顺铂诱导A549细胞凋亡的研究

目的 探讨顺铂诱导肺癌细胞凋亡的规律，机制以及在肿瘤化疗中的作用。方法 应用形态学观察，琼脂糖凝胶电泳，原位DNA断裂点的末端标记法和流式细胞仪分析技术，检测顺铂诱导A549细胞的凋亡作用。结果 3mg/L顺铂诱导的细胞凋亡在12-72h持续存在并逐渐增强，呈时间依赖性；顺铂浓度分别为1、3、5、7mg/L时均诱导了细胞凋亡，呈浓度依赖性，在顺铂作用下，细胞被阻滞于G1期。结论 诱导细胞凋亡可能是顺铂抗肿瘤作用的重要机制。     

MicroRNA-18a对非小细胞肺癌细胞A549/DDP顺铂耐药性的调控研究

目的：探讨microRNA-18a（miR-18a）对顺铂（DDP）耐药非小细胞肺癌（NSCLC）A549/DDP细胞耐药性的影响及其作用机制。方法将A549/DDP细胞随机分为3组,分别为空白对照组（正常培养的A549/DDP细胞）、阴性对照组（在正常培养的A549/DDP细胞中转染无关序列）和miR-18a转染组（在正常培养的A549/DDP细胞中转染miR-18a）。每组重复5次,待转染进行24、48、72、96 h后检测转染效果。实时荧光定量PCR检测A549/DDP细胞中miR-18a的表达水平;流式细胞术检测转染后的细胞周期情况;MTT法测定转染miR-18a对A549/DDP细胞的增殖抑制;Western Blot检测转染后A549/DDP细胞的共济失调-毛细血管扩张症突变基因蛋白（ATM）及磷酸化ATM的表达。结果 miR-18a转染组、阴性对照组、空白对照组的miR-18a相对表达量分别为（101.1±2.50）、（1.18±0.21）、（1.00±0.02）,差异有统计学意义（P﹤0.05）;miR-18a转染组DDP的半数抑制浓度（IC50）值为（17±0.51）μmol/L,低于阴性对照组和空白对照组;与阴性对照组和空白对照组相比,miR-18a转染组A549/DDP的S期和G2/M期细胞比例、ATM及磷酸化ATM蛋白水平均降低,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 miR-18a的表达水平可以调控A549/DDP细胞对DDP的耐药性,可能与ATM及磷酸化ATM的表达有关。     

miRNA-192对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨抑制microRNA-192（miR-192）在非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂（DDP）耐药性方面的影响及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人肺腺癌耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549细胞中miR-192的表达水平,A549／DDP细胞转染miR-192抑制剂（inhibitor）和miR-阴性对照（NC）48h后采用qRT-PCR检测转染效率,分别采用MTT法、克隆形成实验及流式细胞术检测转染48h后A549／DDP细胞对DDP的药物敏感性、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,Western blotting检测转染48h后细胞中Bax和Bcl-2的表达变化。结果 miR-192在A549／DDP细胞中的表达水平高于A549细胞（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor 48h后的A549／DDP细胞miR-192水平低于转染miR-NC者（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor后,A549／DDP细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多、DDP对其半数抑制浓度降低、Bax蛋白水平升高和Bcl-2蛋白水平下降,与转染miR-NC者比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 抑制miR-192能够降低A549／DDP细胞对DDP的耐药性,其作用机制可能是通过增加细胞凋亡以及下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达来实现的。     

