感染日本血吸虫小鼠用双氢青蒿素连续给药及与吡喹酮伍用的疗效观察

目的观察双氢青蒿素连续多次给药及与吡喹酮伍用对日本血吸虫童虫和成虫的杀灭效果。方法采用腹部贴片感染小鼠,每鼠感染日本血吸虫尾蚴(40±1)条后随机分组。分别在感染后第6天或第34天,用双氢青蒿素200、300、400mg/kg或600mg/kg灌服治疗,日1次,连服3d。在小鼠感染后第7天或第35天,分别灌服双氢青蒿素或吡喹酮各300mg/kg以及2种药物剂量同时灌服,或双氢青蒿素于小鼠感染后第7天或第35天灌服,而吡喹酮则在感染后第6天或第8天,以及第34天或第36天给药。2次试验各设有1组不治疗的对照。治疗组和对照组小鼠均于感染后50d解剖,收集成虫,计算减虫率和减雌率。结果在感染后第6天,连续3次灌服剂量分别为200、300、400mg/kg和600mg/kg双氢青蒿素,小鼠减虫率分别为69.16%、80.68%、87.11%和90.62%,减雌率分别为62.19%、75.61%、83.65%和92.16%。在感染后第34天,连续3次灌服给药组小鼠减虫率分别为73.90%、74.99%、84.19%和85.49%,减雌率分别为83.84%、92.91%、94.05%和95.27%。在童虫期(感染后7d),单剂量双氢青蒿素(300mg/kg)与吡喹酮(300mg/kg)联合给药组小鼠减虫率为19.66%;单剂量双氢青蒿素(300mg/kg)第7天服用,吡喹酮第6天或第8天给药组小鼠减虫率分别为42.96%和57.46%。在成虫期(感染后35d),双氢青蒿素(300mg/kg)与吡喹酮(300mg/kg)联合给药组小鼠减虫率为70.21%,吡喹酮第34天或第36天给药组小鼠减虫率分别为60.82%和81.51%。结论双氢青蒿素在童虫期和成虫期连续给药可增强其抗日本血吸虫作用效果。在童虫期,双氢青蒿素与吡喹酮伍用或吡喹酮第6天用药可降低抗日本血吸虫作用效果;在成虫期,双氢青蒿素与吡喹酮伍用或吡喹酮第36天用药可增强抗日本血吸虫效果。     

青蒿琥酯对日本血吸虫童虫超微结构影响的电镜观察

小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第7d开始，灌服青蒿琥酯300mg／kg·次，每wk1次，连续4次。在首次给药和第2次给药后的不同时间收集童虫作电镜观察。结果：首次给药后4h，扫描电镜见虫体表皮肿胀；8－12h后表皮褶嵴消失、糜烂；第1d即发现死亡虫体。以后几次给药，病变加重，虫体大部分死亡。透射电镜见皮层细胞肿胀、肌层坏死及溶解、肠腔上皮破坏和脱落。实验表明该药对日本血吸虫童虫有直接损害作用。     

青蒿琥酯对日本血吸虫生殖作用的影响

目的观察青蒿琥酯对日本血吸虫成虫生殖的影响。方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第20d灌服青蒿琥酯300mg/kg,给药后3周解剖小鼠,用灌注法收集成虫,计算减虫率;取肝右叶做石蜡切片,观察虫卵肉芽肿;剩余肝脏溶解后计数虫卵;收集无损虫体进行体外培养,观察虫卵形态,并计数产卵量;取完好的虫体做石蜡切片,HE染色后镜下观察生殖器官的发育。结果给药组小鼠体内雌虫产卵量与对照组存在显著的差异,体外培养结果与体内产卵结果相一致。给药组小鼠体内的雌虫的卵巢发育缓慢,比对照组的小,且卵巢内多为未成熟的卵细胞。结论青蒿琥酯能抑制雌虫卵巢的发育,降低或抑制雌虫的产卵量,具有抗日本血吸虫雌虫生殖的作用,能有效的减轻血吸虫病的病情和控制传播。     

