抑制Notch和PI3K/Akt信号通路对食管腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨Notch和PI3K/Akt两条信号通路对人食管腺癌细胞OE33增殖、侵袭及迁移能力的影响及两条信号通路之间的联系。方法 应用Notch信号通路阻滞剂DAPT和PI3K/Akt信号通路阻滞剂LY294002分别单独和联合处理OE33细胞,设置对照组;Western blot和实时定量PCR法检测OE33细胞中NICD、Hes1、p-Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达变化;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;划痕实验用于检测细胞迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力变化。结果 Notch1通路阻滞剂DAPT能减低Notch1通路相关蛋白NICD和Hes1的表达,并能提高p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt路阻滞剂LY294002不仅使p-Akt的蛋白表达水平减低,还能降低Hes1的蛋白表达水平,同时使NICD的蛋白和Hes1的mRNA表达水平增高。DAPT和LY294002联合处理组的NICD、Hes1、p-Akt的蛋白表达均较空白对照组和单药处理组降低,同时细胞的增殖、迁移和转移能力亦明显减弱。各处理组中PTEN的蛋白和mRNA表达水平较对照组均有一定程度的升高。结论 Notch和PI3K/Akt两条信号通路在食管腺癌细胞OE33中可能存在串话, 同时抑制这两种信号通路能有效的抑制OE33的增殖、侵袭及迁移。     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。     

过表达miR-141-3p通过靶向下调PTEN并激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌A2780 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-141-3p 通过靶向PTEN并调控PI3K/Akt 通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年4 月至2017 年10 月河南省人民医院妇产科收治的资料完整的28 例卵巢癌患者肿瘤组织和相应的癌旁组织,采用qPCR检测卵巢癌组织和细胞系中miR-141-3p 的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p 和PTEN的靶向关系;过表达或敲降miR-141 及PTEN基因后,采用CCK-8、Transwell 和Annexin V-FITC/PI 双染流式术检测卵巢癌A2780 细胞增殖、侵袭和凋亡水平,WB实验进一步检测miR-141-3p 对PTEN-PI3K/Akt 信号通路的调控作用。结果：miR-141-3p 在卵巢癌组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-141-3p 靶向作用于PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。与对照组相比,敲降miR-141-3p 后A2780 细胞的增殖受到显著抑制（48 h 时,0.36±0.04 vs 0.82±0.06,P<0.05）、侵袭能力明显降低[穿膜细胞数（45.14±7.88）vs（215.32±16.04）个,P<0.01]、细胞凋亡率显著升高[ （9.29±0.65）% vs（1.85±0.26）%,P<0.01]。过表达PTEN显著抑制了A2780 细胞中p-Akt 的表达（均P<0.01）、抑制细胞增殖和侵袭能力（均P<0.01）而明显促进细胞凋亡（均P<0.01）,在过表达PTEN的同时过表达miR-141-3p 或添加IGF-1 后可逆转上述的变化。结论：miR-141-3p 能够促进A2780 细胞增殖、侵袭和诱导凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN并激活PI3K/Akt通路有关。     

CCNB1基因通过调控PI3K/Akt信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)基因对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常口腔上皮细胞系HOK和人口腔鳞癌细胞系SCC-15、SCC-4、Cal-27中CCNB1基因的表达量,将CCNB1 siRNA(si-CCNB1)和阴性对照(si-NC)转染至SCC-15细胞,同时设置空白对照(Control),qRT-PCR和Western blot检测各组SCC-15细胞中CCNB1的表达,MTT实验、Transwell实验和划痕实验分别检测沉默CCNB1对SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9、PI3K、Akt和p-Akt蛋白的表达。结果 CCNB1在口腔鳞癌细胞系中的表达显著高于正常口腔上皮细胞(P＜0.05),si-NC组SCC-15细胞中CCNB1 mRNA和蛋白的表达与Control组无统计学差异(P＞0.05);si-CCNB1组中CCNB1 mRNA和蛋白的表达明显低于si-NC组和Control组(P＜0.05),si-NC组SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达与Control组无统计学差异(P＞0.05);si-CCNB1组细胞增殖、侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9、PI3K、p-Akt蛋白表达均明显低于si-NC组和Control组(P＜0.05),两组间Akt蛋白表达无统计学差异(P＞0.05)。结论 CCNB1在口腔鳞癌细胞系中呈高表达,沉默CCNB1基因能够抑制人口腔鳞癌SCC-15细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

miR-186通过Shp2和PI3K/Akt/mTOR信号通路对肺腺癌细胞的抑制作用

目的 探讨miR-186过表达对肺腺癌细胞生长的影响及其是否与调节Shp2和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.方法 将人肺腺癌细胞A549分为Con-mimic组、miR-186-mimic组和Con组,采用CCK8细胞增殖实验检测miR-186对细胞增殖的影响;采用划痕实验检测miR-186对细胞转移的影响;采...     

