lncRNA NEAT1调控miR-4262表达影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:qPCR检测NEAT1和miR-4262在人正常甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞株FTC-133、ML-1、SW579中的表达。用si-NEAT1或miR-4262 mimic转染SW579细胞,考察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。生物学信息预测结合双荧光素酶报告实验分析NEAT1和miR-4262之间的靶向关系。MTT法检测细胞增殖抑制率;Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。共转染si-NEAT1和anti-miR-4262,观察抑制miR-4262表达对抑制NEAT1表达诱导的SW579细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:NEAT1在甲状腺癌细胞中的表达显著上调（P＜0.05）,miR-4262表达下调（P＜0.05）。抑制NEAT1表达或过表达miR-4262显著增加SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,显著降低迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。miR-4262是NEAT1的靶基因。上调或下调NEAT1表达明显调控miR-4262表达（P＜0.05）。抑制miR-4262表达能逆转抑制NEAT1表达对SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达的促进作用,以及对细胞迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论:lncRNA NEAT1通过靶向miR-4262影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-3195对人喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨miR-3195对喉癌Hep2细胞增殖的影响及其分子机制。方法：选取2008年1月至2012年8月期间在南华大学教学医院郴州市第一人民医院耳鼻喉科收治的29例喉癌患者的喉癌组织及其相应的癌旁组织标本,采用qPCR检测miR-3195在喉癌和癌旁组织中的表达;构建miR-3195在喉癌Hep-2细胞中稳定高表达的细胞株,采用MTT法观察miR-3195稳定高表达组和对照组的增殖情况;建立裸鼠移植瘤模型,观察miR-3195稳定高表达的人喉癌细胞株Hep-2在裸鼠体内增殖的情况。利用生物信息学预测 miR-3195 的靶基因,构建 TBX1 3''UTR 的荧光素酶载体,双荧光素酶检测系统检测其荧光素酶活性;Western blotting检测稳定高表达miR-3195组和对照组细胞株的TBX1蛋白表达水平。结果：miR-3195在喉癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P<0.01）;miR-3195上调可抑制Hep-2细胞的增殖（P<0.01）,且可明显抑制裸鼠移植瘤瘤体的生长（P<0.05）;双荧光素酶报告基因检测结果表明miR-3195可能与TBX1靶向结合（P<0.05）,同时Western blotting法验证了miR-3195能够抑制TBX1蛋白的表达（P<0.05）。结论：miR-3195对Hep2细胞有明显的增殖抑制作用,其分子机制可能与负性调控TBX1的表达有关。     

下调CACNA2D1对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响

目的:探讨下调CACNA2D1对胃癌耐药性细胞系SGC7901/ADR耐药的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法检测16对胃癌及癌旁组织以及胃癌细胞系SGC7901和SGC7901/ADR中的CACNA2D1 的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹技术（Western blot）检测CACNA2D1的蛋白表达情况;MTT法检测SGC7901、SGC7901/ADR及转染CACNA2D1 siRNA后SGC7901/ADR的IC50值;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:qRT-PCR结果显示:CACNA2D1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01);CACNA2D1在耐药细胞系SGC7901/ADR中的表达明显高于其亲本细胞系SGC7901(P＜0.01)。蛋白免疫印迹技术结果显示相对于转染CACNA2D1 negative control（NC）组,转染CACNA2D1 siRNA组的胃癌细胞CACNA2D1表达降低;MTT结果显示细胞系SGC7901与SGC7901/ADR的阿霉素半数抑制浓度（IC50）分别为（1.3±0.6）μg/ml与（5.5±0.45）μg/ml;SGC7901/ADR转染CACNA2D1 siRNA后对阿霉素的IC50明显下降。流式细胞术检测凋亡结果显示,CACNA2D1的表达下调后,SGC7901/ADR细胞的凋亡比明显增加。 结论:CACNA2D1能够促进胃癌SGC7901/ADR细胞系产生多药耐药。     

