抑郁介导肿瘤免疫微环境诱导肝癌不良预后研究

摘 要：［目的］ 寻找抑郁影响肿瘤预后的相关基因，分析这些基因与肿瘤免疫微环境的相互作用，探讨抑郁影响肝癌预后的可能作用机制。［方法］ 选取倾向评分匹配临床及病理分期相一致的肝癌患者组织17例，其中抑郁组8例、无抑郁组9例，通过转录组基因芯片技术筛选两组间差异基因，采用基因互作网络作图分析肝癌抑郁相关的关键因子和相关信号通路。利用癌症基因图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库分析抑郁相关关键炎症因子的表达与肝癌肿瘤浸润淋巴细胞( tumor infiltrating lymphocytes，TILs)表型评分及预后的关系。［结果］ 比较两组组织标本基因表达谱，共有286个基因表达水平发生改变，其中上调基因131个、下调基因155个。将差异表达基因进行互作网络作图，发现主要存在两个主要的网络节点，CXCR4-CXCL12轴和ALDH2-DMGDH-ABAT，炎症因子CXCL13、TIMP2、FOS、CD40、CCL25都与CXCR4-CXCL12轴存在相互作用或调控的关系，抑郁相关的CXCR4-CXCL12轴差异基因表达与肝癌患者TILs表型评分相关。生存分析结果显示，TILs表型评分的低评分组生存时间短于中评分组（P＜0.05）。Cox回归分析结果显示，FOS、CXCR4、CXCL13、CD40高表达及CXCL12低表达是影响肝癌患者总生存的危险因素。［结论］ 抑郁可介导激活肝癌组织中FOS、CXCR4、CXCL13、CD40表达、下调CXCL12表达调控TILs表型，影响肿瘤免疫微环境，抑制肿瘤免疫，从而影响预后。     

基于肿瘤免疫微环境的肝癌分子分型研究进展

免疫治疗改善了肝癌整体治疗策略,其特有的免疫异质特征和对免疫微环境的高度耐受使免疫治疗进入瓶颈阶段,因此对于可能受益于免疫检查点治疗的患者来说,划分肝癌分子分型是必要的。随着二代测序技术的进步,科学家根据浸润性免疫细胞丰度、免疫检查点表达水平、多组学数据、免疫抑制互斥机制及肿瘤微环境异质性等各个层面进行分子分型探索,不仅将肝癌特定生物学、分子和临床病理特征与肿瘤微环境关联,而且显示出与转录组分子分型的重叠之处,有利于未来肝癌的诊断、治疗方式选择和预测临床结局,推动精确的肝癌个体化免疫治疗。     

免疫微环境与肿瘤关系的研究进展

近年研究表明,肿瘤组织中的免疫成分,如各类免疫细胞及其他间质细胞与肿瘤细胞产生的生长因子、细胞因子、促进血管生成因子等协同作用,促进了肿瘤的发生发展.文章就肿瘤免疫微环境和肿瘤发生发展的研究进展作一综述.     

mAFP基因转染树突状细胞免疫对小鼠诱发性肝癌发生的影响

目的:探讨用mAFP基因转染的树突状细胞(dendritic cells,DC)瘤苗免疫对小鼠诱发性肝癌发生的影响。方法:诱导、扩增C57BL/6J小鼠DC。将表达小鼠AFP基因(mAFP)的重组腺病毒转染DC。80只C57BL/6J雄性小鼠随机分为A、B、C、D组,每组20只。以单纯DC为A组;将表达mAFP基因的重组腺病毒转染DC(pAd-BM5-mAFP-DCs)为B组;表达mAFP基因的质粒DNA(pAdBM5-mAFP)为C组;以单纯PBS(磷酸缓冲液)注射为对照组D组。免疫方法:实验组在每只小鼠的左胁部注射5×105个细胞(0.1ml/次),连续免疫3天,以后每7天接种疫苗1次,继续免疫4次。正常对照组,仅注射0.1ml PBS。在接种免疫的同时,给以二乙基亚硝胺(DEN)、四氯化碳(CCl4)和乙醇联合诱癌。诱癌20周后处死小鼠,检查成瘤情况。同时对肝脏标本进行组织病理学检查。结果:80只免疫小鼠中,A组肝细胞癌发生率为70%;B组肝细胞癌发生率仅为25%;C组肝癌发生率为65%;D组肝癌发生率为75%。B组与其它对照组比较有显著性差异(p<0.05),其他各组比较无显著性意义。结论:转基因pAdBM5-mAFP-DC瘤苗免疫自然诱癌的C57BL/6J小鼠,能激发较强的抗肿瘤免疫反应,降低肝癌的发生率。     