PTPRJ通过Src/PI3K/Akt信号通路促进前列腺癌细胞的黏附、迁移和侵袭

目的:探究PTPRJ基因表达对前列腺癌DU145细胞黏附、迁移和侵袭的影响以及可能的调控机制。方法:实时荧光定量PCR、Western blot检测PTPRJ在前列腺肿瘤组织和细胞系中的表达;用携带PTPRJ特异shRNA的重组慢病毒(LV-shPTPRJ)感染沉默PTPRJ表达;MTT检测细胞黏附力,Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR、Western blot检测信号通路分子mRNA和蛋白表达。结果:与正常前列腺组织和细胞相比,PTPRJ在前列腺肿瘤组织和PC-3、DU145细胞系中表达升高（P＜0.05）;与对照组相比,沉默PTPRJ后前列腺癌DU145细胞黏附、迁移和侵袭能力显著下降（P＜0.01）、信号通路蛋白pY418Src、p-PI3K和p-Akt表达水平均显著降低（P＜0.05）;SC79激活PI3K/Akt可逆转PTPRJ下调对DU145细胞黏附和侵袭的影响;沉默PTPRJ下调裸鼠瘤体组织中pY418Src、p-PI3K和p-Akt表达（P＜0.05）。结论:PTPRJ可能通过激活Src/PI3K/Akt信号通路来促进DU145细胞的黏附、迁移和侵袭,预示PTPRJ可能成为前列腺癌治疗的潜在靶点。     

miR-182激活PI3K/AKT信号通路促进肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨miR-182通过PI3K/AKT信号通路对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:将体外培养的HepG2细胞分为对照组(未转染)、阴性组(转染阴性对照)、模拟物组(转染miR-182模拟物)和模拟物+抑制剂组(转染miR-182模拟物后,加入PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-182的表达水平,Western blot检测各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达,采用MTT法、克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结果:与对照组相比,模拟物组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数均明显升高,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显上升(P<0.05);而阴性组和对照组细胞相比无显著性差异(P>0.05)。与模拟物组相比,模拟物+抑制剂组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数明显降低,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显下降(P<0.05)。结论:miR-182可通过激活PI3K/AKT信号通路上调MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-125a-3p靶向负调控PLK4抑制神经母细胞瘤细胞增殖及其机制探讨

目的:研究miR-125a-3p对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:运用qRT-PCR法检测Hela、SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达;将miR-125a-3p组（转染miR-125a-3p mimics）、miR-NC组（未转染细胞）、inhibitor-NC组（转染空inhibitor）、miR-125a-3p inhibitor组（转染miR-125a-3p inhibitor）、siPLK4组（转染siPLK4）、miR-125a-3p+Vector组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-125a-3p+PLK4组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1-PLK4共转染）以脂质体法转染至SH-SY-5Y细胞;MTT法检测各组细胞的增殖情况;Western blot检测各组细胞中PLK4、PIK3CA、Akt、p-Akt蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与Hela细胞相比,SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达均显著降低（P<0.05）;与Control组相比,miR-125a-3p组细胞的增殖显著降低,PLK4、PIK3CA、p-Akt蛋白的表达量均显著降低（P<0.05）;PLK4为miR-125a-3p的靶基因。过表达PLK4可逆转miR-125a-3p对SH-SY-5Y细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论:miR-125a-3p可抑制神经母细胞瘤细胞增殖,其作用机制与靶向负调控PLK4有关,将可为神经母细胞瘤的治疗提供新靶点。     

PI3K—Akt信号通路与胃癌的研究进展

细胞内信号传导通路PI3K—Akt与胃癌的发生、生长及化疗耐药关系密切。本文概述了PI3K—Akt的分类结构、PI3K—Akt信号转导通路的调节、与胃癌细胞凋亡及血管生成的关系及化疗耐药和放疗的机制。     

PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响研究

目的 探讨PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 选用PI3K/MTOR双重阻断剂NVP-BEZ235体外处理肾癌A498细胞,浓度分别为0、100、250、500 nmol/L.48 h后采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肾癌A498细胞中AKT和MTOR蛋白磷酸化情况;MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blot法检测细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达变化.结果 肾癌A498细胞中p-AKT、MTOR、p-MTOR、E-Cadherin、PTEN的表达及细胞增殖率、迁移率、穿膜细胞数量各自在不同NVP-BEZ235浓度下比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01).与0 nmol/L组比较,100、250、500 nmol/L的NVP-BEZ235处理肾癌A498细胞后,细胞中磷酸化蛋白p-AKT和p-MTOR的表达均下调,细胞增殖率下降,细胞迁移率下降,穿膜细胞数量减少,细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 通过阻断PI3K/AKT/MTOR信号通路可以抑制肾癌A498细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与上调细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达有关.     

