干扰能及联合化疗药物对人肺腺癌细胞A549生长的影响

1997年6月～1998年6月我院采用四甲基偶氮哇蓝比色（MTT）法,首次体外观察了干扰能及联合化疗药物对人肺腺癌细胞A549生长的影响,旨在为肺癌的治疗提供有价值的实验依据。材料和方法一、实验分组：设空白对照组（加培养基200μl）,细胞对照组（单细胞悬液100μl＋培养液100μl）,实验组（单细胞悬液100μl＋实验用药100μl）。每组设5个平行孔。二、细胞培养：人肺腺癌A549细胞（购于中科院上海细胞生物研究所）培养于37℃5％CO2孵箱中,2～3代后同0．25％胰蛋白酶消化传代。培养基RPML1640（含15％小牛血清,青、链霉素各100ug／m…     

双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用研究

目的 观察双氢青蒿素对肺腺癌A549细胞的体外抑瘤效应，并对其抗癌机理作出初步探索。方法 双氢青蒿素对体外培养肺腺癌A549细胞的生长抑制作用采用MTT检测法，细胞凋亡率检测用流式细胞术，并用荧光显微镜及透射电镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果 双氢青蒿素半数抑瘤浓度为230nM，双氢青蒿素作用后细胞出现凋亡形态改变，流式细胞术结果出现凋亡峰。结论 双氢青蒿素有较明显抑瘤效应，其抗癌机理可能与诱导细胞凋亡有关。     

七叶甙对人肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用及其抗炎平喘机制…

实验表明，七叶甙虽对体外培养的人肺腺癌细胞株Ａ５４９细胞的〔＾３Ｈ〕－ＴｄＲ及〔＾３Ｈ〕－ＵＲ参入无明显作用，但能够显著地抑制其参入，从而发挥抗炎平喘的作用。     

金龙胶囊对肺腺癌A549生长能力的影响的研究

目的研究金龙胶囊对肺腺癌A549生长能力的影响。方法体外培养A549细胞,采用细胞计数法绘制连续生长曲线和TUNEL法检查凋亡指数,观察不同剂量金龙胶囊对A549细胞生长的影响治疗。结果给药组生长曲线明显较对照组平缓,并与给药剂量呈显著相关性,给药组凋亡指数明显高于对照组,凋亡指数与给药剂量呈正相关。结论金龙胶囊对肺癌A549细胞的增殖能力有显著抑制作用并能诱导肿瘤细胞凋亡,作用呈剂量相关性。     

CCL5对人肺腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的:研究敲低CC基序趋化因子配体5(CCL5)在非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞中的表达及对A549细胞增殖、迁移、凋亡等生物学活性的影响,探讨CCL5促进A549细胞上皮间质软化(EMT)的可能分子机制。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,应用shRNA敲低A549细胞中CCL5基因,分为阴性对照组(siRNA-NC)及实验组(siRNA-CCL5)。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中CCL5mRNA表达;CCK-8、Transwell实验观察下调CCL5表达后细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;蛋白印迹法(Western blot)检测E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及TGF-β信号通路TGF-β蛋白表达量的变化。结果:与对照组相比,敲低CCL5表达后实验组A549细胞CCL5mRNA表达下调(P<0.05);CCK-8实验结果显示A549细胞的增殖受到抑制(P<0.05);Transwell实验显示A549细胞的迁移、侵袭明显抑制(均P<0.05);A549细胞凋亡增加;West...     

低分子量肝素对人肺腺癌A549细胞作用的影响研究

目的观察低分子肝癌(LMWH)对人肺腺素A549细胞体外作用的影响,阐明LMWH抑制肿瘤血管生成的可能机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测LMWH处理细胞后血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达变化。结果 VEGF mRNA水平的表达分别是随药物浓度增加和时间的延长而逐渐减弱,差异具有显著性(P<0.05)。结论 LMWH可以下调细胞VEGF mRNA的表达水平,可作为血管生成抑制剂有望成为解决肿瘤细胞耐药和肿瘤靶向治疗的新途径。     

白藜芦醇对肺腺癌细胞增殖和CXCR4表达的影响

<正>肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,临床以早期转移和预后极差为特点。由于CXCR4表达于多种肿瘤细胞中[1],并且与肿瘤细胞远处转移密切相关[2],因此,CXCR4的作用越来越受到人们的重视。白藜芦醇(reveratrol,Res)可以抑制多种癌细胞的生长[3],本实验拟通过研究白藜芦醇     