基于肿瘤免疫微环境分型的实体瘤免疫治疗策略的研究进展

肿瘤免疫微环境（TIME）是肿瘤细胞得以生存和发展的复杂环境,其组成成分及相关特征在调节肿瘤的发生和发展中发挥重要作用,并影响不同免疫疗法的临床疗效。TIME的研究为实体瘤诊疗开辟了一条新的路径,因此针对TIME的治疗策略具有发展前景且成为探索方向,以帮助指导和改善实体瘤的治疗。本文基于FOWLER团队确认的TIME四分型理论,进一步阐述不同分型的TIME特征及潜在可适用的免疫治疗方式,对目前基于TIME分型的肿瘤免疫治疗选择提供指导。同时提出在成像引导的测序等新技术协助下,新的生物标志物、TIME分型理论和治疗靶点的涌现,为实体瘤免疫疗法赋予光明前景。在新的疗法不断出现的同时,基于TIME的免疫治疗研究方向仍应尽可能提前关口,以实现肿瘤早诊早治的目的。     

低剂量辐射对Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境的影响

目的 探讨低剂量辐射(LDR)对Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境(TME)的影响,以及高剂量辐射(HDR)前LDR预处理在TME中发挥的效应机制.方法 接种Lewis肺癌细胞(1×106)于雄性C57BL/6小鼠左侧腋下,待小鼠肿瘤直径1 cm左右(12 d),随机分为假手术Sham(1)组、LDR(2)组、HDR(3)组...     

基于肿瘤微环境探讨六神丸对结肠癌小鼠移植瘤的抗肿瘤作用

目的 基于肿瘤微环境中的M2型巨噬细胞极化探讨六神丸对结肠癌小鼠移植瘤的作用。方法 建立CT26结肠癌小鼠皮下移植瘤模型,将小鼠随机分为对照组、奥沙利铂组、奥沙利铂联合六神丸组,给药过程中测量肿瘤体积及小鼠体质量。三周后处死小鼠,称取瘤重,计算脾脏指数,同时检测血清中IFN-γ、IL-12P40表达水平及相关血生化指标。进一步检测血清及肿瘤组织中IL-10与TGF-β的表达水平,免疫组织化学实验检测各组M2型巨噬细胞浸润程度。结果 与对照组相比,奥沙利铂联合六神丸组小鼠的肿瘤体积及体质量明显下降,小鼠的脾脏指数及血清中IFN-γ、IL-12P40表达水平明显增高,且无明显不良反应。IL-10与TGF-β的表达水平明显下降,CD68及CD206表达水平下降。结论 六神丸对结肠癌小鼠移植瘤的抗肿瘤作用与抑制肿瘤微环境中M2型巨噬细胞极化密切相关。     

小鼠肝癌固化瘤苗的免疫实验研究

目的 探讨肝癌瘤苗对小鼠免疫功能的影响。方法 测定小鼠抑瘤率及胸腺细胞功能变化。结果 用瘤苗免疫后小鼠能抗同源10~7个癌细胞攻击,其中40％全部有效,60％部分有效。结论 此瘤苗有明显抑瘤作用,且此作用与其影响胸腺细胞代谢增强有密切关系。     

小鼠肝癌原位移植模型的建立及其研究意义

目的:建立小鼠的肝癌原位移植模型,为研究肝癌的侵袭转移机制奠定基础.方法:体外培养小鼠肝癌细胞株H22细胞并进行传代,调整细胞浓度为1×107/ml,接种到小鼠腹腔,进行腹腔传代培养,腹腔传代3次后,收集腹水瘤细胞,用生理盐水洗涤2遍,调整细胞浓度为2×107/ml,用50 μl的微量注射器无菌开腹直视下向小鼠肝脏左叶注入50 μl的H22细胞,术后常规饲养,14天后人道主义处死小鼠,解剖观察小鼠肝脏肿瘤形成情况,病理组织学方法鉴定肿瘤组织.结果:肉眼可见肿瘤结节形成良好,成瘤率高,病理鉴定为肝癌.结论:成功建立了小鼠的肝癌原位移植模型,为后续研究肝癌的免疫逃逸和侵袭转移提供了实验基础.     

A phase II study of etoposide in patients with hepatocellular carcinoma by the Tokyo Liver Cancer Chemotherapy Study Group

Twenty-four patients with hepatocellular carcinoma were treated with 80 mg etoposide/m2 for five consecutive days at 4-week intervals. Of the 21 patients evaluated, only one showed a partial response (of 8 weeks, duration). The dose-limiting factor was bone marrow suppression. Grades 3 and 4 white blood cell count toxicity occurred in five (24%) and two (10%) patients, respectively. Alopecia (grades 1 and 2) was observed in 18 patients (57%). The The present study indicates that etoposide has very limited activity against hepatocellular carcinoma.     

