miR-22-3p对蓝光暴露下大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

目的　探讨miR-22-3p对蓝光暴露下的大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及机制。方法　取36只清洁级SD大鼠, 将12只SD大鼠随机分为2组:对照组与蓝光暴露组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养;蓝光暴露组大鼠先进行暗适应24 h,随后采用复方托吡卡胺散瞳,将大鼠暴露在蓝光（光照强度1500 lux）下2 h;另取24只大鼠随机分为4组:对照组、蓝光暴露组、AAV-miR22组、AAV-miR22&PTEN组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养,其余3组均接受蓝光暴露处理,AAV-miR22组注射1 μL含 2.5×10⁹ vg(基因组拷贝数)的AAV-7m8-miR-22-3p,AAV-miR22&PTEN组注射1 μL含2.5×10⁹ vg的AAV-7m8-miR-22-3p&PTEN,对照组与蓝光暴露组向大鼠玻璃体内注射1 μL生理盐水,注射结束使用氧氟沙星眼膏预防感染。取大鼠眼球组织行HE染色,在光学显微镜下观察检测神经节细胞层（GCL）、GCL至外核层 (ONL)的厚度,其中包含有内丛状层（IPL）、内核层(INL)、外丛状层（OPL）;采用NeuN免疫荧光组织化学染色标记RGC,计数视网膜上NeuN标记的阳性细胞数;TUNEL染色检测细胞凋亡;采用Lipofectamine 2000转染试剂盒转染阴性对照、miR-22-3p mimic、miR-22-3p inhibitor至RGC-5细胞,转染48 h后测定miR-22-3p表达量,转染成功即可采用Western blot检测PTEN蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR检测miR-22-3p表达,Western blot检测PTEN、p-Akt、Akt与Nrf2蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验在酶标仪上测定荧光素酶活性。结果　HE染色结果证实:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织萎缩,视网膜GCL、GCL至ONL厚度变薄（P<0.05）。另外,NeuN免疫荧光组织化学染色发现:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织RGC数减少（P<0.05）。实时荧光定量PCR实验结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内miR-22-3p相对表达量降低（P<0.05）。Western blot检测结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内PTEN蛋白的表达水平升高,Nrf2蛋白的表达水平和p-Akt/Akt蛋白表达比值均降低（均为P<0.05）;miR-22-3p能够负向调控PTEN蛋白在RGC内的表达水平（P<0.05）。HE染色结果显示:过表达miR-22-3p能够缓解蓝光诱导的大鼠视网膜萎缩,并且能够提高大鼠视网膜GCL、GCL至ONL厚度。NeuN免疫荧光组织化学染色结果证实:过表达miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN表达提高蓝光暴露大鼠视网膜上RGC数。TUNEL实验结果证实:miR-22-3p能够通过抑制PTEN表达缓解蓝光诱导的大鼠视网膜RGC凋亡。结论　miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN的表达,激活PI3K/Akt/Nrf2通路,缓解蓝光诱导的大鼠RGC凋亡。     

不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜细胞凋亡的影响

目的　探讨不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin,NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）大鼠视网膜细胞凋亡的影响。方法　成年SD大鼠随机分为正常对照组、RIRI 组和 NAS 组。采用高眼压法建立RIRI大鼠模型。NAS组按照给药剂量的不同分为NAS低剂量组（5 mg·kg^-1）、NAS中剂量组（10 mg·kg^-1）和NAS高剂量组（20 mg·kg^-1）,造模前后30 min腹腔注射NAS。HE染色法观察各组大鼠视网膜形态学的改变,免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中活性Caspase-3的表达,TUNEL法检测各组视网膜细胞凋亡的变化。结果　HE染色结果显示,NAS中剂量组大鼠视网膜各层细胞排列最整齐,视网膜内层厚度［（53.24±1.68）μm］显著薄于RIRI组［（60.54±2.52）μm］及NAS低剂量组［（56.78±1.78）μm］（均为P<0.01）,NAS中剂量组视网膜神经节细胞数［（1113.65±74.40）个·mm^-2］显著多于RIRI组［（719.89±83.67）个·mm^-2］及NAS低剂量组［（882.09±55.62）个·mm^-2］（均为P<0.01）。免疫组织化学结果示,视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数RIRI组［（246.08±19.23） 个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（196.95±19.83）个·mm^-2、（142.77±18.25）个·mm^-2、（133.10±15.19）个·mm^-2］均显著多于正常对照组［（95.37±10.93）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数量显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。TUNEL检测结果显示,TUNEL阳性细胞数RIRI组［（225.45±18.93）个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（175.06±17.69）个·mm^-2、（108.85±13.41）个·mm^-2、（100.37±13.53）个·mm^-2］均多于正常对照组［（81.98±11.29）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜TUNEL阳性细胞数显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。结论　腹腔注射NAS治疗可减轻RIRI大鼠视网膜细胞凋亡,具有神经保护作用,中剂量NAS治疗方案最佳。     