青蒿琥酯治疗小鼠日本血吸虫病的血清学研究

目的观察青蒿琥酯对日本血吸虫感染小鼠的治疗作用及血清IgG的动态变化，探讨血清抗体与体外杀童虫效果的相关性。方法用日本血吸虫感染C57／BL6小鼠，在感染后8、15、22和29d分别一次性灌服300mg／kg青蒿琥酯，对照组小鼠灌服1％羧甲基纤维素钠。最后一次给药后7d剖杀小鼠，计算成虫数和虫卵数，以ELISA法检测小鼠血清中日本血吸虫特异性IgG抗体的水平，观察接受青蒿琥酯治疗的小鼠血清与巨噬细胞体外协同杀伤日本血吸虫童虫的效应。结果青蒿琥酯治疗组小鼠未检获成虫和虫卵；血清中日本血吸虫尾蚴抗原特异的IgG抗体水平在感染后21d达高峰，此后下降；成虫抗原特异的IgG抗体水平呈上升态势，二者与对照组比较差异均无显著性；青蒿琥酯治疗小鼠血清中虫卵抗原特异的IgG抗体呈低水平状态，显著低于对照组。青蒿琥酯治疗组小鼠血清和对照组小鼠血清均具有较强的体外杀童虫效果。结论青蒿琥酯对日本血吸虫感染的小鼠具有显著的治疗效果，其血清与巨噬细胞在体外具有协同杀伤童虫的作用。     

青蒿琥酯对日本血吸虫作用的研究Ⅰ小鼠体内不同发育阶段虫体对青蒿琥酯的敏感性

目的观察小鼠体内不同发育阶段日本血吸虫童虫与成虫对青蒿琥酯的敏感性.方法用定量日本血吸虫尾蚴感染小鼠,感染2 h,1、3、7、12、14、16、25、35 d和42 d分别一次性灌服500 mg/kg青蒿琥酯.给药后4周解剖小鼠,采用门静脉灌注法收集虫体,计算减虫率.结果青蒿琥酯对1、3、7、12、14、16、25、35、42 d龄童虫或成虫的减虫率分别为16.9%、18.0%、71.3%、50.2%、36.9%、31.3%、45.3%、58.0%、26.4%,其中以7～35 d龄虫对该药最敏感.结论青蒿琥酯对小鼠体内日本血吸虫不同发育阶段均有杀灭作用,对7～35 d龄虫体杀灭效果更为明显.     

青蒿琥酯对日本血吸虫作用的研究小鼠体内不同发育阶段虫体对青蒿琥酯的敏感性

目的观察小鼠体内不同发育阶段日本血吸虫童虫与成虫对青蒿琥酯的敏感性。方法用定量日本血吸虫尾蚴感染小鼠,感染2h,1、3、7、12、14、16、25、35d和42d分别一次性灌服500mg/kg青蒿琥酯。给药后4周解剖小鼠,采用门静脉灌注法收集虫体,计算减虫率。结果青蒿琥酯对1、3、7、12、14、16、25、35、42d龄童虫或成虫的减虫率分别为16.9%、18.0%、71.3%、50.2%、36.9%、31.3%、45.3%、58.0%、26.4%,其中以7~35d龄虫对该药最敏感。结论青蒿琥酯对小鼠体内日本血吸虫不同发育阶段均有杀灭作用,对7~35d龄虫体杀灭效果更为明显。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究XIIV湖沼型流行区日本血吸虫对吡喹酮的敏感性评价

目的比较中国大陆湖沼型流行区日本血吸虫不同分离株对吡喹酮的敏感性,为建立吡喹酮敏感性检测/监测技术提供实验依据。方法从湖南、湖北、江西、安徽和江苏5省湖沼型血吸虫病流行区现场采集感染性钉螺,分离尾蚴,以40条各虫株尾蚴感染小鼠,感染35 d后分为6组,5个用药组分别一次灌服37.5、75、150、300 mg/kg和600 mg/kg吡喹酮,对照组小鼠灌服2.5%Cremophor EL溶液。所有小鼠于感染后50 d解剖,收集小鼠体内成虫,统计虫负荷和减虫率,计算并比较不同分离株血吸虫的吡喹酮半数有效剂量(ED50值)。结果37.5、75、150、300 mg/kg和600 mg/kg吡喹酮一次灌胃给药后,各组小鼠减虫率分别为10.37%～19.81%、23.22%～33.09%、39.25%～49.61%、62.87%～74.44%和91.26%～98.09%。经不同剂量吡喹酮给药后,各组小鼠减虫率差异无统计学意义(P>0.05)。7株日本血吸虫不同分离株的吡喹酮ED50值为134.1～186.7 mg/kg,但各分离株的吡喹酮ED50值差异无统计学意义(P>0.05)。结论中国大陆湖沼型流行区日本血吸虫不同分离株对吡喹酮的敏感性差异无显著性。血吸虫吡喹酮ED50值作为定量指标,能够客观反映血吸虫种群对吡喹酮的敏感性。     

