长链非编码 RNA DRAIC 通过抑制 miR-223-3p 促进肺癌细胞增殖和转移

目的 探究长链非编码 RNA(IncRNA)DRAIC 对 miR-223-3p 的调节作用及对肺癌细胞增殖和转移的影响。 方法 选取 2019 年 1 月至 2020 年 6 月河北工程大学附属医院收治的 90 例非小细胞肺癌患者的癌组织和癌旁组织,分析癌症基因 组图谱(TCGA)数据中肺癌组织 lncRNA DRAIC 的表达及其与患者预后生存期的关系,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检 测肺癌组织 lncRNA DRAIC 和 miR-223-3p 的表达水平并进行 Pearson 相关性分析;Starbase 数据库预测及双荧光素酶实验验 证 lncRNA DRAIC 与 miR-223-3p 的靶向关系;将经慢病毒包装的 lncRNA DRAIC 和 miR-223-3p 慢病毒质粒分别转染至肺 癌细胞 A549 和 H520 中,分为对照组、si-NC 组、si-DRAIC 组、pcDNA 组、pcDNA-DRAIC 组、DRAIC+miR-NC 组、DRAIC+miR223-3p 组;MTT 法和集落形成实验、划痕实验和 Transwell 小室实验分别检测细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力;RT-qPCR 和蛋白印迹法检测 JAK2 和 STAT3 的 mRNA 和蛋白的表达;裸鼠成瘤实验检测移植瘤的发展。 结果 TCGA 数据显示肺癌组 织 lncRNA DRAIC 的表达水平高于癌旁组织,且预后生存期与 lncRNA DRAIC 的表达水平呈负相关;与癌旁组织相比,肺癌组 织中 lncRNA DRAIC 水平升高,miR-223-3p 水平降低,且 lncRNA DRAIC 与 miR-223-3p 呈负相关;lncRNA DRAIC 水平与肿 瘤大小、TNM 分期、淋巴结转移、分化程度呈正相关(P<0. 05)。 lncRNA DRAIC 与 miR-223-3p 存在结合位点,lncRNA DRAIC 过表达抑制 miR-223-3p 的表达(P<0. 05);lncRNA DRAIC 过表达能够上调 JAK2 和 STAT3 的 mRNA 和蛋白水平,促进细胞 增殖、划痕愈合和增加侵袭细胞数,促进移植瘤生长(P<0. 05)。 另外,miR-223-3p 可部分逆转 lncRNA DRAIC 对肺癌细胞的 恶性表型。 结论 lncRNA DRAIC 通过抑制 miR-223-3p 促进肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及体内移植瘤的发展,且可能通过激 活 JAK2 / STAT3 信号通路发挥作用。     

长链非编码RNA HOTTIP 通过调控细胞凋亡水平促进非小细胞肺癌增殖

背景与目的：探索非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)有效的早期诊断及预后标志物具有重要的科学意义和临床价值。长链非编码RNA(lncRNA)在肿瘤中的作用逐渐引起研究者的关注。本研究拟分析lncRNA HOTTIP在NSCLC中的表达情况及对NSCLC细胞增殖水平的影响和机制。方法：采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测方法检测54例NSCLC组织及其对应癌旁组织的HOTTIP表达情况,分析NSCLC组织HOTTIP表达与临床病理参数的相关性;MTT方法检测肺癌细胞增殖水平,流式细胞术检测凋亡率的改变;蛋白［质］印迹法(Western blot)检测目的基因的蛋白表达变化。结果：与癌旁组织比较,HOTTIP在肺癌组织中的表达率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。HOTTIP表达与患者淋巴结转移和TNM分期相关。转染HOTTIP siRNA至A549肺癌细胞后,结果显示,与未转染组和阴性质粒转染组相比,转染siRNA-HOTTIP 的A549细胞HOTTIP 表达明显降低;HOTTIP表达下调后细胞增殖速度减慢,凋亡率增加,凋亡相关蛋白Bax的表达增加,Bcl-2表达减少。结论：HOTTIP是一种新的NSCLC生物标志物,可作为潜在的治疗新靶点。     

