纳米二氧化钛对小鼠心肌细胞DNA的损伤及叔丁基对苯二酚的拮抗作用

 目的  探讨纳米二氧化钛(nano-titanium dioxide,Nano-TiO2)对小鼠心肌细胞DNA的损伤作用,并进一步研究核因子NF-E2相关因子（nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2）诱导剂叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)是否可降低此种损伤。方法  30只ICR小鼠随机分为6组:对照组,Nano-TiO2 低(0.5 g/kg)、中(1 g/kg)、高(2 g/kg)剂量组,tBHQ组,tBHQ+ Nano-TiO2组。Nano-TiO2灌胃给予,tBHQ腹腔注射,均1次/天,连续7天。末次染毒后24 h处死小鼠,取新鲜心脏组织,胰酶消化法制备心肌细胞悬液,采用单细胞凝胶电泳技术检测心肌细胞DNA损伤程度。 结果  (1)对照组心肌细胞核呈圆形荧光团,强度均匀,大小较一致,无明显拖尾。不同剂量Nano-TiO2染毒后,各组均存在不同数量的DNA受损心肌细胞,出现彗星拖尾现象,且其尾部的拖尾程度及荧光强度随Nano-TiO2剂量的增加而增强。经CASP软件分析,低、中、高剂量Nano-TiO2组尾部DNA含量(tail DNA percent,TD)分别为28.45±1.70、35.08±0.81、39.94±4.46,明显高于对照组(23.96±2.59),差异有统计学意义(P<0.01),并有良好的剂量 效应关系(r=0.9947)。低、中、高剂量Nano-TiO2组彗星尾矩(olive tail moment,OTM)较对照组均有明显增加且差异有统计学意义(P<0.05),并有良好的剂量-效应关系(r=0.9886)。(2) tBHQ组心肌细胞细胞核呈圆形,无拖尾;Nano-TiO2中剂量(1 g/kg)组细胞拖尾明显,但给予tBHQ可明显降低Nano-TiO2所致的细胞核拖尾程度;与Nano-TiO2组相比,tBHQ +Nano-TiO2组两项指标TD及OTM均明显降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论  Nano-TiO2可剂量依赖性地引起心肌细胞DNA损伤,而Nrf2诱导剂tBHQ可拮抗Nano-TiO2所致心肌细胞DNA损伤。     

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的：研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3－E1甾体激素受体辅激活因子1（steroid receptor coactivator-1,SRC-1）和核受体辅抑制因子（nuclear receptor corepressor,NcoR）表达的调节作用及其机制。方法：体外培养MC3T3-E1细胞于含29／6胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的α最低必须培养基（α—minimal essential medium,α—MEM）中,给予不同浓度大豆苷原或10^-6 mol／L的雌二醇作用3d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体（estrogen receptor,ER）拮抗剂ICI182780（Faslodex,ICI,10^-7 mol／L）和雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）特异性拮抗剂（methyl—piperidino—pyrazole,MPP,10^-6 mol／L）干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果：大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^-7mol／L和10smol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2．5倍（P〈0．05）和2倍（P〈0．05）。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35％（P〈0．05）。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^-7mol／L和10^-5 mol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1．8倍（P〈0．05）和2．4倍（P〈0．05）。结论：大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1／NcoR比值。ER8参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1／NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。     

齐墩果酸对糖尿病小鼠胰岛损伤的保护作用

目的 观察齐墩果酸对糖尿病小鼠胰岛损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 建立链脲佐菌素 (STZ) 诱导的糖尿病小鼠模型,ig 给予齐墩果酸3周。实验期间监测小鼠体质量、血糖的变化,实验结束后检测小鼠血清胰岛素浓度以及血清和胰腺中超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT) 的活性以及丙二醛 (MDA) 的量。通过胰腺 HE 染色和胰岛素免疫组化分析胰岛的病理变化,应用 Western blotting 法检测胰腺组织中 NF-κB p65 和 IκBα 蛋白表达量的变化。结果 齐墩果酸能增加糖尿病小鼠的体质量,降低糖尿病小鼠的空腹血糖,升高血清中的胰岛素浓度,显著提高血清和胰腺中 SOD 和 CAT 的活性,MDA 水平显著降低。HE 染色等形态学检测显示齐墩果酸能减轻小鼠胰岛萎缩,增加胰岛β细胞的数目。Western blotting 结果显示齐墩果酸增加胰腺组织内 IκBα 的表达,降低 NF-κB p65 蛋白表达。结论 齐墩果酸能减轻 STZ 诱导的胰岛损伤,可能是通过减轻氧化应激水平,减弱胰岛内 NF-κB 信号通路的过度激活而发挥保护作用。     