利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究利多卡因对骨肉瘤细胞MG-63增殖、迁移和侵袭的影响,并探索其作用机制。方法:使用1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L浓度利多卡因处理MG-63细胞,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达,qRT-PCR检测长链非编码RNA TTN-AS1（TTN-AS1）和微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达,starBase软件结合双荧光素酶报告实验分析TTN-AS1与miR-524-5p的靶向关系。MG-63细胞中转染si-TTN-AS1、miR-524-5p或pcDNA-TTN-AS1（并进行10 mmol/L利多卡因处理）,观察细胞的增殖、迁移、侵袭。结果:不同浓度利多卡因明显提高细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,显著减少迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）,均呈剂量依赖性。TTN-AS1可靶向调控miR-524-5p表达。抑制TTN-AS1表达与miR-524-5p过表达显著增加MG-63细胞的增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。TTN-AS1过表达逆转了利多卡因对MG-63细胞增殖、迁移、侵袭和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用,以及对miR-524-5p、p21蛋白表达的促进作用。结论:利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA BLACAT1靶向结合miR-29a-3p调控甲状腺癌细胞TPC-1的生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA BLACAT1(lncRNA BLACAT1)调控microRNA-29a-3p（miR-29a-3p）对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能机制。方法:收集2018年06月至2019年03月在我院行甲状腺癌切除术的31例患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p在甲状腺癌组织、癌旁组织、5种甲状腺癌细胞系（SW579、 PDTC-1、 HMGA1、 TPC-1、 KAT-5）及正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平;调控TPC-1甲状腺癌细胞系中lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p的表达,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用生物信息分析和双荧光素酶报告基因法预测和验证lncRNA BLACAT1与miR-29a-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织和正常甲状腺细胞相比,甲状腺癌组织和细胞系中lncRNA BLACAT1的表达水平显著上调,miR-29a-3p的表达水平显著下调（P＜0.05）;过表达lncRNA BLACAT1促进TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭;在甲状腺癌组织中lncRNA BLACAT1的表达水平与miR-29a-3p的表达水平呈负相关（r2 =0.492,P＜0.001）;双荧光素酶分析证实lncRNA BLACAT1能特异性结合miR-29a-3p,并能降低其表达;过表达miR-29a-3p抑制TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,且miR-29a-3p可以抑制由lncRNA BLACAT1过表达引起的TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的增强。结论:lncRNA BLACAT1通过靶向调控miR-29a-3p表达影响甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,从而促进甲状腺癌的发展。     

长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1（musculin antisense RNA 1,MSC-AS1）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用LipofectamineTM2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高（P＜0.05）;MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关（P＜0.01）,并提示患者的预后不良（P＜0.01）;敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖（P＜0.05）。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。     

lncRNA RHPN1-AS1靶向miR-485-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其分子机制

目的:探讨lncRNA RHPN1反义RNA1（RHPN1-AS1）靶向miR-485-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响和机制。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测20例骨肉瘤组织与其对应的癌旁组织、人正常成骨细胞hFOB1.19以及3种骨肉瘤细胞（U-2OS、SAOS-2、HOS）中RHPN1-AS1和miR-485-5p的表达水平。利用脂质体转染法将RHPN1-AS1小干扰RNA（si-RHPN1-AS1）、小干扰RNA阴性对照（si-NC）、miR-485-5p模拟物（miR-485-5p mimics）、miRNA阴性对照（miR-NC）分别转染U-2OS细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶14（MMP-14）蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RHPN1-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织比较,骨肉瘤组织中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与hFOB1.19细胞比较,3种骨肉瘤细胞中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-RHPN1-AS1组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表达水平显著降低,p21、p27和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）;与miR-NC组比较,miR-485-5p组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低,p21和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）。RHPN1-AS1靶向负性调控miR-485-5p表达。干扰miR-485-5p表达逆转了抑制lncRNA RHPN1-AS1表达对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:抑制RHPN1-AS1通过上调miR-485-5p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。     