长链非编码RNA UCA1 靶向调控miR-185-5p 对非小细胞肺癌A549 细胞的作用及其机制

[摘要] 目的：探究长链非编码RNA（ long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1 ( urothelial carcinoma associated 1,UCA1) 调控非小细胞肺癌(NSCLC) A549 细胞增值、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：NSCLC A549 细胞培养及慢病毒转染完成后,RT-PCR检测A549 细胞UCA1 表达水平,荧光素酶实验验证UCA1 和miR-185-5p 的靶向关系,MTT检测A549 细胞活性,Transwell 和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting 检测Wnt1/β-catenin 信号通路蛋白的表达。结果：sh-UCA1 能显著抑制UCA1 表达并促进miR-185-5p 表达(均P<0.05),miR-185 inhibitor 可减弱sh-UCA1 对miR-185-5p 表达的促进作用(P<0.05),UCA1 能明显抑制miR-185-5p 表达(P<0.05),miR-185 mimic 可减弱UCA1 对miR-185-5p 表达的抑制作用(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明UCA1 序列上有miR-185-5p 的结合位点。sh-UCA1 能显著抑制A549 细胞增殖、侵袭和迁移(均P<0.05),并能降低信号通路蛋白Wnt1、β-catenin 信号和TCF-4 表达水平(均P<0.05);miR-185 inhibitor 能显著减弱sh-UCA1 对A549 细胞的增殖、侵袭、迁移及对Wnt1/β-catenin 通路蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论：UCA1 可通过靶向miR-185-5p 促进NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与Wnt1/β-catenin信号通路激活有关。     

非小细胞肺癌的潜在生物标记物:长链非编码RNA

非小细胞肺癌是常见的肺癌类型之一,筛选可用于诊断、治疗和预后判断的生物标志物是近年来非小细胞肺癌研究的热点之一。我们已知,基因和表观遗传学改变是非小细胞肺癌发展的重要因素,近期研究发现,基因组的非蛋白质编码区域可以作为各种RNA的转录模板,统称为非编RNA。包括长链非编码RNA在内的非编码RNA,在多种细胞功能中发挥了重要作用。研究表明,长链非编码RNA的表达异常与肿瘤的发生关系密切,包括非小细胞肺癌。在本篇综述中,我们将总结长链非编码RNA作为非小细胞肺癌潜在生物标志物的最新研究进展。     

长链非编码RNA在非小细胞肺癌中的研究进展

肺癌是全球发病率最高,也是死亡率最高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌占肺癌的绝大部分。目前发现大量的非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs)极大地改变了人们对肿瘤的理解。lncRNAs是一组非编码的RNA(ncRNAs)超过200个核苷酸,不具有蛋白质编码能力。越来越多的证据表明,特定的lncRNAs可能参与肿瘤发生的过程。它们参与了多重分子调控以及基因表达变化相关的途径,重要的是据报道,lncRNAs与肺癌的治疗有关,包括化疗、分子靶向治疗等,它们可以作为潜在肺癌的诊断生物学指标或目标。本文将对长链非编码RNA在非小细胞肺癌中的研究进展作一综述。     

长链非编码 RNA FENDRR 对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：检测长链非编码 RNA FENDRR 基因在非小细胞肺癌（non －small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及其对 A549细胞增殖及凋亡的影响。方法：Real －time PCR 检测 FENDRR 基因在 NSCLC 组织中的表达;构建 FENDRR 基因表达载体 pcDNA －FENDRR 并转染 A549细胞,Real －time PCR 检测转染效果;MTT 法检测 A549细胞的增殖活力;流式细胞术测定 A549细胞的凋亡率。结果：FENDRR 基因在 NSCLC 组织中的表达显著下调,为癌旁正常组织中 FENDRR 的37．24％（P ＜0．01）,FENDRR 的低表达与 NSCLC 的低分化及高 T 分期相关。pcDNA －FENDRR 的转染能够显著上调 A549细胞中 FENDRR mRNA 的表达（P ＜0．01）,而 FENDRR 过表达能够显著抑制 A549细胞的增殖活力,并诱导凋亡由3．41％升高至8．47％（P＜0．01）。结论：FENDRR 基因的表达下调与 NSCLC 的发生和进展相关,其在 NSCLC 中发挥肿瘤抑制基因的作用,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达与功能

