MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145,miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异;不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后,Q-PCR检测miR-145表达变化;miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后,CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,Western blot检测ADAM19蛋白表达;Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后,SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,再用5 μmol/L吉非替尼干预,Western blot检测ADAM19蛋白的表达;采用siRNA抑制ADAM19表达,再用5 μmol/L吉非替尼干预,CCK8检测细胞活力;采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法,观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示,与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较,肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低;5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后,miR-145表达显著上调;转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区;Western blot结果显示,5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后,两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞,之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗,ADAM19蛋白表达下调;siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达,再给予5 μmol/L吉非替尼治疗,CCK8结果显示,两种细胞的细胞活力显著降低;过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后,显著抑制皮下肿瘤生长,并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性,其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域,从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

高表达HMGB1肺癌细胞系的筛选及意义

背景与目的 在人肺鳞癌细胞株YTMLC-9、人肺腺癌细胞株A549、人大细胞肺癌细胞株L9981及人小细胞癌细胞株NCI-H446中筛选高表达HMGB1的细胞株,作为人肺癌细胞HMGB1基因研究的理想材料.方法 采用实时荧光定量PCR和Western blot方法对人肺癌细胞HMGB1基因在4株细胞中的mRNA和蛋白水平的表达进行检测,筛选出高表达HMGB1基因的人肺癌细胞株.结果 人肺鳞癌细胞株YTMLC-9、人肺腺癌细胞株A549、人大细胞肺癌细胞株L9981及人小细胞癌细胞株NCI-H446中均有HMGB1基因表达,其中人大细胞肺癌细胞株L9981表达水平最高,mRNA是表达量最低的人肺腺癌细胞株A549mRNA表达量的10.3倍;人大细胞肺癌细胞株L9981 HMGB1蛋白表达水平最高,与其它3种人肺癌细胞株相比有统计学差异(P<0.001).结论 人大细胞肺癌L9981细胞株为HMGB1高表达细胞株,可作为进行肺癌细胞中研究HMGB1的实验材料.     

培美曲塞对不同miR-21表达水平人肺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的 检测不同miR-21表达水平的人肺癌细胞对培美曲塞的药物敏感性,并探讨可能作用机制。方法 采用Annexin V-EGFP荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测培美曲塞对不同miR-21表达水平的A549人肺癌细胞凋亡诱导作用,级联酶底物显色法检测caspase-3的活化状态,蛋白免疫杂交法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、 Bax的表达水平变化。结果 20μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导高表达miR-21的A549人肺癌细胞（A549-21H0）和低表达miR-21的A549细胞（A549-21L0）的凋亡,且A549-21L0处于细胞凋亡晚期,而A549-21H0处于细胞凋亡早期。5μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导65.3％的A549-21L0 细胞早期凋亡,仅诱导2.8％的A549-21H0细胞早期凋亡。5μmol／L培美曲塞作用6h即可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应超过2倍（P＜0.01）;在9h时活化效应最强,活化效应超过7倍（P＜0.01）;18h后活化效应超过6倍（P＜0.01）;至24h时活化效应仍在5倍以上（P＜0.01）。同样条件下,5μmol／L培美曲塞作用18h才引起A549-21H0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应接近3倍（P＜0.01）,至24h活化效应在4倍以上（P＜0.01）。5μmol／L培美曲塞作用于A549-21L0细胞9h即可引起Bax表达水平显著性升高和Bcl-2表达水平明显下降。结论 A549-21L0人肺癌细胞对培美曲塞诱导的细胞凋亡具有更高的敏感性。培美曲塞可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,并可通过调控Bax和Bcl-2表达水平诱导凋亡,这种效应具有一定的时间-效应关系。     

1,25二羟基维生素D3对肺腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的研究1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2VitD3]对肺腺癌细胞株A549生长及凋亡的影响.方法应用流式细胞仪、免疫组织化学和RT-PCR等方法观察1,25二羟基维生素D3对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期、调控细胞周期基因和调控凋亡基因表达水平的影响.结果1 μmol/L的1,25二羟基维生素D3对A549细胞的生长有抑制作用,1 μmol/L的1,25二羟基维生素D3作用后A549细胞G1期比例由59.7%增加至73.2%,P=0.001;S期比例由26.4%降至21.1%,P=0.018;细胞凋亡率由2.6%增至7.2%,P=0.015;可明显上调Fas/FasL的表达量,下调bcl-2表达量;可抑制细胞周期蛋白D1的表达量由0.762减至0.207,P=0.001;同时抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4的表达量由0.642减至0.129,P=0.002.但较低浓度的1,25二羟基维生素D3上述作用不明显.结论1 μmol/L的1,25二羟基维生素D3可通过多种途径发挥抗肺腺癌作用.     