顺铂诱导人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞的凋亡

背景与目的:近年的研究表明,诱导细胞凋亡是多种作用于核酸代谢不同环节的化疗药物抗肿瘤的重要机制。但顺铂杀灭人小细胞肺癌(SCLC)细胞的药物效应除了损伤其DNA外,诱导该类恶性肿瘤细胞凋亡是否是其杀灭细胞的重要机制尚无相应研究。基于此,本研究旨在探讨顺铂诱导人SCLC细胞系H446细胞凋亡的机制及其在SCLC化疗中的作用。方法:分别采用形态学观察、流式细胞仪分析技术和原位DNA断裂点的末端标记法,检测顺铂诱导H446细胞的凋亡作用。结果:终浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/m l的顺铂均可诱导H446细胞凋亡,且呈浓度依赖性(处理48 h时,其凋亡指数分别为1.47±0.03、8.28±0.54、11.02±1.05、12.74±1.08、27.16±1.15);终浓度为2μg/m l的顺铂在24~72 h持续诱导细胞凋亡且诱导凋亡作用逐渐增强,呈时间依赖性;终浓度为5μg/m l的顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的S期,终浓度<5μg/m l顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的G2期和S期。结论:诱导细胞凋亡可能是顺铂抗肿瘤作用的重要机制。     

马钱子碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长并增强顺铂敏感性

摘 要：［目的］ 评估马钱子碱对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其增强化疗敏感性。［方法］ 采用NSCLC细胞系A549为研究对象,分别采用CCK-8法、集落形成实验和细胞侵袭、迁移实验检测马钱子碱对A549细胞活力、侵袭和迁移的影响;应用Western blot检测马钱子碱对PTEN、Akt和p-Akt蛋白表达影响。［结果］ 马钱子碱或顺铂单独有效抑制细胞生长、细胞集落的发育以及细胞的侵袭和迁移（P<0.05）,并且马钱子碱和DDP联合处理对细胞的抑制作用强于单独的化合物（P<0.05）。Western blot分析结果显示,在A549细胞中,马钱子碱（20μg/ml）处理增加PTEN蛋白的表达（P<0.05）减少了p-Akt蛋白表达（P<0.05）,并且hsa-miR-21 minic可部分抑制马钱子碱对PTEN蛋白表达的促进作用。［结论］ 马钱子碱可抑制肺癌的进展,增强抗癌药物顺铂对肺癌细胞的作用。     

CD13抑制剂乌苯美司对A549细胞顺铂敏感性的影响及其机制

  目的   检测CD13抑制剂乌苯美司联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡的影响,并探讨其机制。   方法   应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖;流式细胞Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot方法检测p53、PARP-1、Bcl-2、Bcl2-xL和Caspase蛋白水平;酶活性底物法检测CD13活性;Hoechst33342染色联合流式细胞术检测侧群细胞。   结果   乌苯美司单药对A549细胞增殖无显著影响（P>0.05）,乌苯美司（100 μg/mL）联合顺铂作用A549细胞24、48、72 h后,乌苯美司可显著增强8、16 μmol/L顺铂对A549细胞的增殖抑制（P < 0.05）,并呈时间依赖性,72h时,8、16μmol/L顺铂组和顺铂联合组的细胞增殖率分别为（62.06± 7.60）% vs.（27.92±5.84）%和（19.22±1.57）% vs.（0.67±0.42）%（P < 0.05）;但对64 μmol/L顺铂的细胞增殖率无明显影响（P>0.05）。16 μmol/L顺铂联合组细胞凋亡的比例明显增加（P < 0.05）。乌苯美司对P53、PARP-1、Bcl-2、Bcl2-xL及Capsize蛋白水平无明显影响,但显著抑制A549细胞CD13活性和降低A549侧群细胞比例（P < 0.05）。   结论   CD13抑制剂乌苯美司体外条件下显著提高低剂量顺铂对A549细胞的抑制作用,可能成为CD13阳性非小细胞肺癌患者顺铂的增敏剂。      

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p（microRNA-125a-5p,miR-125a-5p）对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）的方法检测人肺上皮正常细胞（BEAS-2B）与非小细胞肺癌细胞系（A549、A549/DDP、SK-MES-1）中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞的存活率与半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高（P＜0.05）;过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著增加（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2（P＜0.05）;过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.05）。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