目的：探讨长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达情况及其分子机制。方法：采用 qRT -PCR 方法检测肺癌组织中 MEG3的相对表达量,分析其与临床病理资料的相关性。将 MEG3转染到肺癌A549细胞后,应用 qRT - PCR 检测 A549细胞中 MEG3的表达;MTT 检测细胞转染后肿瘤细胞增殖的变化;并用 Western blot 检测转染后细胞中凋亡相关蛋白（BCL -2和 BCL - XL）表达。结果：肺癌组织中 MEG3的相对表达水平显著低于正常肺组织（P <0.05）。各肺癌细胞株中 MEG3的表达水平均低于肺上皮细胞株（P <0.05）。MEG3的表达水平与肿瘤大小、临床分期以及淋巴结转移之间有显著相关性（P <0.05）。MEG3转染A549细胞48h 和72h 后,A549细胞的增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组（P <0.05）。其 BCL - XL 蛋白表达水平相较于空白对照组和阴性对照组表达明显下调（P <0.05）。结论：MEG3在 NSCLC 肿瘤组织中表达下调,可能部分通过下调 BCL - XL 的表达而抑制肺癌细胞的增殖。     

长链非编码RNA：非小细胞肺癌研究的一个新领域

肺癌的发病率和死亡率位居各种肿瘤之首,其中非小细胞肺癌（NSCLC）占80％～85％,主要包括肺鳞癌和肺腺癌。尽管近年在肿瘤研究上有很大突破,NSCLC的治疗效果仍不佳且预后差,其5年生存率仅17％。因此,深入研究NSCLC发生发展的机制对NSCLC早期诊断、预防和治疗有重要意义。越来越多的研究证明,长链非编码RNA（LncRNA）参与了NSCLC的发病进程,与细胞侵袭转移、增殖、凋亡和耐药性密切相关。本文探讨了NSCLC中LncRNA的最新研究进展,旨在为NSCLC的诊断和治疗提供新的思路。     

基因间长链非编码RNA152靶向微小RNA?103a?3p对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 152(LINC00152)靶向调控微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞(ANIP-973、NCI-H157、A549和NCI-H1975)的LINC00152水平。选取LINC00152水平最高的细胞分别转染LINC00152特异性小干扰RNA(si-LINC00152组)或无关序列(si-NC组),另设未转染细胞为对照组。QPCR检测LINC00152水平,活细胞计数CCK-8法、Transwell小室和划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的水平;荧光素酶报告实验验证LINC00152靶向结合miR-103a-3p的能力。结果NSCLC细胞的LINC00152水平均高于BEAS-2B细胞(P<0.05),尤其是NCI-H1975细胞的最高。si-LINC00152组的LINC00152水平为0.352±0.087,低于对照组的1.058±0.219和si-NC组的1.126±0.139(P<0.05)。与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组NCI-H1975细胞转染48、72 h的增殖活力下降(P<0.05);si-LINC00152组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(27.386±2.428)%和(78.840±5.031)个,低于si-NC组的(77.675±4.803)%和(179.208±13.264)个及对照组的(76.371±5.385)%和(174.003±15.678)个(P<0.05);与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组的MMP-2和MMP-9水平均降低,而PTEN水平升高(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告分析证实,miR-103a-3p模拟物降低了野生型LINC00152的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。结论LINC00152在NSCLC细胞中高表达并发挥促癌作用,与NSCLC的迁移侵袭密切相关,LINC00152与miR-103a-3p间的相互作用在NSCLC靶向治疗中有一定潜能。     

长链非编码RNA SPRY4-IT1对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞系中的表达水平,以及SPRY4-IT1对NSCLC细胞增殖和侵袭功能的影响及分子机制.方法:用实时定量PCR技术检测SPRY4-IT1在NSCLC组织及细胞系中的表达水平.将pCDNA-SPRY4-IT1转染SPC-A1和A549细胞,过表达SPRY4-IT1,用MTT法和克隆形成实验检测SPRY4-IT1对SPC-A1和A549细胞增殖和克隆形成能力的影响.Transwell实验评价SPRY4-IT1对细胞迁移、侵袭能力的影响.qPCR和Western blot检测过表达SPRY4-IT1对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物上皮性钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响.结果:SPRY4-IT1的表达在NSCLC组织和细胞系中出现显著下调(P<0.01).过表达SPRY4-IT1能降低SPC-A1细胞和A549细胞的增殖和侵袭能力.过表达SPRY4-IT1显著上调E-cadherin的水平、抑制Vimentin的表达,从而影响肿瘤细胞EMT过程.结论:长链非编码RNA SPRY4-IT1表达下调可能通过调控EMT机制促进NSCLC细胞的增殖和侵袭.     

