M2型巨噬细胞外泌体对小鼠自身免疫性肝炎的保护作用#br#

摘要：目的　探究M2型巨噬细胞来源的外泌体（M2 Exos）对刀豆蛋白A（Con A）诱导的小鼠自身免疫性肝炎（AIH）的保护作用。方法　采用IL-4（20 μg/L）刺激RAW264.7巨噬细胞24 h后提取M2 Exos并用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质免疫印迹对其进行鉴定;免疫荧光观察RAW264.7巨噬细胞对M2 Exos的摄取情况。将12只C57BL/6J小鼠随机分为PBS组、DiR-M0 Exos组、DiR-M2 Exos组和DiR染料对照组。Con A（15 mg/kg）注射完成1 h后通过尾静脉分组注射PBS溶液、DiR-M0 Exos（100 μg）、DiR-M2 Exos（100 μg）和DiR染料,活体成像技术观察Exos在AIH小鼠肝、脾、心、肺、肾、肠的分布情况。将20只C57BL/6J小鼠随机分为Control组（PBS溶液）、Con A组（15 mg/kg Con A）,M0 Exos组（15 mg/kg Con A+200 μg M0 Exos）和M2 Exos组（15 mg/kg Con A+200 μg M2 Exos）,每组5只。Con A注射完成12 h后处死小鼠,收集外周血和肝组织,全自动生化仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平;苏木精-伊红（HE）染色观察肝脏病理形态变化;实时荧光定量PCR（qPCR）检测肝组织肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6的mRNA表达水平;流式细胞术检测肝脏巨噬细胞亚群变化情况。结果　成功诱导并分离了M2 Exos,可被RAW264.7巨噬细胞摄取;经尾静脉注射后,M2 Exos主要在小鼠肝脏和脾脏中蓄积。与Control组相比,Con A组小鼠血清ALT和AST明显升高（P＜0.05）,肝脏结构紊乱,肝细胞大片坏死,肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达升高（P＜0.05）,肝脏单核细胞来源巨噬细胞（MoMFs）的浸润增多（P＜0.05）。与Con A组相比,M2 Exos组小鼠血清ALT和AST水平显著下降（P＜0.05）,肝脏坏死明显减轻,肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达降低（P＜0.05）,肝脏MoMFs的浸润减少（P＜0.05）。结论　M2 Exos可对小鼠AIH起到保护作用,其作用机制可能与降低肝脏炎性细胞因子的表达及减少对MoMFs的招募有关。     

外泌体调控细胞自噬相关信号通路的研究进展

摘要：外泌体是由胞内多囊泡体与细胞膜融合释放到细胞外环境形成的双层脂质膜囊泡,其内富含蛋白质、RNA和脂类等,可介导细胞间通信,并参与多种生理病理过程。自噬是细胞为了减轻代谢应激、维持稳态,将细胞内需要降解的细胞器、蛋白质、RNA等包裹在双层膜的囊泡结构中,形成自噬体,并与溶酶体结合形成自噬溶酶体,降解内容物的过程。近年来研究发现,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路、Toll样受体信号通路,以及信号转导及转录激活因子（STAT）3/Bcl-2信号通路均是外泌体调控自噬的重要相关通路,参与外泌体调控自噬的过程。本文针对外泌体调控细胞自噬相关信号通路的作用机制及研究进展作一综述。     