蛋白激酶CK2β siRNA对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用

目的：探讨蛋白激酶CK213特异性干扰RNA对肺腺癌细胞系A549增殖的影响。方法：构建蛋白激酶CK2psiRNA表达质粒pGPU6-CSNK2B，以与人编码序列无同源性的通用阴性对照表达质粒pGPU6一NC作对照，分别用脂质体转染法转染A549细胞。采用RT-PCR、Western Blot、免疫细胞化学技术检测转染后（K2pmRNA和蛋白表达，同位素参入法检测CK2活性，细胞计数法检测转染后A549的细胞生长曲线和倍增时间，流式细胞术检测转染后对A549细胞周期的影响。结果：重组质粒稳定转染A549细胞后，转染pGPU6一CSNK2B组CK213mRNA、细胞胞浆蛋白表达和CK2激酶活性均较转染pGPU6一NC组和未转染组细胞明显下降（P〈0．05），各组间细胞胞核蛋白CK213表达无明显差异（P〉0．05）；CK2活性的抑制率与CK213蛋白表达抑制率大致平行；转染pGPU6一CSNK2B组细胞生长相对缓慢，细胞的倍增时间为56h，而未转染组细胞的倍增时间为39h；流式细胞结果显示转染pGPU6-CSNK2B组A549细胞增殖指数明显降低（P〈0．05），细胞阻滞于G0／G1期。结论：蛋白激酶CK2B特异性siRNA表达质粒可以阻抑A549细胞CK2t3的表达，抑制细胞增殖和CK2激酶活性，为CK2 siRNA作为抗肿瘤药物的开发和CK2药靶的研究奠定了基础。     

人参皂苷对人肺腺癌细胞转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨人参皂苷对人肺腺癌A549细胞及其对转化生长因子β1( TGF-β1)表达的影响。方法 将人肺腺癌标准细胞株A549培养后完全随机分为人参皂苷组、对照组,采用四氮唑蓝法检测各组细胞增殖率;用酶联免疫吸附法测定各组细胞TGF-β1的表达水平,并分析TGF-β1的表达与A549细胞凋亡的相关性。结果 当人参皂苷浓度为0.1、1、10、100μmol/L时,A549细胞内TGF-β1表达水平逐渐降低,其吸光度(A)值分别为2.712±0.285、1.436±0.285、0.543±0.280、0.125±0.022,不同浓度的人参皂苷组间比较及其与对照组（A值为3.737±0.234）比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。当人参皂苷浓度为1、10、100 μmol/L时,A549细胞半数抑制浓度(IC50)分别为0.26±0.09、0.54±0.04和0.74±0.10,与阴性对照组(0.01±0.01)相比,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 人参皂苷可以抑制肿瘤细胞TGF-β1的分泌,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

芍药苷对肺腺癌细胞A549凋亡的诱导作用

目的:研究芍药苷对肺腺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法:以0(阴性对照)、5、10、20、40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,以MTT法检测A549细胞活力。上述浓度芍药苷培养A549细胞24 h后,酶标法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western blot法检测Bcl-xl、Bax、核因子κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核因子κB p65(NF-κB pp65)蛋白表达。结果:与阴性对照比较,5~40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,细胞活力减弱;5~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Caspase-3活性、Bax蛋白表达增强;10~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Bcl-xl蛋白表达减弱,NF-κB pp65蛋白表达减弱;以上差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:芍药苷可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与激活NF-κB信号通路、调节相关基因表达有关。     

姜黄素对A549裸鼠移植瘤影响的网状Meta分析

目的：评价姜黄素对A549裸鼠移植瘤影响。方法：系统检索主要中文数据库,纳入数据库中有关姜黄素对A549裸鼠移植瘤影响的动物实验,采用SYRCLE动物实验风险评估工具评价纳入研究质量,STATA13.0软件对数据进行合并分析。结果：共纳入7个研究,网状Meta分析结果显示,与空白相比姜黄素能够减轻瘤重,缩小肿瘤体积,降低肿瘤微血管密度,在姜黄素基础上,加用顺铂可以增加疗效。结论：姜黄素对A549肺癌细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用。     

罗格列酮增强顺铂对肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的观察罗格列酮(ROZ)和顺铂(DDP)合用对人肺腺癌A549细胞裸小鼠移植瘤生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法采用A549细胞株建立人肺腺癌裸鼠模型,将28只成瘤雌裸小鼠随机分成7组:①对照组(生理盐水0.2ml);②DDP低剂量组(1mg.kg-1);③DDP高剂量组(4mg.kg-1);④ROZ低剂量组(10mg.kg-1);⑤ROZ高剂量组(30mg.kg-1);⑥DDP低剂量组+ROZ低剂量组;⑦DDP低剂量组+ROZ高剂量组,隔天腹腔注射给药,共8次。于最后一次给药后48h处死各组小鼠,收集瘤标本行光镜观察,免疫组化检测PPARγ、PTEN和pAkt蛋白表达情况。结果①各实验组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤质量明显低于对照组(P<0.01)。低、高剂量ROZ联合用药组较低剂量顺铂组抑瘤作用明显增强(P<0.05),其瘤重抑制率分别为52.11%和83.8%。②免疫组化:低、高剂量罗格列酮组与对照组比较,PPARγ、PTEN的表达上调,而pAkt的表达呈现下调,差异具有显著性(P<0.05),联合用药组该调节作用进一步增强(P=0.00)。③不良反应:高剂量顺铂组出现不良反应,其余各组无明显不良反应。结论罗格列酮能够增强顺铂对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,其作用机制可能与罗格列酮激活PPARγ,上调PTEN的表达和抑制pAkt的表达有关。     