Liver resection and transplantation offer similar 5-year survival for Child-Pugh-Turcotte A HCC-patients with a single nodule up to 5 cm: A multicenter,exploratory analysis

Background and aim

The current guideline of the American Association for the Study of Liver Diseases recommends liver resection for Child-Pugh-Turcotte A patients with a single hepatocellular carcinoma, total serum bilirubin ≤1 mg/dL and absence of significant portal hypertension. This subset of patients would have a long-term survival comparable to transplantation. The main aim of this study is to evaluate the survival rates in patients with a single nodule ≤5 cm following resection.

Methods

Medical records of 105 Child-Pugh-Turcotte A patients who underwent liver resection between 1997 and 2009 were analyzed in 3 countries.

Results

One, 3-, and 5-year survival rate was 97%, 83%, and 66%, respectively, and no variable that can be assessed prior to liver resection predicted survival probabilities.

Conclusions

Liver resection offers 5-year survival similar to transplantation for Child-Pugh-Turcotte A patients with hepatocellular carcinoma and a single nodule up to 5 cm, independently of any patient baseline characteristics.     

氢氧化钠瘤内注射对肝癌生长和转移抑制作用的实验性研究

目的探讨氢氧化钠溶液瘤内注射对肝癌的疗效及其毒副作用。方法对SMMU-LTNM肝癌裸鼠皮下模型,瘤内注射不同浓度的氢氧化钠溶液,与生理盐水组和无水酒精注射组比较（每组10只）肿瘤生长和肺转移抑制情况,并称动物体重。结果与生理盐水瘤内注射组相比,氢氧化钠注射组裸鼠体重显著增加,肿瘤生长和肺转移明显受抑制（P〈0.05）。2%浓度组与3%浓度组抑瘤效果相近,优于1%浓度组（P〈0.01）,1%浓度组抑瘤效果与无水酒精注射组比较差异不显著（P=0.157）。结论 1%～3%浓度的氢氧化钠瘤内注射对肝癌具有较好的疗效,且无明显毒副作用。     

TACE对肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达及其预后的影响

目的 探讨TACE对肝癌MMP-2、MMP-9的表达及预后的影响.方法 选取肝癌患者80例,随机分为两组,分别为术前TACE组、直接手术组.采用酶联免疫吸附法检测两组患者术前静脉血中MMP-2、MMP-9的水平;采用免疫组织化学法检测两组患者术中所取肝癌及癌旁组织中MMP-2、MMP-9的表达;比较两组患者术后1、2、3年的生存情况,并分析其影响因素.结果 直接手术组患者血液中MMP-2、MMP-9水平明显高于术前TACE组患者,差异有统计学意义(P<0.05);两组肝癌组织中MMP-2、MMP-9表达阳性率均较癌旁组织高,且直接手术组肝癌组织中MMP-2、MMP-9的阳性率明显高于术前TACE组,差异有统计学意义(P<0.05);术前TACE组1、2、3年生存率及中位生存期明显优于直接手术组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9表达、门静脉癌栓、行TACE术均是影响患者生存期的因素(P<0.05);与患者性别、年龄、AFP、肿瘤大小、肿瘤数目无关(P>0.05).结论 TACE术能够降低肝癌患者血液及组织中MMP-2、MMP-9的表达,延长患者术后生存期,且患者生存期的长短受Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9的表达、出现门静脉癌栓以及行TACE术的影响,MMP-2、MMP-9可能成为评价肝癌治疗效果及预后的新的指标.     

RT-PCR克隆人IL-6、IL-10、IL-13和SCF等四种细胞因子膜外区cDNA

在逆转录病毒介导下将TNF基因转染入小鼠LAK细胞中．结果发现．转染TNF基因的LAK细胞比正常LAK细胞和转染对照基因的LAK细胞分泌更高水平的TNF．其体外生长能力和杀伤活性均显著升高．抗TNF单抗可显著抑制其体外杀伤活性．表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的TNF介导的。将较低数量的TNF基因转染的LAK细胞与IL-2联合腹腔内注射后，对腹水型肝癌小鼠有显著的治疗效果．     

腹腔内注射TNF基因转染的LAK细胞对于腹水型肝癌小鼠的疗效

近年来基因治疗的适应症已从遗传性疾病扩大至肿瘤、感染性疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病等,并已在某些恶性肿瘤、遗传性疾病、爱滋病的临床试治中取得了一定疗效.目前国内外的基因治疗热方兴未艾,对此,应有清醒的认识和正确的评价.本文介绍了基因治疗的研究现状,并从6个方面展望了未来的发展,及对我国如何开展基因治疗研究工作提出了4条建议.     