miRNA-340和cyclin D1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨胃癌组织中miRNA-340（miR-340）和cyclin D1的表达水平,并分析二者与胃癌患者临床病理参数的关系。方法:选取2019年12月至2020年06月期间我院病理科胃癌手术切除组织及对应癌旁正常胃黏膜组织(距离肿瘤边缘≥5 cm)共60例。采用qRT-PCR检测组织中miR-340的表达水平,采用免疫组化染色检测cyclin D1蛋白表达水平,并分析二者与胃癌患者临床病理参数的关系。结果:胃癌组织中miR-340的表达水平（2.38±0.51）明显低于癌旁正常黏膜组织（2.70±0.54）,差异具有统计学意义（P＜0.05）;胃癌组织中cyclin D1蛋白的表达水平（48.33％）明显高于癌旁正常黏膜组织（16.67％）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。胃癌组织中miR-340表达与cyclin D1蛋白表达呈负相关（r=-0.367,P＜0.05）。胃癌组织中miR-340的表达与肿瘤直径、肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期有关（P＜0.05）,cyclin D1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期、神经侵犯及淋巴结转移有关（P＜0.05）。结论:胃癌组织中miR-340和cyclin D1蛋白表达异常,且与不良预后相关,二者联合有望成为胃癌诊疗的潜在生物标志物。     

红景天苷通过miRNA-210-3p/E2F3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨红景天苷（salidroside，Sal）通过miRNA-210-3p/E2F3对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:通过生物信息网站分析miR-210-3p及其靶基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达及生存影响。采用免疫组化法检测肺腺癌组织和正常组织中E2F3蛋白的表达；qRT-PCR检测NSCLC细胞中miR-210-3p和E2F3基因表达；Western blot检测NSCLC细胞中E2F3蛋白表达；CCK-8、细胞划痕及克隆形成实验分别检测红景天苷和miR-210-3p对NSCLC细胞增殖、迁移及克隆形成的影响。结果:生物信息网站显示miR-210-3p和E2F3在肺腺癌组织中高表达，且与不良预后相关。Sal以时间-浓度依赖抑制NSCLC细胞的增殖活性（P＜0.05），并显著降低NSCLC细胞的迁移及克隆形成能力（P＜0.05），而低浓度Sal对正常肺上皮细胞的增殖无明显抑制效果。miRNA-210-3p和E2F3表达在NSCLC细胞中上调（P＜0.05），Sal可抑制二者表达（P＜0.05）。与对照组比较，miR-210-3p inhibitor组E2F3表达上调（P＜0.05），miR-210-3p mimics组E2F3表达被抑制（P＜0.05），Sal与miR-210-3p mimics联用进一步抑制了miR-210-3p mimics所致的E2F3表达下调和细胞增殖和迁移的增强作用（P＜0.05）。结论:miR-210-3p和E2F3在肺腺癌中高表达，Sal可通过时间-浓度依赖负调控miRNA-210-3p/E2F3影响 NSCLC细胞的生物学行为，发挥抗癌作用。     

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p（miR-379-5p）通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con（miR-con组）、miR-379-5p mimics（miR-379-5p组）分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA（miR-379-5p+pcDNA组）、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL（miR-379-5p+pcDNA-CTSL组）分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织（P＜0.05）;与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）,而促进Cleaved caspase-3蛋白表达（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

c-Myc在人胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨c-Myc在人胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:免疫组化和qRT-PCR检测胃癌组织及其癌旁组织中c-Myc的表达;qRT-PCR和Western blot检测人胃黏膜细胞GES-1和人胃癌细胞HGC-27、AGS、SGC-7901中c-Myc的表达;HGC-27细胞转染siRNA-NC和siRNA-c-Myc。48 h后,CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）、CXC亚家族受体4（cysteine X cysteine receptor 4,CXCR4）和基质细胞衍生因子（stromal cell derived factor-1,SDF-1）蛋白表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中c-Myc mRNA表达和免疫组化评分升高（P＜0.05）。与GES-1组相比,HGC-27组、SGC-7901组和AGS组中c-Myc mRNA和蛋白表达均升高（P＜0.05）。与siRNA-NC组相比,siRNA-c-Myc组细胞在24 h、48 h和72 h增殖能力减弱（P＜0.05）,G0/G1期细胞比例升高（P＜0.05）,G2/M和S期细胞比例降低（P＜0.05）,迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P＜0.05）,HIF-1α、CXCR4和SDF-1蛋白表达降低（P＜0.05）。结论:敲低c-Myc可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞周期阻滞,该作用可能是通过抑制HIF-1α/CXCR4通路实现的。     

miR-135a 通过下调SOX2 抑制喉癌Hep-2 细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