miR-363-3p和miR-5100在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨小分子RNA(microRNA)miR-363-3p 和miR-5100在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.方法:利用荧光定量PCR的方法,检测肿瘤组织、癌旁组织及远离肿瘤的正常组织中致癌基因Myc的mRNA 和miR-363-3p、miR-5100的表达,然后分析miR-363-3p 和miR-5100与临床病理特征之间的相关性.结果:Myc在肿瘤组织中表达明显升高;miR-363-3p在肺癌组织中的表达明显低于正常组织(P<0.001),而在癌旁组织中的表达却远远高于正常组织(P<0.05);miR-5100在肺癌组织中的表达显著地高于正常组织(P<0.001),并且癌旁组织中的表达也高于正常组织(P<0.05).临床相关性分析显示,miR-363-3p的表达与淋巴结转移呈正相关(P<0.001),miR-5100的表达与临床分期也呈正相关性(P<0.05).结论:miR-363-3p 和miR-5100可能参与了非小细胞肺癌早期的发生和转移,并可能作为早期诊断和预后的分子标志物.     

miR-223-3p通过调控ECT2诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨miR-223-3p对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选取24例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-223-3p的相对表达水平,免疫组化检测分析上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平,并对两者进行相关性分析。将人非小细胞肺癌A549细胞分为正常对照组、转染对照组、miR-223-3p过表达组,其中正常对照组细胞未作任何处理,转染对照组细胞转染空质粒载体,miR-223-3p过表达组转染miR-223-3p mimics。MTT实验和平板集落形成实验检测各组细胞的增殖率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blot实验检测ECT2蛋白的表达水平;采用siRNA转染法沉默A549细胞中的ECT2后,检测细胞增殖及凋亡的变化。结果：miR-223-3p在癌组织中表达显著低于癌旁组织,而癌组织中ECT2蛋白表达高于癌旁组织,二者存在负相关关系（r=-0.666,P < 0.05）;与正常对照组和转染对照组细胞相比,miR-223-3p过表达组细胞的增殖率降低（P < 0.05）,ECT2蛋白表达显著降低,而细胞凋亡率显著升高（P < 0.05）;沉默ECT2对细胞增殖和凋亡的影响与过表达miR-223-3p基本一致。结论：miR-223-3p可能通过负向调控ECT2的表达,进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

circ_0072088通过调控miR-545-3p/STAT3轴促进非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究环状RNA(circular RNA,circRNA)0072088在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的生物学功能及其作用机制.方法:在公共基因芯片数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中下载GSE101684数据集,通过GEO2R...     

miR-196a调控p27kip1促进非小细胞肺癌细胞增殖的机制研究

目的 探讨miR-196a在非小细胞肺癌（NSCLC）组织及细胞系中的表达,以及抑制或过表达miR-196a对NSCLC细胞增殖能力的影响及其作用的靶基因。方法 实时定量PCR（QPCR）技术检测NSCLC组织及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors及miR-196a mimics抑制或上调miR-196a的表达水平,并通过QPCR检测转染效率。用MTT和克隆形成实验检测上调或下调miR-196a对SPC-A1或A549细胞增殖能力的影响;生物信息学及Western blotting方法分析验证miR-196a对靶基因p27kip1的调控作用。结果 与正常肺组织及细胞相比,在NSCLC组织和细胞中miR-196a的表达出现显著上调,SPC-A1细胞和A549细胞中转染miR-196a inhibitors或miR-196a mimics能显著抑制或上调miR-196a的表达;抑制miR-196a的表达能降低SPC-A1细胞增殖能力,而上调miR-196a的表达则能促进A549细胞增殖。miR-196a能够负性调控p27kip1的表达。结论NSCLC组织及细胞中miR-196a的表达上调能够抑制p27kip1的表达,并显著促进NSCLC细胞增殖,影响NSCLC的发生与发展。     