顺铂加卡铂治疗中晚期非小细胞肺癌的临床观察

全组共90例经病理学证实为中晚期的非小细胞肺癌。将病例随机分为三组,每组30例。均采用EP方案,第一组为足叶乙甙加顺铂,卡铂交替应用;第二组为足叶乙甙加顺铂;第三组为足叶乙甙加卡铂。90例均可评价疗效,第一组1例获完全缓解,13例获部分缓解,有效率达46.7％。第二组有效率为40％,第三组有效率为36.7％,第二、三组均无完全缓解病例。经统计学处理,三组疗效无显著差异。第一组胃肠道反应明显低于第二组,而骨髓抑制明显低于第三组,具有统计学意义。因此,第一组副作用比第二、三组低。     

顺铂为主联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效分析

采用以顺铂为主的联合化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌３６例。ＣＡＰ方案治疗２１例，无１例达完全缓解，７例达部份缓解，有效率为３３．３％；ＥＰ方案治疗１５例，１例达完全缓解，５例达部分缓解，有效率为４０％。３６例患者总有效率为３６．１％。化疗中出现的毒副反应主要是Ⅰ－Ⅱ级的骨髓抑制和消化道反应，未出现明显的肝肾功能损害，使用ＣＡＰ方案治疗时出现１例ＥＣＧ异常。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

外泌体APE1对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感度的影响CSCD

目的探讨外泌体脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞顺铂(CDDP)敏感度的影响。方法Western blot检测顺铂处理和APE1基因重组慢病毒载体转染A549细胞后,细胞及其分泌的外泌体中APE1的变化情况。PKH26对外泌体染色后,激光共聚焦观察其进入细胞内的情况。将外泌体和带GST标签的APE1纯化蛋白(GST-APE1)与A549细胞共培养,观察细胞内GST-APE1的表达情况。分别将顺铂处理后的细胞外泌体(EXOCDDP)和慢病毒转染细胞产生的外泌体(EXOAPE1)与A549细胞共培养48 h,观察外泌体对A549细胞顺铂敏感度的影响。敲低A549细胞内APE1后,采用APE1的功能抑制剂处理与EXOAPE1共培养的A549细胞,观察处理后A549细胞对CDDP的敏感度以及γ-H2AX蛋白变化情况。结果高表达APE1的A549细胞产生高表达APE1的外泌体。APE1能够以外泌体包裹的形式被受体细胞所吸收。将EXOCDDP和EXOAPE1分别与A549细胞共培养后,A549细胞对顺铂的敏感度明显低于对照组。采用APE1碱基切除修复功能抑制剂,能够逆转EXOAPE1所致的细胞耐药性。结论A549细胞可通过外泌体传递APE1降低受体细胞对顺铂的敏感度。     

LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 pcDNA-lincRNA-p21、空载质粒pcDNA转染A549细胞设为过表达组和空载组;稳定转染过表达组加入Notch信号通路特异性激活剂Jagged1蛋白,设为Notch激活剂组;不作处理细胞为对照组。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭情况。RT-qPCR及Western blot法检测各组Notch1、HES-1、NICD、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达。结果 过表达组培养24、48和72 h MTT实验A值均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组48 h细胞迁移率和穿膜细胞数及Notch1、HES-1、NICD、Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和Notch激活剂组,Notch激活剂组高于空载组和对照组（P<0.05）。结论 LncRNA-p21基因过表达可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其调控机制可能与抑制Notch信号通路、阻断A549细胞上皮间质转化有关。     

右美托咪定对顺铂诱导的非小细胞肺癌细胞凋亡及氧化应激的影响

目的 探讨右美托咪定(Dex)对顺铂诱导的人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的影响及其潜在机制.方法 将人非小细胞肺癌细胞系分为3组:对照组、顺铂组和Dex组.采用Western Blot法检测各组细胞中凋亡相关蛋白、细胞色素C、mTOR/ERK1/2信号分子及E-钙粘蛋白的表达,采用试剂盒法检测活性氧(ROS)的含...     