对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应#br#

目的　探讨对比剂诱导巨噬细胞来源外泌体对肾小管上皮细胞的作用及甘草酸苷的干预效应。方法　分别用PBS、碘海醇、碘海醇+甘草酸苷刺激THP-1细胞,获取3种外泌体（NC-Exo、CIN-Exo、CIN-GL-Exo）。透射电镜观察外泌体的形态;蛋白免疫印迹（Western blot）检测CD63、TSG101、calnexin的表达;荧光标记法检测外泌体的摄取。将HK-2细胞随机分为4组：Con组、NC-Exo组、CIN-Exo组、CIN-GL-Exo组。Western blot检测3种外泌体中高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达量,以及4组细胞中凋亡相关蛋白及HMGB1/Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测4组细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测4组细胞炎性因子［白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α］mRNA的表达。结果　THP-1细胞来源的外泌体为圆形或类圆形小囊泡,表达标志物蛋白CD63、TSG101,而不表达内质网蛋白calnexin。标记DiR荧光素的外泌体可被HK-2细胞摄取。CIN-Exo中HMGB1表达量高于NC-Exo和CIN-GL-Exo（P＜0.05）。CIN-Exo组的细胞凋亡率以及Bax、Cleaved caspase-3表达量高于Con组、NC-Exo组、CIN-GL-Exo组,而Bcl-2表达量低于其他3组（P＜0.05）。CIN-Exo组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平,以及HMGB1、TLR4、NF-κB表达量高于其他3组（P＜0.05）。结论　对比剂可通过巨噬细胞来源外泌体诱导肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应,可能与外泌体HMGB1水平上调有关,甘草酸苷可抑制该途径而发挥保护效应。     

高血糖通过抑制线粒体自噬加重大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨急性高血糖对局灶性脑缺血大鼠神经功能损伤的作用及机制。方法按照随机数字法,将80只♂SD大鼠分为假手术组、脑缺血模型组(正常血糖NG)、脑缺血合并高血糖1组(HG1)、脑缺血合并高血糖2组(HG2)。线栓法建立大鼠局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血期间腹腔注射50%葡萄糖溶液诱导急性高血糖。MCAO 24 h后,采用Ludmila Belayev 12分法对大鼠的神经功能进行评分;采用TTC法对大鼠脑梗死体积和水肿程度进行评估;采用免疫荧光双标和电镜的方法对线粒体自噬的现象进行观察;进一步通过Western blot的方法对脑组织中自噬相关蛋白(LC3和Beclin-1),以及线粒体介导的凋亡相关因子(CytC,AIF,caspase-9和caspase-3)的表达情况进行检测。结果正常血糖组、高血糖1组和高血糖2组的血糖分别控制在4、10和20 mmol·L~(-1)的水平。与模型组相比,高血糖1组大鼠的神经功能评分和脑梗死体积差异没有显著性(P>0.05),而高血糖2组大鼠的神经功能损伤、梗死体积和水肿程度都有明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。缺血/再灌注损伤3 d后取材进行检测,较模型组相比,高血糖2组大鼠的线粒体自噬水平减少,差异具有统计学意义(P<0.05),受损线粒体增加,伴随Cyt-C和AIF释放以及caspase-8/caspase-3活化的增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论轻度急性期高血糖不加重脑梗死损伤。重度急性期高血糖则可能是通过抑制受损线粒体的自噬性清除,导致受损线粒体堆积,进而扩大线粒体介导的下游的凋亡损伤,加重了大鼠的脑梗死损伤程度。     

PPAR-α激动剂对PAN诱导肾小球足细胞损伤的保护作用

目的探讨PPAR-α激动剂非诺贝特对氨基核苷嘌呤霉素(PAN)诱导肾小球足细胞损伤的作用及其机制。方法将18只8周龄SD♀大鼠随机分为3组(n=6)。PAN模型组和非诺贝特组1次尾静脉注射PAN 65 g·g-1,空白对照组注射生理盐水,PAN注射后d1,非诺贝特组灌胃非诺贝特40 mg·kg-1·d-1),空白对照组和PAN模型组灌胃等体积溶剂。分别于d 0、6、10收集24 h尿样,采用Bradford法测定大鼠24 h尿蛋白含量。PAN注射后10 d将大鼠安乐死,收集肾小球样本。利用Western blot和Real-Time PCR检测肾小球足细胞损伤标记物的表达和凋亡相关基因、骨架蛋白以及裂隙膜蛋白基因转录活性。结果注射PAN后d10,24 h尿蛋白含量较d 0明显上升,足细胞损伤标记物desmin基因水平和蛋白表达明显增加,线粒体凋亡通路、TGF-β/Smad通路和p38通路转录水平明显上调,足细胞骨架蛋白和裂隙膜蛋白的转录活性明显增加。非诺贝特处理能够明显降低PAN引起的尿蛋白,改善PAN对足细胞的损伤作用;明显抑制凋亡通路的转录活性;降低骨架蛋白和裂隙膜蛋白的转录活性。结论非诺贝特能够改善PAN诱导的肾小球足细胞损伤,其作用机制与抑制凋亡通路有关。     

