雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化影响的初步研究

目的将雌激素受体ERβ1真核表达质粒转染到人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对E-cadherin、Vimentin等基因表达和细胞上皮间质转化的影响,探讨ERβ1在乳腺癌发生发展中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用实时荧光定量PCR、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达的变化;并用细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。所有数据以±s表示,多个样本均数间的比较用单因素方差分析,组间比较采用SNK法。细胞生长曲线变化采用重复测量方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、E-cadherin mRNA和蛋白水平明显增强（P〈0.010）,Vimentin mRNA水平明显减少（P〈0.010）,细胞增殖能力明显减弱。结论 ERβ1可能参与抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的上皮间质转化过程。     

HER-2通过ZEB1促进乳腺癌细胞上皮间质转化

背景与目的：人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)是表皮生长因子受体家族中的一员,它参与细胞多个生物过程,如细胞增殖、侵袭和凋亡等。有研究表明,HER-2与细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程相关,但具体机制有待进一步探讨,本研究旨在探讨HER-2对EMT的调节机制。方法：用Transwell小室模拟细胞的迁徙侵袭能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测目的基因的表达;用活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧的水平。结果：Transwell小室模拟实验发现,HER-2过表达能促进乳腺癌细胞的侵袭转移;机制研究表明,HER-2能上调ZEB1,用siRNA降低ZEB1表达使HER-2过表达细胞的侵袭能力受损;此外,HER-2过表达乳腺癌细胞中活性氧水平较低。结论：HER-2可以上调ZEB1的表达而赋予乳腺癌细胞EMT相关特性,ZEB1可作为进一步研究HER-2与EMT调节关系的靶点。     

B7-H3沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学功能的影响

目的:探讨B7-H3沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学行为的影响.方法:通过脂质体LipofectamineTM2000转染B7-H3 siRNA干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3到乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选后获得B7-H3沉默细胞株MDA-MB-2...     

浸润性乳腺癌上皮-间质转化1例

0 引言上皮-间质转化( epithelial-mesen chymal transition,EMT)是胚胎发育、组织重建和伤口修复中的基础过程,同时也是肿瘤浸润、转移的一个非常重要的机制.在EMT过程中,上皮细胞之间连接松散,细胞失去基底面至表面的极性排列,形态呈梭形;上皮标志物E-钙黏素表达下降,间质标志物N-钙黏素、波形蛋白等表达增加;细胞侵袭和转移能力增强[1].这些EMT典型变化通常都是在细胞培养或动物移植瘤实验中发现的.     

乳腺癌细胞上皮间质转化的分子机制及其防治的研究进展

摘 要：上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是恶性肿瘤上皮细胞向间质表型转化的启动过程,可促进恶性肿瘤的侵袭和转移。本文综述了乳腺癌EMT的分子标志物包括表面标志物、支架标志物和相关调控因子、相关信号通路及缺氧微环境等。乳腺癌细胞EMT会导致内分泌治疗和化疗耐药,机制可能与乳腺癌上皮细胞特性、雌激素受体及乳腺癌干细胞活性改变有关。基础研究表明中医药可逆转乳腺癌EMT,但是相关临床研究及其作用机制的文献报道较少,尚需进一步探索。明确乳腺癌细胞EMT的分子机制,有利于乳腺癌细胞转移和耐药的深入研究,并为临床上乳腺癌的靶向调控及中医药治疗提供新的思路。     

CTEN在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用与机制研究

目的:探讨CTEN在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用及其分子机制。方法:采用定量PCR及Western blotting检测人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中CTEN的表达水平;然后用Lipofectamine 2000将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染至乳腺癌MCF-7细胞,为高表达组,将对照质粒pcmv转染至MCF-7细胞,为对照组,用定量PCR检测两组细胞中CTEN、Snail和EMT标记分子mRNA水平的变化,用Western blotting检测CTEN、Snail和EMT标记分子蛋白水平的变化;应用Lipofectamine 2000将CTEN干扰质粒siCTEN转染至MDA-MB-231细胞,为干扰组,将对照质粒siNC转染至MDA-MB-231细胞,为对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测两组细胞中CTEN、Snail和EMT标记分子mRNA及蛋白水平的变化;应用Lipofectamine 2000将Snail干扰质粒siSnail转染至MCF-7细胞,为干扰组,将对照质粒siNC转染至MCF-7细胞,为对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测两组细胞中Snail mRNA及蛋白水平的表达情况,然后再将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染入两组细胞,定量PCR检测CTEN和EMT标记分子mRNA水平的变化,Western blotting检测CTEN和EMT标记分子蛋白水平的变化。结果:CTEN在MDA-MB-231中的表达量高于MCF-7细胞;与对照组相比,高表达CTEN组的MCF-7细胞形态呈纺锥形,Snail表达升高,上皮标记分子E-cadherin表达下降,间质标记分子N-cadherin及Vimentin表达升高,促进EMT的发生;与对照组相比,敲低CTEN组的MDA-MB-231细胞形态呈鹅卵石形,Snail表达下降,上皮标记分子E-cadherin表达上升,间质标记分子N-cadherin及Vimentin表达下降,促进MET的发生;在MCF-7细胞中干扰Snail后再过表达CTEN,其促进EMT的作用明显减弱。结论:CTEN能够诱导乳腺癌细胞发生上皮间质转化,且其可能通过转录因子Snail发挥作用。     

微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制

目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.     

