高危人乳头状瘤病毒感染宫颈癌患者miR-34a-5p表达及意义

摘 要：［目的］ 探讨高危人乳头状瘤病毒（high risk human papillomavirus,HR-HPV）感染宫颈癌患者组织及血清miR-34a-5p的表达以及血清miR-34a-5p对宫颈癌的诊断价值。［方法］ 采用RT-PCR检测70例HR-HPV阳性宫颈癌组织和癌旁组织、100例HR-HPV阳性宫颈癌患者血清、80例HR-HPV阳性宫颈上皮内瘤病变(CIN)患者血清、80例健康体检者血清中miR-34a-5p的表达水平。Pearson法分析组织和血清中miR-34a-5p表达量的相关性,分析miR-34a-5p与宫颈癌临床病理特征的关系,分析血清miR-34a-5p诊断宫颈癌的价值。［结果］ 宫颈癌组织miR-34a-5p相对表达量明显低于癌旁组织（P＜0.05）。宫颈癌患者血清miR-34a-5p相对表达量明显低于CIN患者和正常人（P＜0.05）,CIN患者血清miR-34a-5p相对表达量明显低于正常人（P＜0.05）。癌组织miR-34a-5p相对表达量与淋巴结转移有关(P<0.05)。血清miR-34a-5p相对表达量与淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)。miR-34a-5p在癌组织与血清中的相对表达量呈正相关（r=0.459,P＜0.05）。血清miR-34a-5p诊断宫颈癌的ROC曲线下面积为0.860（95%CI：0.803~0.917）。［结论］ HR-HPV宫颈癌患者血清miR-34a-5p下调,与癌组织miR-34a-5p表达呈正相关,有望成为宫颈癌诊断的分子标志物。     

长链非编码RNA PVT1和miR-30d-5p在肝内胆管癌组织中的表达及其与预后相关性分析

目的:分析肝内胆管癌（ICC）组织中长链非编码RNA PVT1（lncRNA PVT1）和miR-30d-5p的表达,探讨其与ICC患者临床病理因素及预后的关系。方法:收集2012年3月至2015年9月间经手术切除的47例ICC组织和相应癌旁组织（≥5 cm）。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测组织中lncRNA PVT1、miR-30d-5p表达水平,分析二者表达与临床病理因素及3年总生存率（OS）的关系。结果:ICC组织中lncRNA PVT1表达水平显著高于癌旁组织（P＜0.05）,miR-30d-5p表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.05）。lncRNA PVT1表达与ICC患者肿瘤直径、组织分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）,miR-30d-5p表达与ICC患者组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关（P＜0.05）。ICC组织中lncRNA PVT1表达与miR-30d-5p表达呈负相关（P＜0.05）。lncRNA PVT1低表达者3年OS明显高于高表达者（P＜0.05）,miR-30d-5p高表达者3年OS显著高于低表达者（P＜0.05）。组织分化程度、TNM分期、lncRNA PVT1表达、miR-30d-5p表达均是影响ICC患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。结论:ICC组织中lncRNA PVT1高表达、miR-30d-5p低表达,二者表达与ICC患者组织分化程度、TNM分期及预后有关。     