分泌型丛生蛋白通过抑制线粒体自噬缓解H2O2诱导的心肌细胞损伤 #br#

目的 探讨分泌型丛生蛋白（sCLU）对心肌细胞氧化损伤的影响及其机制。方法 采用大鼠心肌细胞 H9C2。实验1分为Control组（仅更换培养基）和H2O2组（100 µmol/L H2O2处理）。实验2分为Control组、pcDNA3.1组 （转染 pcDNA3.1 对照空质粒）、pcDNA3.1-sCLU 组（转染 pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒）、H2O2组（100 µmol/L H2O2处 理）、H2O2+pcDNA3.1 组（pcDNA3.1 对照空质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组 （pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）。实验 3 分为 DMSO 组（加入 1% 体积分数 的 DMSO）、Mdivi-1 组（10 µmol/L 的 Mdivi-1 处理）、H2O2+DMSO 组（加入 1% 体积分数的 DMSO 处理 30 min 后加入 100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+Mdivi-1组（10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min后加入100 µmol/L的H2O2处理）、H2O2+ pcDNA3.1-sCLU 组（pcDNA3.1-sCLU 过表达质粒转染 48 h 后加入 100 µmol/L H2O2处理）、H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1组（pcDNA3.1-sCLU过表达质粒转染48 h后加入10 µmol/L的Mdivi-1处理30 min,再加入100 µmol/L H2O2 处理）。采用MTT法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二 醛（MDA）水平。DFCH-DA荧光探针测定细胞活性氧（ROS）水平。实时定量聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验 检测细胞中sCLU表达,Western blot法检测CLU、PINK1、Parkin和LC3蛋白表达水平。结果 （1）实验1。与Control 组比较,H2O2组细胞中sCLU mRNA、细胞培养上清中sCLU蛋白及细胞中CLU蛋白相对表达水平均降低（P＜0.01）。 （2）实验2。与Control组比较,H2O2组细胞活力、SOD水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均降低,细胞凋亡率、ROS水平、MDA 水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均升高（P＜0.05）;与H2O2组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU组细胞活力、SOD水平、 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均升高,细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平、PINK1和Parkin蛋白表达水平均降低（P＜0.05）。（3） 实验3。与DMSO组比较,Mdivi-1组细胞活力与细胞凋亡率差异无统计学意义;H2O2+DMSO组细胞活力下降,细胞 凋亡率升高（P＜0.05）。与H2O2+DMSO组比较,H2O2+Mdivi-1组、H2O2+pcDNA3.1-sCLU组和H2O2+pcDNA3.1-sCLU+ Mdivi-1 组细胞活力均升高,细胞凋亡率均下降（P＜0.05）。与 H2O2+Mdivi-1 组比较,H2O2+pcDNA3.1-sCLU 组和 H 2O2+pcDNA3.1-sCLU+Mdivi-1组细胞活力差异无统计学意义,细胞凋亡率降低（P＜0.05）。结论 sCLU对氧化应 激条下的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与线粒体自噬的抑制有关。     