逆转录病毒载体介导针对RANKL的重组蛋白对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨重组蛋白核因子-κB(NF-κB)受体活化因子(RANK) -Fc对小鼠肝缺血再灌注损伤保护作用及可能的机制.方法 据不同处理将小鼠随机分为无血清培养基对照组( Sham组);目地基因病毒组(RANK-Fc组);空载体病毒组(eGFP组),各组均经尾静脉将2.5ml溶液(含或不含病毒)6 s内注入.3d后RANK-Fc及eGFP组建立70％肝缺血再灌注损伤模型,热缺血90 min后再灌注不同时间,Sham组行假手术.各组均在1、3、6及24h剖杀小鼠5只,留取血清及肝组织标本.RT-PCR法检测eGFP mRNA表达,Western印迹检测RANK-Fc蛋白表达.HE染色组织学变化及肝脏酶学水平用于肝损伤判断,Western印迹及免疫组织化学方法测定NF-κB的活化程度.c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化水平亦经Western印迹检测.酶联免疫吸附测定法定量检测组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平.细胞凋亡情况由TUNEL法判断.相同时间点各组间比较采用单因素方差分析,两两比较用t检验.结果 应用流体力学体内转染方法,RANK-Fc及eGFP在肝脏成功表达.相同时间点RANK-Fc组[ALT(U/L):1149±109、1574±258、2778±217、461±65;AST( U/L):1027±276、1467±236、2208±378、506±160]肝脏酶学水平均较eGFP组[ALT(U/L):2828±345、5194±944、8403±806、969±147;AST(U/L):2770±343、4778±684、8050±1160、977±115]改善(P＜0.01).与eGFP组相比,RANK-Fc组小鼠肝细胞NF-κB p65(t=6.726)及JNK(t =6.713)表达水平降低,促炎症介质TNF-α[(235±56)比(527±109) pg/ml,t=4.779]、IL-6[(303±73)比(702±126) pg/ml,t =5.482]水平降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01),免疫组织化学检查显示细胞核NF-κB阳性染色细胞数减少,HE染色显示肝组织学病变减轻,TUNEL染色阳性细胞显著减少.结论 RANK-Fc对小鼠缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制至少通过部分阻断NF-κB介导的炎症反应及JNK介导的促凋亡而实现.     

螺旋藻对辐射小鼠损伤的保护作用研究

目的 研究螺旋藻对^60Co-γ射线对辐射小鼠损伤的保护作用。方法对各组小鼠经口给予小鼠不同剂量螺旋藻14d，以^60Co-γ射线一次性照射后，测定小鼠的白细胞数、骨髓有核细胞数、骨髓细胞微核率、小鼠血中超氧化物歧化酶活性、小鼠血清溶血素。结果与辐射对照组比较，螺旋藻在中剂量组能提高辐照后第3天的小鼠外周血白细胞数（P〈0．05）、提高小鼠骨髓有核细胞数（P〈0．05）、提高照射后第7天辐射损伤模型小鼠血中超氧化物歧化酶活性（P〈0．05）、提高照射后第14天辐射损伤模型小鼠血清溶血素（P〈0．05），在高剂量组能提高辐照后第3天和第14天的小鼠外周血白细胞数（P〈0．05）、提高小鼠骨髓有核细胞数（P〈0．01）、降低小鼠骨髓细胞微核率（P〈0．05）、提高照射后第7天辐射损伤模型小鼠血中超氧化物歧化酶活性（P〈0．01）、提高照射后第14天辐射损伤模型小鼠血清溶血素（P〈0．05）。结论螺旋藻可增强小鼠机体抗氧化酶活性，对其血液系统、造血系统、免疫系统具有一定的辐射防护作用。     