GPR120通过抑制核因子-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　探讨GPR120对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响及可能机制。方法　健康雄性SD大鼠按55 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。模型诱导成功后,将大鼠随机分成三组:糖尿病组、鱼油预处理组(鱼油1 g·kg^-1每天1次灌胃;鱼油的主要成分为omega-3,omega-3为GPR120通路激活剂)、安慰剂组(玉米油1 g·kg^-1每天1次灌胃),每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组（对照组和糖尿病组大鼠每天1次灌胃等剂量PBS缓冲液）。12周后,气相色谱法检测各组大鼠视网膜组织中二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）含量,HE染色检测RGC密度,免疫荧光染色检测视网膜GPR120蛋白表达,Western blot检测视网膜GPR120、核因子-κB（NF-κB）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白相对表达量。结果　与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显减少（均为P<0.01);与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显增加（均为P<0.01)。GPR120主要分布于RGC层。对照组大鼠RGC密度为(437.06±4.72) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(35.65±0.89)%、(12.42±0.58)%、(13.76±0.08)%;糖尿病组大鼠RGC密度为 (329.75±3.51) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3 蛋白相对表达量分别为(24.14±0.46)%、(38.94±0.45)%、(25.14±0.45)%;鱼油预处理组大鼠RGC密度为(412.44±3.62) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(31.59±0.77)%、(18.11±0.58)%、(20.14±0.61)%。与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显降低;与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01)。糖尿病组与安慰剂组相比,各指标差异均无统计学意义(均为P＞0.05)。结论　GPR120激活对糖尿病大鼠RGC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。     

基于JAK2/STAT3通路分析姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响

目的　探讨姜黄素（CUR）对视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,并通过JAK2/STAT3通路探讨其机制,以期为CUR的临床应用提供理论依据。方法　健康雄性成年Sprague Dawley大鼠36只,随机分为假手术（Sham）组、RIRI组与CUR组,每组各12只。RIRI组和CUR组大鼠右眼采用高眼压法建立RIRI模型,Sham组仅将针头刺入大鼠右眼前房,不升高眼压。CUR组大鼠于建模前30 min腹腔注射CUR（100 mg·kg^-1）,RIRI组和Sham组大鼠腹腔注射等剂量生理盐水。造模后24 h,采用HE染色及免疫组织化学染色法观察各组大鼠视网膜形态及视网膜神经节细胞（RGC）数变化,Iba-1/CD16、Iba-1/Arg1免疫荧光双标法检测CUR对RIRI大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,免疫组织化学结合Western blot检测观察CUR对RIRI大鼠RGC及JAK2/STAT3通路信号分子表达的影响。结果　HE染色及免疫组织化学染色结果显示,Sham组大鼠视网膜细胞排列整齐,神经节细胞层见大量Brn-3a⁺细胞（即RGC）;与Sham组相比,造模后24 h,RIRI组大鼠内层视网膜厚度显著增加、RGC数显著减少,而CUR组大鼠内层视网膜厚度较RIRI组显著变薄,RGC数显著多于RIRI组（均为P<0.05）。免疫荧光双标染色结果显示,RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞（M1型小胶质细胞）数较Sham组显著增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞数显著少于RIRI组,但仍多于Sham组（均为P<0.05）;RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞（M2型胶质细胞）数较Sham组增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞数显著高于RIRI组（均为P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示,与Sham组相比,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均较Sham组增多,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均显著少于RIRI组（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,Sham组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平较低;造模后24 h,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3 蛋白表达显著升高,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量均较RIRI组显著下降,但仍高于Sham组（均为P<0.05）。结论　CUR可调控小胶质细胞由M1型向M2型极化,从而减轻大鼠RIRI,具有神经保护作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路激活有关。     