The role of lncRNA MSC-AS1/miR-29b-3p axis-mediated CDK14 modulation in pancreatic cancer proliferation and Gemcitabine-induced apoptosis

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) remains a leading cause of cancer-related death due to the failure of traditional therapies. In the present study, we attempted to construct a lncRNA-miRNA-mRNA network which may modulate PDAC cell proliferation and Gemcitabine-induced cell apoptosis starting from CDK14, a new member of the CDK family and an oncogene in many cancers. Based on TCGA data, a significant positive correlation was observed between lncRNA MSC-AS1 and CDK14. Moreover, MSC-AS1 expression was upregulated in PDAC tissues. Higher MSC-AS1 expression was correlated with poorer prognosis in patients with PDAC. MSC-AS1 knockdown in Panc-1 and BxPC-3 cells significantly inhibited the cell proliferation. Moreover, miR-29b-3p, which has been reported to act as a tumor suppressor, was predicted to bind to both MSC-AS1 and CDK14. Contrary to MSC-AS1, higher miR-29b-3p expression was correlated to better prognosis in patients with PDAC. In both PDAC cell lines, miR-29b-3p negatively regulated MSC-AS1 and CDK14. As confirmed using luciferase reporter gene and RIP assays, MSC-AS1 served as a ceRNA for miR-29b-3p to counteract miR-29b-mediated CDK14 repression. MSC-AS1 knockdown inhibited CDK14 protein levels and PDAC proliferation and enhanced gemcitabine-induced cell death and apoptosis while miR-29b-3p inhibition exerted an opposing effect; the effect of MSC-AS1 knockdown was partially attenuated by miR-29b-3p inhibition. Taken together, we demonstrated that MSC-AS1/miR-29b-3p axis modulates the cell proliferation and GEM-induced cell apoptosis in PDAC cell lines through CDK14. We provided a novel experimental basis for PDAC treatment from the perspective of lncRNA-miRNA-mRNA network.     

lncRNA FOXD2-AS1 通过调控miR-185-5p/CCND2 分子轴诱导胃癌细胞MGC-803 对阿帕替尼的耐药性

目的:探讨lncRNA FOXD2-AS1（FOXD2-AS1）通过调控miR-185-5p/CCND2 分子轴参与胃癌细胞对阿帕替尼耐药性的分子机制。方法：收集无锡市第五医院2016 年4 月至2017 年12 月间收治的资料完整的25 例胃癌患者癌组织和相应癌旁组织标本,采用qRT-PCR 检测FOXD2-AS1、miR-185-5p 和CCND2 在胃癌组织或细胞系中的表达水平;采用CCK-8、Transwell 和AnnexinV-FITC/PI 双染流式术检测胃癌细胞对阿帕替尼药物的敏感性;采用双荧光素酶报告基因验证FOXD2-AS1、miR-185-5p 和CCND2 的靶向关系,并通过Western blotting 和qRT-PCR 检测其调控关系。结果：FOXD2-AS1 在胃癌组织和阿帕替尼耐药细胞株中高表达;同时,过表达FOXD2-AS1 可促进胃癌MGC-803/AP细胞对阿帕替尼的耐药性。双荧光素酶报告基因证实FOXD2-AS1 靶向作用miR-185-5p 并下调其表达水平。miR-185-5p 通过抑制胃癌MGC-803/AP 细胞增殖、侵袭和促进凋亡进而下调FOXD2-AS1 对胃癌细胞阿帕替尼耐药性的促进作用。miR-185-5p 可靶向负调控CCND2 的表达,FOXD2-AS1 通过下调miR-185-5p 对CCND2 的抑制作用进而促进胃癌MGC-803/AP细胞增殖、侵袭和抑制凋亡,从而上调胃癌细胞对阿帕替尼的耐药性。结论：FOXD2-AS1 通过调控miR-185-5p/CCND2 分子轴诱导胃癌细胞对阿帕替尼的耐药性。     

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。