雌二醇对小鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的：探讨雌二醇对小鼠心肌缺血再灌注损伤急性期的保护能力,并分析其可能机制。方法：采用小鼠心肌急性缺血再灌注模型,利用心脏B超及心肌TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）染色研究雌二醇对小鼠心肌缺血再灌注急性期心肌收缩能力及心梗面积的影响作用,Western blot法检测雌二醇对心肌巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）及其下游AMP激活的蛋白激酶（AMPK）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）磷酸化水平的作用。结果：雌二醇可改善心肌缺血再灌注损伤后小鼠左室射血分数（EF）及短轴缩短率（FS）,差异有统计学意义（P ＜0.05）。雌二醇作用后缺血再灌注心肌MIF水平升高,AMPK、ACC磷酸化水平升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论：雌二醇能够保护小鼠心肌缺血再灌注损伤急性期的心脏功能,这种保护作用可能通过MIF-AMPK信号通路实现。     

藏红花素对大鼠心肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究藏红花素(crocin)对缺氧损伤心肌细胞的保护作用,并探讨其作用机制.方法:采用原代培养心肌细胞,建立心肌细胞化学缺氧损伤实验模型.应用生物化学方法测定心肌细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;蛋白质印迹法分别检测心...     

低氧预适应对阿霉素致心肌细胞损伤的保护作用

目的观察低氧预适应(HPC)对阿霉素致心肌细胞损伤的保护作用。方法将培养的心肌细胞随机分为3组:对照组、阿霉素组、HPC+阿霉素组。MTT法测定心肌细胞存活率;试剂盒检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)半定量检测核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达量的改变。结果与对照组相比,阿霉素组心肌细胞存活率显著下降(P0.01),细胞LDH漏出量显著增加(P0.01),NF-κB蛋白表达水平增高显著(P0.01);与单纯阿霉素组相比,低氧预适应组心肌细胞存活率显著升高(P0.01),细胞LDH漏出量显著降低(P0.01),NF-κB蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论阿霉素导致心肌细胞氧化损伤,低氧预适应可能通过抑制NF-κB蛋白表达水平对其起保护作用。     

类固醇受体辅活化子-1基因敲除小鼠的繁殖与筛选

目的 繁殖和鉴定SRC-1基因敲除小鼠.方法 将所引进的雄性野生型小鼠和雌性SRC-1基因敲除小鼠进行交配繁殖,繁殖成功后其子代均为杂合子,杂合子和杂合子再交配就可以得到野生型、杂合型及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雌性和雄性纯合子,其子代就均为纯合子.结果 SRC-1小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦成功获得了较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及筛选方法,可以获得较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.     

抑制铁死亡可减轻脓毒症小鼠的心肌损伤：脂钙蛋白-2的作用

目的 观察铁死亡在盲肠结扎与穿孔（CLP）法诱导的脓毒症小鼠心肌损伤中的作用,并探讨脂钙蛋白-2（Lcn2）在铁死亡中的可能作用。方法 选取8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用CLP法诱导脓毒症心肌损伤模型。小鼠随机分为3组（10只/组）：假手术组、脓毒症组（CLP,小鼠接受CLP手术）、脓毒症+铁死亡抑制剂Ferrostain-1组（CLP+Fer-1,小鼠腹腔注射浓度为5 mg/mL的Fer-1 5 mg/kg,1 h后接受CLP手术）。各组小鼠术后24 h通过超声心动图检测小鼠心功能。H&E染色观察心肌损伤,透射电镜观察心肌纤维细微结构和线粒体的变化;ELISA法测定血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;组织铁试剂盒测定心肌组织铁含量的变化;Western blot法检测心肌组织中Lcn2蛋白和铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和铁死亡抑制蛋白1（FSP1）的表达变化。结果 与假手术组相比,CLP术后24 h,脓毒症小鼠心脏收缩与舒张功能减弱,左心室射血分数（LVEF%）、左心室缩短分数（LVFS%）和左心室舒张末期内径（LVIDd）降低（P<0.05）;左心室收缩期末期内径（LVIDs）升高（P<0.05）。与CLP组相比,CLP+铁死亡抑制剂Fer-1组LVEF%、LVFS%和LVIDd升高（P<0.05）;LVIDs降低（P<0.05）。光镜下观察到CLP小鼠心肌纤维排列不整齐,部分变性,有炎症细胞浸润,间质水肿,横纹模糊,红细胞渗出。透射电镜观察到部分线粒体嵴减少,外膜破裂,部分线粒体变小,膜密度增高。CLP+Fer-1组小鼠心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻。与假手术组相比,CLP组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、Lcn2蛋白表达升高（P<0.01）,GPX4、FSP1蛋白表达降低（P<0.01）。与CLP组相比,CLP+Fer-1组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、和Lcn2蛋白表达降低（P<0.05）;GPX4、FSP1蛋白表达升高（P<0.05）。结论 来源于GPX4、FSP1不同途径的铁死亡参与CLP引起的脓毒症性心肌损伤的发生,抑制铁死亡可减轻脓毒症心肌损伤,Lcn2可能参与其中。     