葡萄籽原花青素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidin extract，GSPE）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）的保护作用及其机制。方法　将120只大鼠分为假手术组（Sham组，灌胃生理盐水）、模型组（RIRI组，眼内灌注加压法制备，灌胃生理盐水）及GSPE低、中、高剂量组（GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组，灌胃0.13 g·kg^-1 GSPE、0.25 g·kg^-1 GSPE、0.50 g·kg^-1 GSPE）、阳性对照组（α-LA组,灌胃100 mg·kg^-1 α-硫酸锌）。采用苏木精-伊红（HE）染色观察各组大鼠视网膜组织形态学变化情况；ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、iNOS、白细胞介素-6（IL-6）水平，氮蓝四唑显色法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性；双抗体夹心法检测血清丙二醛（MDA）水平，铁离子还原法检测活性氧（ROS）水平；TUNEL法检测各组大鼠视网膜组织神经细胞凋亡；免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜组织中核因子E2-相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、Caspase-3表达情况；Western blot法检测各组大鼠视网膜组织中细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、p-ERK1/2表达情况。结果　GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组、RIRI组和Sham组视网膜厚度分别为（139.31±11.43）μm、（127.05±12.73）μm、（113.16±13.25）μm、（110.58±13.47）μm、（161.48±10.26）μm、（92.35±16.54）μm,Nrf2蛋白阳性表达率分别为（29.93±4.21）%、（34.06±5.17）%、（43.12±7.23）%、（45.35±7.46）%、（11.86±3.19）%、（52.27±8.36）%，ERK1/2蛋白磷酸化水平分别为0.41±0.05、0.62±0.07、0.89±0.09、0.92±0.05、0.23±0.04、1.16±0.25，RIRI组与Sham组比较，差异均有统计学意义（均为P<0.05）， GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组与RIRI组比较，差异均有统计学意义（均为P<0.05），且GSPE表现出剂量依赖性。与Sham组相比，RIRI组神经细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、TNF-α、IL-6、iNOS、MDA、ROS水平显著升高，HO-1阳性表达率、SOD水平显著降低（均为P<0.05）；与RIRI组相比，GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组神经细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、TNF-α、IL-6、iNOS、MDA、ROS水平显著降低，HO-1阳性表达率、SOD水平显著升高，且GSPE表现出剂量依赖性剂量依赖性（均为P<0.05）。结论　GSPE能够抑制视网膜组织神经细胞凋亡，保护视网膜组织，其作用机制可能与ERK/Nrf2/HO-1通路活化有关。     

抑制JAK/STAT信号通路对糖尿病早期大鼠视网膜Müller细胞的保护作用及对谷氨酸转运蛋白表达的影响

目的　探讨JAK/STAT信号通路对糖尿病早期大鼠视网膜Müller细胞及对谷氨酸转运蛋白（glutamate transporter，GLAST）表达的影响。方法　雄性SD大鼠30只，随机分成对照组、糖尿病组、AG490组，每组10只。后两组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ） 50 mg·kg^-1诱导糖尿病模型。模型诱导成功后，AG490组给予AG490 10 μL（17 mmol·L^-1）玻璃体内注射给药。注射1个月后，利用试剂盒检测3组大鼠视网膜中谷氨酸含量变化，免疫荧光检测视网膜GLAST表达，免疫组织化学检测视网膜p-JAK2表达，Western blot检测视网膜GLAST、p-JAK2及p-STAT3蛋白相对表达量。结果　与对照组GLAST相对表达量（65.35±0.66）%、p-JAK2相对表达量（32.80±0.40）%、p-STAT3相对表达量（17.62±1.09）%、谷氨酸含量（23.93±0.67）μmol·g^-1相比，糖尿病组视网膜p-JAK2相对表达量（52.16±0.62）%、p-STAT3相对表达量（47.41±0.95）%及谷氨酸含量（44.88±0.27）μmol·g^-1均明显增加，GLAST相对表达量（32.96±0.64）%明显下降（均为P<0.01）；而与糖尿病组相比，AG490组p-JAK2相对表达量（13.67±0.45）%、p-STAT3相对表达量（14.47±0.25）%及谷氨酸含量（25.18±0.66） μmol·g^-1均明显降低，GLAST相对表达量（49.48±0.32）%明显增加（均为P<0.01）。结论　糖尿病早期大鼠视网膜GLAST表达明显降低，抑制JAK/STAT通路的活化可上调视网膜GLAST表达，降低视网膜谷氨酸含量，这可能有助于减轻糖尿病状态下视网膜Müller细胞的损伤。     