小檗碱通过诱导细胞抑制性自噬发挥抗胃癌作用

目的探讨中药黄连活性成分小檗碱抗胃癌作用及相关机制。方法用MTT法检测小檗碱对人胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用;用MDC染色结合流式细胞术及GFP-LC3质粒转染法检测小檗碱引起BGC-823细胞发生自噬;用Western印迹法检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1表达水平;引入自噬抑制剂3-MA和CQ,用MTT法检测小檗碱诱导的自噬与细胞存活之间的关系;建立人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤模型,评价小檗碱在体内抑制人胃癌细胞移植瘤的生长作用,用免疫组化法和Western印迹法检测肿瘤组织中自噬相关蛋白的表达水平。结果小檗碱呈时间-剂量依赖性的诱导BGC-823细胞死亡,其48 h的IC50值为24μmol·L~(-1)。与对照组相比,小檗碱处理后细胞中自噬小体的数目及自噬标志蛋白LC3及Beclin-1的表达水平皆随时间依赖性增加,且抑制自噬后小檗碱引起的细胞死亡率下降,提示小檗碱诱导的自噬发挥抑制细胞生长的作用。裸鼠移植瘤实验表明,5、10及20 mg·kg~(-1)的小檗碱均对裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用,且抑制作用与剂量成正比。其中小檗碱高剂量组的相对肿瘤增殖率为28%,优于阳性对照药物5-FU(31%)。同时,小檗碱不影响裸鼠的体重,裸鼠生长状态良好,说明其毒性较小。进一步发现小檗碱能够呈剂量依赖性的增加肿瘤组织中自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结论小檗碱在体内和体外通过诱导细胞抑制性自噬而发挥抗胃癌作用。     

二氢杨梅素通过上调自噬活性抑制MPP~+诱导的PC12细胞损伤

目的观察二氢杨梅素(DMY)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响并探讨其可能的机制。方法含DMY 5,10,20,40和80μmol·L~(-1)的培养液预处理PC12细胞0.5 h,培养液中加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)10 mmol·L~(-1),再加入MPP+500μmol·L~(-1)培养48 h。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活,丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,透射电镜观察细胞的超微结构,Western蛋白质印迹法检测细胞中自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达。结果与细胞对照组比较,MPP+组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著增加(P<0.05),细胞中自噬体的数量明显减少,自噬泡占胞质总面积的百分率显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著降低(均P<0.05),P62的表达显著升高(P<0.05)。与MPP+组比较,MPP++DMY 10~80μmol·L~(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著降低(P<0.05)。与MPP+组比较,MPP++DMY 20μmol·L~(-1)组细胞中自噬体数量明显增加,自噬泡占胞质总面积的百分率显著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(P<0.05),P62的表达显著降低(P<0.05)。与MPP++DMY 20μmol·L~(-1)组比较,MPP++DMY+3-MA组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞上清液中LDH水平显著增加(P<0.05)。结论 DMY抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调细胞自噬活性有关。     

SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长

目的研究SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的作用和机制。方法以人乳腺癌MCF-7细胞为研究目标,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的作用;Real-time PCR和Western blot检测SAHA对CTSV的mRNA及蛋白表达的影响,同时检测利用siRNA干扰技术敲除CTSV后的细胞CTSV表达水平;细胞免疫荧光法检测SAHA对LC3II分子的作用;Real-time PCR和Western blot检测SAHA诱导自噬过程中相关ATG分子和LC3的mRNA和蛋白的变化;Bafilomycin A1抑制自噬,随后利用Western blot和Muse细胞分析仪分别检测p62蛋白水平和SAHA作用后的细胞活力。结果SAHA可以抑制MCF-7细胞的增殖,并促进CTSV的表达。CTSV-siRNA转染细胞后,CTSV的mRNA和蛋白水平均显著性降低。SAHA增加了LC3免疫荧光点的分布,与CTSV-siRNA共同作用可恢复由CTSV-siRNA敲减引起的细胞自噬减弱。SAHA在增强ATG4C和Beclin1表达的同时,LC3B也随之升高而mTOR则下降。抑制CTSV表达后也同时逆转了SAHA的效应。Bafilomycin A1阻断自噬后,被SAHA抑制的p62蛋白的表达和细胞活力显著增强。结论SAHA-CTSV轴通过诱导过度自噬抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。     