FTY720对耐顺铂非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测芬戈莫德（fingolimod,FTY720)对耐顺铂非小细胞肺癌细胞株A549增殖及凋亡的影响。方法:应用CCK-8检测耐顺铂A549细胞株在FTY720不同浓度（5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L和20 μmol/L）作用不同时间（24 h和48 h）后的增殖活性。流式细胞仪检测不同浓度（5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L）作用不同时间（24 h和48 h）后耐顺铂A549细胞凋亡情况,Western blot 法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:耐顺铂A549细胞的增殖抑制程度和促进凋亡的程度均与FTY720呈时间依赖及剂量依赖性。结论:FTY720以时间依赖及剂量依赖模式对耐顺铂A549细胞呈现出抑增殖及促凋亡作用。     

ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究

目的 通过对ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究，为下一步研究打下基础。方法利用细胞集落形成实验研究肺癌细胞株A549、NCI—H446的放射敏感性差异，并结合免疫荧光实验和激光共聚焦扫描（LSCM）技术来探讨两细胞株中ATM蛋白的表达差异与放射敏感性之间的关系。结果集落形成实验中，在接受2、4、6、8Gy剂量照射时，A549和NCI—H446两肺癌细胞株的存活分数分别为81．0％、32．4％、12．0％、3．5％和52．4％、17．0％、3．2％、0．7％。ATM蛋白定位于细胞浆和胞核；利用LSCM分析两细胞株中ATM蛋白的表达差异，A549细胞ATM蛋白荧光强度（71．188＋13．379）较NCI-H446细胞（47．478±19．032）明显增强（P〈0．0001），有统计学意义。结论两肺癌细胞株A549和NCI-H446具有放射敏感性差异，ATM蛋白在两细胞株中的表达亦有差异显著性，表明其表达量可能与放射敏感性呈负相关。     

沉默CXCR4的表达逆转肺癌细胞顺铂耐药

目的:探讨沉默CXCR4对肺癌细胞顺铂耐药的影响,并研究其分子作用机制。方法:利用RT-qPCR测定肺癌耐药（A549/DDP）及药物敏感细胞株（A549）中CXCR4 mRNA的表达水平;利用LipofectamineTM 2000将siRNA-CXCR4转染至肺癌耐药细胞株中,RT-qPCR及蛋白质印迹法（Western blot）验证siRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率;利用CCK-8法检测沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的增殖活性;利用流式细胞仪测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的凋亡率;利用MTT法测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性;利用Western blot实验测定沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR实验结果显示,肺癌耐药细胞株A549/DDP中CXCR4 mRNA的表达量显著高于药物敏感细胞株（P＜0.01）;体外转染siRNA-CXCR4可明显下调A549/DDP细胞株中CXCR4的表达（P＜0.001）;CCK-8实验结果显示,沉默CXCR4的表达抑制了A549/DDP细胞的增殖活性（P＜0.01）;流式细胞仪实验结果显示,沉默CXCR4的表达促进了A549/DDP细胞凋亡（P＜0.01）;MTT实验结果显示,沉默CXCR4的表达增加了A549/DDP细胞对顺铂的敏感性（P＜0.01）;Western blot实验结果显示,沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默CXCR4的表达抑制肺癌耐药细胞增殖、促进凋亡,逆转肺癌细胞顺铂耐药,CXCR4正向调控CYP1B1的表达,可能是CXCR4逆转肺癌细胞顺铂耐药的作用机制。     