电脉冲化疗对人甲状腺癌裸鼠移植瘤的作用

目的：探讨电脉冲化疗对人甲状腺末分化癌裸鼠皮下移植瘤的肿瘤效果。方法：利用人甲状腺未分化癌细胞系TA－K进行裸鼠皮下接种,建立裸鼠皮下移植瘤模型进行电脉冲化疗实验。观察肿瘤局部注射给药和腹腔药给与电脉冲相结合治疗后肿瘤大体和病理组织学变化。结果：局部注射平阳霉素（PYM）结合电脉冲组与其他实验组比较有明显的抗肿瘤效果,其完全缓解率为８０％,部分缓解率为２０％,总有效率为１００％,而腹腔注射ＰＹＭ结合电脉冲组治疗后肿瘤缩小不足５０％,肿瘤体积变化与其对照组相比判别不显著,对照组,单纯给药组,单纯给予电脉冲组肿瘤继续进展。结论：利用PYM介导的电脉冲化疗治疗人甲状腺未分化癌8裸鼠皮下移植瘤,其中局部给药与电脉冲结合效果最好,电脉冲化疗无明显局部及全身反应,是一种安全可靠的治疗手段。     

Characteristics of Liver Cancer at Khmer-Soviet Friendship Hospital in Phnom Penh,Cambodia

Background: Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most frequent cancers in South East Asiancountries including Cambodia, where prevalence of chronic carriers of hepatitis B and C virus (HBV and HCV)is reported to be very high. We reviewed HCC cases admitted to a cancer hospital in Phnom Penh, which is theonly one hospital for cancer treatment and care in Cambodia during the study period. Materials and Methods:Information was collected from medical records of 281 cases (210 males and 71 females) diagnosed as primaryHCC from 2006 to 2011. Results: The subjects were 7-81 years old with a median age of 53 years. Hypochondriacpain was the most common complained symptom (74%). One third of the cases presented with jaundice. Nearlyhalf had ascites at their first visit. One third had liver cirrhosis. Nearly three fourths of the cases presentedwith tumor sized more than 50 mm in diameter, and in almost all cases (97.4%) the size was more than 20 mm.Among 209 subjects tested, hepatitis virus carriers were 75.6%; 46.4% for HBV only, 21.5% for HCV only,and 7.7% for both viral infections. Median age of patients with HBV was about ten years younger than thosewith HCV. Conclusions: This study revealed the characteristics of HCC cases in Cambodia, although there wereseveral limitations. Most HCC cases were infected with HBV and/or HCV, and diagnosed at late stages withcomplications. This implicated that public health intervention to prevent HBV and HCV infection is of highpriority.     

肝癌首发部位对患者术后复发的影响

目的探讨肝癌首发部位及联合血清甲胎蛋白(AFP)表达对于预测肝癌患者术后复发及预后的意义。方法回顾性分析2005年3月-2009年10月行肝癌手术并长期随访的256例患者,运用Kaplan-Meier生存曲线分析总体生存率及术后复发率,Logrank检验P值,Cox比例风险模型进行单因素及多因素分析术后复发高危因素。结果肝癌首发部位不同,其术后总体生存率差异有统计学意义(P=0.022),且肝癌首发于全肝或肝左叶组患者较肝右叶组患者具有更高的术后复发风险(P=0.002)。分层分析发现,在AFP阴性(AFP<25 ng/ml)亚组中两者术后复发率差异有统计学意义(P<0.001)。Cox单因素及多因素分析显示远处转移(P=0.016)、血清AFP(P=0.002)及门脉癌栓(P<0.001)可以作为预测肝癌术后复发的独立危险因素,而肝癌首发部位不能作为一个独立的危险因素(P=0.088)。结论肝癌首发部位可以作为一个预测患者术后复发的危险因素。     

罗格列酮对肝癌SMMC-7721细胞VEGF蛋白表达的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ( PPARγ) 配体罗格列酮对肝癌SMMC-7721细胞中VEGF表达的影响及其可能机制。方法经不同浓度罗格列酮（0、0.1、1、10、100μmol/L）分别作用SMMC-7721细胞24h、48h、72h后,采用Western印迹法检测细胞VEGF和PTEN、Akt1/2及P-Akt1蛋白表达的变化。结果罗格列酮可以显著抑制SMMC-7721细胞中VEGF蛋白表达水平（P<0.05）,呈时间和剂量依赖性;能上调细胞PTEN的表达,并呈时间和剂量依赖性（P<0.05）,但Akt_1/2及P-Akt₁的表达无明显改变（P>0.05）。结论罗格列酮可抑制SMMC-7721细胞中VEGF蛋白表达,该作用可能是与上调PTEN表达有关,但不是通过直接抑制PI3K/Akt信号转导途径来实现的。