[摘要] 目的：探讨敲降miR-135a 对人喉癌上皮Hep-2 细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法：收集2018年1 月至2018 年6 月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10 例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2 细胞中miR-135a 的表达水平。miR-135 inhibitor 转染喉癌Hep-2 细胞后,采用CCK-8 检测Hep-2 细胞活性,集落形成实验检测Hep-2 细胞集落形成能力,Transwell 实验检测Hep-2 细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2 细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor 的Hep-2 细胞,CCK-8 实验检测Hep-2 细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI 染色流式细胞术检测Hep-2 细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor 质粒、对照pcDNA 空载体（SOX2-Con）质粒、pcDNA-SOX2（SOX2-OE）质粒共转染Hep-2 细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2 组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果：与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高（P<0.01）;与正常NHP细胞比较,miR-135a 在Hep-2 细胞中表达水平明显上调（P<0.01）;转染miR-135a inhibitor导致Hep-2 细胞中miR-135a 表达水平明显降低（P<0.01）。敲降miR-135a 明显降低Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2 表达（均P<0.01）;明显增强细胞对奥沙利铂敏感性（P<0.01）;与miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE 组的Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加（均P<0.01）;同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2 组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2 细胞存活率显著升高（P<0.01）。结论：敲降miR-135a 可能通过下调转录因子SOX2 的表达抑制Hep-2 细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。     

miR-424靶向NRP2对宫颈癌细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响

目的:探讨微小RNA（miR）-424靶向神经纤毛蛋白2（NRP2）对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测宫颈癌组织和癌旁组织以及宫颈癌细胞SiHa和人宫颈上皮细胞HCerEpiC中miR-424和NRP2蛋白表达情况。将体外培养的SiHa细胞分为对照组、miR-ctrl组（转染miR-ctrl）、miR-424组（转染miR-424模拟物）、miR-424+pcDNA3.1组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）和miR-424+NRP2组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1-NRP2过表达载体质粒）,采用实时荧光定量PCR法验证转染效率,免疫印迹法检测SiHa细胞中NRP2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424和NRP2靶向关系,MTT法检测细胞增殖和顺铂敏感性,Transwell小室检测细胞迁移。结果:双荧光素酶报告基因实验证实miR-424可与NRP2靶向结合;相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;相较于HCerEpiC细胞,SiHa细胞中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与miR-ctrl组比较,miR-424组SiHa细胞中miR-424表达水平明显升高,而NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50）值均明显降低（P＜0.05）;与miR-424+pcDNA3.1组比较,miR-424+NRP2组细胞中NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的IC50值均明显升高（P＜0.05）;miR-ctrl组和对照组之间以及miR-424+pcDNA3.1组和miR-424组之间上述各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-424可通过靶向调控NRP2表达抑制SiHa细胞增殖、迁移并增强顺铂敏感性。     