Beclin 1 在 MG132 抗 OVCAR3 卵巢癌细胞中的变化及作用研究简

目的：研究Beclin1在MG132抗OVCAR3卵巢癌细胞中的变化及作用。方法：OVCAR3细胞经小同浓度MG132处理24h后,MTT法检测细胞存活率,Western blot法检测自噬相关Beclin1蛋白的变化。采用细胞转染技术过表达卵巢癌细胞中Beclin1,MG132处理24h后,MTT法检测细胞存活率;Hoechst33258进行核染色观察染色质浓缩和核碎片等凋亡特征性形态学改变。采用shRNA技术下调OVCAR3细胞的Beclin1表达,MG132处理细胞,AO染色观察酸性自噬泡的形成。结果：与空白对照组比较,1、2、5和10μmol/L浓度的MG132作用24h均能明显抑制OVCAR3细胞的生长（均P〈0．05）,5μmol／L浓度接近半抑制率;而且5μmol／L和10μmol／L浓度的MG132作用24h能显著诱导OVCAR3细胞的Beclin1蛋白水平下降（P=0．001）。与卒质粒转染组对比,过表达Beclin1的卵巢癌细胞在MG132处理后核的凋亡明显增加;细胞存活率明显降低,（P=0．00089）。下调卵巢癌细胞中Beclin1表达后,MG132诱导的酸性囊泡蓄积无改变。结论：MG132使OVCAR3细胞中Beelin1降低,Beclin1具有增强MG132抗OVCAR3的作用,但该怍用与自噬无关。     

淫羊藿苷通过IL-6/STAT3通路逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的作用机制研究

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对A549/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用及对白细胞介素-6(IL-6)和信号传导子及转录激活子3(STAT3)信号通路的调节。方法 第4代对数生长期的A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组和ICA组，MTT法检测不同浓度ICA对细胞增殖率的影响。采用不同浓度DDP及50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞，MTT法检测ICA对A549/DDP细胞化疗敏感性的影响。采用4μg/mL DDP和50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Transwell试验检测细胞侵袭能力，qRT-PCR检测细胞中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP) mRNA相对表达量，蛋白印迹法检测IL-6、STAT3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。结果 细胞增殖率随ICA浓度的增加而降低(P<0.05)。与单独使用不同浓度DDP处理A549/DDP细胞比较，50和100μmol/L ICA处理提高细胞对DDP的敏感性，降低DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)(P&...     

肺癌细胞中survivin与P53的相关性

目的：观察survivin特异性小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）对P53野生型和乃3缺失型肺癌细胞株的生长抑制作用，分析肺癌细胞中survivin与乃3的相关性。方法：以化学合成的survivinsiRNA转染丹3野生型肺癌细胞株A549和P53缺失型肺癌细胞株H1299，用MTF法检测转染前后肺癌细胞的增殖情况，流式细胞术分析细胞周期和凋亡的改变，半定量RT—PCR检测转染对survivinmRNA表达的影响，Westernblotting检测survivin、PARP、P21、P53等蛋白表达的变化。结果：siRNA转染前A549细胞中survivin表达量明显低于H1299细胞（P〈0．05）。SurvivinsiRNA转染组两种细胞survivin蛋白及RNA表达水平均显著低于对照组和无关干扰组（P〈0．01）。SurvivinsiRNA对A549和H1299细胞生长抑制作用均呈浓度依赖性（P〈0．05），但对H1299细胞的抑制起效晚于A549，且抑制程度低于A549细胞。转染后A549和H1299细胞均有G1期比例增加和S期比例相应地减少，H1299细胞的变化更为显著。A549细胞有一定比例出现凋亡，PARP发生了裂解，P53、P21蛋白表达增加，而H1299细胞中上述指标的变化却不明显。结论：P53野生型A549细胞内源性survivin表达明显低于P53缺失型H1299细胞；抑制survivin能上调P53蛋白表达，其对A549细胞的生长、凋亡和P21等蛋白表达的影响明显强于H1299细胞；提示survivin与P53之间可能存在着相互抑制作用。     

c-Myc down-regulation is involved in proteasome inhibitor-mediated enhancement of radiotherapeutic efficacy in non-small cell lung cancer

In this study, the effect of MG132 (carbobenzoxyl-leucinyl-leucinyl-leucinal-H) at a low dose on radiotherapeutic efficacy and its accurate mechanism of radiosensitization were investigated in human non-small cell lung cancer. The effect of MG132 on ionizing radiation (IR)-induced cytotoxicity, cell proliferation and survival of A549 cells was evaluated. The protein expression modulated by MG132 and IR were inspected by Western blot analysis. To determine in vivo radiotherapeutic efficacy, tumor growth delay was analyzed in a A549 tumor-bearing xenograft mouse model after single or repeated treatment of MG132 and/or IR. Induction of apoptosis and change of c-Myc expression in the tumor tissue was explored by histological analysis. MG132 at a non-toxic dose enhanced the radiation-induced cytotoxicity of A549 cells, accompanying a significant decrease of c-Myc expression. Suppression of c-Myc expression by small interfering RNA (siRNA) displayed enhancement of radiosensitivity similarly to MG132 treatment. Tumor growth in the xenograft mice was markedly delayed by systemic administration of MG132 combined with IR. In vivo down-regulation of c-Myc and increased induction of apoptosis were simultaneously observed in the tumor tissues followed by combinational treatment of MG132 and IR. The results reveal a novel mechanism for proteasome inhibitor-mediated radiosensitization in which c-Myc down-regulation is involved.     