糖尿病患者血清中同型半胱氨酸水平与视网膜神经节细胞层厚度的相关性研究

目的　探讨2型糖尿病患者血清中同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）水平与视网膜神经节细胞层（ganglion cell layer,GCL）厚度之间的相关性。方法　收集2016年10月至2017年10月就诊于中国医科大学附属盛京医院的60例糖尿病患者和30人健康对照者（对照组）,根据ETDRS分类将糖尿病患者分为两组:不伴眼底病变的糖尿病患者组（NDR组,n=30）和非增殖期糖尿病视网膜病变患者组（NPDR组,n=30）,检测所有病例血清中Hcy水平,并使用光学相干断层扫描测量其视网膜GCL厚度。分析血清中Hcy水平和GCL厚度变化及两者之间的相关性。结果　对照组、NDR组和NPDR组血清中Hcy水平分别为（11.87±2.19）nmol·L^-1、（14.87±0.42）nmol·L^-1、（20.77±2.40）nmol·L^-1,呈明显升高趋势,差异有统计学意义（P=0.000）,而GCL厚度分别为（88.33±6.36）μm、（81.73±1.41）μm、（64.00±12.73）μm,呈明显下降趋势,差异也有统计学意义（P=0.000）。随着眼底病变进展,血清中Hcy水平增加,视网膜GCL厚度变薄;Pearson相关性分析发现,血清中Hcy水平与视网膜GCL厚度呈负相关（r=-0.908,P=0.000）。结论　糖尿病患者血清中Hcy水平增加与视网膜GCL厚度变薄相关,Hcy参与了糖尿病视网膜病变的神经退行性病变。     

过表达TBK1通过调控RIPK1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨TANK结合激酶1（TBK1）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的作用机制。方法　按60 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素制备糖尿病模型。模型制备完成后,随机分成三组:糖尿病(DM)组、TBK1过表达(TBK1-OE)组 (大鼠玻璃体内单次注射TBK1过表达慢病毒载体5 μL,病毒滴度为 1.0×10⁹ IU·mL^-1)、TBK1空载体(TBK1-NC)组(玻璃体内注射等剂量病毒包装的阴性对照液),另取正常大鼠作为对照(CON)组,每组15只。12周后,免疫荧光染色检测大鼠视网膜TBK1蛋白表达定位,Hoechst 33342染色检测大鼠视网膜RGC凋亡,ELISA检测大鼠视网膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,Western blot检测大鼠视网膜TBK1、受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、Caspase-3蛋白相对表达量。结果　TBK1在大鼠RGC中特异表达。与CON组相比,DM组、TBK1-NC组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,TBK1蛋白相对表达量均明显降低(均为P<0.01);TBK1-OE组各指标均增加（均为P<0.01);而与DM组相比,TBK1-OE 组大鼠RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,TBK1蛋白相对表达量明显增加(均为P<0.01)。而DM组与TBK1-NC组大鼠之间RGC凋亡率,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,TBK1、RIPK1、Caspase-3蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论　过表达TBK1对糖尿病大鼠RGC凋亡具有抑制作用,其机制与阻断RIPK1信号通路激活有关。     