乳腺癌干细胞上皮-间质转化标志物表达变化及意义

目的 探讨乳腺癌干细胞上皮．间质转化标志物表达变化及其临床意义。方法采用无血清悬浮培养法,从MCF-7细胞培养乳腺癌微球体细胞,应用流式细胞仪检测微球体细胞中CD44和CD24的表达,采用Westernblot方法检测微球体细胞中E-钙黏素、N-钙黏素、纤维连接蛋白、波形蛋白的表达水平,体外穿膜实验检测肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。结果乳腺微球体富集了CD44＋CD24-的乳腺癌干细胞,并能在含血清培养基中增殖分化。该微球体细胞的上皮标志物E-钙黏素表达水平下调,而间质标志物N-钙黏素、纤维连接蛋白、波形蛋白的表达水平上调,同时乳腺癌干细胞的迁移、侵袭能力显著增强。结论乳腺癌干细胞具有上皮-间质转化的特征,具有显著增强的迁移、侵袭能力。     

上皮间质转化与乳腺癌的研究进展

在肿瘤演进中,原发性肿瘤中的一些细胞再次激活调控胚胎发育被称之为上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的潜在途径,使得上皮细胞获得间质细胞特征,更易发生侵袭和转移。EMT的异常激活与高侵袭基底型乳腺癌相关,提高了细胞生存能力、获得干细胞潜能及增强其侵袭转移能力,EMT化的癌干细胞对常规治疗更具有抵抗性。本文总结了与EMT相关的调控因子及癌干细胞在乳腺癌进展中的作用。     

乳腺癌中FoxP3表达与上皮间质转化的相关性及其意义

  目的  探讨乳腺癌组织FoxP3、TGF-β1的表达和上皮间质转化(EMT)的相互关系及其临床意义。  方法  免疫组织化学法检测74例乳腺癌组织中FoxP3、TGF-β1、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达情况, 分析乳腺癌FoxP3蛋白表达与临床病理特征的关系, 以及FoxP3、TGF-β1的表达和EMT发生之间的关系。  结果  FoxP3与TGF-β1的表达率和EMT的发生率分别为36.5%(27/74)、39.2%(29/74)和40.5%(30/74)。乳腺癌FoxP3表达与淋巴结转移相关(P < 0.05), 与其他临床病理特征无关(P>0.05)。FoxP3和TGF-β1的表达之间存在相关性, 而TGF-β1可以促进EMT发生(P < 0.05)。  结论  FoxP3的表达与乳腺癌淋巴结转移和EMT的发生相关, 可能作为预测乳腺癌转移可能性的标记物。      

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

肺癌上皮间质转化后引发Nrf2介导的多药耐药的研究

目的 探讨肺癌中上皮间质转化通过Nrf2通路导致多药耐药的可能性。方法 TGF-β1诱导肺腺癌细胞发生上皮间质转化, Western blot法检测癌细胞发生上皮间质转化的标志分子和细胞核内Nrf2的表达变化;比色法测定GSH含量及GST活力的变化;MTT实验检测癌细胞发生上皮间质转化前后对顺铂耐药指数的变化。结果 TGF-β1使癌细胞发生了上皮间质转化：细胞失去极性,上皮标志分子E-cadherin表达下降,而间质标志分子Vimentin和Snail表达上升;细胞发生上皮间质转化后细胞核内Nrf2表达显著增加,GSH含量增高及GST活力增强,癌细胞对顺铂的耐药指数是原来的7.7倍。结论 肺癌上皮间质转化后可能通过Nrf2通路介导了癌细胞的多药耐药。     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

Down-Regulation of Notchl and NF-κB by Curcumin in Breast Cancer Cells MDA-MB-231

Objective:To test whether the down-regulation of Notch1 gene expression by curcumin could inhibit cell growth and induce apoptosis,which may be associated mechanistically with the down-regulation of NF-κB in breast cancer cells. Methods:Breast cancer cell lines MDA-MB-231 were cultured in vitro and treated with different dosages of curcumin(0,1.25,5.0,20.0μmol/L)for dose-dependent assay and different time(0,24,48,72 h)at the dosage of 5.0μmol/L for time course assay.The changes of the mRNA and protein expression of Notch1 and NF-κB were measured by RT-PCR and Western Blot,and MTT assay was used to measure the change of proliferation. Results:The mRNA and protein levels of Notch 1 and NF-κB were decreased significantly in human breast cancer cell line with the increase of dosage of curcumin(P＜0.05),and with the extension of time course(P＜0.05).These changes suggested a dose- and time-dependent manner.The proliferation rate of cells also was significantly inhibited(P＜0.05). Conclusion:The current results show that the Notch-1 signaling pathway is associated mechanistically with NF-κB activity during curcumin-induced cell growth inhibition and apoptosis of breast cancer cells.These results suggest that the down-regulation of Notch signaling by curcumin may be a novel strategy for the treatment of patients with breast cancer.     