SU5416对小鼠急性肺损伤后肺纤维化的影响研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）受体抑制剂Z-3-[（2,4-二甲基吡咯-5-烃基）亚甲基]-2-吲哚满酮（SU5416）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）后肺纤维化的影响。方法90只雄性C57BL/6小鼠随机分为LPS模型组（MG组）、SU5416干预组（TG组）和正常对照组（CG组）,每组30只。MG组及TG组小鼠经尾静脉注射0.5mlLPS（5mg/kg）建立小鼠ALI模型;CG组以等体积0.9%氯化钠注射液代替。30min后,TG组小鼠即予腹腔注射0.5mlSU5416（50mg/kg）,MG组和CG组小鼠则腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液。于第7、14、28天分别处死3组小鼠各10只;行HE及Masson染色观察小鼠肺损伤改变;检测肺组织匀浆中羟脯氨酸水平;免疫组化法测定肺组织VEGF、CD31表达水平。结果MG组小鼠第7天肺损伤明显,肺呈纤维化改变,第28天纤维化进一步加重;同一时间点,MG组及TG组小鼠肺损伤评分、羟脯氨酸水平、CD31及VEGF表达水平均高于对照组（均P＜0.05）,而TG组小鼠上述指标均低于MG组（均P＜0.05）。结论SU5416可减轻LPS诱导小鼠ALI后肺纤维化,其可能通过抑制VEGF、CD31表达发挥作用。     

法舒地尔对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致小鼠败血症继发急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用及机制?方法:C57BL/6小鼠随机分为对照(Control)组?LPS模型组?LPS+fasudil(10 mg/kg)组?LPS + 地塞米松(dexamethasone,Dex,5 mg/kg)组?造模后观察不同时间点各组生存率,6 h处死小鼠收集血清?支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)?肺组织,ELISA测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)?白细胞介素(IL)-1β?IL-10水平,检测BALF中细胞计数和蛋白浓度,HE染色观察各组肺组织病理改变,湿干重比评估肺含水量,ELISA测定肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量?结果:fasudil可显著改善动物生存率?延长生存时间;缓解肺组织炎性损伤及肺水肿程度,降低MPO含量,下调血清中促炎细胞因子IL-1β?TNF-α水平,上调抗炎细胞因子IL-10表达?结论:fasudil可有效缓解LPS所致的小鼠ALI,其作用可能与减轻受累肺组织炎症反应相关?     

痰热清注射液及药效成分黄芩苷对心梗模型小鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨痰热清及其药效成分黄芩苷对小鼠心肌梗死后心肌细胞损伤的保护作用。方法将小鼠随机均分为假手术组、心梗模型组和痰热清高、中、低剂量组,以及高剂量组痰热清对应的黄芩苷含量100 mg/kg作为药效成分组。分别测定小鼠24 h心肌病理形态学检查、梗塞面积、心肌细胞凋亡数目比例、HMGB1、TLR4、NF-kB的表达活性、IL-6、TNF-α、MDA、caspase-3等指标。结果和心梗模型组相比,痰热清高剂量组与药效成分黄芩苷组均能显著改善心肌病理,降低梗死边缘区的心肌细胞凋亡率和梗死区面积,下调心梗小鼠心肌组织中HMGB1/TLR4/NF-kB信号通路以及IL-6、TNF-α、MDA、caspase-3的表达。结论痰热清与其药效成分黄芩苷具有类似的心脏保护药效,其机制涉及改善HMGB1/TLR4/NF-kB信号通路及下游炎性因子,氧化应激及凋亡因子的表达,从而降低小鼠心肌梗死后心肌细胞损伤。     