薏苡仁提取物注射液对人肺腺癌的抗肿瘤作用研究

目的研究薏苡仁提取物注射液（康莱特,Kanglaite）对人肺腺癌体外及体内的抗肿瘤作用。方法运用CCK-8细胞增殖试验、划痕试验以及Transwell小室穿膜试验考察康莱特对A549细胞株的增殖、迁移及侵袭的影响;建立人肺腺癌A549裸鼠异种移植模型,考察高、中和低剂量静脉给药的康莱特单用或与顺铂合用的抗肿瘤作用。结果体外试验显示,经康莱特作用后,A549细胞的增殖、迁移和侵袭均受到明显抑制。康莱特高、中和低剂量静脉给药,对人肺腺癌A549裸鼠异种移植模型的肿瘤相对增殖率分别为34．52％、36．67％和42．47％;高、中和低剂量康莱特合并低剂量顺铂的肿瘤相对增殖率分别为26．75％、22．48％及29．82％。结论康莱特在体外及体内对人肺腺癌均有良好的抗肿瘤活性。康莱特与低剂量顺铂合用,体内抗肿瘤作用增强。     

E盒结合锌指蛋白 2促进肺腺癌细胞 A549迁移的作用研究

目的 研究转录因子E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-bindingprotein,ZEB2)在肺癌组织中的表达及促进结肺癌细胞A549迁移的作用.方法 研究起止时间为2018年3月至2019年5月.采用免疫组化法检测肺癌组织及癌旁组织中ZEB2蛋白的表达情况;Transwell法检测干扰或过表达ZEB2对A549细胞迁移作用的影响;RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ZEB1对A549细胞中转移相关分子-E钙黏素(E-cadherin)表达的影响.结果 与对照组相比,干扰ZEB2表达可抑制A549细胞的迁移能力,对照组穿过Transwell小室的细胞数量为(37.6±8.1)个,干扰ZEB2组为(12.3±3.2)个;相反,过表达ZEB2可促进A549细胞的迁移能力,对照组为(48.3±4.2)个,过表达ZEB2组为(129.6±12.1)个;干扰ZEB2可促进E-cadherin基因和蛋白的表达,过表达ZEB2则可抑制E-cadherin基因和蛋白的表达;ZEB2在肺癌组织中的表达明显高于在癌旁组织中的表达.结论 ZEB2在肺癌组织中高表达并可促进肺腺癌细胞迁移能力.     

虾青素对人肺癌 A549 细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响

目的 探讨虾青素对人肺癌 A549 细胞裸鼠移植瘤放射治疗敏感性的影响。 方法 20 只 BALB/c Nude 裸鼠随机均分为 4 组： 对照组（小鼠灌胃 10%DMSO 的超纯水）, 虾青素组（小鼠灌胃 10%DMSO 的虾青素悬液, 剂量为 50 mg/kg, 每隔 1 d 给药 1 次, 共给药 7 次）, 照射组（小鼠灌胃 10%DMSO 的超纯水, 肿瘤生长部位使用加速器局部照射, 5 Gy/次, 总剂量 15 Gy）及联合组（同时进行虾青素灌胃和局部照射处理）。 肿瘤最短直径达到 5 mm 以上开始实验, 每隔 1 d 测量移植瘤长短直径计算肿瘤体积并绘制移植瘤生长曲线, 末次给药后第 2 天处死小鼠, 取肿瘤块称质量并将其制成石蜡切片。 免疫组化方法检测石蜡切片内肿瘤细胞增殖抗原 Ki-67、磷酸化 STAT3（p-STAT3）表达及细胞凋亡（Tunnel 染色）情况。 结果 与对照组比较, 虾青素组、照射组及联合组瘤体生长速度减慢（P < 0.05）, 以联合组瘤体生长速度最慢。 对照组、虾青素组、照射组和联合组瘤体质量、Ki-67、p-STAT3 表达水平均依次降低, 抑瘤率、细胞凋亡率均依次升高, 组间多重比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 虾青素能够通过抑制 p-STAT3 表达增加肺癌 A549 细胞裸鼠移植瘤的放疗敏感性。     