miR-429在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨微小RNA-429（miR-429）在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:选取本院收治的78例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,另选取同期因其他疾病需进行鼻内镜手术患者33例为对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测两组组织中miR-429的表达。体外培养人鼻咽上皮细胞NP69与鼻咽癌细胞株CNE-2,将miR-429阴性对照质粒、miR-429 mimics质粒分别转染至CNE-2细胞,分别命名为阴性转染组、miR-429过表达组,未经处理的细胞命名为空白组,采用qRT-PCR技术检测各转染组细胞中miR-429表达。MTT法检测各转染组细胞增殖情况;平板克隆细胞形成实验检测细胞菌落形成情况;Transwell检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹（Western blot）检测E盒结合锌指蛋白（ZEB1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、钙黏附蛋白E（E-cadherin）蛋白表达量。结果:鼻咽癌组织中miR-429表达水平显著低于对照组（P＜0.05）,且CNE-2细胞中miR-429表达水平显著低于NP69细胞（P＜0.05）;miR-429过表达组miR-429表达水平显著高于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞增殖能力显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞菌落形成、迁移细胞及侵袭细胞数量均显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞中ZEB1、MMP-2蛋白表达水平显著低于空白组、阴性转染组,而E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论:鼻咽癌细胞中miR-429呈低表达,miR-429过表达后可显著抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

沉默circRNA hsa_circ_0061137通过miR-217/ARL6IP1轴抑制宫颈癌细胞生长和转移

目的:探讨环状RNA（circular RNA,circRNA）hsa_circ_0061137对宫颈癌（cervical cancer,CC）生长转移的影响及其相关作用机制。方法:取CC组织样本（93例）及癌旁组织样本（93例）,正常宫颈上皮细胞系（End1/E6E7）和CC细胞系（HeLa、SiHa、C-33A、CaSki）,用qRT-PCR法检测组织和细胞中hsa_circ_0061137、miR-217、ARL6IP1的表达;双荧光素酶报告实验验证hsa_circ_0061137、ARL6IP1与miR-217的靶向调控作用。敲低CC细胞系（HeLa、SiHa）中hsa_circ_0061137及HeLa细胞共转染si-hsa_circ_0061137和miR-217抑制物（miR-217 inhibitor）后,用CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）的表达;qRT-PCR法检测各组细胞中hsa_circ_0061137、miR-217、ARL6IP1的表达。裸鼠荷瘤实验检测敲低hsa_circ_0061137后对肿瘤生长的影响。结果:hsa_circ_0061137、ARL6IP1在CC组织及细胞系中表达水平显著高于正常宫颈组织及正常宫颈上皮细胞（P＜0.05）;miR-217在CC组织及细胞系中表达水平显著低于正常宫颈组织及正常宫颈上皮细胞（P＜0.05）。hsa_circ_0061137、ARL6IP1分别与miR-217之间存在靶向负调控关系。敲低hsa_circ_0061137,可抑制CC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT特性,并促进CC细胞凋亡（P＜0.05）;miR-217 inhibitor可部分逆转hsa_circ_0061137敲低发挥的抗CC生长及转移作用（P＜0.05）。裸鼠荷瘤实验证实hsa_circ_0061137敲低可显著减弱瘤体生长增殖,并抑制ARL6IP1表达（P＜0.05）。结论:沉默hsa_circ_0061137可发挥抗CC增殖及转移作用,其作用可能与靶向miR-217/ARL6IP1轴有关。     

miR-205在肾癌中的表达与临床病理特征及预后的关系

目的 肾癌是由多种因素共同作用而导致,本文研究肾癌组织和肾癌细胞中 miR-205 的表达量,阐明肾癌患者临床 病理特征及预后与miR-205 表达量的关系和可能的作用机制。方法 2010 年2月至2014 年2月在湖北土家苗族自治州中心医 院泌尿外科选取人肾癌组织和癌旁正常组织样本60 例,采用RT-PCR 检测miR-205 的表达量,并探究患者的临床病理特征及 预后情况与其之间的关系;采用 miR-205 转染肾癌细胞株 ACHN,通过 MTT 检测过表达 miR-205 对肾癌细胞生长的影响;通 过Transwell 实验研究miR-205 对结肠癌细胞迁移的影响;分别采用免疫组化和Western blot 方法探究肾癌组织上皮间质转化 情况。结果 与癌旁组织相比肾癌组织中miR-205 处于低表达（P＜0.05）;miR-205 的表达量与肿瘤的浸润和复发情况密切 相关（P＜0.05）,而与肿瘤的病理分期和临床分期无关（P＞0.05）。miR-205 过表达后发现肾癌细胞的生长受到显著的抑 制（P＜0.05）,迁移效率显著降低（P＜0.05）。肾癌细胞存在上皮间质转化现象,miR-205 可能是通过抑制上皮间质转化 来抑制细胞的增殖和迁移。结论 miR-205 在肾癌组织中低表达,其参与肾癌进展,miR-205 的表达情况可为肾癌治疗提供 思路。     