隐丹参酮通过抑制帽子依赖的翻译促进人肺癌细胞A549的凋亡

目的 探索隐丹参酮对人肺癌细胞A549中帽子依赖翻译的影响及帽子依赖翻译在隐丹参酮促A549细胞凋亡中的作用。方法 免疫印迹实验检测隐丹参酮对A549细胞中mTOR及4EBP1磷酸化的影响,随后通过m7GTP pull down实验检测隐丹参酮对A549细胞中eIF4F蛋白复合物形成的影响,最终通过免疫印迹实验、Annexin V和CCK8法检测敲低4EBP1表达前后隐丹参酮对A549细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2表达、细胞凋亡和存活的影响。结果 隐丹参酮以剂量依赖的方式抑制A549细胞中mTOR及4EBP1的磷酸化、eIF4F蛋白复合物的形成和Bcl-2蛋白的表达。细胞凋亡分析发现,对照组中,隐丹参酮显著地诱导了A549细胞的凋亡[（4.68±0.77）% vs. （31.1±4.1）%, P<0.05],但敲低4EBP1的表达显著抑制了隐丹参酮的促凋亡作用[（31.1±4.1）% vs.（8.85±1.2）%, P<0.05]。CCK8法检测结果发现,隐丹参酮显著抑制了A549细胞的存活[（1±0.09）% vs.（0.43±0.05）%, P<0.05],但敲低4EBP1的表达拮抗了EMD638683的抑存活作用[（0.43±0.05）vs.（0.87±0.06）, P<0.05]。结论 隐丹参酮通过抑制mTOR激酶的活性抑制4EBP1磷酸化,从而抑制A549细胞中帽子依赖的翻译,进而抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱发人肺癌细胞A549的凋亡。     

多西他赛联合顺铂一线治疗晚期非小细胞肺癌

目的：比较多西他赛及长春瑞滨联合顺铂一线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和不良反应.方法：67例晚期非小细胞肺癌患者随机分为2组.多西他赛组：多西他赛37.5mg/m^2,d1,8,顺铂80 mg/m^2,分为3天,d1～3.长春瑞滨组：长春瑞滨25 mg/m^2,d1,8,顺铂用法同前.结果：多西他赛组有效率50%,1年生存率46.9%,2年生存率15.6%.长春瑞滨组有效率25.7%,1年生存率31.4%,2年生存率11.4%（P＜0.05）.主要毒副作用为骨髓抑制、恶心、呕吐.结论：一线治疗晚期非小细胞肺癌多西他赛较长春瑞滨联合顺铂疗效高,生存期长.     

泰索帝每周给药联合顺铂一线治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的确定泰索帝每周给药联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的最大耐受剂量（MTD）和剂量限制毒性（DLT）,观察其疗效（RR）和安全性,并进行药代动力学研究。方法泰索帝每周给药,连用3周,休息1周,顺铂每周期的第1天给药;每28d为1个治疗周期。顺铂的剂量为75mg／m^2。泰索帝在Ⅰ期临床阶段共有4个剂量组：25mg／m^2、30mg／m^2、35mg／m^2和40mg／m^2,每个剂量组至少人选3例患者。在Ⅱ期临床阶段,根据Ⅰ期临床推荐剂量,泰索帝35mg／m^2每周给药。药代动力学为第一周期第1天和第15天抽取血样待分析。根据Ⅰ期临床研究推荐剂量,进行Ⅱ期临床研究。结果Ⅰ期临床的15例患者中,有14例可评价疗效,其中5例部分缓解,有效率为35．7％,其中位生存时间16个月（范围5-40个月）。1、2、3年生存率分别为73．3％、26．6％和20．0％。中位疾病进展时间9个月（6～14个月）。Ⅱ期临床研究的83例初治的晚期非小细胞肺癌患者共接受了216个周期的化疗,可评价者75例。有1例患者完全缓解,22例患者部分缓解,占全部人组病例的27．7％（23／83）,占可评价病例的30．7％（23／75）;其中位生存时间为10．7个月（范围3—34个月）,1年生存率为48．6％。主要不良反应为Ⅲ-Ⅳ度的粒细胞减少以及乏力、指甲毒性及液体潴留。结论泰索帝（35mg／m^2）每周给药联合顺铂（75mg／m^2）作为一线方案治疗晚期非小细胞肺癌,疗效较好,骨髓毒性较小。     