miR-142-5p靶向DDX5调控卵巢癌顺铂耐药

摘 要：［目的］ 分析微小RNA（microRNA,miR）-142-5p靶向DEAD box p68 RNA解旋酶（DEAD-box RNA helicase 5,DDX5）调控卵巢癌顺铂（cisplatin,DDP）耐药机制。［方法］ 收集2019年4月至2020年11月45例卵巢癌手术切除的癌组织及癌旁组织,采用RT-qPCR测定miR-142-5p表达,Western blot法测定DDX5表达。实验分4组：SKOV3组、SKOV3/DDP组、阴性对照组（感染阴性对照慢病毒LV-miR-142-5p-NC的SKOV3/DDP细胞）、病毒感染组（感染沉默miR-142-5p的慢病毒LV-miR-142-5p-IN的SKOV3/DDP细胞）,对比各组miR-142-5p、DDX5表达、细胞生长抑制率、细胞凋亡率和细胞OD值。 双荧光素酶报告实验验证miR-142-5p和DDX5的靶向关系。［结果］ 卵巢癌组织miR-142-5p mRNA表达、DDX5蛋白表达比癌旁组织高（P＜0.05）;SKOV3/DDP组、阴性对照组miR-142-5p mRNA表达和DDX5蛋白表达比SKOV3组高（P＜0.05）;病毒感染组miR-142-5p mRNA表达、DDX5蛋白表达相比SKOV3/DDP组、阴性对照组低（P＜0.05）。 不同浓度顺铂（1.25、2.5、5、10、20 μg/mL）作用后,SKOV3/DDP组、阴性对照组的细胞生长抑制率比SKOV3组低（P＜0.05）;病毒感染组细胞生长抑制率比SKOV3/DDP组及阴性对照组高（P＜0.05）。DDP培养48 h 后,SKOV3/DDP组、阴性对照组细胞凋亡率比SKOV3组低,OD值比SKOV3组高（P＜0.05）;相比SKOV3/DDP组和阴性对照组,病毒感染组凋亡率高,OD值低（P＜0.05）。DDX5 WT+miR-142-5p mimic组荧光素酶活性比DDX5 WT组高（P＜0.05）。［结论］ miR-142-5p下调可能通过抑制DDX5表达促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,从而逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。     

结直肠癌组织中DDX5表达水平及其与患者预后的相关性

目的:探讨RNA解螺旋酶DDX5(p68)在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）组织中的表达水平及其与结直肠癌患者预后的相关性。方法:选取2015年03月至2016年11月陆军军医大学第二附属医院收治的接受外科手术初治的213例结直肠癌患者,收集其临床资料、肿瘤组织石蜡标本;采用免疫组化方法检测肿瘤组织中DDX5蛋白表达情况;随访3年,分析DDX5蛋白表达水平与结直肠癌患者预后的关系。结果:截止2019年11月30日,共有202例患者完成随访;死亡23例,复发44例,共计67例,预后不良率为33.17%;预后不良组在肿瘤分化程度上低于预后良好组,淋巴结转移情况、肿瘤浸润型比例、临床分期上高于预后良好组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;预后不良组肿瘤组织中DDX5蛋白表达水平高于预后良好组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;以DDX5表达水平中位数为截点,DDX5高表达组3年无进展生存率为58.88%,低于DDX5低表达组的78.30%,DDX5高表达组疾病进展风险显著高于DDX5低表达组（P=0.002）;多因素Logistic分析显示,肿瘤低分化（OR=14.097）、淋巴结N1-2转移（OR=118.602）、高临床分期（OR=1 525.596）、浸润型生长（OR=2.533）及DDX5高表达（OR=8.958）是影响结直肠癌患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。结论:结直肠癌组织中DDX5蛋白高表达可导致患者预后不良,可能是评估结直肠癌预后的一项生物标志物。     

结直肠癌中医辨证分型与miR-29、miR-34a表达的相关性分析

目的:探究结直肠癌患者血清miR-29、miR-34a表达水平及其与中医辨证分型的相关性。方法:选取2014年06月至2015年06月本院收治的127例结直肠癌患者作为研究对象（结直肠癌组）,并根据中医辨证分型标准分为湿热内蕴型21例、气滞血瘀型40例、脾肾阳虚型29例、气血两虚型18例、肝肾阴虚型19例;另选取同期在本院体检的127例健康者作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测血清miR-29、miR-34a表达水平,并进行比较;采用Pearson法分析血清miR-29与miR-34a表达水平的相关性;采用Logistic回归模型分析影响结直肠癌患者不良预后发生的危险因素。结果:结直肠癌组患者血清miR-29、miR-34a表达水平均明显低于健康对照组（P＜0.05）。低分化、浸润程度T3-T4、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移患者血清miR-29、miR-34a表达水平明显低于高中分化、浸润程度T1-T2、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者（P＜0.05）。结直肠癌患者血清miR-29与miR-34a表达水平呈正相关（r=0.529,P=0.000）。低分化、浸润程度T3-T4、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、淋巴结转移、低miR-29水平、低miR-34a水平是影响结直肠癌患者不良预后发生的危险因素（P＜0.05）。脾肾阳虚型、气滞血瘀型、湿热内蕴型预后不良患者比例依次明显增加（P＜0.05）。肝肾阴虚型、气血两虚型、脾肾阳虚型、气滞血瘀型、湿热内蕴型结直肠癌患者血清miR-34a表达水平依次显著降低（P＜0.05）,miR-29表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:结直肠癌患者血清中miR-29、miR-34a低表达,与肿瘤分期升高、分化程度降低、浸润程度增加、淋巴结转移、远处转移、不良预后等密切相关,且miR-34a对结直肠癌不同中医辨证分型有一定的分型参考意义。     