miR-204在胃癌生长中的作用及机制

目的:探讨microRNA-204(miR-204)在胃癌中的表达,研究miR-204在胃癌细胞增殖中的作用和机制。方法:采用RT-PCR方法检测胃癌组织、胃癌细胞中的miR-204相对表达量;分析miR-204的表达与临床病理参数的关系;瞬时转染上调胃癌SGC7901细胞中miR-204的表达量,CCK8检测转染前后细胞增殖能力的变化;Western blot检测转染前后SGC7901细胞中Bcl-2表达的变化。结果:胃癌组织中miR-204相对表达量（1.94±0.78）明显低于正常胃组织（4.01±1.47）（P＜0.01）;同样,人胃癌细胞株中miR-204表达水平明显低于正常胃上皮细胞（P＜0.01）。胃癌组织中miR-204的表达水平与肿瘤的大小、远处转移和TNM分期明显相关（P＜0.05）。CCK8结果显示,miR-204 mimics转染后SCG7901细胞的增殖率较转染前明显下降（P＜0.05）,Western blot结果显示胃癌细胞中Bcl-2的表达水平较转染前明显下调（P＜0.05）。结论:miR-204在胃癌组织中低表达且与其恶性生物学行为相关,上调miR-204可通过下调Bcl-2的表达抑制胃癌细胞的增殖。     

miR-155在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-155在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响机制。方法:通过生物信息学网站预测miR-155的可能靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用qRT-PCR测定NSCLC组织及细胞中miR-155和ZIC3的表达;通过LipofectamineTM2000试剂盒向A549细胞中分别转染miR-155 mimic和mimic NC,共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3;Western blot检测转染miR-155 mimic对ZIC3蛋白表达的影响;MTT法、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测miR-155对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:生物信息学网站预测显示ZIC3-3' UTR与miR-155存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证ZIC3是miR-155的靶基因,ZIC3表达受miR-155的负向调控。NSCLC组织及细胞中miR-155显著低表达,ZIC3显著高表达（P＜0.05）;过表达miR-155抑制了ZIC3蛋白的表达水平（P＜0.05）。转染miR-155 mimic显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P＜0.01）;共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3逆转了miR-155 mimic对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:NSCLC中miR-155显著低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭;miR-155可能通过靶向负调控ZIC3影响NSCLC细胞的生物学行为。     

HOTAIRM1靶向miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:研究长链非编码RNA HOTAIRM1（lncRNA HOTAIRM1）与微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的靶向关系及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法:荧光定量PCR（qPCR）检测HOTAIRM1和miR-129-5p在人正常脑组织和胶质瘤组织中的表达。建立抑制HOTAIRM1表达细胞株,研究其对U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）、上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平。生物学信息预测和双荧光素酶报告基因法分析HOTAIRM1和miR-129-5p之间的靶向关系。共转染si-HOTAIRM1和anti-miR-129-5p,观察抑制miR-129-5p表达对抑制HOTAIRM1表达诱导的U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。 结果:HOTAIRM1在胶质瘤组织中的表达明显上调（P<0.05）,miR-129-5p表达下调（P<0.05）。抑制HOTAIRM1表达显著降低U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量（P<0.05）,明显增加U251细胞凋亡率和p21、Bax、E-cadherin蛋白表达量（P<0.05）。miR-129-5p是HOTAIRM1的靶基因。上调或下调HOTAIRM1表达明显调控miR-129-5p表达（P<0.05）。抑制miR-129-5p表达逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、MMP-2、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,并逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞p21、E-cadherin、Bax蛋白表达和细胞凋亡率的促进作用。 结论:lncRNA HOTAIRM1通过靶向miR-129-5p影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。