熊果酸通过HGF/c-met通路逆转肺癌A549细胞上皮间质转化及血管生成

目的:探索熊果酸抑制由肝细胞生长因子(HGF)诱导肺癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)及血管生成的作用机制研究。方法:利用CCK-8、侵袭实验、Western blot实验和小管形成实验研究熊果酸对HGF诱导的肺癌细胞增殖、细胞侵袭、EMT、管腔形成能力和相关信号通路分子表达的影响。结果:熊果酸能显著抑制肺癌A549细胞增殖,其作用肺癌A549细胞24 h的IC₅₀值为31.75μmol/L; HGF能使肺癌细胞穿透小室滤膜的数量显著增多(P<0.01),加入熊果酸作用后,肺癌细胞穿透小室滤膜的数量又显著降低(P<0.01);HGF能诱导肺癌EMT的形成(P<0.01),熊果酸则能抑制肺癌EMT形成(P<0.01);HGF能使小管形成明显增加(P<0.01),而熊果酸则能明显抑制小管的形成(P<0.01);此外,我们还研究了熊果酸对相关信号通路的影响,发现熊果酸能显著抑制HGF激活的HGF/c-met信号通路。同时,我们使用c-met抑制剂SU11274进一步研究其...     

Entinostat影响NK细胞对非小细胞肺癌杀伤作用的体外研究

  目的  观察Entinostat对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞A549和HCC-827表面NKG2D配体表达的影响，比较经Entinostat处理前后A549和HCC-827细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性。  方法  通过MTT法检测Entinostat对A549和HCC-827细胞增殖的影响，流式细胞术检测NKG2D配体表达的变化，RT-PCR检测配体在mRNA水平的变化，并用ELISA检测细胞培养上清中可溶性MICA的含量。乳酸脱氢酶释放实验检测Entinostat作用后的A549和HCC-827细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性。  结果  Entinostat对A549和HCC-827细胞的生长抑制作用具有时间-剂量依赖性。以0.5、1 μmol/L Entinostat诱导A549和HCC-827细胞48h后，细胞表面NKG2D配体表达水平升高，MICA和MICB的mRNA转录水平升高。1 μmol/L Entinostat提高了A549细胞培养上清中可溶性MICA表达水平。0.5、1 μmol/L Entinostat增强了HCC-827细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性。  结论  Entinostat通过上调NSCLC NKG2D配体的表达，提高NK细胞对NSCLC的杀伤作用，为探讨NSCLC的治疗提供了新的方法和理论依据。      

凋亡抑制因子（ARC）对肺癌细胞侵袭能力及对Akt蛋白磷酸化的影响

目的:探讨含有Caspase富集功能域的凋亡抑制因子（ARC）对肺癌细胞侵袭能力及对细胞中蛋白激酶B（Akt）蛋白磷酸化的影响。方法:人正常肺细胞MRC-5和肺癌细胞A549、SPC-A1、H322经细胞蛋白提取后,Western blot检测细胞中ARC表达水平。把ARC小干扰RNA组（ARC siRNA组）、siRNA对照组（siRNA-NC组）转染至人肺癌细胞中,同时设置未转染组（只加入转染试剂）,培养48 h后,Western blot检测细胞中ARC、Akt、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达水平,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果:人肺癌细胞A549、SPC-A1、H322中ARC表达水平明显高于正常人肺细胞MRC-5（P＜0.01）。肺癌细胞A549中ARC表达水平最高,后续选用A549细胞继续研究。ARC siRNA组细胞侵袭能力及细胞中ARC、p-Akt、MMP-2表达水平均明显低于未转染组（P＜0.01）。siRNA-NC组细胞侵袭能力及细胞中ARC、p-Akt、MMP-2表达水平与未转染组相比差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论: ARC在肺癌细胞中表达上调,干扰ARC后肺癌细胞的侵袭受到抑制,细胞中Akt磷酸化水平降低。     

miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列（mimics-NC）、CXCR4过表达质粒（pcDNA3.1-CXCR4）、pcDNA3.1空载质粒（Vector）转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组（转染无义序列）、mimics组（转染miR-139-5p mimics）、mimics+Vector组（共转染miR-139-5p mimics和空载质粒）和mimics+CXCR4组（共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒）,另设置空白对照组（blank）。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC50值和耐药指数（resistance index,RI）;qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC50值分别为（208.87±27.89）μmol/L和（31.66±6.30）μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低（P＜0.05）,而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT等蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。     