罗格列酮下调肺腺癌细胞血管内皮细胞生长因子的表达

目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(RSG)对肺腺癌血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的调节作用,旨在进一步揭示PPARγ抑制肺腺癌血管生成的机制。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549,给予不同浓度RSG作用24 h后,用免疫细胞化学检测VEGF蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PPARγ、VEGF mRNA的表达。结果RT-PCR及免疫细胞化学结果显示A549细胞存在PPARγmRNA和蛋白的表达。RSG呈浓度依赖方式上调PPARγ的表达;1.25μmol.L-1RSG处理组VEGF mRNA表达明显下调,10μmol.L-1RSG下调作用最强,≥20μmol.L-1RSG下调作用减弱,100μmol.L-1RSG对VEGF mRNA表达下调与对照组比较无统计学意义;PPARγ阻断剂GW 9662明显减弱了RSG下调VEGF的作用(P<0.01或P<0.05,n=6)。结论PPARγ的活化可抑制肺腺肿瘤新生血管的生成,其机制可能是通过部分PPARγ途径下调VEGF的表达而实现的。提示PPARγ可能是肺腺癌血管生成治疗的1个新分子靶点。     

乌贼墨对小鼠NK细胞杀伤活性的影响和抑瘤作用的研究

研究乌贼墨对小鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的诱生作用及NK细胞杀伤性的持续时间，并探讨乌贼墨对荷瘤鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的影响及抑制肿瘤生长的作用。用5％的乌贼墨给小鼠灌胃，连续5d后取不同时间的小鼠脾细胞，应用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性，结果表明，口服乌贼墨后可使小鼠NK细胞杀伤活性增强，实验组与对照组比较有显著性差异（P＜0．01），诱生后24h杀伤活性明显增强，2周左右恢复正常水平，乌贼墨可使荷瘤鼠NK细胞杀伤活性增强，瘤体明显小于阴性对照组，病理学分析证明小鼠瘤组织出血坏死及炎细胞浸润程度明显高于对照组，阳性对照组小鼠免疫功能损伤严重。     

冬凌草甲素对人肺癌A549 和 PC-9 细胞侵袭的抑制作用和机制研究

摘要： 目的 探讨天然产物衍生物冬凌草甲素对人肺癌细胞体外侵袭的抑制作用及其机制。方法 冬凌草甲素处理人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 后, 应用细胞增殖实验 （MTS） 法检测肿瘤细胞生长, Transwell 试验检测肿瘤侵袭能力, 黏附试验检测肿瘤黏附能力, 流式细胞术检测肿瘤细胞周期, Western blotting 和 Realtime-PCR 检测细胞周期蛋白依赖性激酶 1 （CDK1）、 雷帕霉素靶蛋白 （mTOR）、 p53、 p21、 E-钙黏素 （E-cadherin）、 CD44、 β-catenin、 尿激酶型纤溶酶原激活物 （uPA）、 基质金属蛋白酶 （MMP） -2/9、 p-AKT 和磷酸化酪氨酸激酶 （p-Src） 表达, 报告基因技术考察核因子 （NF） -κB 转录活性。结果 冬凌草甲素显著抑制 A549 和 PC-9 细胞的体外增殖、 黏附和侵袭, 将细胞周期阻滞在 G2/M 期, 冬凌草甲素促进 E-cadherin、 p53 和 p21 的表达, 下调 CDK1、 mTOR、 CD44、 β-catenin、 uPA、 MMP-2/9、 p-AKT 和 p-Src 表达和 NF-κB 转录活性。结论 冬凌草甲素可抑制人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 的体外侵袭能力,可能与其调节酪氨酸激酶活性有关。     

超抗原SEA原核表达及诱导淋巴细胞杀伤人肺腺癌细胞效果观察

目的探讨重组质粒pET22b-SEA经原核表达后,金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）对人外周血单核细胞（PBMC）杀瘤活性的影响。方法将重组质粒pET22b—SEA转化至E．coli BL21（DE3）扩大培养,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE分析;密度梯度离心分离PBMC,不同浓度SEA诱导PBMC,12、36、60h后用MTT法测定PBMC对人肺腺癌细胞A549的杀伤活性。结果经诱导,pET22b-SEA得到表达,产物相对分子质量约为30kDa,与理论值大小一致;随着SEA浓度的升高PBMC的杀瘤活性显著增强,在36h、高效靶比、高SEA浓度的情况下,杀伤率最高可达57．21％。结论重组质粒pET22b-SEA在大肠杆菌中成功表达;SEA可诱导PBMC对人肺腺癌细胞A549产生更强的杀瘤活性。