Radix Tetrastigma Hemsleyani Flavone Induces Apoptosis in Human Lung Carcinoma A549 Cells by Modulating the MAPK Pathway

Radix Tetrastigma Hemsleyani Flavone (RTHF) is widely used as a traditional herb for its detoxificationand anti-inflammation activity. Recently, several studies have shown that RTHF can inhibit growth and induceapoptosis in human cancer cell lines. However, the mechanisms are not completely understood yet. In this studywe investigated the potential effects of RTHF on growth and apoptosis in human lung adenocarcinoma A549 cellsas well as its mechanisms. A549 cells were treated with RTHF at various concentrations for different times. Invitro the MTT assay showed that RTHF had obvious anti-proliferation effects on A549 cells in a dose- and timedependentmanner. Cell morphological changes observed by inverted microscope and Hoechst33258 methodswere compared with apoptotic changes observed by fluorescence microscope. Cell apoptosis inspected by flowcytometry showed significant increase in the treatment group over the control group (P<0.01). Expression ofapoptosis related Bax/Bcl-2, caspases and MAPK pathway proteins were detected by Western blotting. Theresults showed that RTHF up-regulated the Bax/Bcl-2 ratio and cle-caspase3/9, cle-PARP expression in a dosedependentmanner. Expression of p-p38 increased, p-ERK decreased significantly and that of p-JNK was littlechanged in the RTHF group when compared with the control group. These results suggest that RTHF mightexert anti-growth and apoptosis activity against lung cancer A549 cells through activation of caspases and Bcl-2family proteins and the MAPK pathway, therefore presenting as a promising therapeutic agent for the treatmentof lung cancer.     

长春瑞滨联合顺铂与长春瑞滨联合奥沙利铂治疗晚期NSCLC的随机对照临床研究

背景与目的 长春瑞滨联合顺铂是治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的主要化疗方案之一，但副反应较重。本研究的目的是比较长春瑞滨联合顺铂与长春瑞滨联合奥沙利铂治疗晚期NSCLC的临床疗效和毒副作用。方法 126例不能手术或术后复发转移的Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者随机分组，接受长春瑞滨联合顺铂或长春瑞滨联合奥沙利铂方案，化疗2～3个周期后评价疗效。结果 长春瑞滨联合顺铂组有效率为48．4％，部分缓解率为45．2％；长春瑞滨联合奥沙利铂组有效率为42.2％，部分缓解率为40．6％，两组近期疗效比较无显著性差异（P〉0．05）。长春瑞滨联合顺铂组Ⅲ＋Ⅳ度白细胞下降25例（40．3％），长春瑞滨联合奥沙利铂组仅10例（15．6％），两组比较有显著性差异（P＜0．05）；Ⅲ＋Ⅳ度消化道反应在长春瑞滨联合顺铂组为11例（17．7％），长春瑞滨联合奥沙利铂组仅3例（4．7％），亦有显著性差异（P〈0．05）。长春瑞滨联合顺铂组发生神经毒性7例（11．7％），长春瑞滨联合奥沙利铂组有60例（93．8％），有显著性差异（P〈0．05）。结论 长春瑞滨联合顺铂和长春瑞滨联合奥沙利铂是治疗晚期NSCLC较有效的方案。与长春瑞滨联合顺铂方案相比，长春瑞滨联合奥沙利铂方案疗效相似，消化道反应及血液学毒性较轻，而神经毒性反应发生率较高。