葡萄籽原花青素调控NLRP3/Caspase-1通路介导的焦亡途径对糖尿病视网膜病变大鼠的保护作用

目的　探讨葡萄籽原花青素调控NLRP3/Caspase-1通路介导的焦亡途径对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠的保护作用。方法　建立DR大鼠模型，随机分为模型组、葡萄籽原花青素组、VX-765组、葡萄籽原花青素+VX-765组（每组各12只），另取12只大鼠为对照组，药物干预14 d，HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理学变化；TUNEL染色检测各组大鼠视网膜神经节细胞（RGC）焦亡情况；采用试剂盒测定各组大鼠视网膜组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）及血清中炎症因子糖基化终末产物（AGEs）、白细胞介素（IL）-1β与IL-18水平；Western blot检测各组大鼠视网膜组织NLRP3/Caspase-1通路蛋白表达水平。结果　与对照组相比，模型组大鼠视网膜组织明显变薄，结构疏松，细胞结构层次紊乱、排列不规则，RGC变少、稀疏，呈现严重病理损伤变化，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β、IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均显著升高（均为P<0.05），SOD与CAT水平均显著降低（均为P<0.05）。与模型组相比，葡萄籽原花青素组、VX-765组大鼠视网膜组织形态结构得到恢复，病理损伤均有不同程度减轻，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β与IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均降低（均为P<0.05），SOD与CAT水平均升高（均为P<0.05）。与葡萄籽原花青素组及VX-765组分别相比，葡萄籽原花青素+VX-765组大鼠视网膜组织病理损伤进一步减轻，形态结构几乎恢复正常，RGC焦亡率，ROS与MDA水平，AGEs、IL-1β与IL-18水平，NLRP3与Caspase-1蛋白表达水平均降低（均为P<0.05），SOD与CAT水平均升高（均为P<0.05）。结论　葡萄籽原花青素可以抑制炎症发生发展，增强DR大鼠抗氧化活性，减轻过氧化反应，缓解视网膜组织病理学损伤，减少RGC焦亡，可能是通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。     

氢离子对碘酸钠诱导的小鼠年龄相关性黄斑变性视网膜的保护作用及机制

目的　探讨氢离子（H⁺）对碘酸钠（NaIO₃）诱导的小鼠年龄相关性黄斑变性视网膜的保护作用及机制。方法　选取60只8~10周龄SPF级健康C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组、NaIO₃组、H⁺组,每组20只。H⁺组小鼠灌胃富含H⁺水（每只每天6 mL）预治疗7 d,对照组及NaIO₃组小鼠灌胃相同剂量的自来水;NaIO₃组、H⁺组小鼠按20 mg·kg^-1剂量鼠尾静脉注射NaIO₃溶液,对照组小鼠鼠尾静脉注射相同剂量的生理盐水;H⁺组小鼠继续灌胃富含H⁺水（每只每天6 mL）治疗5 d,对照组及NaIO₃组小鼠给予相同剂量的自来水。然后对小鼠行眼底照相、OCT、视网膜电图、FFA检查,取小鼠眼球行HE染色,Western blot检测Caspase8表达情况。结果　NaIO₃组小鼠视网膜厚度［（232.370±17.060）μm］与对照组［（316.265±5.314）μm］、H⁺组［（296.406±27.411）μm］间差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,对照组与H⁺组之间差异无统计学意义（P=0.122）。NaIO₃组a波振幅低于对照组和H⁺组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,对照组a波振幅与H⁺组间差异亦有统计学意义（P=0.036）。对照组和H⁺组b波振幅均高于NaIO₃组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,对照组b波振幅与H⁺组间差异无统计学意义（P=0.121）。FFA显示,对照组小鼠无血管渗漏,NaIO₃组小鼠的视网膜血管有大面积渗漏区,H⁺组小鼠视网膜渗漏面积较NaIO₃组明显减少。HE染色结果表明,NaIO₃组小鼠视网膜色素上皮层变薄甚至消失,并且出现大量的黑色沉积物,H⁺组小鼠视网膜黑色沉积物较NaIO₃组减少。对照组（0.406±0.161）和H⁺组（0.543±0.302）视网膜中Caspase8相对表达量均明显低于NaIO₃组（1.498±0.219）,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。对照组与H⁺组间差异无统计学意义（P=0.501）。结论　H⁺通过抑制Caspase8凋亡途径抑制NaIO₃诱导的视网膜黄斑变性。     

桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用

目的探讨桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法选取12周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组10只、糖尿病组10只、IOP组(给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1)10只和抑制剂组(给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1+锌原卟啉20 mg·kg^-1)10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用一次性腹腔注射10 g·L^-1链脲佐菌素(60 mg·kg^-1)制作糖尿病大鼠模型,桦褐孔菌多糖采用灌胃法给药;抑制剂组在桦褐孔菌多糖灌胃前24 h将锌原卟啉经腹腔注射给大鼠。正常对照组和糖尿病组灌胃相同体积的生理盐水,并于12周后禁食不禁水12 h后进行实验。将分离到的新鲜视网膜,石蜡包埋,切片,用于HE染色和免疫组织化学染色。检测视网膜样品组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;采用HE染色观察视网膜形态并检测视网膜神经节细胞密度;免疫组织化学染色观察细胞HO-1阳性染色情况;采用West...     