白花蛇舌草通过PI3K/Akt信号通路抑制人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞增殖

目的:探讨白花蛇舌草对人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将人非霍奇金淋巴瘤细胞Raji分为对照组、白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组,采用CCK-8法检测各组Raji细胞培养12 h、24 h、48 h、72 h时细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Western blot检测培养48 h时各组细胞CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平。结果:白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组Raji细胞增殖抑制率随着处理时间延长而增加,在相同时间点时,白花蛇舌草+LY294002组Raji细胞增殖抑制率均高于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）;细胞周期检测结果显示:与对照组相比,白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组G0/G1期细胞比例增多、S期细胞比例降低（P＜0.05）,而白花蛇舌草组、LY294002组G0/G1期、S期细胞比较差异无统计学意义（P＞0.05）,白花蛇舌草+LY294002组G0/G1期、S期细胞均低于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）;Western blot检测结果显示:白花蛇舌草组、LY294002组、白花蛇舌草+LY294002组CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平均低于对照组（P＜0.05）,白花蛇舌草+LY294002组CyclinD1、CyclinD3、CDK4、PAK2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平均低于白花蛇舌草组、LY294002组（P＜0.05）,白花蛇舌草组、LY294002组各种蛋白水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:白花蛇舌草对Raji细胞增殖有抑制作用,可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

miR-409-3p靶向调控RRM2抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、鼻咽癌细胞5-8F、6-10B中miR-409-3p、核糖核苷酸还原酶M2(...     

lncRNA DLEU2/miR-455-3p/OTUD7B轴通过PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌恶性发展

目的:探讨长链非编码RNA DLEU2(lncRNA DLEU2,DLEU2)对宫颈癌恶性发展的影响。方法:利用TCGA数据库和qRT-PCR分析DLEU2在宫颈癌组织和细胞系中的表达。采用CCK-8、Western blotting、免疫荧光、细胞划痕、Transwell和TUNEL实验检测干扰DLEU2(sh-DLEU2)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析DLEU2和miR-455-3p的靶基因,评估miR-455-3p inhibitor/mimic对宫颈癌细胞生长和PI3K/AKT信号通路的影响。裸鼠荷瘤实验检测干扰DLEU2后对瘤体体内生长的影响。结果:宫颈癌组织和细胞系中DLEU2表达显著上调（P＜0.01）。sh-DLEU2可抑制Hela和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.01）,促进细胞凋亡（P＜0.001）。DLEU2与miR-455-3p相结合,OTUD7B为miR-455-3p的靶基因。miR-455-3p inhibitor促进细胞恶性发展并激活PI3K/AKT信号通路,而sh-DLEU2可逆转其作用（P＜0.01）;miR-455-3p mimic也可部分逆转Oe-OTUD7B对细胞的作用（P＜0.01）。此外,sh-DLEU2抑制了裸鼠荷瘤组织的生长（P＜0.01）。结论:DLEU2通过miR-455-3p/OTUD7B轴激活PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌的恶性发展。     

丹皮酚通过下调miR-21并抑制PI3K/AKT通路抑制Hela细胞侵袭、转移及增殖

目的:探讨丹皮酚对Hela细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法:使用不同浓度（50、100、200 和400 mg/L）丹皮酚处理Hela细胞株,分为正常对照组（NC组）、不同浓度丹皮酚组、miR-NC组、miR-21组、丹皮酚+miR-NC和丹皮酚+miR-21组。PI3K的激动剂740Y-P (25 μg/mL)加入丹皮酚组、 NC组,分别定义为丹皮酚+740Y-P组、740Y-P组。MTT检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力;实时荧光定量PCR检测细胞miR-21表达水平;Western blot检测细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、MMP9水平。结果:丹皮酚可抑制Hela细胞增殖能力（P＜0.05）,抑制作用与浓度呈正相关。选择200 mg/L的丹皮酚进行后续研究。与NC组比较,丹皮酚组侵袭及迁移细胞数量、MMP2蛋白、MMP9蛋白、miR-21表达水平明显降低（P＜0.01）。与NC组比较,丹皮酚组细胞凋亡率增加,G1期延长,S期、G2期缩短（P＜0.01）。与NC组、miR-NC组相比,48、72 h 时miR-21组细胞活力明显升高（P＜0.05）,克隆、侵袭及迁移细胞数量明显升高(P＜0.05)。与丹皮酚组、丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组克隆、侵袭及迁移细胞数升高（P＜0.05）。与NC组比较,丹皮酚组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显下降（P＜0.01）;与丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）。与丹皮酚组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数升高（P＜0.01）,与740Y-P组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数降低（P＜0.01）。结论:丹皮酚可下调miR-21,抑制PI3K/AKT通路,进而抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移。