Gold nanoparticle-directed autophagy intervention for antitumor immunotherapy via inhibiting tumor-associated macrophage M2 polarization

Tumor-associated macrophages (TAMs), one of the dominating constituents of tumor microenvironment, are important contributors to cancer progression and treatment resistance. Therefore, regulation of TAMs polarization from M2 phenotype towards M1 phenotype has emerged as a new strategy for tumor immunotherapy. Herein, we successfully initiated antitumor immunotherapy by inhibiting TAMs M2 polarization via autophagy intervention with polyethylene glycol-conjugated gold nanoparticles (PEG-AuNPs). PEG-AuNPs suppressed TAMs M2 polarization in both in vitro and in vivo models, elicited antitumor immunotherapy and inhibited subcutaneous tumor growth in mice. As demonstrated by the mRFP-GFP-LC3 assay and analyzing the autophagy-related proteins (LC3, beclin1 and P62), PEG-AuNPs induced autophagic flux inhibition in TAMs, which is attributed to the PEG-AuNPs induced lysosome alkalization and membrane permeabilization. Besides, TAMs were prone to polarize towards M2 phenotype following autophagy activation, whereas inhibition of autophagic flux could reduce the M2 polarization of TAMs. Our results revealed a mechanism underlying PEG-AuNPs induced antitumor immunotherapy, where PEG-AuNPs reduce TAMs M2 polarization via induction of lysosome dysfunction and autophagic flux inhibition. This study elucidated the biological effects of nanomaterials on TAMs polarization and provided insight into harnessing the intrinsic immunomodulation capacity of nanomaterials for effective cancer treatment.     

乙酰胆碱抑制自噬保护高糖诱导的H9c2细胞损伤

目的研究乙酰胆碱(ACh)对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法应用高糖处理H9c2细胞72 h,建立心肌细胞损伤模型。实验分为:①对照组(control);②高糖组(HG);③HG+ACh(10-4nmol·L~(-1))组;④HG+ACh+AICAR(0. 5 nmol·L~(-1))组;⑤HG+ACh+雷帕霉素(rapamycin,Rap)组(Rap 50 nmol·L-1);⑥HG+3-MA(2 mmol·L~(-1))组。MTT及ATP含量检测,评估各组细胞活性;Western blot观察各组自噬、凋亡及AMPK/m TOR信号通路相关蛋白表达变化;透射电镜观察各组细胞自噬小体的数量变化。结果与对照组相比,HG组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、pAMPK/AMPK比值降低(P <0. 05),p-mTOR/m TOR、Bax/Bcl-2比值升高(P <0. 05);与HG组相比,HG+3-MA组Bax/Bcl-2比值降低(P <0. 05),HG+ACh组心肌细胞活性增加(P <0. 05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK、Bax/Bcl-2比值降低(P <0. 05),p-mTOR/m TOR比值升高(P <0. 05);与HG+ACh组相比,HG+ACh+AICAR组p-AMPK/AMPK比值升高(P <0. 05),p-mTOR/m TOR比值降低(P <0. 05),而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P <0. 05),HG+ACh+Rap组Bax/Bcl-2比值升高(P <0. 05)。结论 ACh通过AMPK信号通路抑制自噬,保护高糖诱导的心肌细胞损伤。     

曲美他嗪抑制自噬减少中性粒细胞胞外核酸网形成

目的研究曲美他嗪(trimetazidine TMZ)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)体外诱导中性粒细胞胞外核酸网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的影响及其与自噬的关系。方法密度梯度离心法提取小鼠骨髓中性粒细胞,ox-LDL体外干预建立NETs诱导模型;采用TMZ、LY294002、Rapamycin干预ox-LDL对NETs的诱导;免疫荧光法观察NETs标志物MPO-DNA的释放;PicoGreen试剂盒定量检测cfDNA/nets含量;Western blot检测髓过氧化物酶(MPO)、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3b的表达。结果 ox-LDL以浓度-时间依赖的方式刺激中性粒细胞释放MPO-DNA复合物,使上清cfDNA/nets含量明显增高;细胞自噬相关蛋白LC3b、Beclin-1及MPO的蛋白水平亦随ox-LDL浓度增加上调; TMZ预处理能抑制NETs释放,降低LC3b、Beclin-1及MPO的蛋白表达,该结果可被PI3K通路阻断剂LY294002模拟,...     