不同N-乙酰-5-羟色胺(NAS)给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨腹腔与尾静脉注射N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)两种给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)组织病理学、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法健康无眼疾成年Sprague-Dawley雄性大鼠54只,采用随机数字表法分为正常对照组(n=6)、RIRI腹腔组(n=12)、RIRI静脉组(n=12)、NAS腹腔组(n=12)和NAS静脉组(n=12),后四组采用升高眼压法建立大鼠RIRI模型。NAS腹腔组、NAS静脉组于建模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射NAS(10 mg·kg^-1),RIRI腹腔组、RIRI静脉组于造模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射同等剂量的生理盐水。RIRI后24 h,采用免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜中活性Caspase-3的表达,TUNEL染色检测各组视网膜细胞凋亡情况;RIRI后7 d,HE染色观察各组视网膜组织病理学变化。结果 HE染色结果示,正常对照组大鼠视网...     

玻璃体内注射辅酶Q10对NaIO3诱导的AMD模型小鼠的保护作用

目的　探讨玻璃体内注射水溶性CoQ10对NaIO₃诱导的年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）的保护作用。方法　66只昆明小鼠分为3组:对照组、NaIO₃诱导组（小鼠尾静脉注射NaIO₃）和CoQ10修复组，小鼠尾静脉注射NaIO₃后玻璃体内分别注射高浓度（2.0 g·L^-1）和低浓度（0.1 g·L^-1）的CoQ10，注射平衡液做假处理组。在建模后第7天取材，行常规组织切片、HE染色、GFAP染色、Iba1染色，检测NaIO₃诱导的视网膜病变和CoQ10对该种病变的修复效果。结果　注射NaIO₃ 7 d后，HE染色结果显示，NaIO₃诱导组小鼠视网膜外核层每10 μm 长度的细胞数由正常水平（29.13±3.97）个减少至（17.50±4.03）个，差异有统计学意义（P<0.01）；GFAP染色结果显示，Müller细胞发生反应性胶质化，与对照组相比每250 μm×250 μm面积的细胞数由（21.17±4.26）个增加至（28.67±2.80）个，差异有统计学意义（P<0.01）；Iba1染色结果显示，小胶质细胞呈现出“阿米巴状”的激活形态，每250 μm×250 μm面积的细胞数由（6.71±2.29）个增加至（22.14±3.76）个，差异有统计学意义（P<0.01）。分别对NaIO₃诱导组小鼠玻璃体内注射高、低浓度的CoQ10（2.0 g·L^-1和0.1 g·L^-1）后，与假处理组相比，其中注射高浓度CoQ10（2.0 g·L^-1）组外核层细胞数目显著增加（P<0.05），而低浓度CoQ10（0.1 g·L^-1）组没有显著差异（P>0.05）。并且，Müller细胞反应性胶质化程度减弱，GFAP阳性细胞数恢复至（23.83±3.87）个；小胶质细胞分枝增多，Iba1阳性细胞数恢复至（16.86±3.29）个，与NaIO₃诱导组相比，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射CoQ10可通过减轻Müller细胞的反应性胶质化和抑制小胶质细胞的激活而减缓视网膜感光细胞退化，对AMD起到保护作用。     

甘草查尔酮A对过氧化氢致视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　研究甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对过氧化氢（H₂O₂）致视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGC）损伤的保护作用,为LCA在青光眼治疗方面的应用提供初步的实验依据。方法　体外培养RGC-5细胞,随机分为对照组（正常培养基培养）、H₂O₂组（培养基中加入200 μmol·L^-1 H₂O₂）、LCA组（培养基中除加入200 μmol·L^-1 H₂O₂外,还分别加入10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1、40 μmol·L^-1的LCA溶液）,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果　CCK-8法检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组的细胞存活率分别为（63.7±5.4）%、（78.8±6.3）%和（72.3±6.9）%,与H₂O₂组的（54.3±3.9）%相比,20 μmol·L^-1 LCA组增殖最显著（P＜0.05）。流式细胞术检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组细胞凋亡率分别为（21.1±1.9）%、（12.3±1.3）%和（14.8±2.0）%,与H₂O₂组的（29.3±2.0）%比较,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。Western blotting检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组Bcl-2蛋白的表达均增加,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。ELISA法检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组RGC-5的丙二醛含量均降低,但超氧化物歧化酶活性均显著增加（均为P＜0.05）。结论　LCA能缓解H₂O₂诱导的RGC损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和氧化应激有关。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 m...     