青蒿琥酯对日本血吸虫童虫体内四种酶活性的影响

小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第7d起灌服青蒿琥酯300mg/kg·次,每周1次,共4次.于每次给药后的第3、第5d收集童虫,制成匀浆,作薄层淀粉胶电泳,胶中有关同工酶经底物显色,作酶活性定性观察.另设相应时间的不给药对照组.观察发现:该药对苹果酸脱氢酶(MDH)、6-磷酸甘露糖酶(MPI)和酸性磷酸酶(ACPH)有明显抑制作用.对磷酸葡萄糖异构酶(PGI)的活性影响不明显.提示青篙琥酯对日本血吸虫童虫的能量代谢和肠壁对红细胞的消化有抑制作用.     

外源性一氧化氮抗日本血吸虫的实验研究

目的观察外源性一氧化氮(NO)抗日本血吸虫的效果。方法以蜂蜡为NO的吸收剂,在不同条件下用逆转乳化法制备NO乳状液,测定其中NO的含量,选择乳状液中NO含量最大的用于抗日本血吸虫试验。在小鼠感染日本血吸虫尾蚴后22天起灌服,剂量为0.5ml/d,连续灌服5d,心脏灌注法收集虫体计数,研究外源性NO抗日本血吸虫的效果。结果外源性NO中NO的最大含量为536.2μmol/L;对小鼠日本血吸虫有一定的杀虫效果,减虫率达45.0%,减卵率达42.7%。结论外源性NO对日本血吸虫有一定的抗虫作用。     

蒿苯酯预防日本血吸虫病的实验研究

本文报道了蒿苯酯预防动物血吸虫病的实验结果。小鼠、免及犬在单次感染日本血吸虫尾蚴后第7d开始服蒿苯酯,每wkl次,连服4-6次,对宿主体内的血吸虫童虫有明显杀灭效果,减虫率达90％—100％,该药对不同感染度小鼠体内血吸虫童虫的杀灭作用相同。对连续感染14d(每d1次)的家兔减虫率亦达93.5％,蒿苯酯皮下注射给药效果比口服好,但毒性大。比较蒿苯酯、呋喃丙胺和吡喹酮3种药物杀灭血吸虫童虫的效果,以蒿苯酯为最佳。同样,蒿苯酯优于其他两种青蒿衍生物一蒿甲醚和还原青蒿素。     

双氢青蒿素抗日本血吸虫作用的体内实验观察

目的观察不同发育阶段日本血吸虫对双氢青蒿素的敏感性,探索双氢青蒿素抗日本血吸虫的效果。方法采用尾蚴腹部贴片法感染小鼠,每鼠感染日本血吸虫尾蚴40条;在血吸虫不同发育阶段灌服用药,于感染后50 d解剖小鼠,收集成虫,计算减虫率和减雌率。①在小鼠感染后2 h,3、5、7、10、14、18、21、28 d和35 d灌服双氢青蒿素（300 mg/kg）,观察双氢青蒿素对不同发育阶段血吸虫的作用效果。②以不同剂量双氢青蒿素分别给感染后7 d或35 d的小鼠用药,观察双氢青蒿素抗日本血吸虫作用的量-效关系。③以不同药物剂量分别在感染后第7天和第35天给药（共2次）,观察双氢青蒿素对日本血吸虫的作用效果。结果300 mg/kg双氢青蒿素一次灌服用药对7 d龄童虫和35 d龄成虫有明显杀灭作用,减虫率分别为64.81%和60.47%,减雌率分别为73.81%和90.48%。以200、300、400 mg/kg和600 mg/kg双氢青蒿素治疗感染后7 d小鼠,减虫率分别为46.84%、60.63%、59.55%和60.21%,减雌率分别为59.73%、72.29%、72.58%和76.61%;治疗感染后35 d小鼠,减虫率分别为47.23%、62.33%、76.31%和83.63%,减雌率分别为59.73%、89.36%、89.65%和93.96%;在感染后第7天和第35天共治疗2次,减虫率分别为58.16%、82.66%、83.42%和83.79%,减雌率分别为68.69%、90.43%、93.74%和94.63%。结论双氢青蒿素具有一定的抗日本血吸虫作用,对7 d童虫和35 d成虫较为敏感。     

