺苷(N6-methyl-adenosine,m6A)甲基化调节因子在肺癌肿瘤免疫微环境中的潜在作用及机制.方法 基于TCGA数据库,本研究利用生物信息学综合分析m6A RNA甲基化调节因子与肺癌免疫浸润及预后的相关性.结果 多个m6A RNA甲基化调节因子在肺鳞癌和肺腺癌中差异性表达.然而,A...     

慢病毒介导NK4过表达对人肺腺癌移植瘤生长的影响

目的：研究瘤内注射慢病毒介导的NK4过表达对肺腺癌移植瘤生长、转移以及微血管生成的影响。方法：构建人肺腺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型并随机分为3组。通过瘤内注射的方式分别向三组注射过表达慢病毒LV-NK4 (50 μl, 6×108 TU/ml)、空载慢病毒LV-con (50 μl, 6×108 TU/ml)和PBS(50 μl)。观察28天后将裸鼠处死,测量瘤体积及瘤重。HE染色观察瘤组织、肺组织情况。采用TUNEL法检测各组瘤体细胞凋亡情况。免疫组化染色检测c-Met蛋白的表达,微血管密度(MDV)检测评估血管生成。结果：小鼠荷瘤实验显示,LV-NK4组瘤体积(316.166±89.290 mm3)小于LV-con组(812.714±348.967mm3)和PBS组(838.598±390.780mm3),差异具有统计学意义,P＜0.05。LV-NK4组瘤重(0.4344±0.1234g)小于LV-con组(0.7018±0.2227g)和PBS组(0.7829±0.1510g),差异具有统计学意义,P＜0.05。肿瘤组织病理结果显示LV-NK4组凋亡、坏死明显增多;LV-NK4组微血管密度(MDV)为(11.2±2.78),较LV-con组(18.90±3.479)和PBS组(22.00±5.40)明显减少,P＜0.01。LV-con组和PBS组肺部可见明显肿瘤转移灶,LV-NK4组未见明显转移灶,RT-PCR/WB检测证明移植瘤组织中NK4的表达增加。免疫组化染色显示LV-NK4组裸鼠瘤组织c-Met蛋白表达明显减少。结论：慢病毒介导的NK4过表达抑制肺腺癌移植瘤的生长及肺转移。     

CLEC5A抑制肝胆管细胞癌增殖和转移的作用研究

目的探究C型凝集素结构域家族5成员A(CLEC5A)在肝胆管细胞癌(ICC)组织中的表达特点,并分析其对ICC细胞株RBE增殖、凋亡、迁移以及侵袭特性的影响。方法免疫组化染色法检测25例ICC患者癌组织及配对癌旁组织中CLEC5A的表达水平;构建慢病毒介导CLEC5A过表达RBE细胞株,采用实时荧光定量PCR检测细胞内CLEC5A表达水平,CCK-8法检测CLEC5A对RBE细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测RBE细胞凋亡和细胞周期,Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力。结果 CLEC5A在ICC癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05)。过表达CLEC5A可以抑制RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡并引起G2/M期阻滞(P<0.05)。结论 CLEC5A是一个潜在的ICC抑癌基因,它可能通过调控细胞增殖、迁移及侵袭特性影响ICC发生发展。     

长链非编码RNA SNHG16靶向微小RNA-7-5p对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA SNHG16对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制.方法 选取2016年10月至2018年12月重庆医科大学附属第三医院收治的25例喉癌病人,于术中切取喉癌组织及其相应癌旁组织并冻存.体外培养喉癌Hep-2细胞,Hep-2细胞,按照随机数字表法分为si-NC组(转染无意义干扰序列si-...     

Inhibition of 5-HT cell firing in the DRN by non-selective 5-HT reuptake inhibitors: studies on the role of 5-HT1A autoreceptors and noradrenergic mechanisms

Improved clinical antidepressant efficacy may result if the acute inhibition of 5-HT cell firing induced by antidepressants is prevented. Here we examined whether inhibition of 5-HT cell firing by non-selective 5-HT uptake inhibiting antidepressant drugs is reversed by a selective 5-HT_1A receptor antagonist. In addition, we examined whether concomitant blockade of NA uptake offsets the inhibition of 5-HT cell firing resulting from 5-HT uptake blockade. Antidepressants which block 5-HT uptake (paroxetine, clomipramine, amitriptyline, venlafaxine), all caused dose-dependent and complete inhibition of 5-HT cell firing. Desipramine, a selective NA uptake blocker, caused a slight reduction in firing. The selective 5-HT_1A receptor antagonist, WAY 100635, reversed the inhibition of 5-HT cell firing induced by clomipramine, amitriptyline, venlafaxine, and paroxetine, but not that induced by the α₁ adrenoceptor antagonist, prazosin. Desipramine, at a dose which increased extracellular NA in the DRN, reversed the effect of prazosin but did not alter the ability of paroxetine to inhibit 5-HT cell firing. Our data indicate that antidepressant drugs with 5-HT uptake blocking properties inhibit 5-HT cell firing via activation of 5-HT_1A autoreceptors, and do so irrespective of their effects on NA uptake. These data are discussed in relation to the application of 5-HT_1A receptor antagonists to enhance the clinical efficacy of antidepressant drugs. Received: 15 July 1996 / Final version: 11 November 1996     

对羟吡啶甲基腺苷在大鼠输精管A1与非A1受体作用

为进一步研究对羟吡啶甲基腺苷(HPMA)受体作用特点,用离体大鼠前列腺端输精管,比较了它与A1受体特异性激动剂环己烷基腺苷(CHA)作用异同。结果表明,HPMA有非A1受体样突触后抑制作用,能剂量依赖性地降低外源性PE,NE,ACh引起的输精管收缩反应;在场刺激下它优先作用于突触前;高剂量的HPMA(10^-5mol·L^-1)不仅可完全抑制场刺激引起的输精管收缩反应,同时还使组织对外源性ACh的反应性降低,是突触前抑制和突触后抑制的共同结果。提示HPMA在大鼠输精管同时具有突触前A1受体和突触后非A1受体作用。