吸烟对血清POLD4 mRNA表达水平的影响北大核心

目的:探讨吸烟对DNA聚合酶polδ最小亚基POLD4 mRNA表达水平的影响。方法:于2018年01月至2018年05月收集我院无吸烟患者10例,轻度吸烟患者5例,中度吸烟患者8例,重度吸烟患者10例的血清各5 mL。标本经处理后通过RT-PCR检测polδ聚合酶各亚基POLD4、POLD1、POLD2、POLD3及DNA修复相关蛋白XPA、XPC的mRNA相对表达水平。结果:相对于无吸烟组,吸烟组POLD4 mRNA表达水平总体呈现下降趋势,尤其轻度吸烟组下降最明显,同为DNA聚合酶polδ催化亚基的POLD1及POLD3亚基的mRNA表达水平总体也呈下降趋势,但亚基POLD2 mRNA表达水平却呈反向增高。进一步对比同为DNA修复蛋白的XPA mRNA表达水平同POLD4类似吸烟组呈现出下降,尤其是轻度、中度吸烟组明显,而另一DNA修复蛋白XPC mRNA总体水平并未受吸烟影响,但亚组分析显示重度吸烟组表达水平下降。结论:吸烟可导致血清POLD4 mRNA表达水平下降,可能是导致肺癌形成的一个原因。     

丙泊酚抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化及其机制探讨

目的:探究丙泊酚对白细胞介素-6（IL-6）诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化（EMT）的作用及机制。方法:将A549细胞随机分成四组:对照组、IL-6组（50 ng/ml重组IL-6蛋白）、IL-6+丙泊酚低剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和5 μmol/L丙泊酚）、IL-6+丙泊酚高剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和10 μmol/L丙泊酚）。MTT法检测细胞活力，Transwell检测细胞迁移情况，Real-time PCR方法检测EMT相关基因（E-cadherin、Vimentin和Snail1）mRNA的表达水平，Western blot检测EMT相关蛋白及JAK2和STAT3的磷酸化表达水平。使用0.5 μmol/L STAT3激活剂colivelin处理细胞，检测其对丙泊酚调节的IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响。结果:与对照组相比，IL-6组中细胞的活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均增加（P均<0.05）；与IL-6组相比，IL-6+丙泊酚组中细胞活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均降低（P均<0.05），这些变化均具有剂量依赖性。STAT3激活剂能够减弱丙泊酚对IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响（P均<0.05）。结论:丙泊酚能够抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞EMT进程，这种作用是通过抑制JAK2/STAT3的活化发挥作用的。     

Proteasome inhibition by MG132 induces growth inhibition and death of human pulmonary fibroblast cells in a caspase-independent manner

MG132 as a proteasome inhibitor that can induce apoptotic cell death in various cell types including lung cancer cells. We investigated the cellular effects of MG132 on human pulmonary fibroblast (HPF) cells in relation to cell growth inhibition and death, and described the molecular mechanisms of MG132 in HPF cell death. This agent dose-dependently inhibited the growth of HPF cells with an IC50 of approximately 20 μM at 24 h and induced cell death accompanied by the loss of mitochondrial membrane potential (MMP; ?Ψm) and an increase in caspase-3 and -8 activities. MG132 increased intracellular ROS levels and GSH-depleted cell numbers. However, all the tested caspase inhibitors intensified HPF growth inhibition by MG132 and caspase-9 inhibitor also enhanced cell death and MMP (?Ψm) loss. Moreover, the administration of Bcl-2 siRNA augmented HPF cell death by MG132 whereas p53, Bax, caspase-3 and -8 siRNAs did not strongly affect cell death. In addition, each caspase inhibitor and siRNA differently affects ROS levels including O2?- regardless of cell growth inhibition and cell death levels. Caspase-8 and -9 inhibitors increased the number of GSH-depleted cells in MG132-treated HPF cells. In conclusion, MG132 induced growth inhibition and death in HPF cells in a caspase-independent manner. The growth inhibition and death of HPF cells by MG132 and/or each caspase inhibitor or apoptosis-related siRNA were not tightly related to the changes in ROS levels.