辐照旋毛虫肌肉幼虫免疫对日本血吸虫感染的保护作用

目的　观察辐照旋毛虫肌肉幼虫 (TsML)免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的保护效果。　方法　用60 Co照射的TsML经腹腔免疫小鼠 15只 ,另设TsML匀浆和生理盐水免疫组作为对照。在两次加强免疫后 (1次 /周 ) ,分别用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后第 40d解剖小鼠 ,计算虫荷 ,并对肝组织中的虫卵和雌虫子宫内的虫卵进行计数。同时采用数字图像处理技术对成虫形态结构进行测量分析。　结果　 1)辐照TsML免疫组与生理盐水对照组比较 ,小鼠虫荷数、肝组织和雌虫子宫内的虫卵数显著减少 ;免疫小鼠体内血吸虫虫体及睾丸、卵巢发育受到明显影响 ;2 )TsML匀浆免疫组的减虫效果较差 ,减卵效果及虫体、睾丸、卵巢发育与辐照TsML免疫组相似。　结论　辐照TsML和匀浆TsML免疫均能诱导小鼠产生对日本血吸虫攻击感染的保护作用 ,且辐照TsML较匀浆TsML具有更好的保护效果。     

重组日本血吸虫铁蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 用重组日本血吸虫铁蛋白免疫小鼠,观察抗血吸虫的免疫保护作用。方法 用重组的日本血吸虫铁蛋白（ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ）免疫小鼠,经皮下免疫３次,在第３次免疫后４周,经腹部感染日本血吸虫尾蚴４０条或５０条,４５ｄ后杀鼠,观察减虫效果。结果 用ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ,ＩＬ－１２＋ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ和ＦＣＡ＋ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ免疫小鼠分别获得２     

日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4基因及蛋白联合免疫保护性价值的研究

摘要：目的研究日本血吸虫核糖体蛋白（SjRPS4）基因和蛋白联合免疫对小鼠的保护效果。方法将SjRPS4 DNA疫苗和重组蛋白疫苗间隔2w 3次分别或联合免疫昆明鼠,2w后,每鼠感染尾蚴20条,45d后剖杀小鼠,计数成虫,肝、肠、粪及每雌子宫虫卵数。结果联合免疫组与生理盐水组相比较,获得了49.7%的减虫率、62.6%的粪减卵率、46.0%的每雌子宫减卵率、49.0%的肝减卵率、54.3%的肠减卵率（P均<0.01）,均显著高于单独的SjRPS4 DNA疫苗组36.2%的减虫率、48.7%的粪减卵率、35.2%的每雌子宫减卵率、41.8%的肝减卵率、40.5%的肠减卵率（P均<0.05）,及单独蛋白免疫组38.2%的减虫率、50.1%的粪减卵率、38.9%的每雌子宫减卵率、42.4%的肠减卵率（P均<0.05）。结论SjRPS4 DNA疫苗及重组蛋白疫苗均可诱导小鼠产生一定的免疫保护作用,且联合免疫方案保护效果优于单一疫苗。     