1,8-桉叶油素调节自噬改善高糖诱导的内皮细胞损伤

目的探讨1,8-桉叶油素(1,8-Cineole)通过调节自噬来改善高糖(HG)诱导人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用。方法采用HG作用HAECs 60 h,不同剂量的1,8-Cineole进行干预,运用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞毒性,Western blot法检测Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、caspase-3和caspase-9的蛋白表达,及使用自噬抑制剂氯喹(CQ)作用HAECs后,检测Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、caspase-3和caspase-9的表达情况。结果1,8-Cineole提高细胞活力,减少LDH含量,激活自噬和抑制细胞凋亡。与空白组比较,CQ组的Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、caspase-3和caspase-9表达增加,同时观察到CQ+HG+CH组与CQ+HG组比较时,以上蛋白差异均无统计学意义。结论1,8-Cineole对高糖诱导HAECs损伤具有保护作用,其作用与改善自噬流相关。     

自噬在脑缺血性损伤中的作用

自噬是一种细胞内成分自我降解的过程,包括自噬的诱导、自噬体膜的形成、自噬体的形成、自噬体与溶酶体的融合以及内容物的降解。自噬若适度激活,则促进细胞存活;若过度激活,则可加重细胞损伤,甚至导致细胞裂解和促进细胞死亡。该文主要从自噬的形成过程及分子机制、脑缺血后自噬的诱发因素、自噬参与脑缺血的信号转导通路及自噬在脑缺血损伤中的作用进行综述,为进一步研究自噬与脑缺血性损伤及其药物调控提供参考。     

丹参素钠通过抑制炎症反应对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨丹参素钠通过抑制炎症反应对大鼠心肌缺血-再灌注(myocardial ischemia-reperfusion,MI/R)损伤的保护作用。方法采用结扎冠状动脉复制大鼠MI/R损伤模型,将动物随机分为假手术组,模型组,丹参素钠低、中、高剂量组。除模型组于再灌注时给予生理盐水外,丹参素钠低、中、高剂量组于再灌注即刻给予丹参素钠(15、30、60 mg kg-1)。实验终末,测定心肌梗死面积,检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTnI)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)和白细胞介素6(IL-6)水平,采用苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌组织的病理性改变。结果与模型组相比,丹参素钠中、高剂量组大鼠心肌梗死面积显著减少(P<0.05),血清中CK-MB、cTnI的浓度显著下降(P<0.05),并且丹参素钠高剂量组TNF-α、IL-1、IL-6均显著小于模型组(P<0.05),所有给药组心肌组织的病理损伤也小于模型组。结论丹参素钠对大鼠MI/R损伤有保护作用,其机制与抑制MI/R损伤时的炎症反应相关。     

Astilbin alleviates sepsis-induced acute lung injury by inhibiting the expression of macrophage inhibitory factor in rats

Sepsis is a systemic inflammatory response syndrome caused by severe infections. Astilbin is a dihydroflavonol derivative found in many medicinal and food plants with multiple pharmacological functions. To investigate the effects of astilbin on sepsis-induced acute lung injury (ALI), cecal ligation and puncture was performed on rats to establish a sepsis-induced ALI model; these rats were then treated with astilbin at different concentrations. Lung injury scores, including lung wet/dry ratio, protein leakage, myeloperoxidase activity, and inflammatory cell infiltration were determined to evaluate the effects of astilbin on sepsis-induced ALI. We found that astilbin treatment significantly attenuates sepsis-induced lung injury and improves survival rate, lung injury scores, lung wet/dry ratio, protein leakage, myeloperoxidase activity, and inflammatory cell infiltration. Astilbin treatment also dramatically decreased the production of inflammatory cytokines and chemokines in bronchoalveolar lavage fluid. Further, astilbin treatment inhibited the expression and production of macrophage inhibitory factor (MIF), which inhibits the inflammatory response. Collectively, these data suggest that astilbin has a protective effect against sepsis-induced ALI by inhibiting MIF-mediated inflammatory responses. This study provides a molecular basis for astilbin as a new medical treatment for sepsis-induced ALI.     