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒（pcDNA3.1-KLF3）或空载质粒（Vector）单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者TNM分期和远处转移有关（均P＜0.05）;miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.326,P=0.013）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达, KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-133a-3p在胃癌组织和血浆中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

[摘要] 目的：检测miR-133a-3p 在胃癌组织及患者血浆中的表达水平及其对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其与患者预后的关系。方法：收集河北医科大学第四医院普外科2012 年5 月至2013 年5 月胃癌手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本52例,每例组织标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织。采用实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）法检测miR-133a-3p 在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康体检者血浆（35 例）的表达情况,分析miR-133a-3p 的表达水平与胃癌患者中位DFS及临床病理特征的关系。CCK-8 法检测过表达或沉默miR-133a-3p 对胃癌SGC7901 细胞增殖的影响。结果：miR-133a-3p 在胃癌组织中的表达明显降低（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤侵润深度（T）、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.01）;在胃癌患者血浆中的表达明显升高（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.05）;与患者血清中CA199的表达水平正相关（P<0.01）。胃癌组织中miR-133a-3p 高表达组患者中位DFS 明显高于低表达组（20.8 vs 14.8 个月,P<0.05）。血浆中miR-133a-3p 的高表达组患者中位DFS明显低于低表达组（14.4 vs 20.3 个月,P<0.05）。过表达miR-133a-3p 可明显抑制SGC7901 细胞的增殖能力,同样沉默其表达可明显促进SGC701 细胞的增殖能力（均P<0.05）。结论：miR-133a-3p 可明显抑制胃癌细胞SGC7901 的增殖能力,在胃癌组织和血浆中存在明显异常表达,其表达与患者预后明显相关,可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物。     

miR-145-5p靶向TAGLN2调控结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的机制探讨

目的:探究微小RNA-145-5p（miR-145-5p）在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其靶向调控肌动蛋白凝胶蛋白2（TAGLN2）对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术对48例结直肠癌患者癌组织、配对癌旁组织、结直肠癌细胞株（HCT8、SW620、HCT116、HT-29）及结直肠黏膜细胞FHC中的miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达进行定量分析。将SW620细胞设为空白对照组、miR-145-5p mimics组、mimics-NC组、pcDNA3.1-TAGLN2组、pcDNA3.1-Vector组和miR-145-5p mimics+pcDNA3.1-TAGLN2组,采用qPCR检测miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达,采用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力,采用免疫印迹法（Western blot）检测TAGLN2蛋白及EMT相关蛋白表达,采用双荧光素酶报告实验检测miR-145-5p和TAGLN2间的靶向关系。结果:miR-145-5p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,并与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）;TAGLN2在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,并与miR-145-5p表达呈负相关（P<0.05）;miR-145-5p和TAGLN2在结直肠癌HCT8、SW620、HCT116和HT-29细胞中的表达水平显著低于或高于FHC细胞（均P<0.05）。miR-145-5p过表达可降低SW620细胞的侵袭和迁移能力。miR-145-5p靶向调控TAGLN2表达,单独转染TAGLN2阳性质粒可增加SW620细胞的侵袭和迁移能力,与miR-145-5p mimics同时转染后,TAGLN2蛋白、波形蛋白（Vimentin）和神经钙黏素（N-cadherin）表达降低,上皮钙黏素（E-cadherin）表达升高,TAGLN2对SW620细胞侵袭和迁移能力的增强作用被显著抑制。结论:miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达状态,其表达水平与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,miR-145-5p靶向调控TAGLN2抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移能力。     

lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p促进结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移