日本血吸虫调宁蛋白样蛋白P14基因DNA疫苗对小鼠免疫保护作用研究

摘 要：目的 研究日本血吸虫调宁蛋白样蛋白P14基因DNA疫苗对小鼠免疫保护作用。 方法 制备无内毒素DNA疫苗,用于免疫小鼠。将雌性BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只。生理盐水组给予100 μl/鼠/次;空质粒组100 μg/鼠/次、pcDNA3.1(+)-SjP14组、pcDNA3.1(+)-SjP14 + pcDNA3.1(+)-SjGST组分别经肌肉给予100 μg/鼠/次;同上每2周免疫一次,共3次。末次免疫后2周,经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴（30±1）条/鼠。尾蚴攻击6周后解剖小鼠,收集成虫和血清,计算减虫率并检测血清IgG1、IgG2a及总IgG;同时留取肝脏,部分消化后在显微镜下行虫卵计数,计算减卵率,部分肝脏用于组织病理学分析（HE染色法）,观察肝细胞变化及肉芽肿情况。结果 与NS对照组比较,pcDNA3.1(+)-Sj P14p核酸疫苗组减虫率和减卵率分别达到45.1%（P<0.05）和62.0%（P<0.001）;SjP14核酸疫苗与SjGST核酸疫苗联合免疫组减虫率和减卵率分别提高至56.3%（P<0.01）和73.9%（P<0.001）;SjGST和SjP14 组减虫率大于SjP14疫苗组,但两组之间差异无显著性（P＞0.05）; SjGST和SjP14组减卵率明显大于SjP14疫苗组, 两组之间差异有显著性（P<0.001）。SjGST和SjP14组与SjP14组血清IgG1、IgG2a及总IgG水平在免疫6周、12周后均较对照组显著提高（P<0.01）,但SjGST和SjP14组与SjP14之间差异无显著性（P＞0.05）。肝组织切片镜下显示,pcDNA3.1(+)-SjP14组肝脏病变较生理盐水组和空质粒组明显减轻,pcDNA3.1(+)-SjP14 + pcDNA3.1(+)-SjGST组肝脏损伤程度最轻,虫卵肉芽肿周围炎症反应轻,肉芽肿面积较小。结论 pcDNA3.1(+)-Sj P14核酸疫苗有一定程度的抗血吸虫感染作用,pcDNA3.1(+)-SjP14与pcDNA3.1(+)-SjGST疫苗联合免疫能增强小鼠对血吸虫感染的保护。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究ⅩⅦ 日本血吸虫吡喹酮抗性株在小鼠体内的生物学特性

目的实验观察日本血吸虫吡喹酮抗性株在终宿主小鼠体内的生物学特性,探索日本血吸虫吡喹酮抗性株对终宿主的致病力及传播强度。方法分别采用日本血吸虫江苏吡喹酮敏感株和抗性株、湖南吡喹酮敏感株和抗性株尾蚴定量感染小鼠,建立小鼠-钉螺-小鼠生活史循环,观察比较各虫株的虫卵开放前期、产卵量及虫卵分布、对终宿主的易感性、虫体生长发育等生物学特性。结果日本血吸虫江苏吡喹酮敏感株和抗性株虫卵开放前期分别为36.1 d和36.8d(t=0.907,P=0.372),粪便中虫卵数分别为14.6只/100 mg和21.2只/100 mg(t=2.946,P=0.007),回收成虫数分别为20.5条/鼠和25.1条/鼠(t=2.128,P=0.042),组织中虫卵数分别为31 303只/对成虫和38 594只/对成虫(t=2.185,P=0.040)、肝脏虫卵数分别为14 810只/对成虫和19 715只/对成虫(t=2.934,P=0.007),肠组织中虫卵数分别为16 493只/对成虫和18 879只/对成虫(t=1.044,P=0.309);江苏敏感株和抗性株雌雄合抱虫体长度(t=0.328,P=0.744)、雌虫体长(t=0.386,P=0.701)及雄虫体长(t=0.332,P=0.741)差异均无统计学意义。日本血吸虫湖南吡喹酮敏感株和抗性株虫卵开放前期分别为35.5 d和35.6 d(t=0.169,P=0.867),粪便中虫卵数分别为13.3只/100 mg和18.9只/100 mg(t=3.622,P=0.001),回收成虫数分别为17.6条/鼠和25.1条/鼠(t=3.153,P=0.004),组织中虫卵数分别为30 932只/对成虫和53 903只/对成虫(t=3.865,P=0.001),肝脏虫卵数分别为12 307只/对成虫和26 363只/对成虫(t=4.388,P0.01),肠组织中虫卵数分别为18 625个/对成虫和27 541个/对成虫(t=2.679,P=0.012);湖南敏感株和抗性株雌雄合抱虫体长度(t=0.853,P=0.397)、雌虫体长(t=0.573,P=0.569)及雄虫体长(t=0.742,P=0.461)差异均无统计学意义。结论日本血吸虫吡喹酮抗性株产卵量和肝组织虫卵沉积量均明显高于敏感株,提示其对终宿主的致病性更强;抗性株感染鼠粪便中排出虫卵数明显多于敏感株,提示抗性株的传播能量高于敏感株。