高迁移率族蛋白1在醛固酮诱导肾小管上皮细胞自噬中的作用 #br#

目的 探讨高迁移率族蛋白 1（HMGB1）在醛固酮（ALDO）诱导大鼠肾小管上皮细胞自噬中的作用。方 法 取对数生长期的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为 Control组、ALDO组（10 nmol/L）、HMGB1抗体组（1 mg/ L）、IgG组（1 mg/L）和 ALDO+HMGB1抗体组（1 mg/L HMGB1抗体预处理 1 h,再加入 10 nmol/L ALDO刺激 24 h）和阳 性对照组（Rosup,100 µmol/L）,处理24 h后利用荧光探针DCFH-DA标记后使用流式细胞仪检测NRK-52E细胞内活 性氧（ROS）水平的变化。另外,将培养的 NRK-52E 细胞分为 Control 组、ALDO 组（10 nmol/L）、N-乙酰半胱氨酸组 （NAC,50 µmol/L）和 NAC+ALDO组（50 µmol/L NAC预处理 1 h,再加入 10 nmol/L ALDO）,处理 24 h后 Western blot法 检测白细胞介素（IL）-1β蛋白的表达水平。观察10 nmol/L ALDO刺激24 h后,HMGB1蛋白表达的变化。最后,予以 1 mg/L HMGB1抗体预处理（1 mg/L HMGB1抗体处理 1 h后,再加入 10 nmol/L ALDO刺激 24 h）,Western blot法检测 LC3-Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白的表达水平。结果 流式细胞仪检测结果显示,与Control组相比,ALDO组NRK-52E细 胞内 ROS 的产生明显增加（P＜0.05）;与 ALDO 组相比,ALDO+HMGB1 抗体组细胞内 ROS 的水平显著下降（P＜ 0.05）。Western blot结果显示,与Control组相比,ALDO组IL-1β、HMGB1、LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白的表达上调,p62蛋 白的表达下调（P＜0.05）;与 ALDO组相比,ALDO+NAC组 IL-1β蛋白的表达下调（P＜0.05）,ALDO+HMGB1抗体组 LC3-Ⅱ蛋白的表达降低、p62蛋白的表达增加（P＜0.05）,Beclin-1蛋白的表达差异无统计学意义。结论 ALDO通 过促进NRK-52E细胞内ROS的产生,增加HMGB1的分泌,刺激IL-1β的释放,进而诱导自噬的发生;抑制HMGB1的 释放可逆转这一现象,本研究为慢性肾脏病的防治提供了新靶点和新思路。     

外泌体在心肌缺血再灌注损伤中作用的研究进展

外泌体是细胞主动分泌的囊泡样物质,可以转运蛋白质、细胞因子以及微小核糖核酸等物质参与细胞间通讯等过程,进而发挥调控相应受体细胞功能的作用。细胞在受到一定刺激时,分泌的外泌体数量以及转运物质会发生相应的变化。急性心肌梗死后通常通过溶栓或者经皮冠状动脉介入治疗等实现再灌注治疗,而再灌注后心肌损伤是血管再通后的常见现象,也是影响预后的主要原因,目前临床上尚无针对心肌缺血再灌注损伤的有效的防治措施。研究发现,外泌体在心肌缺血再灌注损伤炎性反应、血管再生、氧化应激、心室重塑以及心肌细胞凋亡等过程中发挥着重要调控作用,因此具有巨大的潜在临床应用价值。