目的： 探讨lncRNA SNHG10在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响与可能的机制。 方法： 收集2018年1月至2019年12月在河南省人民医院行根治性结直肠癌切除术的78例患者的癌组织及对应癌旁组织标本,采用qPCR法检测结直肠癌组织、结直肠癌细胞（SW480、SW620、HT-29和LoVo）及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA SNHG10和miR-532-3p的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系及在组织中表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SNHG10和miR-532-3p间的靶向关系。向SW620细胞中转染si-SNHG10或miR-532-3p mimic或共转染si-SNHG10+miR-532-3p inhibitor,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用WB法检测E-cadherin,N-cadherin和vimentin蛋白表达水平变化。 结果： SNHG10 在结直肠癌组织和细胞中呈高表达（P<0.05 或 P<0.01）,其表达水平与TNM分期和远处转移有关（均P<0.05）;miR-532-3p在结直肠癌组织和细胞中呈低表达,其表达水平与TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关（P<0.05或P<0.01）,SNHG10和miR-532-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.225, P=0.048）。双荧光素酶报告基因实验证实SNHG10靶向调节miR-532-3p的表达。下调 SNHG10 或上调 miR-532-3p 的表达后,SW620 细胞的侵袭和迁移能力显著降低（P<0.01）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05）、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平降低（均P<0.05）。抑制miR-532-3p表达后,敲低lncRNA SNHG10表达对结直肠癌细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转（均P<0.05）。 结论： lncRNA SNHG10在结直肠癌中高表达并与TNM分期和远处转移相关,lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p表达并通过EMT途径影响结直肠癌细胞的侵袭和转移。     

血清miR-29a-5p和miR-222的表达与肝癌的诊断和预后的关系

目的：研究血清中miR-29a-5p和miR-222表达与肝细胞肝癌（HCC）的诊断价值和预后的关系.方法：采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）对比检测76例HCC患者、62例肝良性疾病患者和60例健康对照组血清中miR-29a-5p和miR-222水平.分析miR-29a-5p和miR-222的表达与患者临床病理参数以及肝癌切除术预后的关系.结果：HCC患者血清miR-29a-5p和miR-222表达明显高于良性肝病和正常对照组（P＜0.05）,与AFP、肿瘤大小、癌栓、病理分化、TNM分级有关（P＜0.05）.HCC患者中miR-29a-5p和miR-222低表达组的复发转移率显著低于高表达组,其术后生存率也显著高于高表达组（P＜0.05）.结论：血清miR-29a-5p和miR-222与HCC的临床病理特征密切相关,不仅是潜在的HCC早期检测指标,且miR-29a-5p和miR-222在HCC患者血清中表达上调与HCC复发转移率高及预后差密切相关,提示其也可能是判断HCC手术预后的分子标志物.     

miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡（均P＜0.05）;与pmirGLO-MUT 3' UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3' UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）;与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进（均P＜0.05）,与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转（均P＜0.05）。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。     

miR-30a-5p通过靶向下调ATF1提高非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性北大核心

目的:探索miR-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-PCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中miR-30a-5p表达情况;应用miR-30a-5p agomir、antagomir及对照转染A549细胞株,联合放射,检测miR-30a-5p对A549细胞株的放射增敏效应;通过生物信息学预测并筛选miR-30a-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因检测进行验证;siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞,通过qRT-PCR、Western Blotting检测靶基因表达与miR-30a-5p的关系,并通过平板克隆形成实验检测其对A549细胞株的放射增敏效应。结果:miR-30a-5p在A549和H460细胞株中表达均低于BEAS-2B细胞株(P<0.001);miR-30a-5p agomir转染联合放射,A549细胞放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N较agomir NC组降低(均为P<0.05)。靶基因预测及验证结果显示,miR-30a-5p可以与ATF1的3'UTR特异性结合,ATF1是miR-30a-5p的一个靶基因,过表达miR-30a-5p可下调ATF1表达。siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞联合照射,A549细胞克隆形成率及放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N均低于对照组(均为P<0.05)。结论:miR-30a-5p通过靶向下调ATF1表达,在A549细胞中发挥放射增敏效应。     

miR-34a通过靶基因Notch1调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miR-34a通过靶基因Notch1调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过荧光定量PCR检测miR-34a在子宫内膜癌和癌旁组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a的靶基因,子宫内膜癌Ishikawa细胞转染miR-34a mimics及对照miR-NC,并转染Notch表达载体,通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a和Notch1对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a对Notch1蛋白表达的影响。结果:miR-34a在人子宫内膜癌组织中表达显著下调（P<0.05）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-34a能与Notch1 3' UTR结合,miR-34a mimics能够显著抑制细胞活力（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.05）,并且miR-34a mimics显著抑制Notch1蛋白表达（P<0.05）。结论:miR-34a能够通过调控靶基因Notch1的表达,抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-520a-3p靶向ABCG2增强乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的机制研究