乳腺癌中组蛋白去甲基化酶JMJD3与上皮间质转化相关蛋白表达的相关性及临床意义CSCD

目的探讨乳腺癌组织中组蛋白去甲基化酶JMJD3与上皮细胞-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的表达及其相关性。方法收集120例乳腺癌及对应癌旁组织标本,采用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织中JMJD3、E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的表达,并分析上述蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系及相关性。结果乳腺癌组织中JMJD3和E-cadherin阳性率(56.67%和65.00%)显著低于癌旁组织(73.33%和83.33%)(均P<0.05),Vimentin和N-cadherin阳性率(54.17%和58.33%)显著高于癌旁组织(23.33%和20.83%)(均P<0.05)。JMJD3、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin的表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期和淋巴结转移均相关(均P<0.05),JMJD3与肿瘤直径相关(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌中JMJD3与E-cadherin表达呈正相关(r=0.204,P=0.025),与Vimentin和N-cadherin表达均呈负相关(r=-0.467,r=-0.500,均P=0.000)。结论乳腺癌中JMJD3可能通过调节乳腺癌细胞上皮-间质转化途径调控乳腺癌侵袭转移。     

miR-325-3p靶向CLDN1基因调控胃癌上皮间质转化和侵袭转移

目的 探讨miR-325-3p靶向CLDN1基因对胃癌上皮间质转化和侵袭转移的影响.方法 选取人胃黏膜上皮细胞株GES-1以及人胃癌细胞株HGC27、SGC-7901、MKN-45和MGC-803,并检测细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达.双荧光素酶报告实验验证miR-325-3p和CLDN1的靶向关系,干预...     

Adipocyte culture medium stimulates production of macrophage inhibitory cytokine 1 in MDA-MB-231 cells

Obesity is one of the potential risk factors in causing breast cancer. As a result, adipose tissue surrounding breast ductal cells may play an important role in the breast cancer development or progression. To identify the genes that are regulated by factors secreted from adipocytes in breast cancer cells, MDA-MB-231 cells were treated with the culture medium of adipocytes. Most of induced genes were related to immune function and wound healing, which share a common gene expression signature with cancer progression. In present study macrophage inhibitory cytokine 1 (MIC-1) gene was studied among the induced genes. It was found that both MIC-1 mRNA and protein were dramatically increased by the culture medium of adipocytes. Furthermore, proteinase K-treated adipocyte culture supernatants also induced MIC-1 expression. These findings indicate that proteins are not major MIC-1 inducing factors in adipocyte culture medium. Consequently, we examined the effect of free fatty acids such as palmitate and oleate on MIC-1 induction and found that palmitate markedly induced MIC-1 gene expression, whereas oleate did not. Adipocyte culture medium- and palmitate-induced MIC-1 gene expression was mediated by the activation of p38 MAPK, but not by the activation of JNK, ERK, and NF-kappaB pathway. In addition, adipocyte-CM-induced MIC-1 also increased invasiveness of MDA-MB-231 cells.     

趋化因子CCL18与乳腺癌临床病理特征的关系及其对乳腺癌细胞EMT过程的影响

目的 探讨趋化因子CCL18与乳腺癌临床病理特征的关系及其对乳腺癌细胞EMT过程的影响.方法 选取行手术切除治疗的50例乳腺癌患者为研究对象,其中Ⅰ期3例,Ⅱ～Ⅲ期28例,Ⅳ期19例.采用免疫组织化学法检测乳腺组织中CCL18表达情况,分析其与临床病理特征的关系.选取乳腺癌细胞系BT-474和MDA-MB-231,分别...     

三阴性乳腺癌细胞中上皮间质转化与EGFR单抗治疗效果的相关性

目的 研究三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer, TNBC）细胞株的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）水平与西妥昔单抗药敏性的相关性。方法 （1）运用免疫印记法比较TNBC细胞株中EGFR、波形蛋白（vimentin）以及E钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平。（2）通过CCK8试剂比较不同细胞株对西妥昔单抗的敏感度。（3）采用Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂恩替诺特（ENT）逆转MDA-MB231的EMT。（4）观察ENT联合西妥昔单抗对MDA-MB231细胞活性的抑制作用。结果 （1）MDA-MB468细胞中E-cadherin的表达水平明显高于MDA-MB436及MDAMB231细胞;vimentin的表达水平明显低于MDA-MB436及MDA-MB231。（2）MDA-MB468对西妥昔单抗的敏感度明显高于MDA-MB231及MDA-MB436。（3）MDA-MB231的EMT能被Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂ENT逆转。（4）ENT单药显著抑制MDA-MB231细胞的活性,ENT联合西妥昔单抗较ENT单药对细胞生长的抑制作用更加显著。结论 TNBC细胞中,EMT与EGFR单克隆抗体西妥昔单抗的疗效可能相关。联合Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂ENT以及西妥昔单抗治疗可能是治疗TNBC的新方法。