香芹酚预处理减轻小鼠心肌缺血再灌注时氧化应激及细胞凋亡

目的探索香芹酚（CAR）对小鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其相关机制。方法结扎雄性C57 BL/6小鼠冠状动脉左前降
支45 min后解除结扎线构建急性心肌缺血再灌注（I-R）损伤模型。动物被随机分为5组：假手术组（n=13）、Vehicle组（DMSO
in saline +I-R组）（n=13）、CAR组（CAR+I-R组）：分为20、40及60 mg/kg组（每组n=13）。CAR于缺血前15 min给药。缺血45 min
再灌注2 h后检测心肌组织氧化应激水平及细胞凋亡率。结果同Vehicle组相比,CAR组心肌缺血再灌注后心肌梗死面积、氧
化应激水平及细胞凋亡率显著降低（P<0.05）Vehicle 组及CAR组DCFDA强度分别为（158.21±6.43）%及（123.47±9.82）%。
Vehicle 组及CAR组Mn-SOD活性分别为0.67±0.16 及1.12±0.17 U/mg protein。Vehicle 组及CAR组过氧化氢酶活性分别为
0.14±0.09及0.63±0.07 U/mg protein。结论CAR可通过降低氧化应激水平及心肌细胞凋亡率缓解小鼠心肌缺血再灌注损伤。
     

香芹酚预处理对心肌缺血再灌注时线粒体损伤的作用

目的 探索香芹酚(CAR)对心肌缺血再灌注(I-R)时线粒体损伤的作用.方法 C57 BL/6小鼠冠状动脉左前降支结扎45 min,解除结扎2h构建心肌I-R损伤模型.将小鼠随机分为3组(每组n=12):假手术组、Vehicle (DMSO in saline)+ I-R组、CAR(60 mg/kg)+ I-R组.Vehicle或CAR于冠脉结扎前15 min给药.心肌缺血45 min再灌注2h后,检测心肌梗死面积,并测定平均线粒体面积、线粒体分裂百分比、线粒体基质微粒及脂滴数量以评估线粒体损伤情况.结果 与假手术组相比,Vehicle组心梗面积显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与Vehicle组相比,CAR(60 mg/kg)预处理可显著减少心梗面积,差异有统计学意义(P＜0.05).与Vehicle组相比,CAR预处理可显著降低平均线粒体面积、线粒体基质微粒数、线粒体周围脂滴数和线粒体分裂百分比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CAR可通过减轻心脏组织中线粒体损伤降低小鼠心肌I-R后心梗面积.     

别嘌醇改善急性心肌梗死患者心肌再灌注损伤的临床研究

目的 探讨别嘌醇预处理对急性心肌梗死(AMI)患者行急诊经皮冠状动脉介入手术(PCI)后心肌再灌注损伤的影响.方法 对拟行急诊PCI的160例AMI患者,分为别嘌醇组和对照组各80例,治疗3个月.分别测定术前、术后心肌酶谱及心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)、超氧化物歧化酶(SOD),以及术后24 h内恶性心律失常发生率,常规检测术后3个月心功能、血脂、肝肾功、尿酸等指标.结果 与对照组比较,别嘌醇组心肌酶谱及cTnⅠ明显降低、SOD活力增加、术后24 h恶性心律失常发生率降低、术后3个月时左心功能明显改善(均P＜0.05),但两组血尿酸均降低差异无统计学意义(P＞0.05),均无肝肾功能异常.结论 别嘌醇预处理能减少AMI患者再灌注损伤中氧自由基的生成,降低恶性心律失常发生,减轻缺血心肌再灌注损伤.