目的:研究miR-520a-3p对乳腺癌细胞多西他赛敏感性的影响,并探索潜在的分子机制。方法:收集2015年4月至2017年10月在我院乳腺外科确诊的45例乳腺癌标本,实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-520a-3p的表达水平。分析miR-520a-3p与乳腺癌化疗耐受和肿瘤生物学特征的相关性。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/Doc和MDA-MB-231中miR-520a-3p和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABCG2）mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹实验检测ABCG2的表达。转染miR-520a-3p mimic后,采用细胞毒性实验观察乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的变化。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验观察miR-520a-3p升高后,ABCG2 mRNA和蛋白的表达变化。进一步采用双荧光素酶活性实验验证miR-520a-3p对ABCG2的靶向作用。结果:化疗耐药组新辅助化疗后肿瘤原发部位的miR-520a-3p表达水平明显降低（P＜0.05）,同时相关性分析发现,miR-520a-3p低表达与高TNM分期（III期）和淋巴结转移相关（P＜0.05）。miR-520a-3p在MCF-7/Doc和MDA-MB-231细胞中表达较在MCF-7细胞中下降（P＜0.05）,而ABCG2的表达水平则明显升高（P均<0.05）。上调miR-520a-3p后,MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的敏感性增强（P＜0.05）,而ABCG2在mRNA和蛋白水平的表达均下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因结果则证实ABCG2是miR-520a-3p的靶基因。结论:miR-520a-3p可逆转MCF-7/Doc对多西他赛的耐药性,这一作用可能与负调控肿瘤耐药相关蛋白ABCG2的表达从而抑制药物外排有关。     

miRNA-98-5p靶向HMGA2调控结直肠癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化

目的:研究miRNA-98-5p在结直肠癌细胞中的表达水平及对癌细胞增殖和侵袭的影响,探讨miRNA-98-5p在结直肠癌中的临床意义及可能的分子机制。方法:收集2016年8月至2018年2月手术切除的结直肠癌组织标本60份,实时荧光定量PCR法检测结直肠癌组织和癌旁组织中miRNA-98-5p的表达水平,免疫组化检测分析HMGA2的表达强度。分析miRNA-98-5p与结直肠癌肿瘤生物学特征和HMGA2表达的相关性。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miRNA-98-5p在结直肠癌细胞中的表达情况;应用miRNA-98-5p模拟物转染人结直肠癌HCT116细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭情况,Western blot检测HMGA2、E-cadherin和Vimentin蛋白表达。采用双荧光素酶活性实验验证miRNA-98-5p对HMGA2的靶向作用。构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察肿瘤生长状况。结果:结直肠癌组织miRNA-98-5p的表达水平低于癌旁组织,结直肠癌组织HMGA2的表达水平高于癌旁组织(P＜0.05)。相关性分析显示,HMGA2表达强度与miRNA-98-5p表达水平呈负相关(r=-0.536,P＜0.001)。miRNA-98-5p在结直肠癌细胞中表达水平低于对应结直肠黏膜正常细胞（P＜0.05）;与转染阴性对照细胞比较,转染miRNA-98-5p模拟物的HCT116细胞增殖水平和侵袭能力均受到抑制（P＜0.05）,HMGA2、Vimentin蛋白表达水平降低,E-cadherin表达增高。双荧光素酶报告基因结果提示HMGA2是miRNA-98-5p的靶基因。裸鼠皮下成瘤实验结果显示与Blank组和NC组相比,实验组肿瘤生长缓慢,重量明显降低。结论:miRNA-98-5p在结直肠癌细胞中表达下调,且miRNA-98-5p通过调节HMGA2的表达从而影响结直肠癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化状态。     