褪黑素联合锌对H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨褪黑素（MT）联合锌（Zn）对H₂O₂诱导的人视网膜色素上皮（ARPE）细胞氧化损伤的保护作用。方法　常规培养ARPE细胞株（ARPE-19）,利用不同浓度H₂O₂处理ARPE-19细胞,将细胞存活率接近50%的H₂O₂浓度作为氧化损伤浓度。将ARPE-19细胞分为:不同浓度MT（10^-5 mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-7mol·L^-1）+ZnCl₂（15 μmol·L^-1）组,ZnCl₂组（采用15 μmol·L^-1 ZnCl₂培养细胞）,H₂O₂组（不添加MT和ZnCl₂培养细胞）,空白对照组（细胞不做任何处理）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用试剂盒测量各组细胞内活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）的含量。ELISA检测各组细胞内白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达量。结果　当H₂O₂浓度为300 μmol·L^-1时,细胞存活率为(54.31±1.91)%,此时细胞存活率接近50%,后续实验中均选择该浓度作为氧化损伤浓度。ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞凋亡率分别为3.05%、1.17%、1.50%、1.71%,与空白对照组（0）相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.76倍、1.59倍、1.41倍,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内ROS含量分别为空白对照组的1.13倍和1.25倍,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组细胞内MDA的含量较空白对照组显著提高 （P<0.05）;ZnCl₂组、10^-5 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内MDA的含量均较空白对照组稍增加,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。H₂O₂组、ZnCl₂组、10^-7 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;10^-5 mol·L^-1MT+ZnCl₂组和10^-6 mol·L^-1 MT+ZnCl₂组细胞内IL-6和TNF-α的表达量均略高于空白对照组,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　MT联合Zn能有效降低H₂O₂损伤所致ARPE-19细胞内ROS的含量,随之减少细胞内MDA的含量,同时也能抑制IL-6和TNF-α的表达量,从而起到保护RPE细胞的作用。     

重组碱性成纤维细胞生长因子通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)的保护作用。方法　雄性SD大鼠40只，随机分成对照组、糖尿病组、rbFGF组、rbFGF+DAPT组(DAPT为Notch1通路的特异性拮抗剂)，每组10只。后三组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 诱导糖尿病模型。模型诱导成功后，rbFGF组给予rbFGF 10 μL(200 U)玻璃体内注射给药，rbFGF+DAPT组在给予rbFGF基础上加用DAPT(10 μmol·L^-1)。注射12周后，HE染色检测RGC密度，免疫组织化学染色检测神经元再生相关蛋白GAP-43、Notch1蛋白表达，Western blot检测GAP-43、Notch1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3相对表达量。结果　与对照组RGC密度(433.49±6.02)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(8.96±0.26)%、Notch1阳性率(45.04±0.46)%及Caspase-3 (27.91±0.63) %蛋白表达相比，糖尿病组RGC密度(328.35±6.43)mm^-2，Notch1荧光强度(31.66±0.40)%蛋白表达明显降低，GAP-43荧光强度(13.66±0.52)%、Caspase-3 (48.91±0.64)%蛋白表达明显增加(均为P<0.05)；而与糖尿病组相比，rbFGF组RGC密度(425.30±7.98)个·mm^-2，Notch1阳性率(41.76±0.62)% 及GAP-43荧光强度(33.05±0.37)%蛋白表达明显增加，Caspase-3 (28.86±0.71)%蛋白表达明显降低(均为P<0.05)；而rbFGF+DAPT组RGC密度(324.91±8.22)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(14.27±0.64)%、Notch1阳性率(30.40±0.82)%及Caspase-3 (47.63±0.68)%蛋白表达均无明显变化(均为P>0.05)。结论　rbFGF可上调糖尿病状态下视网膜GAP-43蛋白表达，下调Caspase-3蛋白表达，进而提高RGC的存活，其机制可能与激活Notch1信号通路有关。