miR-21和PTEN在食管癌中的表达及其与放疗敏感性和预后的关系

目的:探讨miR-21和PTEN在食管癌中的表达及其与放疗敏感性和预后的关系。方法:采集放疗的57例食管癌组织和癌旁组织,采用RT-PCR和Western blot检测miR-21、PTEN的表达水平,分析miR-21和PTEN的相关性及其表达与临床病理特征的关系,分别观察miR-21、PTEN表达与患者预后的关系。结果:癌组织中miR-21表达显著高于癌旁组织,PTEN表达显著低于癌旁组织。癌组织中miR-21表达与PTEN表达呈负相关（r=-0.813,P=0.000）。57例患者中完全缓解20例,部分缓解32例,无效5例,总有效率为91.23％。完全缓解者miR-21表达显著低于部分缓解和无效者（P＜0.05）,部分缓解者miR-21表达显著低于无效者（P＜0.05）;完全缓解者PTEN表达显著高于部分缓解和无效者（P＜0.05）。miR-21表达与患者淋巴结转移、病变长度和浸润深度有关,PTEN表达与患者淋巴结转移、肿瘤分化程度和浸润深度有关。 57例患者3年总生存率为49.12％,miR-21低表达组3年生存率（61.76％）显著高于高表达组（30.43％）（P＜0.05）;PTEN低表达组3年生存率（29.63％）显著低于高表达组（66.67％）（P＜0.05）。结论:食管癌组织中miR-21和PTEN表达异常,二者呈负相关;前者低表达存活率高,后者恰恰相反,有望成为可监测患者放疗敏感性及预后的指标。     

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p（microRNA-125a-5p,miR-125a-5p）对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）的方法检测人肺上皮正常细胞（BEAS-2B）与非小细胞肺癌细胞系（A549、A549/DDP、SK-MES-1）中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞的存活率与半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高（P＜0.05）;过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著增加（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2（P＜0.05）;过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.05）。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

替莫唑胺通过调控miR-216a/PRKCA抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭作用的研究

目的:探讨替莫唑胺抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的作用,推测其作用机制是通过微小RNA-216a（microRNA-216a,miR-216a）/蛋白激酶Cα(protein kinase C-alpha,PRKCA)进行调控。方法:体外培养胶质瘤细胞U251,用不同剂量替莫唑胺染毒48 h后,构建野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体及检测荧光素酶活性,检测替莫唑胺对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的影响及miR-216a和PRKCA表达的影响。结果:miR-216a mimics使野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降了47.52%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;miR-216a mimics使突变型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降不显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白对照组比较,低、中、高剂量组胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量均降低,miR-216a mRNA相对表达量均增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;随着替莫唑胺剂量的增加,胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量随之降低,miR-216a mRNA相对表达量随之增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:替莫唑胺可以通过促进miR-216a的表达而抑制PRKCA的表达,降低胶质瘤细胞U251增殖和侵袭。     

血浆miRNA在肺癌早期筛查中作用的病例对照研究

目的:探讨miR-122-5p等miRNA在早期肺癌患者血浆中的表达水平及其与肺癌发病风险的关联性。方法:运用高通量测序技术筛选在早期肺癌患者和对照者血浆中差异表达的miRNA,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miRNA的表达。采用性别、年龄±5岁进行1∶2匹配的病例对照研究,使用条件Logistic回归分析miRNA与肺癌发病风险的关联。结果:早期肺癌组血浆miR-122-5p、miR-199a-5p、miR-221-3p、miR-27b-3p和miR-99a-5p的表达水平均显著高于对照组（P＜0.01）;用于检测早期肺癌时,miR-199a-5p的灵敏度可达95.8%,miR-99a-5p的特异度可达81.2%;血浆miR-122-5p、miR-199a-5p、miR-221-3p、miR-27b-3p和miR-99a-5p的表达与肺癌发病风险升高存在显著关联,第四分位数组的肺癌发病风险较高,分别是第一分位数组的9.613倍（95%CI:1.488~62.118,Ptrend=0.011）、23.863倍（95%CI:2.208~257.938,Ptrend=0.007）、27.416倍（95%CI:2.575~291.919,Ptrend=0.003）、23.626倍（95%CI:2.044~273.070,Ptrend=0.005）和72.504倍（95%CI:3.519~1 493.742,Ptrend=0.004）。结论:miR-122-5p、miR-199a-5p、miR-221-3p、miR-27b-3p和miR-99a-5p是肺癌发病的危险因素。